检索结果-内蒙古大学图书馆

药学学报 2012年第3期47卷 409-416,258页

作者：王攀高小飞卜旺雨张娟侯艳芳牛保华王玮马远方齐义军河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475000 河南大学药学院河南开封475000 河南大学环境医学研究所河南开封475000

多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是临床肿瘤化疗失败的主要原因之一,定量分析与鉴定食管鳞癌顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)耐药相关蛋白对阐明食管癌耐药的分子机制具有重要理论意义。本研究采用浓度递增法建立食管癌C... 详细信息

多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是临床肿瘤化疗失败的主要原因之一,定量分析与鉴定食管鳞癌顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)耐药相关蛋白对阐明食管癌耐药的分子机制具有重要理论意义。本研究采用浓度递增法建立食管癌CDDP耐药细胞系EC9706/CDDP,细胞培养稳定同位素标记(stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC)和高效液相-电喷雾串联质谱检测、生物信息学定量分析并鉴定EC9706/CDDP及其母细胞系EC9706的差异蛋白表达谱。EC9706/CDDP细胞呈贴壁性生长但增殖缓慢,多形性、异形性明显,耐药指数为3.23。74种差异表达的蛋白质分子主要包括细胞骨架相关蛋白(20%)、能量代谢相关蛋白(11%)、转录调控及DNA修复相关蛋白(11%)、氧化还原内稳态维持类蛋白(9.5%)、蛋白合成及参与mRNA处理类蛋白(12%)、核糖体结构类蛋白(8.1%)、分子伴侣蛋白(8.1%)、免疫/炎症反应相关蛋白(5.4%)、细胞内转运功能相关蛋白(5.4%)、核组装相关蛋白(2.7%)等。表明食管癌顺铂耐药的发生是多分子参与、多代谢通路失调的复杂过程,差异表达的蛋白分子将有助于深入理解MDR发生的分子机制,并为MDR表型逆转的新型药物设计提供有价值的分子靶点。

关键词：食管癌顺铂多药耐药细胞培养稳定同位素标记串联质谱

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细胞培养稳定同位素标记定量分析食管癌顺铂耐药相关蛋白

细胞培养稳定同位素标记定量分析食管癌顺铂耐药相关蛋白

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作者：高小飞河南大学

学位级别：硕士

背景多药抗药性（Multidrug-r esistance，M DR）是指恶性肿瘤病人或细胞接触某种抗癌药物后，继而对该药物及其他抗癌药产生耐药性，是肿瘤患者或细胞避免抗癌药物毒性作用效应的总称。MDR使肿瘤患者对化疗药物甚至一系列广谱药物的敏... 详细信息

背景多药抗药性（Multidrug-r esistance，M DR）是指恶性肿瘤病人或细胞接触某种抗癌药物后，继而对该药物及其他抗癌药产生耐药性，是肿瘤患者或细胞避免抗癌药物毒性作用效应的总称。MDR使肿瘤患者对化疗药物甚至一系列广谱药物的敏感性降低，最终导致肿瘤患者化疗疗效的降低甚至无效。许多学者进行了MDR的相关研究，主要目的是为了研究MDR的分子机制，为MDR逆转提供分子靶点及奠定理论基础，最终治愈肿瘤患者。MDR的发生涉及到细胞膜、细胞质、细胞间隙以及细胞核的结构或者功能的改变。概括起来，肿瘤细胞的耐药机制主要包括以下几个方面，（Ⅰ）细胞吞噬作用的改变，（Ⅱ）细胞膜磷脂类的改变及相互作用，（Ⅲ）细胞膜转运通路的表达和活化，（Ⅳ）增强的药物结合力和胞内积聚，（Ⅴ）胞吐作用的改变，（Ⅵ）MDR相关蛋白的表达和活化，（Ⅶ）离子微环境的改变，如pH、Ca2+浓度等。蛋白质组学是后基因组时代的一个研究热点，尤其是定量蛋白质组学，不仅是诊断疾病、治疗靶点的探索及鉴定的重要工具，更进一步加深了对疾病发生的分子机制的认识与理解。二维电泳和稳定同位素标记是定量蛋白质组学常用的两种基本技术手段。我们前期研究应用二维电泳（Two-dimensional-electrophoresis,2-D E）对食管癌及癌旁组织进行研究，已发现三十多种与食管癌发生发展相关的蛋白。但是，2-DE本身存在着许多技术缺陷和不足，如对偏碱性或偏酸性、分子量过小或过大、难溶的蛋白质的检出敏感性较低，并且消耗时间长、低通量、难以精确自动化和定量等。细胞培养稳定同位素标记（Stable isotope labeling with amino acids in cell culture，SILAC）技术是在细胞培养过程中用稳定同位素标记氨基酸结合质谱技术对蛋白质表达进行定量分析的一种技术，SILAC不但实现了对蛋白质进行定性分析，而且还可以进行精确定量分析，具有样本需求量少、直接、高效、操作简单等特点。所以，稳定同位素标记结合质谱定量分析技术正在逐步取代2-DE技术。食管癌（Esophageal-carcinoma,EC）是世界上常见的恶性肿瘤之一，其流行病学特征是具有显著的地域性，高发区与低发区德发病率相差高达500倍，食管癌的预后极差，中晚期患者的5年生存率仅为10%左右。河南省林州市是世界上食管癌高发地区之一。过去几十年里，许多学者此地区进行了各方面的研究及综合研究，提出食管癌是一个多因素多阶段的复杂过程，目前该地区人群食管癌的发病率和死亡率一直未得到明显改善，仍然是该地区肿瘤患者的主要死亡原因之一。顺铂（Cis-diamminedichloroplatinum，C DDP）和5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil-5-FU）标准化疗方案是目前EC综合治疗的重要手段，但是，治疗效果很不理想，主要原因是由于肿瘤细胞获得了多药耐药性（Multidrug-resistance,MDR），由于耐药性导致了肿瘤化疗的最终失败。因此，鉴定MDR耐药相关蛋白具有重要的理论和实际意义，不仅有助于化疗方案的制定，还能够帮助进一步理解MDR发生的分子机制。目的本研究采用SILAC和高效液相-电喷雾串联质谱（High-performance-liquidchromatography-electrosprayionization-mass-spectrometry,HPLC-ESI-MS/MS）技术，定量分析并鉴定食管癌顺铂耐药相关蛋白，分析研究食管癌顺铂耐药发生的分子机制，丰富和深入理解MDR发生的分子机制，为MDR逆转的新型药物设计提供有价值的分子靶点。方法 1、浓度递增法建立食管癌CDDP耐药细胞系EC9706/CDDP； 2、S ILAC和HPLC-ESI-MS/MS技术定量分析并鉴定EC9706/CDDP与CDDP敏感的母细胞系EC9706的差异表达蛋白； 3、免疫印迹方法（Western blotting, WB）验证食管癌顺铂耐药相关蛋白。结果 EC9706/CDDP细胞呈贴壁性生长,增殖缓慢，多形性、异形性明显，耐药指数是3.23。74种差异表达的蛋白质包括能量代谢相关蛋白（11%）、细胞骨架蛋白（20%）、蛋白合成及参与mRNA处理类蛋白(12%)、DNA修复及转录调控蛋白（11%）、氧化还原维持内稳态稳定蛋白（9.5%）、分子伴侣蛋白（8.1%）、核组装相关蛋白（2.7%）、免疫/炎症反应相关蛋白（5.4%）、细胞内转运功能相关蛋白(5.4%)、核糖体结构类蛋白（8.1%）等。小结发现了与CDDP耐药相关的差异蛋白表达谱，包括参与炎症及免疫功能、三磷酸核苷合成

关键词：食管癌顺铂多药耐药性细胞培养稳定同位素标记串联质谱

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细胞培养稳定同位素标记技术在蛋白质组学中的应用与进展

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生物技术通讯 2009年第2期20卷 238-242页

作者：沈国波徐玉环龚凤鸣梁淑芳四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室四川成都610041

细胞培养稳定同位素标记技术(SILAC)是在细胞培养过程中,利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术,对蛋白表达进行定量分析的一种新技术。它不仅可以对蛋白质进行定性分析,还可通过质谱图上一对轻-重稳定同位素峰的比例来反映对应蛋白... 详细信息

细胞培养稳定同位素标记技术(SILAC)是在细胞培养过程中,利用稳定同位素标记的氨基酸结合质谱技术,对蛋白表达进行定量分析的一种新技术。它不仅可以对蛋白质进行定性分析,还可通过质谱图上一对轻-重稳定同位素峰的比例来反映对应蛋白在不同状态下的表达水平,实现对蛋白质的精确定量。SILAC结合质谱技术在定量蛋白质组学中发挥了巨大的作用,其应用范围从细胞系扩展到亚细胞器、组织与动物整体水平,具体的应用策略也在不断完善发展。我们总结评述了SILAC技术在差异表达蛋白质组、蛋白质翻译后修饰、药物蛋白质组和蛋白质相互作用等方面的应用与进展。

关键词：细胞培养稳定同位素标记定量蛋白质组学质谱

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利用定量蛋白质体学平台找寻预测肝癌产生蕾莎瓦抗药性之生物标记物及幽门螺旋杆菌诱导胃癌之microRNA-21标的蛋白

利用定量蛋白质体学平台找寻预测肝癌产生蕾莎瓦抗药性之生物标记...

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作者：叶昭圻国立台湾大学

学位级别：博士

以质谱分析为基础的定量蛋白质体学目前已广泛地应用在生物医学或临床研究中，运用其系统化地解析不同样品间的表现量差异，找寻生物标识物或探讨致病机转。本篇论文中我们利用此技术分别研究肝癌治疗之生物标识物及microRNA (miRNA) ... 详细信息

以质谱分析为基础的定量蛋白质体学目前已广泛地应用在生物医学或临床研究中，运用其系统化地解析不同样品间的表现量差异，找寻生物标识物或探讨致病机转。本篇论文中我们利用此技术分别研究肝癌治疗之生物标识物及microRNA (miRNA) 于胃癌致病过程中参与的角色。蕾莎瓦为目前晚期肝细胞癌病患的标准治疗方式。不幸地，大部份病患治疗过程中往往会产生抗药性。因此可预测蕾莎瓦效用的生物标志物显得十分重要。为了找寻衍生蕾莎瓦抗药性中的相关蛋白，我们应用 SILAC 定量蛋白体学方法分析比较人类肝癌细胞株 HuH-7 及具蕾莎瓦抗药性的 HuH-7R 中有表现差异的蛋白，另外配合 iTRAQ 定量蛋白体学方法监定由 HuH-7 和 HuH-7R 细胞植入小鼠皮下产生肿瘤之差异蛋白。借由上述两种定量蛋白体方法，并利用软体运算分析差异蛋白得知有 10 个蛋白与癌症中的细胞贴附，移动与侵袭有关。其中，当我们减少HuH-7R细胞中的半乳糖凝集素-1 (galectin-1) 表现量，观察到细胞增生与转移受到抑制，同时也能恢复抗药性细胞对蕾莎瓦的感受性。我们证实了galectin-1为可预测蕾莎瓦抗药性的生物标志物，且 galectin-1 是经由 AKT/mTOR/ HIF-1 讯息传递途径而产生。此外，肝癌病患血液中的 galectin-1 高表现量与较差的肿瘤控制率及低反应率有关。我们也发现血液中galectin-1 含量高与不良的无恶化存活率与总体存活期存在着独立因素关联。显示 galectin-1 可当作肝癌病人接受蕾莎瓦治疗期间是否产生抗药性反应的生物标志物。借此我们可协助区分肝癌治疗效果及提供直接的个人化治疗。本篇论文的第二部分着重于胃癌。过去研究已证实，幽门螺旋杆菌 (Helicobacter pylori) 的感染确实与胃癌发生有关，然而其详细的致癌机转仍有待厘清，尤其与微核糖核酸 (miRNAs) 之关联性鲜少被讨论过。miRNAs 为一内生性且不被转译成蛋白的小分子 RNA，能借由与 mRNA基因的 3 端不转译区 (3’UTR) 结合抑制转译或造成其裂解，进而调控相关的基因表现。本实验室发现在幽门螺旋杆菌感染后 miR-21 大量表现，为了厘清 miR-21 与幽门螺旋杆菌之致癌机制，我们应用 SILAC 定量蛋白体学方法分析比较高度表现 miR-21 之胃线癌上皮细胞株 AGS 及对照组中有表现差异的蛋白。利用 miRNAs 目标预测软体 (miRsystem) 与其中表现量降低的蛋白交集得 47 个 miR-21 的潜力目标，同时使用生物资讯学分析交集之蛋白得知与癌症中的细胞增生，移动与细胞凋亡有关。我们也借由细胞实验证实了 miR-21 高度表现下，细胞增生与转移能力增强且能抑制细胞凋亡。其中选取了6个潜力 miR-21 目标: DAXX, MAP3K1, NFAT5, PDCD4, RASA1 及 TP53BP2，未来将利用报导基因分析 (luciferase report assay) 确定是否为 miR-21 之目标基因，同时借由基因抑制 (knockdown) 观察其参与之功能。借此厘清在幽门螺旋杆菌感染时，大量表现的 miR-21 抑制其下游基因表现，使得原有的抑癌功能遭受破坏进而导致胃癌的产生。

关键词：蕾莎瓦抗药性肝细胞癌细胞培养稳定同位素标记等重相对标记绝对定量半乳糖凝集素-1 AKT/mTOR/HIF-1α 讯息传递途径生物标志物胃癌幽门螺旋杆菌 miR-21

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C17.2神经干细胞增殖及分化过程中糖蛋白质组变化研究

C17.2神经干细胞增殖及分化过程中糖蛋白质组变化研究

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作者：陈柯湖南师范大学

学位级别：硕士

神经干细胞(neural stem cells, NSCs)是指分布于神经系统的、具有自我更新和多分化潜能的干细胞,其在特定的条件下能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。自从神经干细胞的自身分裂增殖和多分化潜能被人们认识后,人们就对其在... 详细信息

神经干细胞(neural stem cells, NSCs)是指分布于神经系统的、具有自我更新和多分化潜能的干细胞,其在特定的条件下能分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。自从神经干细胞的自身分裂增殖和多分化潜能被人们认识后,人们就对其在中枢神经系统损伤和退行性疾病这样非常棘手的疾病中可能发挥的治疗作用充满了希望。由于神经干细胞的重大应用前景,研究神经干细胞新的表面标志物以及调控神经干细胞自我更新、增殖及分化的相关蛋白具有重要的临床意义和研究价值。糖基化是蛋白质的重要翻译后修饰之一,糖基化修饰对蛋白质的结构和功能都有着重要的影响。研究发现,神经干细胞的增殖和分化都受到信号通路的严格精密的调控,其中糖蛋白在信号通路调控过程中均发挥着重要生理作用,因此通过定量糖蛋白质组学技术大规模、高通量的研究神经干细胞增殖及分化过程中糖蛋白质的表达差异以及糖基化修饰程度的变化等,将有助于我们发现新的神经干细胞细胞表面标志性分子以及和干细胞增殖分化相关的关键糖蛋白,从而加深我们对神经干细胞增殖及分化的生理机制方面的了解。本实验目的是研究C17.2神经干细胞向星形胶质细胞分化过程中糖蛋白的变化。C17.2神经干细胞具有永生化、多潜能及可被体内跟踪等特性,是目前体外研究神经干细胞的良好载体。我们运用细胞培养稳定同位素标记(SILAC)技术结合凝集素亲和法和肼化学反应法对C17.2神经干细胞经AICAR刺激后向星形胶质细胞分化进行了定量糖蛋白质组分析。通过质谱分析,我们共鉴定到了123个非冗余糖基化修饰蛋白,其中57个糖蛋白具有相对定量信息,其中有16个细胞质膜糖蛋白在神经干细胞向星形胶质细胞分化过程中表现出了显著差异。这些糖蛋白在细胞黏附、细胞增殖、细胞分化以及神经系统发育过程中都发挥着重要生理作用。我们的研究不仅丰富了神经干细胞糖蛋白质数据,而且为发现新的神经细胞表面标志物以及研究神经干细胞增殖、定向分化以和神经系统疾病治疗等提供重要的理论基础。

关键词：神经干细胞糖蛋白质组细胞培养稳定同位素标记凝集素亲和法肼化学反应法

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应用蛋白质组技术筛选人食管癌细胞系9706顺铂耐药相关蛋白

引用

河南大学学报（医学版） 2012年第1期31卷 35-38页

作者：晁玮霞刘琳卜旺雨张娟侯艳芳高小飞牛保华马远方齐义军河南大学医学院细胞与分子免疫学重点实验室河南开封475004 河南大学医学院机能实验室河南开封475004 河南职工医学院护理教研室河南郑州451191

目的应用蛋白质组技术筛选人食管癌(esophageal cancer,EC)顺铂耐药相关蛋白。方法采用顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)浓度递增法、间歇作用方式建立EC9706顺铂耐药细胞系(EC9706/CDDP),应用细胞培养稳定同位素标记(cell culture and stable isotope labeling,SILAC)、质谱(mass spectrometry,MS)筛选和鉴定食管癌耐药相关的蛋白。结果共鉴定出耐药相关的74种差异表达蛋白,其中53种在EC9706/CDDP中表达显著升高和21种表达明显降低。结论筛选的EC9706/CDDP耐药相关蛋白对进一步阐明肿瘤多药耐药分子机制具有重要理论意义和应用价值,并为逆转多药耐药表型的药物设计提供了新的分子靶点。

关键词：食管癌顺铂多药耐药细胞培养稳定同位素标记串联质谱

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