检索结果-内蒙古大学图书馆

分子植物育种 2019年第6期17卷 1906-1912页

作者：罗冬梅赵亚文荆永琳徐立李志英南京农业大学园艺学院南京210095 中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所农业部华南作物基因资源与种质创制重点实验室儋州571700 海南大学热带农林学院海口570228

为研究漆酶在牛大力生长发育过程中的生物学功能,本实验以牛大力叶片为材料,从反转录PCR获得的cDNA中扩增出漆酶基因CsLAC17全长。序列分析表明,CsLAC17 c DNA全长为2 010 bp,开放阅读框大小为1 755 bp,编码一个由584个氨基酸组成的蛋... 详细信息

为研究漆酶在牛大力生长发育过程中的生物学功能,本实验以牛大力叶片为材料,从反转录PCR获得的cDNA中扩增出漆酶基因CsLAC17全长。序列分析表明,CsLAC17 c DNA全长为2 010 bp,开放阅读框大小为1 755 bp,编码一个由584个氨基酸组成的蛋白质。结构域分析表明,Cs LAC17蛋白的保守结构域具有漆酶典型结构域的特征——铜离子结合域(Cu-oxidase和Cu-oxidase-2)。同源序列分析表明,Cs LAC17蛋白序列与绿豆(Vigna radiata var. radiata)和野生大豆(Glycine soja)同源性为88%、藜豆(Mucuna pruriens)87%、蒺藜苜蓿(Medicago truncatula) 85%。组织特异性表达分析显示,CsLAC17在茎中表达量最高,叶中表达量次之,根中较少。此外,进一步构建了pBI121-CsLAC17过表达载体并转入农杆菌。本研究为日后CsLAC17基因的功能验证以及为牛大力开展分子生物学研究提供帮助。

关键词：牛大力 CsLAC 17 基因克隆组织表达特异性表达载体

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胡杨PeWRKY1基因及其启动子的克隆与功能分析

胡杨PeWRKY1基因及其启动子的克隆与功能分析

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作者：常李伟北京林业大学

学位级别：硕士

WRKY转录因子家族是近年来研究较为广泛的转录因子,WRKY蛋白含锌指结构,其N端存在高度保守的WRKYGQK氨基酸序列,WRKY结构域能专一的与顺式元件W-box[(T)(T)TGAC(C/T)]序列结合。目前研究发现,WRKY转录因子参与了植物生物与非生物胁迫应... 详细信息

WRKY转录因子家族是近年来研究较为广泛的转录因子,WRKY蛋白含锌指结构,其N端存在高度保守的WRKYGQK氨基酸序列,WRKY结构域能专一的与顺式元件W-box[(T)(T)TGAC(C/T)]序列结合。目前研究发现,WRKY转录因子参与了植物生物与非生物胁迫应答反应及其信号转导、植物生长发育、形态建成及代谢调控等一系列生理活动。本研究从胡杨中克隆得到了PeWRKYl基因,通过构建植物过表达载体,利用农杆菌介导方法转化烟草,得到8个转基因株系。用100mM的NaCl处理转基因烟草水培苗一周后,对照及转基因植株的净光合速率(Pn)和气孔导度(Gs)都有显著下降,回复处理三天后,转基因植株的Pn和Gs都有所回升,但对照组的Pn仍然保持继续下降趋势,暗示PeWRKY1在植物响应盐胁迫方面可能存在一定的作用。从胡杨及灰杨中分别调取WRKYl基因的启动子进行序列分析发现,两者含有与植物抗逆相关的多种元件,同时,两者都含有一个W-box结构,表明该启动子可能受上游WRKY家族成员的调控。将两启动子构建到含GUS基因的载体并分别转入烟草,对其进行GUS组织化学染色发现：两种启动子都存在组织表达特异性,转胡杨WRKY1启动子烟草的根、茎维管形成层及叶肉细胞中都发现GUS活性,但转灰杨WRKY1启动子烟草的茎维管形成层并未发现GUS活性,且在根和叶肉细胞中表达量相对较低,表明两种启动子在响应植物逆境胁迫反应中可能存在功能性差异。

关键词： WRKY 非生物胁迫耐盐性顺式元件组织表达特异性

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航天诱变水稻品系972-4差异表达序列（AF448491）的分析研究

航天诱变水稻品系972-4差异表达序列（AF448491）的分析研究

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作者：袁杨成哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

我们在1996年利用返回式卫星搭载了水稻种子,经过7代的选育,获得了许多稳定遗传的突变品系.这些突变性状有表现产量增加,熟期提前,株高和抗逆性变化等表型.并通过稻瘟病抗性试验确定了其中的一个突变品系(972-4).通过对22个稻瘟病生理... 详细信息

我们在1996年利用返回式卫星搭载了水稻种子,经过7代的选育,获得了许多稳定遗传的突变品系.这些突变性状有表现产量增加,熟期提前,株高和抗逆性变化等表型.并通过稻瘟病抗性试验确定了其中的一个突变品系(972-4).通过对22个稻瘟病生理小种的压力筛选,发现972-4对N733.1和N337.3这两个稻瘟病小种的抗性明显减弱.为了揭示这些突变性状的分子生物学机制,该研究集中在稻瘟病抗性突变品系(972-4)cDNA差异片断(EST-AF448491)的表达研究上,EST-AF448491是通过DD-PCR在空间诱变972-4品系与其地面对照972ck的cDNA中,克隆的差异表达序列,长度687bp,将AF448491序列输入NCBI,用blastn查找同源序列,发现与水稻基因组序列AP005191同源,根据水稻基因组序列AP005191的相关信息,确定该基因位于水稻2号染色体12.8CM处.为了研究其基因结构和功能,我们在通过RT-PCR和5\'RACE的方法拟克隆Pi-HIT-2的全长序列的同时,对其在组织特异性、时期表达特异性和抗逆性进行了研究.初步的研究结果提示EST——AF448491的表达在972-4的苗期的叶中表达量比972ck高.在盐胁迫下,其表达在972-4中比对照974ck增强,且有随着时间的推移而逐渐增强的趋势.进一步对其全长基因结构分析,对研究972-4突变品系的抗盐特性,以及是否与空间环境引起该EST所在基因的突变有关,将是非常有意义的工作.

关键词：水稻EST-AF448491 组织表达特异性盐胁迫

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白桦TLP家族基因全基因组鉴定及表达特性分析

白桦TLP家族基因全基因组鉴定及表达特性分析

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作者：毕德泷牡丹江师范学院

学位级别：硕士

白桦(Betula platyphylla)是一种重要的观赏和经济植物,分布广泛,其生长发育阶段易受到各种非生物及生物胁迫的影响,特别是一些病虫害,严重影响白桦的培育,通过杀菌剂处理植物病害,容易对环境造成污染,引起病原菌的抗性,因此利用分子育... 详细信息

白桦(Betula platyphylla)是一种重要的观赏和经济植物,分布广泛,其生长发育阶段易受到各种非生物及生物胁迫的影响,特别是一些病虫害,严重影响白桦的培育,通过杀菌剂处理植物病害,容易对环境造成污染,引起病原菌的抗性,因此利用分子育种技术改良其抗病性成为研究热点。病程相关蛋白在植物抗病中具有重要作用,能直接作用于病原菌,抑制其对植物体的侵害,类甜蛋白(thaumatin-like protein,TLP)是其中一个重要的亚家族,由于该家族蛋白常具有抗真菌活性而成为研究热点,但在白桦中仍未见相关报道。为全面了解白桦TLP家族基因的结构和功能特点,本研究采用同源序列比对法从白桦基因组数据库中筛选和鉴定白桦TLP家族成员,并对其理化性质、亲/疏水性、亚细胞定位、跨膜结构域、信号肽、磷酸化位点、基因结构、染色体分布、保守结构域、蛋白质二级结构、三级结构、启动子顺式作用元件、系统进化等进行了预测和分析。结果表明,白桦TLP基因家族共有41个成员,氨基酸数量在336～975 aa之间,分子量在28 054.11～81 966.03 Da之间,理论等电点在5.01～5.21之间,为偏酸性氨基酸,均为疏水性蛋白;大部分成员定位在细胞质中;17个家族成员含有跨膜结构;磷酸化位点分析结果表明,8个家族蛋白以苏氨酸磷酸化修饰为主,丝氨酸磷酸化修饰为辅;1个家族蛋白以丝氨酸磷酸化修饰为主,酪氨酸磷酸化修饰为辅;其余32个白桦TLP家族基因以丝氨酸磷酸化修饰为主,苏氨酸磷酸化修饰为辅。白桦TLP基因家族成员分布在11条染色体上,其中以8号染色体分布最多(14个);启动子顺式作用元件分析发现,白桦TLP家族成员启动子中多含有植物激素、非生物胁迫及生物胁迫响应相关元件。基于转录组数据和基因半定量技术分析了白桦TLP家族基因的组织表达特异性,结果表明,大多数成员在叶中的表达量最高,在花和叶中,Bp TLP30表达量最高;在根、韧皮部及维管形成层中,Bp TLP33表达量均最高;在木质部中,Bp TLP15的表达量最高;在木栓层及木栓形成层,Bp TLP31表达量最高。Bp TLP35、Bp TLP39在叶片中表达量较高,Bp TLP14、Bp TLP35、Bp TLP36在茎中表达量较高,Bp TLP3、Bp TLP41在根中表达量较高。在Na Cl、低温和病原菌胁迫下,白桦TLP基因均有不同程度的响应,说明该家族基因可能与白桦抗逆性有关。此外,本研究对在病原菌侵染过程中响应强烈的Bp TLP35基因进行了克隆并构建了其植物表达载体。本研究对白桦TLP基因家族成员的特征及表达特性进行了分析,并对关键基因进行了克隆和表达载体的构建,为该家族成员在白桦不同生命过程中的功能研究提供了参考,为关键抗病基因的研究奠定了基础。

关键词：白桦 TLP基因家族生物信息学组织表达特异性表达特性

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军曹鱼Hepcidin基因全长克隆、组织分布及原核表达分析

军曹鱼Hepcidin基因全长克隆、组织分布及原核表达分析

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作者：张鹤河北大学

学位级别：硕士

本文以军曹鱼（Rachycentron canadium）为研究对象，采用同源克隆、RACE-PCR技术，对军曹鱼Hepcidin基因进行了克隆，获得了军曹鱼Hepcidin基因的全长cDNA序列。利用荧光定量PCR（QRT-PCR）技术对Hepcidin在mRNA水平上的表达量进行了... 详细信息

本文以军曹鱼（Rachycentron canadium）为研究对象，采用同源克隆、RACE-PCR技术，对军曹鱼Hepcidin基因进行了克隆，获得了军曹鱼Hepcidin基因的全长cDNA序列。利用荧光定量PCR（QRT-PCR）技术对Hepcidin在mRNA水平上的表达量进行了分析，分析了该基因在军曹鱼正常组织中的分布以及在分别注射脂多糖（LPS）和鲨鱼弧菌（Vibrio carchariae）前后在肝脏、头肾、脾脏中的表达变化。成功构建了Hepcidin基因的原核表达载体。军曹鱼Hepcidin基因全长cDNA序列含714 bp，包括213 bp的5’末端非编码区（5’UTR），228 bp的3’末端非编码区（3’UTR）及273 bp的开放阅读框（ORF），编码90个氨基酸。军曹鱼Hepcidin基因开放阅读框分为信号肽、前肽和成熟肽区，每个区域分别由24个氨基酸、40个氨基酸和26个氨基酸组成，信号肽的分割位点在24位的丙氨酸（Ala）和25位的缬氨酸（Val）之间，成熟肽区域存在8个保守的半胱氨酸位点。预测其蛋白质分子量约为10.03 KDa，等电点为7.54。对其氨基酸序列进行同源性分析，结果表明，军曹鱼和已知鱼类及哺乳动物Hepcidin氨基酸的同源性在85.6 %24.4 %之间。通过氨基酸比对，构建了Hepcidin氨基酸序列的系统进化树，发现军曹鱼和黄鳝的关系最近。利用QRT-PCR技术分析发现Hepcidin基因在已检测的军曹鱼各个正常组织中均表达，其中于肝脏、头肾、脾脏的表达较强；肠、鳃、心脏、皮肤表达程度中等；在血液、脑、胃中表达较弱。军曹鱼稚鱼经LPS以及鲨鱼弧菌分别刺激后，Hepcidin基因表达在肝脏、头肾、脾脏中上升，在肝脏中Hepcidin的表达量上升最快，在6 h已达到表达最高峰，头肾、脾脏中Hepcidin的表达量均在24 h达到表达最高峰，且肝脏中的表达量与头肾和脾脏相比较是最多的。经鲨鱼弧菌刺激后，肝脏在12 h时Hepcidin的表达量达到最高峰，头肾和脾脏均在24 h的时候达到最高峰且与头肾和脾脏相比肝脏中的表达量要多。说明在外源效应因子的刺激作用下，可诱导免疫器官迅速合成急性反应蛋白Hepcidin，作用于外源效应因子，从而对机体进行保护。成功构建了PTYB11-Hepcidin的重组质粒，并将其转入表达菌株*** ER2566，用IPTG进行诱导表达，之后进行SDS-PAGE，基因表达产物出现在66.03 KDa处，经Western Blot检验，证明表达出的重组蛋白与预期结果相符。经IPTG诱导表达之后，进行超声破碎，上清中没有目的蛋白，说明重组蛋白应以包涵体形式存在。该重组质粒的构建为进一步深入研究军曹鱼Hepcidin的结构与功能提供了很好的实验依据。

关键词：军曹鱼 Hepcidin基因全长cDNA 组织表达特异性原核表达

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胡杨PeWRKYl基因及其启动子的克隆与功能分析

胡杨PeWRKYl基因及其启动子的克隆与功能分析

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作者：常李伟北京林业大学

学位级别：硕士

WRKY转录因子家族是近年来研究较为广泛的转录因子,WRKY蛋白含锌指结构,其N端存在高度保守的WRKYGQK氨基酸序列,WRKY结构域能专一的与顺式元件W-box[(T)(T)TGAC(C/T]序列结合。目前研究发现,WRKY转录因子参与了植物生物与非生物胁迫应... 详细信息

WRKY转录因子家族是近年来研究较为广泛的转录因子,WRKY蛋白含锌指结构,其N端存在高度保守的WRKYGQK氨基酸序列,WRKY结构域能专一的与顺式元件W-box[(T)(T)TGAC(C/T]序列结合。目前研究发现,WRKY转录因子参与了植物生物与非生物胁迫应答反应及其信号转导、植物生长发育、形态建成及代谢调控等一系列生理活动。\n 本研究从胡杨中克隆得到了PeWRKY1基因,通过构建植物过表达载体,利用农杆菌介导方法转化烟草,得到8个转基因株系。用100mM的NaCl处理转基因烟草水培苗一周后,对照及转基因植株的净光合速率(Pn)和气孔导度(Gs)都有显著下降,回复处理三天后,转基因植株的Pn和Gs都有所回升,但对照组的Pn仍然保持继续下降趋势,暗示PeWRKY1在植物响应盐胁迫方面可能存在一定的作用。\n 从胡杨及灰杨中分别调取WRKY1基因的启动子进行序列分析发现,两者含有与植物抗逆相关的多种元件,同时,两者都含有一个W-box结构,表明该启动子可能受上游WRKY家族成员的调控。将两启动子构建到含GUS基因的载体并分别转入烟草,对其进行GUS组织化学染色发现:两种启动子都存在组织表达特异性,转胡杨WRKY1启动子烟草的根、茎维管形成层及叶肉细胞中都发现GUS活性,但转灰杨WRKY1启动子烟草的茎维管形成层并未发现GUS活性,且在根和叶肉细胞中表达量相对较低,表明两种启动子在响应植物逆境胁迫反应中可能存在功能性差异。

关键词：非生物胁迫耐盐性顺式元件组织表达特异性胡杨启动子转录因子

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重组鲤鱼TOR基因、蛋白及其制备与检测方法和应用

重组鲤鱼TOR基因、蛋白及其制备与检测方法和应用

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作者：周小秋姜俊冯琳刘扬 625014 四川省雅安市新康路46号

本发明公开了一种重组鲤鱼TOR基因、蛋白及其制备与检测方法和应用。重组鲤鱼TOR基因具有SEQ ID NO：1所示的序列。重组鲤鱼TOR蛋白具有SEQ IDNO：2所示的序列。本发明获得的鲤鱼TOR基因cDNA的核苷酸序列可进一步通过RT-PCR或杂交的方... 详细信息

标准号: CN101899455A

本发明公开了一种重组鲤鱼TOR基因、蛋白及其制备与检测方法和应用。重组鲤鱼TOR基因具有SEQ ID NO：1所示的序列。重组鲤鱼TOR蛋白具有SEQ IDNO：2所示的序列。本发明获得的鲤鱼TOR基因cDNA的核苷酸序列可进一步通过RT-PCR或杂交的方法检测TOR基因的组织表达特异性，也可进一步实现鲤鱼TOR基因全长cDNA的克隆。将本发明的cDNA重组到表达载体上可能会表达出完整的TOR蛋白，进而可用于抗体生产，检测鲤鱼各类细胞和组织、早期胚胎、个体在不同状态下的TOR基因的表达情况等。

关键词：鲤鱼基因蛋白组织表达特异性核苷酸序列基因的表达细胞和组织制备与检测表达载体抗体生产检测胚胎克隆杂交

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山羊S6K1基因cDNA编码区核苷酸序列

山羊S6K1基因cDNA编码区核苷酸序列

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作者：旭日干吴应积王志钢刘东军 010021 内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西路235号内蒙古大学实验动物研究中心

本发明涉及从山羊肌肉细胞分离的编码S6K1蛋白的cDNA的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列。本发明通过比对已知的人、大鼠、兔、牛S6K1基因cDNA的核苷酸序列，找到保守区，然后根据牛S6K1基因cDNA序列(GenBank登陆号AY396564)设计出了... 详细信息

标准号: CN101245345B

本发明涉及从山羊肌肉细胞分离的编码S6K1蛋白的cDNA的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列。本发明通过比对已知的人、大鼠、兔、牛S6K1基因cDNA的核苷酸序列，找到保守区，然后根据牛S6K1基因cDNA序列(GenBank登陆号AY396564)设计出了一对用于RT-PCR扩增羊S6K1基因cDNA编码区片段的引物并用这对引物通过RT-PCR方法扩增出了特异性片段，测序后得到了羊S6K1基因cDNA的编码区的1563bp的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列。获得的这1563bp的核苷酸序列可进一步用于羊S6K1基因全长cDNA的克隆及用于通过RT-PCR或杂交的方法检测S6K1基因的组织表达特异性，也可用于重组表达得到蛋白后制备检测S6K1的抗体。

关键词：核苷酸序列基因氨基酸序列扩增引物蛋白组织表达特异性编码区片段特异性片段肌肉细胞重组表达保守区编码区检测抗体山羊克隆杂交

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水稻非胚乳组织表达启动子(OsTSP I)及其应用

水稻非胚乳组织表达启动子(OsTSP I)及其应用

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作者：杨剑波吕玉萍吴影王妹梅陆徐忠李莉宋丰顺张毅汪秀峰倪大虎 230031 安徽省合肥市农科南路40号

本发明涉及水稻非胚乳组织表达启动子及其应用，该启动子长1785bp，以其取代植物表达载体pCAMBIO1305.1上的组成型CaMV35S启动子，构建成为一个新的植物表达载体，命名为pOsTSP I－GUS。用转基因的方法验证该启动子的启动活性，GUS组织... 详细信息

标准号: CN101230348A

本发明涉及水稻非胚乳组织表达启动子及其应用，该启动子长1785bp，以其取代植物表达载体pCAMBIO1305.1上的组成型CaMV35S启动子，构建成为一个新的植物表达载体，命名为pOsTSP I－GUS。用转基因的方法验证该启动子的启动活性，GUS组织染色结果显示该启动子具有组织表达特异性，即只在水稻非胚乳组织(根、茎、叶等)中表达，在胚乳中不表达。该启动子的获得，为水稻及其它作物胚乳组织基因表达调控研究提供了一个有力的工具，特别是为水稻等转基因食品的安全性研究和开发创造了有利条件。因此，该启动子的获得，具有重要理论和实践意义。

关键词：启动子胚乳组织水稻植物表达载体转基因食品的安全性组织表达特异性基因表达调控胚乳研究和开发实践意义重要理论组织染色转基因组成型验证命名研究

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绒山羊4E-BP1基因cDNA编码区核苷酸序列

绒山羊4E-BP1基因cDNA编码区核苷酸序列

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作者：王志钢刘东军旭日干 010021 内蒙古自治区呼和浩特市赛罕区大学西路235号内蒙古大学实验动物研究中心

本发明涉及从体外培养的绒山羊胎儿成纤维细胞分离的编码4E-BP1蛋白的cDNA的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列。本发明通过比对已知的牛、马、人、小鼠、黑猩猩、猪的4E-BP1基因cDNA的核苷酸序列，找到保守区，然后根据牛4E-BP1基因cDN... 详细信息

标准号: CN101851626A

本发明涉及从体外培养的绒山羊胎儿成纤维细胞分离的编码4E-BP1蛋白的cDNA的核苷酸序列和与它对应的氨基酸序列。本发明通过比对已知的牛、马、人、小鼠、黑猩猩、猪的4E-BP1基因cDNA的核苷酸序列，找到保守区，然后根据牛4E-BP1基因cDNA序列(GenBank登录号NM_001077893)，在不打乱氨基酸编码序列的前提下设计出了一对用于RT-PCR扩增绒山羊4E-BP1基因cDNA编码区片段的简并引物并用这对引物通过RT-PCR方法扩增出了特异性片段，测序后得到了绒山羊4E-BP1基因cDNA的编码区的232bp的核苷酸序列和与它的前231bp核苷酸序列对应的氨基酸序列。获得的这232bp的核苷酸序列可进一步用于绒山羊4E-BP1基因全长cDNA的克隆及用于通过RT-PCR或杂交的方法检测4E-BP1基因的组织表达特异性，也可用于重组表达得到蛋白后制备检测4E-BP1的抗体。

关键词：核苷酸序列绒山羊基因氨基酸序列扩增蛋白氨基酸编码序列胎儿成纤维细胞组织表达特异性黑猩猩编码区片段特异性片段简并引物体外培养重组表达保守区编码区登录号检测抗体引物克隆杂交

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