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细胞培养氨基酸稳定同位素标记-质谱技术测定槲皮素对人肝癌细胞热休克蛋白表达的影响

中华肿瘤杂志 2011年第10期33卷 737-741页

作者：周进方丽姚文秀赵新魏阳周行谢华王理扬陈俐娟四川省肿瘤医院肿瘤内科成都610041 成都医学院第·附属医院消化内科四川大学华西医院肿瘤中心

目的观察槲皮素对人肝癌细胞HepG2中热休克蛋白（HSP）发达的影响，为其抗肿瘤活性探寻可能的靶点。方法经过连续传代，充分氚化HepG2细胞中的亮氨酸，并鉴定其标记率。采用四早基偶氮唑蓝（MTT）法检测槲皮素对HepG2细胞中的亮氨酸,并... 详细信息

目的观察槲皮素对人肝癌细胞HepG2中热休克蛋白（HSP）发达的影响，为其抗肿瘤活性探寻可能的靶点。方法经过连续传代，充分氚化HepG2细胞中的亮氨酸，并鉴定其标记率。采用四早基偶氮唑蓝（MTT）法检测槲皮素对HepG2细胞中的亮氨酸,并鉴定其标记率。采用四早基偶氮唑蓝（MTT）法检测槲素对HepG2细胞生长的抑制活性及有效浓度。以50μmol/L槲皮素作用氚化HepG2细胞45h后，与正常HepG2细胞按1：1等量混合电泳，提肽后时行质谱鉴定，将获得的肽片段数据进行Mascot检索。结论SILAC-MS成熟可靠，能全面定量分析外因作用前后HepG2细胞中全系列蛋白谱的变化，槲皮素对HepG2细胞中HSP表现出强烈的抑制能力，并且这种作用可能是其发挥肿瘤活性的途径之一。

关键词：细胞培养氨基酸稳定同位素标记-质谱技术槲皮素 HepG2细胞热休克蛋白

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应用氨基酸稳定同位素标记-质谱技术构建肺癌细胞14—3—3sigma相互作用的分子网络

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中华预防医学杂志 2013年第8期47卷 752-756页

作者：肖汀米薇李敏曹邦荣冯林程书钧高燕宁中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室100021 军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质研究中心蛋白质组学国家重点实验室

目的筛选14—3—3sigma在非小细胞肺癌细胞中的功能相关蛋白，构建相互作用的分子网络。方法构建稳定过表达14—3—3sigma蛋白的非小细胞肺癌细胞株（PG细胞，大细胞肺癌），采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法检测PG细胞的生长速度。利用... 详细信息

目的筛选14—3—3sigma在非小细胞肺癌细胞中的功能相关蛋白，构建相互作用的分子网络。方法构建稳定过表达14—3—3sigma蛋白的非小细胞肺癌细胞株（PG细胞，大细胞肺癌），采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）方法检测PG细胞的生长速度。利用稳定同位素标记氨基酸（stableisotopelabelingbyaminoacidsincellculture，SILAC）技术，联合线性离子阱回旋共振质谱仪（LC-LTQ—n’）鉴定由14-3-3sigma过表达引起的差异表达蛋白，将质谱鉴定为表达〉2倍或〈0．5倍的蛋白作为差异蛋白。通过检索人类蛋白参考数据库（Humanproteinreferencedatabase，HPRD）和蛋白质交互作用网络数据库（Kyotoencyclopediaofgenesandgenomes，KEGG）构建分子网络。结果显示C4克隆中外源14—3—3sigma表达量最高（命名为PGSC4），后续实验用PGSCA细胞进行。转染14—3-3sigma后，PG细胞生长速度明显减慢。建立了包含147个蛋白差异蛋白的数据库。构建的分子网络中含有26个蛋白，其中参与了多个细胞活动（细胞周期调控、细胞分化、凋亡等）的重要激酶——酪蛋白激酶Ⅱ0t亚基（caseinkinaseIIsubunitalpha，CSNK2A1）是表达升高最明显的蛋白质，与DNA损伤调节机制相关的转录调节因子MENl（Menin）则是表达降低幅度最大的蛋白质。结论14．3—3sigma可以抑制非小细胞肺癌PG细胞的生长速度，与细胞周期、DNA损伤修复等机制相关的蛋白质发生了变化，并构成了相互作用的分子网络。

关键词： 14—3—3蛋白质类肺肿瘤细胞培养氨基酸稳定同位素标记-质谱技术 PG细胞分子网络

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应用氨基酸稳定同位素标记-质谱技术构建肺癌细胞14-3-3 sigma相互作用的分子网络

应用氨基酸稳定同位素标记-质谱技术构建肺癌细胞14-3-3 sigma相...

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全国肿瘤病因学和肿瘤流行病学学术会议

作者：肖汀米薇李敏曾邦荣冯林程书钧高燕宁 100021 北京中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京蛋白质研究中心蛋白质组学国家重点实验室

目的：筛选14-3-3 sigma在非小细胞肺癌细胞中的功能相关蛋白,构建相互作用的分子网络.方法：构建稳定过表达14-3-3 sigma蛋白的非小细胞肺癌细胞株(PG细胞,大细胞肺癌),四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测PG细胞的生长速度.利用稳定同位素标... 详细信息

目的：筛选14-3-3 sigma在非小细胞肺癌细胞中的功能相关蛋白,构建相互作用的分子网络.方法：构建稳定过表达14-3-3 sigma蛋白的非小细胞肺癌细胞株(PG细胞,大细胞肺癌),四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测PG细胞的生长速度.利用稳定同位素标记氨基酸(stable isotope labeling by amino acids in cell culture, SILAC)技术,联合线性离子阱回旋共振质谱仪(LC-LTQ-FT)鉴定由14-3-3 sigma过表达引起的差异表达蛋白,将质谱鉴定为表达＞2倍或＜0.5倍的蛋白作为差异蛋白.通过检索人类蛋白参考数据库(Human protein reference database,HPRD)和蛋白质交互作用网络数据库(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)构建分子网络.结果：鉴定结果显示C4克隆中外源14-3-3 sigma表达量最高(命名为PGSC4),后续实验用PGSC4细胞进行.转染14-3-3 sigma后,PG细胞生长速度明显减慢.建立了包含147个蛋白差异蛋白的数据库.构建的分子网络中含有26个蛋白,其中参与了多个细胞活动(细胞周期调控、细胞分化、凋亡等)的重要激酶——酪蛋白激酶Ⅱα亚基(casein kinaseⅡsubunit alpha,CSNK2A1)是表达升高最明显的蛋白质,与DNA损伤调节机制相关的转录调节因子MEN1 (Menin)则是表达降低幅度最大的蛋白质.结论：14-3-3 sigma可以抑制非小细胞肺癌PG细胞的生长速度,与细胞周期、DNA损伤修复等机制相关的蛋白质发生了变化,并构成了相互作用的分子网络.

关键词： 14-3-3蛋白质类肺肿瘤细胞培养氨基酸稳定同位素标记-质谱技术 PG细胞分子网络

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