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2 篇 复旦大学
2 篇 徐州医科大学
2 篇 温州医学院附属第...
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175 篇 中文

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小RNA miR-20b在制备抗炎药物中的应用

小RNA miR-20b在制备抗炎药物中的应用

引用

作者：尹芝南吴震州赵立青朱恩东 300071 天津市南开区卫津路94号

本发明涉及一种非编码小RNA基因miR-20b在制备抗炎药物中的应用，所述炎症是主要由反应性Th17细胞广泛参与并发挥重要致病作用的炎症反应。本发明所述的miR-20b在反应性Th17细胞中特异性低表达，且分别给na?veCD4+T细胞转染miR-20b模拟... 详细信息

标准号: CN104147615A

本发明涉及一种非编码小RNA基因miR-20b在制备抗炎药物中的应用，所述炎症是主要由反应性Th17细胞广泛参与并发挥重要致病作用的炎症反应。本发明所述的miR-20b在反应性Th17细胞中特异性低表达，且分别给na?veCD4⁺T细胞转染miR-20b模拟体或miR-20b阴性对照后，miR-20b模拟体能够显著减少细胞因子白介素17A基因水平以及蛋白水平表达，且miR-20b不改变Th17细胞增殖和凋亡的水平，表明miR-20b能够有效抑制Th17细胞的分化且不依赖对细胞数量的调控。

关键词：细胞反应性模拟体细胞因子白介素细胞增殖和凋亡制备抗炎药物蛋白水平基因水平细胞转染炎症反应阴性对照有效抑制致病作用非编码小RNA 基因依赖调控

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HCV NS5A下调抑癌基因GADD45α和PTEN的分子机制及其生物学影响

HCV NS5A下调抑癌基因GADD45α和PTEN的分子机制及其生物学影响

引用

作者：成镀中南大学

学位级别：博士

背景和目的：丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)非结构蛋5A (non-structural5A, NS5A)作为HCV的非结构蛋白之一,具有重要的生物学功能。NS5A蛋白参与HCV病毒复制、细胞信号转导、促进细胞增殖、抵抗细胞凋亡等细胞生命活动,与原发... 详细信息

背景和目的：丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)非结构蛋5A (non-structural5A, NS5A)作为HCV的非结构蛋白之一,具有重要的生物学功能。NS5A蛋白参与HCV病毒复制、细胞信号转导、促进细胞增殖、抵抗细胞凋亡等细胞生命活动,与原发性肝癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的发生关系密切。HCV NS5A可能通过调节宿主细胞的蛋白表达而致病。生长阻滞和DNA损伤45α基因(Growth arrest and DNA damage45-alpha, GADD45a)作为一个肿瘤抑制基因,参与细胞周期调控阻滞和生长抑制,维持细胞基因组稳定,在维持正常的细胞周期中发挥重要功能。第十号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted in chromosome10, PTEN)作为另一种重要的肿瘤抑制基因,通过对细胞内多条信号转导通路的负性调控,抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、诱导肿瘤细胞凋亡,维持细胞生长动态平衡。既往临床研究发现,原发性肝癌患者肝癌细胞GADD45a和PTEN表达较正常肝细胞均明显降低,提示GADD45α和PTEN与原发性肝癌的发生密切相关。HCV作为原发性肝癌的主要致病因素之一,其诱导肝癌发生的机制仍不十分清楚。在本课题中,我们研究HCVNS5A对GADD45α和PTEN表达的影响及调控机制,进而探讨GADD45α和PTEN表达异常对HCV感染的肝癌细胞增殖和凋亡的影响,旨在为HCV感染诱发肝癌提供新的实验依据。方法：分别使用荧光素酶试验,相对定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测HCV NS5A对GADD45α和PTEN启动子活性、mRNA转录、和蛋白表达影响。通过p53过表达或针对p53、NF-κB、和PI3K的小分子RNA干扰技术(small interfering RNAs, siRNAs),研究HCV NS5A对GADD45α表达的调控机制。此外,通过细胞活性试验和克隆形成实验评估GADD45α沉默或GADD45α过表达对肝癌细胞增殖活性的影响。同样,使用小分子化学抑制剂和小分子RNA干扰技术探索HCV NS5A对PTEN表达调控的机制。最后,通过Caspase3/7活性试验和凋亡蛋白评估肝癌细胞在PTEN过表达和Akt活化抑制下的细胞凋亡。结果：HCVNS5A在转录水平,通过下调GADD45α启动子活性,mRNA转录,继而下调GADD45α蛋白表达。P53沉默能使GADD45α表达下调,而p53过表达能废除HCVNS5A对GADD45α的下调作用。HCV NS5A下调P53表达,继而导致下游GADD45α表达降低。进一步实验数据表明HCVNS5A促进NF-κB和Akt磷酸化。使用针对NF-κB和PI3K-Akt的小分子抑制剂或特异性siRNAs,能抵消HCVNS5A对p53和CADD45α的下调作用。另外,HCV NS5A蛋白通过抑制P53进而下调GADD45α蛋白表达,促进肝癌细胞增殖、生长。而GADD45α过表达抑制HCVNS5A诱导的细胞增殖。同样发现,HCV在转录水平,下调PTEN启动子活性,mRNA转录,和PTEN蛋白表达。NS5A蛋白在HCV成熟蛋白中对PTEN下调作用最显著。进一步研究发现HCV NS5A通过ROS途径促进NF-κB磷酸化及非ROS途径激活PI3K-Akt磷酸化抑制PTEN蛋白表达。使用小分子抑制剂和siRNAs抑制NF-κB和PI3K-Akt通路,能废除HCVNS5A对PTEN的下调。此外,PTEN过表达能拮抗PI3K对Akt的活化。而NS5A所致的PTEN表达缺失加强PI3K对Akt活化。缺失的PTEN和活化的Akt共同介导NS5A抑肝癌细胞凋亡过程。结论：HCVNS5A通过下调GADD45α表达继而促进细胞增殖。同时HCV NS5A通过ROS依赖和非ROS依赖途径激活NF-κB和PI3K-Akt磷酸化抑制PTEN蛋白表达,抑制细胞凋亡。这些研究表明HCVNS5A在HCV致肝癌产生中扮演重要角色。

关键词： HCV ROS GADD45α PTEN NF-κB PI3K-Akt 细胞增殖和凋亡

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乙型肝炎病毒X蛋白对足细胞增殖和凋亡的影响

乙型肝炎病毒X蛋白对足细胞增殖和凋亡的影响

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中华医学会第五次全国儿科中青年学术交流大会

作者：张瑜周建华华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科

目的乙型肝炎病毒相关性肾炎(hepatitis B virus-associated nephritis,HBV-GN)是一种以足细胞病变为特征的疾病。由于足细胞是一种终末分化细胞,分裂增殖能力有限,一旦受损最终将导致单位肾小球足细胞数量减少,进而可致蛋白尿及肾小球... 详细信息

目的乙型肝炎病毒相关性肾炎(hepatitis B virus-associated nephritis,HBV-GN)是一种以足细胞病变为特征的疾病。由于足细胞是一种终末分化细胞,分裂增殖能力有限,一旦受损最终将导致单位肾小球足细胞数量减少,进而可致蛋白尿及肾小球硬化。HBV-GN通常发生于HBV慢性感染患者,在此病理过程中HBV-DNA可与宿主DNA随机整合并发生基因重排,编码HBx等反式激活因子,进而诱导宿主细胞增殖或凋亡。本研究首先观察了HBV-GN患儿肾活检组织中足细胞数目、凋亡情况以及HBx表达,在此基础上然后通过构建复制缺陷型腺病毒载体将HBx基因导入足细胞株,研究HBx对足细胞增殖和凋亡的影响,并进一步探讨其作用的分子机制。方法1.临床病理研究:①以免疫组织化学方法对19例HBV-GN患儿及8例薄基底膜病患儿(对照组)肾脏病理切片的足细胞进行WT1特异性染色,并采用Weibel-Gomez点计数方法计数足细胞数目;②采用TUNEL标记法来观察15例HBV-GN患儿肾组织及正常肾组织中的凋亡现象;③以免疫组织化学染色法观察14例HBV-GN患儿肾组织中HBx的表达。2.细胞学实验:①利用pAdxsi系统采用体外直接连接法构建携带HBx基因的复制缺陷型腺病毒载体;②以Annexin V-PI双染方法检测足细胞凋亡,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态;③以CFSE绿色荧光染料标记足细胞,采用流式细胞仪检测增殖代数和细胞周期;④通过信号分子抑制剂干预的方法,对细胞内信号转导通路进行研究:⑤Western-blot检测HBx蛋白、细胞周期调控蛋白以及信号转导分子的表达。结果1.临床病理研究:①HBV-GN患儿单位肾小球足细胞绝对数目及相对密度均较对照组显著下降(P<0.01);②93%HBV-GN患儿的肾小球内可见TUNEL阳性细胞(比例为5.72±4.35%),且多数为足细胞,而正常肾组织的肾小球内未见TUNEL阳性信号:③71%HBV-GN患儿的肾小球内存在不同程度的HBx表达,其主要分布于肾小球毛细血管襻及足细胞胞浆。2.细胞学实验:①PCR和基因测序鉴定,证实***构建成功;②HBx可在足细胞株稳定表达:Western blot显示,足细胞感染*** (MOI=50)24h、48h后可高水平表达分子量为17KD的HBx蛋白,且随时间推移表达水平增高;③细胞形态学观察显示,腺病毒感染后24h,***组细胞的核分裂相明显增多甚至出现病理性核分裂相,巨核、双核、多核细胞的比例也较Ad组明显增加,但两组间的细胞凋亡率无明显差异;腺病毒感染后48h,***组细胞除上述有丝分裂障碍的病变更加明显外,胞体缩小、胞核浓染固缩的凋亡细胞比例较Ad组明显增多;④Annexin V-PI双染法显示,于腺病毒感染后24h,空白对照组、Ad组和***组三组间的凋亡细胞比例无明显差异;而于感染后48h,***组细胞的凋亡率较空白对照组和Ad组均明显升高(P<0.05);⑤细胞增殖荧光探针CFSE染色结果显示,HBx可在一定程度上抑制足细胞增殖与其上调p21导致细胞周期出现G2/M阻滞有关;⑥以信号转导分子抑制剂预处理足细胞后感染***,并于感染后24h收集各组细胞检测细胞凋亡、增殖、细胞周期和信号转导分子的表达,结果显示p38 MARK通路和ERK通路的激活参与介导HBx对足细胞殖、凋亡的影响。结论HBx通过p38 MARK、ERIC等多条信号通路影响细胞周期,抑制足细胞增殖并诱导其凋亡,从而在HBV-GN的发病中发挥着重要作用。

关键词： HBx 不同程度病毒感染复制缺陷型腺病毒载体细胞增殖和凋亡乙型肝炎病毒

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小白菊内酯对人肺癌A549细胞增殖和凋亡作用及机制研究

小白菊内酯对人肺癌A549细胞增殖和凋亡作用及机制研究

引用

浙江省医学会呼吸系病分会成立三十周年庆典活动暨2008年呼吸病学学术年会

作者：方梁杰王硕吴月王晴沈毅弘陆国华周建英

小白菊内酯;凋亡;A549细胞;核转录因子-kB非小细胞肺癌是临床常见的恶性肿瘤,手术率低,预后差。对于晚期的非小细胞肺癌患者,化疗仍是延长生存时间的有效方法。虽然,化疗药物不断更新,但是药物的肝肾毒性一直制约着抗肿瘤疗效的提高。目... 详细信息

小白菊内酯;凋亡;A549细胞;核转录因子-kB非小细胞肺癌是临床常见的恶性肿瘤,手术率低,预后差。对于晚期的非小细胞肺癌患者,化疗仍是延长生存时间的有效方法。虽然,化疗药物不断更新,但是药物的肝肾毒性一直制约着抗肿瘤疗效的提高。目前,从药用植物中提取的作用于不同的靶点、无明显毒副

关键词：人肺癌小白菊内酯细胞增殖和凋亡非小细胞肺癌细胞凋亡率 Caspase 机制研究

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人脑胶质瘤中cyclin E的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

人脑胶质瘤中cyclin E的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

引用

2008年浙江省神经外科学学术年会

作者：姜智南周江何向蕾夏朝霞汪艳龙宁波市医疗中心李惠利医院

目的研究人脑胶质瘤中cyclin E的表达与肿瘤恶性程度的关系及其对细胞增殖及凋亡的影响。方法采用免疫组化法和末端脱氧核昔酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法分别检测47例脑胶质瘤中cyclin E、PCNA的表达和凋亡细胞,计算三者阳性单位(... 详细信息

目的研究人脑胶质瘤中cyclin E的表达与肿瘤恶性程度的关系及其对细胞增殖及凋亡的影响。方法采用免疫组化法和末端脱氧核昔酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法分别检测47例脑胶质瘤中cyclin E、PCNA的表达和凋亡细胞,计算三者阳性单位(PU)值,统计分析三者之间及其与胶质瘤病理分级之间

关键词：人脑胶质瘤 cyclin E 细胞增殖和凋亡

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PIAS3敲低对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

PIAS3敲低对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

引用

第十五届全国泌尿外科学术会议

作者：何旺李鸣北京肿瘤医院

目的研究PIAS3敲低对人前列腺癌细胞系DU145细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法构建PIAS3shRNA表达质粒pSilencer4.1/PIAS3,转染DU145细胞。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。结果测序证实PIAS3shRNA表达质粒构建成... 详细信息

目的研究PIAS3敲低对人前列腺癌细胞系DU145细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法构建PIAS3shRNA表达质粒pSilencer4.1/PIAS3,转染DU145细胞。MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。结果测序证实PIAS3shRNA表达质粒构建成功。转染后DU145细胞PIAS3蛋白表达明显下调。MTT分析显示PIAS3敲低促进细胞增殖,并存在剂量-效应关系。流式细胞术分析显示:

关键词： PIAS3 前列腺癌细胞增殖和凋亡

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siRNA沉默hTERT基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

siRNA沉默hTERT基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

引用

2008年浙江省检验医学学术年会

作者：刘安定董学君杨明峰郑专陈建军浙江省绍兴市人民医院

人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)是端粒酶的蛋白催化亚基,其表达是端粒酶活性的限速步骤。hTERT在正常组织中几乎不表达,而绝大多数肿瘤细胞中都有高表达;hTERT mRNA的表达与肿瘤发生发展密切相关。

关键词： hTERT siRNA 人乳腺癌细胞增殖和凋亡基因表达

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钾通道阻滞剂对AGZY-83-a细胞增殖和凋亡的影响

钾通道阻滞剂对AGZY-83-a细胞增殖和凋亡的影响

引用

中国药理学会化疗药理专业委员会第九届学术研讨会

作者：冯铁明李雪连乔国芬单宏丽杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室

[目的]研究电压依赖性延迟整流钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、钙离子激活钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonium,TEA)对人肺腺癌细胞(AGZY-83-a)增殖和凋亡的影响及其作用的机制。[方法]体外细胞培养法培养人肺腺癌... 详细信息

[目的]研究电压依赖性延迟整流钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、钙离子激活钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonium,TEA)对人肺腺癌细胞(AGZY-83-a)增殖和凋亡的影响及其作用的机制。[方法]体外细胞培养法培养人肺腺癌细胞株,采用MTT法检测不同浓度4-AP、TEA对细胞增殖的影响。透射电镜、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况。比色法检测细胞内Caspase-3活性改变。

关键词：钾通道阻滞剂 AGZY-83-a 细胞增殖和凋亡

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外源性Chrelin对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

外源性Chrelin对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

引用

中华医学会心血管病学分会第十次全国心血管病学术会议

作者：张敏上海市胸科医院

目的通过体外细胞学实验研究外源性ghrelin干预肿瘤坏死因子(TNF)-α活化的大鼠血管平滑肌细胞,观察它对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,以进一步探讨ghrelin系统在动脉粥样硬化发生发展中的作用。方法体外培养大鼠血管平滑肌细胞,经光镜... 详细信息

目的通过体外细胞学实验研究外源性ghrelin干预肿瘤坏死因子(TNF)-α活化的大鼠血管平滑肌细胞,观察它对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,以进一步探讨ghrelin系统在动脉粥样硬化发生发展中的作用。方法体外培养大鼠血管平滑肌细胞,经光镜、电镜、免疫组化鉴定细胞。TNF-α(100 U/ml)干预,

关键词：平滑肌细胞凋亡率细胞增殖和凋亡外源性 Chrelin

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短发夹RNA抑制COX-2基因表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

短发夹RNA抑制COX-2基因表达对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

引用

中华医学会第七次全国检验医学学术会议

作者：刘预杨义明涂植光周琦林丁陈亚芹刘靳波重庆市肿瘤研究所临床检验中心肿瘤学重点实验室重庆医科大学检验系临床检验诊断学重点实验室

目的环氧化酶-2(Cyclooxygenase 2,COX-2)在肝癌组织中呈高表达.参与肝癌的发生发展。本研究探讨利用RNA干扰技术抑制肝癌细胞株HepG2的COX-2表达对细胞增殖和凋亡的影响。方法设计、合成一对COX-2基因编码的反向重复序列.定向克隆至质... 详细信息

目的环氧化酶-2(Cyclooxygenase 2,COX-2)在肝癌组织中呈高表达.参与肝癌的发生发展。本研究探讨利用RNA干扰技术抑制肝癌细胞株HepG2的COX-2表达对细胞增殖和凋亡的影响。方法设计、合成一对COX-2基因编码的反向重复序列.定向克隆至质粒载体pGenesil-1,构建靶向COX-2基因的短发夹双链RNA(shRNA)重组表达质粒pshRNA-COX-2转染肝癌细胞HepG2。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹分别检测COX-2基因mRNA和蛋白质表达的抑制效应:四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和流式细胞仪检测COX-2基因表达被抑制后肝癌细胞的增殖情况:电镜观察肝癌细胞调亡。结果pshRNA- COX-2重组表达质粒高效特异地抑制肝癌细胞COX-2基因的mRNA和蛋白质表达.抑制率分别为69.9%和50.3%。转染后72h,肝癌细胞HepG2生长明显受到抑制(p<0.05)。肝癌细胞株HepG2的G0-G1期细胞由55.4%上升为77.9%(P<0.05)。S期细胞由31.1%下降为16.2%(P<0.05)。电镜显示HepG2细胞出现调亡。结论COX-2基因表达与肝癌细胞的增殖和凋亡密切相关。靶向COX-2基因的shRNA重组表达质粒能有效抑制肝癌细胞的COX-2基因表达,从而抑制肿瘤细胞增殖.促进肿瘤细胞调亡.为肝癌基因靶向治疗提供了新的依据。

关键词： COX-2 重组表达质粒肝癌细胞株细胞增殖和凋亡 RNA 基因表达

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