检索结果-内蒙古大学图书馆

河南农业大学学报 2016年第3期50卷 359-363,388页

作者：张玉娟赵婷徐朝于琨马倩李超燕郑文明许君河南农业大学生命科学学院河南郑州450002

为了研究ifitm基因的功能,本研究从猪肾PK15细胞中克隆了猪的3个ifitm c DNA序列,分析了猪ifitm1、ifitm2和ifitm3基因的染色体定位及其与其他物种基因序列的同源关系,并对不同ifitm在不同组织的表达进行分析和检测。结果显示,猪ifitm... 详细信息

为了研究ifitm基因的功能,本研究从猪肾PK15细胞中克隆了猪的3个ifitm c DNA序列,分析了猪ifitm1、ifitm2和ifitm3基因的染色体定位及其与其他物种基因序列的同源关系,并对不同ifitm在不同组织的表达进行分析和检测。结果显示,猪ifitm和人、鼠ifitm具有相同的基因和蛋白结构,进化上与牛ifitm高度同源,ifitm1和ifitm3在脾、肾、心、肝等组织中大量表达,而ifitm2只在脾和肾中检测到表达,在其他组织中的表达量相对较小。猪ifitm基因的克隆、生物信息学及组织表达分析为进一步研究其在猪细胞中的功能奠定了基础。

关键词：干扰素刺激基因猪干扰素诱导的跨膜蛋白基因克隆基因序列组织表达差异

来源：评论

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水牛ELF5基因的克隆鉴定,组织表达谱分析及多态性检测

水牛ELF5基因的克隆鉴定,组织表达谱分析及多态性检测

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第七届中国畜牧科技论坛

作者：付琳苗永旺重庆市畜牧科学院云南农业大学

(目的)为了阐明水牛ELF5基因的结构、基因与水牛泌乳的相关性以及牛科物种ELF5基因的序列差异和群体遗传特征。(方法)本研究采用RT-PCR和电子克隆技术水牛ELF5基因进行了分离鉴定和组织表达谱分析,运用PCR-SSCP技术与DNA直接测序的方法... 详细信息

(目的)为了阐明水牛ELF5基因的结构、基因与水牛泌乳的相关性以及牛科物种ELF5基因的序列差异和群体遗传特征。(方法)本研究采用RT-PCR和电子克隆技术水牛ELF5基因进行了分离鉴定和组织表达谱分析,运用PCR-SSCP技术与DNA直接测序的方法对91份水牛、普通牛、牦牛和大额牛样品ELF5基因的编码区序列进行群体变异检测。(结果)结果显示,水牛ELF5基因的CDS为768 bp,编码255个氨基酸,各物种间的ELF5蛋白的氨基酸序列同源度较高;在水牛非泌乳期和泌乳期间,ELF5基因主要在水牛乳腺、胃、肺、脾、心和肝中表达,其在乳腺组织的表达量最高,且泌乳期的表达量是非泌乳期的1.8倍;在水牛ELF5基因的编码区共检测到11个SNP位点,其中SNP255和SNP461分别在河流型和沼泽型水牛中纯合,其他9个SNP为河流型和沼泽型水牛共享,SNP460和SNP461导致p.G154S和p.G154N氨基酸的异义替换,但对其蛋白功能无显著影响。(结论)研究结果提示,水牛ELF5基因在乳腺发育、生长及其泌乳活动中承担重要角色,ELF5蛋白在牛科物种间高度保守性,预示着水牛ELF5基因在生物体的发育和分化中可能承担着重要的功能。

关键词：水牛 ELF5基因克隆组织表达差异群体变异检测

来源：评论

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长牡蛎(Crassostrea gigas)两个Dmrt家族基因的时空表达

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海洋与湖沼 2015年第3期46卷 717-724页

作者：张娜黄雯许飞李莉张国范郭希明海洋生态养殖技术国家地方联合工程实验室中国科学院海洋研究所青岛266071 中国科学院大学北京100049 Haskin Shellfish Research Laboratory Institute of Marine and Coastal Sciences Rutgers University

本文以长牡蛎27个幼虫发育阶段个体以及成体的5个组织织作为实验材料,采用实时荧光定量PCR技术对其Dmrt家族中的2个基因(CgDsx和CgDmrtA2)的表达模式以及在性别决定中的作用进行了研究。结果表明,长牡蛎CgDsx基因在胚胎发育初期有大量表... 详细信息

本文以长牡蛎27个幼虫发育阶段个体以及成体的5个组织织作为实验材料,采用实时荧光定量PCR技术对其Dmrt家族中的2个基因(CgDsx和CgDmrtA2)的表达模式以及在性别决定中的作用进行了研究。结果表明,长牡蛎CgDsx基因在胚胎发育初期有大量表达,从囊胚期到担轮幼虫初期表达量最高,之后表达量开始降低,在D形幼虫后一直维持在极低的表达水平,此后仅在成体的雄性性腺中具有高度表达。由此可见,CgDsx可能也对早期胚胎发育起一定调控作用,同时参与了性别决定。CgDmrtA2在长牡蛎所有组织中均有表达,各组织间表达差异不显著,在D形幼虫至壳顶后期表达量较高,说明它参与了胚胎中后期的发育过程,可能与神经的形成相关,但是其具体功能还需要进一步研究。

关键词：长牡蛎 Dmrt家族幼虫发育组织表达差异性别决定

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猪IFITM基因分析及过量表达细胞系构建

猪IFITM基因分析及过量表达细胞系构建

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作者：张玉娟河南农业大学

学位级别：硕士

干扰素(Inferons，IFN)是调节细胞生长、分化、免疫反应、抗肿瘤及抗病毒等多种重要生理功能的细胞因子，通过IFN诱导干扰素刺激基因编码的蛋白家族（ISGs）组成的信号网络完成其信号传导过程。干扰素诱导的跨膜蛋白IFITM（inferon-indu... 详细信息

干扰素(Inferons，IFN)是调节细胞生长、分化、免疫反应、抗肿瘤及抗病毒等多种重要生理功能的细胞因子，通过IFN诱导干扰素刺激基因编码的蛋白家族（ISGs）组成的信号网络完成其信号传导过程。干扰素诱导的跨膜蛋白IFITM（inferon-inducible transmemberaneproteins）是系列ISGs中的一个家族，干扰素诱导后可大量表达。近几年发现IFITM蛋白可抑制多种病毒的复制。 IFITM在人、畜、禽、鼠等多种生物中都有表达，在进化上也非常保守，但不同物种中报道的IFITM基因种类和数量都有一定的差异。人类共有IFITM1、IFITM2、IFITM3和IFITM5基因的表达，其中IFITM1、IFITM2和IFITM3广泛表达于多种组织中，而IFITM5仅在成骨细胞中发现。而鼠中除了有IFITM1、IFITM2、IFITM3、IFITM5外，还有IFITM6和IFITM7的存在。最近有文献报道IFITM蛋白具有抗甲型流感病毒（Influenza A virus，IAV）等一些黄病毒属病毒及艾滋病病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）等多种病毒的功能，引起了广泛关注。本论文主要以猪IFITM基因的序列、结构、表达及其对乙脑病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）的影响进行了研究。本论文主要研究结果有： 1、IFITM基因的克隆及其序列分析。通过序列对比已知的IFITM基因的CDS区保守序列，设计特异性的引物，从猪肾细胞PK15中扩增出猪IFITM基因，提交序列至NCBI。 2、IFITM基因的进化分析。以猪组织的总DNA为模板，扩增出IFITM1、IFITM2、IFITM3等3个基因的全长序列，经过分析和序列对比，三个基因都含有一个内含子，并确定这三个基因均位于猪的2号染色体上。在猪基因组中尚未发现完整的IFITM5和IFITM10。通过绘制系统进化树发现猪IFITM与牛（Bos taurus）IFITM基因的同源性最高达到77%以上，牛和鼠的IFITM5同源率高达90%以上。 3、IFITM基因的组织表达分析。采集了猪的不同组织提取RNA，分别扩增IFITM1、IFITM2、IFITM3的基因序列，发现IFITM1、IFITM2和IFITM3在各组织中的表达有较大差异。IFITM1和IFITM3在一些组织（如肝和肾）中表达量较大，而IFITM2仅在猪脾脏组织中检测出有表达。 4、抗JEV功能的初步分析。将猪的IFITM1、IFITM2和IFITM3分别连接到真核表达载体pcDNA3.1(+)上，分别构建了三个重组质粒pcDNA3.1(+)-IFITM1、pcDNA3.1(+)-IFITM2和pcDNA3.1(+)-IFITM3，瞬时转染至PK15细胞，然后进行JEV感染实验，细胞病变分析及RT-PCR结果分析表明三组IFITM基因对JEV具有不同程度的抑制作用。 5、稳定表达IFITM细胞系的构建。将构建好的三个重组质粒pcDNA3.1(+)-IFITM1、pcDNA3.1(+)-IFITM2和pcDNA3.1(+)-IFITM3，转染至PK15细胞，48小时后分析其表达情况，并用G418筛选10-15天，以建立IFITM1、IFITM2、IFITM3基因分别稳定表达的细胞系，以便于以后更深入的研究该基因的功能。

关键词：干扰素诱导的跨膜蛋白组织表达差异乙脑病毒稳定表达细胞系

来源：评论

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山羊clock和cry1基因的克隆及其在大脑和垂体中表达差异的研究

山羊clock和cry1基因的克隆及其在大脑和垂体中表达差异的研究

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作者：张熹玉四川农业大学

学位级别：硕士

clock和cry1基因作为维持生物体节律的关键基因,其在哺乳动物的生物钟调控中起着非常重要的作用。本研究以培育品种南江黄羊为试验材料,应用分子克隆技术从南江黄羊生后60d的垂体组织中分离克隆生物钟基因家族中的clock和cry1两个基因... 详细信息

clock和cry1基因作为维持生物体节律的关键基因,其在哺乳动物的生物钟调控中起着非常重要的作用。本研究以培育品种南江黄羊为试验材料,应用分子克隆技术从南江黄羊生后60d的垂体组织中分离克隆生物钟基因家族中的clock和cry1两个基因部分的CDS区序列。采用实时荧光定量PCR技术研究南江黄羊在生后30d、60d、90d、120d四个时间点clock基因和cry1基因性别之间表达差异、组织表达差异和不同组织的发育性变化规律。结果表明:\n (1)克隆得到南江黄羊clock嗣cryl基因的部分CDS序列,长度分别为1479bp和993bp。克隆所得山羊clock基因部分CDS区序列与绵羊、牛、人和小鼠的一致性分别为99%、90%、94%和92%:山羊cryl基因部分CDS区序列与绵羊、牛、人和小鼠的一致性分别为99%、98%、94%和87%。\n (2)在各个时间点的各个组织中都检测到clock和cry1基因的表达,但其相对表达量存在一定的差异。Clock和cryl基因的表达主要产生于垂体组织,它们在垂体组织中的基因表达量极显著高于大脑组织的表达量(P＜0.01),在大脑组织中的表达量相对较低。\n (3)clock和cryl基因在南江黄羊的垂体和大脑组织中都有表达的优势时间点,在垂体中各个时期,clock基因和cryl基因表达量均呈现先上升后下降的趋势;在垂体中,clock基因60d时表达量最高,且显著高于其它各个时期(P＜0.05),而cryl基因在60d时表达量最高,且极显著高于其它各个时期(P＜0.01);在大脑中各个时期,clock基因的表达量趋于波动平衡,cryl基因的表达量呈现上升趋势;在大脑中,clock基因120d时表达量最高,与其它各个时期差异不显著(P＞0.05),而cryl基因在120d时表达量最高,与其它各个时划差异不显著(P＞0.05)。

关键词：南江黄羊 clock基因 cryl基因克隆垂体组织大脑组织组织表达差异

来源：评论

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