检索结果-内蒙古大学图书馆

生物技术通报 2025年第1期41卷 221-229页

作者：田栩瑞霍信屹郭云涵向林产祝龙王艳平华中农业大学园艺林学学院武汉430070 果蔬园艺作物种质创新与利用全国重点实验室武汉430070

【目的】对百合LoSAUR10基因进行克隆和组织表达特异性分析,在拟南芥中对其功能进行探究,为百合鳞茎发育机理提供参考依据。【方法】利用外源处理比较生长素对百合鳞片扦插籽球发生的影响,在此基础上以‘西伯利亚’百合cDNA为模板克隆Lo... 详细信息

【目的】对百合LoSAUR10基因进行克隆和组织表达特异性分析,在拟南芥中对其功能进行探究,为百合鳞茎发育机理提供参考依据。【方法】利用外源处理比较生长素对百合鳞片扦插籽球发生的影响,在此基础上以‘西伯利亚’百合cDNA为模板克隆LoSAUR10,并对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR和过表达转基因拟南芥植株对LoSAUR10基因的表达特征及其在叶片发育中的功能进行分析。【结果】生长素IAA处理能显著促进百合鳞片扦插过程中的籽球发生和膨大,0.05 g/L的生长素处理后百合籽球发生率较对照组增加了69.04%。在扦插产生的籽球发生早期,LoSAUR10基因的表达受外源生长素诱导,在籽球进入膨大阶段时,LoSAUR10基因的表达逐渐下降。测序结果表明,LoSAUR10基因编码区长297 bp,无内含子,编码98个氨基酸,含有Auxin-inducible结构域。进化树分析结果表明LoSAUR10蛋白序列与郁金香中TgSAUR10及模式植物拟南芥中AtSAUR9和AtSAUR10具有较高的序列相似性。荧光定量PCR结果表明,LoSAUR10基因在转录水平受生长素诱导,且在多个组织中均有表达,但在百合鳞片中表达量较高。与野生型植株相比,过表达LoSAUR10的转基因拟南芥植株表现出莲座叶增大,叶片数量增加,叶片表皮细胞面积增大,且抽薹时间提前的表型。【结论】百合LoSAUR10基因参与调控植物的叶片发育和开花过程,研究结果为揭示百合籽球发生机理奠定了基础。

关键词：百合 LoSAUR10 籽球组织表达特异性转基因拟南芥

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左侧视网膜剥夺鸽左前脑差异表达基因全长cDNA的克隆

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第4期20卷 457-462页

作者：金珠匡晶徐磊吕立夏许蕾李学礼王尧上海第二医科大学基础医学院生理教研室上海200025 上海体育学院生物化学教研室上海200433 同济大学基础医学院生物化学教研室上海200070

利用cDNA末端快速扩增 (RACE)技术克隆了一条由左侧视网膜剥夺造成左前脑差异表达EST片段的全长cDNA序列 ,同源性比较后认定 ,其为鸽e(r)基因 .该基因与人类及斑马鱼等脊椎动物e(r)基因的同源性非常高 ,但C端有明显差异 .RNA斑点杂交、... 详细信息

利用cDNA末端快速扩增 (RACE)技术克隆了一条由左侧视网膜剥夺造成左前脑差异表达EST片段的全长cDNA序列 ,同源性比较后认定 ,其为鸽e(r)基因 .该基因与人类及斑马鱼等脊椎动物e(r)基因的同源性非常高 ,但C端有明显差异 .RNA斑点杂交、逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及Northern印迹等方法检测 ,该基因在不同组织中表达量有差异 .结果表明 ,鸽e(r)基因在左眼视网膜剥夺鸽的左前脑及肝、肾中的表达量较高 ,该基因的表达具有一定的组织表达特异性 .

关键词： eDNA末端快速扩增法(RACE) 组织表达特异性 e(r)基因脑鸽

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番茄根特异表达基因LeGRP2启动子的克隆及其在拟南芥的表达分析

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中国农业科学 2010年第9期43卷 1877-1882页

作者：李志邈杨悦俭杨飞叶青静王荣青阮美颖周国治姚祝平浙江省农业科学院蔬菜研究所/中澳作物改良研究中心浙江师范大学化学与生命科学学院

目的克隆获得番茄根特异表达启动子,为利用基因工程技术创制番茄新种质奠定基础。方法利用Clontech公司的基因组步移(genome walking)技术,扩增番茄根特异表达基因LeGRP2的上游调控序列,并构建植物表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥,... 详细信息

目的克隆获得番茄根特异表达启动子,为利用基因工程技术创制番茄新种质奠定基础。方法利用Clontech公司的基因组步移(genome walking)技术,扩增番茄根特异表达基因LeGRP2的上游调控序列,并构建植物表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥,以GUS为报告基因研究该调控序列的组织表达特异性。结果以番茄基因组DNA为模板,经过2次基因组步移,获得了LeGRP2基因上游1959bp的调控序列(GenBank登录号:EU262719),分析发现含有9个与根特异表达相关的顺式作用元件ROOTMOTIFTAPOX1。转基因拟南芥的组织化学染色分析表明,GUS基因主要在拟南芥的根部特异表达。结论克隆获得了番茄LeGRP2基因启动子,该启动子主要在转基因拟南芥根部表达GUS基因,具有较强的根表达特异性。

关键词：番茄根特异启动子基因组步移组织表达特异性

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樟树长链脂肪酰CoA合成酶1鉴定与功能初步分析

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分子植物育种 2018年第16期16卷 5255-5264页

作者：汪信东江香梅章挺伍艳芳李江江西省林业科学院樟树研究所南昌330013

樟树(Cinnamomum camphora(L.)Presl.)籽油富含中链脂肪酸,但其生物合成机制尚未可知。长链脂肪酰基CoA合成酶(long chain fatty aycl-CoA synthetases,LACSs)亚家族在植物脂肪酸合成与分解代谢中具有重要作用。以樟树转录组数据为参考... 详细信息

樟树(Cinnamomum camphora(L.)Presl.)籽油富含中链脂肪酸,但其生物合成机制尚未可知。长链脂肪酰基CoA合成酶(long chain fatty aycl-CoA synthetases,LACSs)亚家族在植物脂肪酸合成与分解代谢中具有重要作用。以樟树转录组数据为参考、本研究克隆并鉴定了一个LACS基因亚家族成员,序列比对显示其编码氨基酸序列与拟南芥At LACS1序列相似性高达65%,故将之命名为Cc LACS1。实时荧光定量PCR检测显示Cc LACS1基因在花与种仁中优势表达,叶、茎组织中次之。缺陷型酵母互补实验证明Cc LACS1具有脂酰CoA合成酶活性,可广泛地将外源C10~C18脂肪酸活化为脂酰CoA硫酯,但C18类脂肪酸是其偏好催化底物。上述结果暗示Cc LACS1可能与樟树籽油合成与累积相关。

关键词：樟树长链脂肪酰基CoA合成酶1 组织表达特异性酵母互补检测底物偏好性

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拟南芥根特异表达基因启动子在烟草中的表达

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西北植物学报 2011年第6期31卷 1105-1109页

作者：吕山花孙宽莹樊颖伦聊城大学农学院山东聊城252059

以拟南芥为材料,利用PCR技术分离pyk10启动子序列,构建了该启动子GUS植物表达载体,农杆菌介导转化烟草,分析该基因在烟草中的表达,以明确拟南芥根特异表达基因pyk10启动子在烟草中的表达特性。结果表明:克隆的pyk10启动子与已报道的pyk1... 详细信息

以拟南芥为材料,利用PCR技术分离pyk10启动子序列,构建了该启动子GUS植物表达载体,农杆菌介导转化烟草,分析该基因在烟草中的表达,以明确拟南芥根特异表达基因pyk10启动子在烟草中的表达特性。结果表明:克隆的pyk10启动子与已报道的pyk10启动子一致性为100%,GUS基因在烟草的根部特异表达,表明该启动子为根部特异表达启动子,为揭示植物根的发生、分化和发育机制,以及培育抗根部病虫害和营养高效利用型转基因烟草奠定了基础。

关键词：烟草根特异启动子组织表达特异性拟南芥

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甜瓜HD-ZIP基因家族的鉴定及表达

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分子植物育种 2023年

作者：尹丽娟侯尹婕潘晓娜黄可心马磊宫曼玉熊程张显魏春华西北农林科技大学园艺学院湖南农业大学园艺学院

为了探究甜瓜HD-ZIP基因家族的特征及其在甜瓜不同组织以及白粉病、枯萎病胁迫下的表达模式，本研究利用生物信息学的方法鉴定了甜瓜HD-ZIP基因家族成员，分析了其进化关系、保守结构域、基因复制关系、顺式作用元件、组织特异性表达，... 详细信息

为了探究甜瓜HD-ZIP基因家族的特征及其在甜瓜不同组织以及白粉病、枯萎病胁迫下的表达模式，本研究利用生物信息学的方法鉴定了甜瓜HD-ZIP基因家族成员，分析了其进化关系、保守结构域、基因复制关系、顺式作用元件、组织特异性表达，以及白粉病(24， 72， 168 h)、枯萎病菌(24， 48 h)侵染不同时间后基因的表达情况。结果表明，甜瓜HD-ZIP基因家族共包含38个成员，不均匀地分布在除03和05染色体外的10条染色体上，除02染色体外，其他染色体上均可检测到包含CmHDZs的染色体片段复制事件。甜瓜HD-ZIP基因家族可分为I、II、III和IV 4个亚家族，且同一亚家族中的HD-ZIP转录因子具有相似的保守结构和基因结构。启动子分析可得，光响应元件、厌氧诱导元件及脱落酸响应元件广泛分布于甜瓜HD-ZIP基因家族中。基因表达分析结果显示，CmHDZs在甜瓜根、叶、雄花、雌花和果实中存在不同程度的表达。在白粉病菌侵染下，与对照(接种0 h)相比，多数基因呈现下调表达；在接种枯萎病菌后，与对照(接种0 h)相比，CmHDZs总体呈现下调表达趋势。该研究结果为甜瓜的基因改良和遗传育种提供了参考。

关键词： HD-ZIP基因家族甜瓜(Cucumis melo L.) 基因鉴定组织表达特异性生物胁迫

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陆地棉bHLH转录因子GhMYC4基因的克隆及功能分析

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中国农业科技导报 2016年第5期18卷 33-41页

作者：高丽华刘博欣李金博吴燕民唐益雄中国农业科学院生物技术研究所北京100081 西北大学生命科学学院西安710069 深圳市铁汉生态环境股份有限公司深圳518000

通过电子克隆技术从陆地棉中分离了一个Gh MYC4基因(Gen Bank登录号:KF751654),该基因编码的蛋白属于b HLH类转录因子。生物信息学分析结果显示:该基因完整开放阅读框有1 650 bp,编码549个氨基酸。Gh MYC4蛋白的N-端具有MYC蛋白家族特有... 详细信息

通过电子克隆技术从陆地棉中分离了一个Gh MYC4基因(Gen Bank登录号:KF751654),该基因编码的蛋白属于b HLH类转录因子。生物信息学分析结果显示:该基因完整开放阅读框有1 650 bp,编码549个氨基酸。Gh MYC4蛋白的N-端具有MYC蛋白家族特有的b HLH-MYC-N保守结构域,C端具有高度保守的DNA结合域即b HLH结构域。同源比对和系统进化树分析结果显示Gh MYC4蛋白与陆地棉b HLH转录因子和可可b HLH转录因子的亲缘关系最近,与其他物种的MYC2家族成员具有很大的相似性。通过Real time-PCR检测该基因的组织表达特异性,结果显示该基因在陆地棉的根部和叶片中高效表达,纤维中微量表达。在拟南芥原生质体中进行该基因的瞬时表达,证实了Gh MYC4蛋白定位于细胞核。转Gh MYC4的拟南芥受到高盐和干旱胁迫后相比于对照在表型上表现出很好的抗旱耐盐性能,其叶片相对含水量、可溶性糖含量及脯氨酸含量显著高于对照,MDA含量显著低于对照。该结果为培育抗旱耐盐棉花新品种提供了新的基因来源。

关键词：陆地棉 b HLH转录因子 MYC蛋白亚细胞定位组织表达特异性抗旱耐盐

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棉花GhGGPase基因克隆、序列分析及原核表达

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新疆农业科学 2013年第6期50卷 1008-1015页

作者：禄亚洲赛富涛李榕李鸿彬石河子大学生命科学学院新疆石河子832003 石河子大学农业生物技术重点实验室新疆石河子832003

【目的】棉花GDP-L-半乳糖磷酸化酶(GhGGPase)基因的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】利用RT-PCR技术从棉花纤维中克隆棉花GhGGPase基因,进行生物信息学分析,构建原核表达载体pET28a-GhGGPase,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外... 详细信息

【目的】棉花GDP-L-半乳糖磷酸化酶(GhGGPase)基因的克隆、功能序列分析及原核表达。【方法】利用RT-PCR技术从棉花纤维中克隆棉花GhGGPase基因,进行生物信息学分析,构建原核表达载体pET28a-GhGGPase,转化大肠杆菌BL21(DE3)并进行体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。【结果】从陆地棉纤维组织中扩增得到L-半乳糖磷酸化酶基因的cDNA开放读码框为1 350 bp,为包含450个氨基酸的蛋白质,理论分子质量为49 kDa。对氨基酸序列进行生物信息学分析,GhGGPase蛋白具有组氨酸三聚体(HIT)蛋白超家族的主要特性的结构域。进化树分析的表明棉花GhGGPase与柑橘CuGGPase在进化上亲缘关系上较近。成功构建了pET28a-GhGGPase原核表达载体;获得分子质量约为49 kDa左右的重组蛋白GhGGPase。半定量RT-PCR的组织表达特异性分析表明GhGGPase基因与棉纤维的快速伸长发育密切相关。【结论】GhGGPase基因的克隆、序列分析和重组蛋白的诱导表达为深入研究该基因在棉纤维发育中的作用奠定了基础。

关键词：棉花纤维 GDP—L-半乳糖磷酸化酶基因克隆组织表达特异性原核表达

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甘薯PEBP基因家族鉴定以及影响甘薯块根发育候选PEBP基因的鉴定

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热带作物学报 2024年第3期45卷 459-472页

作者：黄哲瑞辛曙丽赵添刘永华朱国鹏海南大学三亚南繁研究院海南三亚572022 海南大学园艺学院/海南省热带园艺作物品质调控重点实验室海南海口570228 保亭黎族苗族自治县农业服务中心海南保亭572316

磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)在植物中广泛存在,在调控开花、种子休眠以及地下储藏器官(如马铃薯块茎和洋葱鳞茎)形成中发挥着重要作用。但目前有关甘薯(Ipomoea batatas)PEBP基因家族成员的研究较少,且尚未有研究系统揭示调控甘薯块根... 详细信息

磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)在植物中广泛存在,在调控开花、种子休眠以及地下储藏器官(如马铃薯块茎和洋葱鳞茎)形成中发挥着重要作用。但目前有关甘薯(Ipomoea batatas)PEBP基因家族成员的研究较少,且尚未有研究系统揭示调控甘薯块根发育的关键PEBP家族成员。本研究首先通过生物信息学分析对甘薯基因组中PEBP基因家族成员的数量和种类进行鉴定,然后通过PEBP基因表达的组织特异性分析、PEBP基因在不同发育时期块根中表达水平的动态变化及其与糖转运蛋白SWEET基因表达水平之间的相关性分析,系统筛选出调控甘薯块根发育的候选PEBP基因家族成员并初步揭示其可能的调控机制。结果如下:(1)从甘薯基因组中共鉴定出15个PEBP基因,聚类分析将其分为4个亚家族:5个FT-like成员(IbFT1~5)、6个TFL1-like成员(IbTFL1~6)、2个MFT-like成员(IbMFT1~2)和2个PEBP-like成员(IbPEBP1~2)。(2)聚类分析结果表明,IbFT5可能会促进甘薯块根发育,而IbTFL3可能会抑制其块根发育。(3)甘薯PEBP基因表达的组织特异性分析表明,在根系高表达的PEBP基因中,只有IbFT5、IbTFL4和IbTFL6不仅在根系的表达水平高于在其他组织中的表达水平,而且和根系中其他PEBP家族成员的表达水平相比,这3个基因的表达水平也是最高的,因此推测这3个PEBP基因可能会促进块根膨大。(4)对上述2种方法得到的4个候选PEBP基因(IbFT5、IbTFL3、IbTFL4和IbTFL6)在不同发育时期块根(定植后30、60、90、120 d)中的表达水平测定结果表明,随着块根的发育,IbFT5、IbTFL4、IbTFL6的表达水平显著上升,特别是在块根快速膨大期(60~90 d),而IbTFL3的表达水平在块根快速膨大期(60~90 d)则快速下降。因此,IbFT5、IbTFL4、IbTFL6可能促进块根发育,而IbTFL3则可能抑制块根发育。(5)伴随着IbFT5、IbTFL4、IbTFL6的表达水平的升高,块根中高表达的5个SWEET基因中有4个(IbSWEET4、IbSWEET11、IbSWEET16和IbSWEET19)的表达水平均呈现不断下降的趋势,这与马铃薯的研究结果相似,表明甘薯PEBP基因可能也是通过抑制SWEET蛋白活性,从而促进糖分通过更高效率的共质体转运途径向块根进行运输最终促进块根发育。综上,本研究不仅确定了甘薯基因组中PEBP基因家族成员的数量和种类,而且还筛选出4个可能影响甘薯块根发育的候选PEBP基因,为进一步提高我国甘薯的产量提供理论依据。

关键词：甘薯 PEBP基因家族生物信息学组织表达特异性块根发育

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At2g04450启动子的克隆和启动活性分析

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热带作物学报 2014年第1期35卷 53-58页

作者：吴坤鑫张秀春陈雄庭刘志昕彭明中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室海南海口571101 农业部转基因植物及植物用微生物环境安全监督检验测试中心海南海口571101

为明确拟南芥At2g04450启动子对靶标基因表达的启动作用,根据已报道的拟南芥基因组序列设计合成1对引物,以拟南芥基因组DNA为模板克隆At2g04450上游调控序列,并与pBAR-GUS中间表达载体相连构建植物表达载体p04450p-GUS,采用农杆菌GV310... 详细信息

为明确拟南芥At2g04450启动子对靶标基因表达的启动作用,根据已报道的拟南芥基因组序列设计合成1对引物,以拟南芥基因组DNA为模板克隆At2g04450上游调控序列,并与pBAR-GUS中间表达载体相连构建植物表达载体p04450p-GUS,采用农杆菌GV3101介导的渗透法转化野生型拟南芥,以GUS为报告基因研究该调控序列的组织表达特异性以及病原菌PstDC3000对该启动子的诱导表达效果。结果表明:获得At2g04450上游调控序列,该序列不仅具有启动子活性,并且具有组织特异性,GUS基因主要在根特异表达;病原菌PstDC3000对该启动子的表达没有诱导作用。本结果将为研究At2g04450的功能奠定基础。

关键词： At2g04450启动子 GUS活性组织表达特异性

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