检索结果-内蒙古大学图书馆

癌症 2003年第9期22卷 916-921页

作者：姜义荣马道新陈学良刘春生山东大学齐鲁医院血液内科

背景与目的:慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫原性低等优点,适于体内基因治疗。本研究探讨慢病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用。方法:将表达慢病毒的3种质粒,即包装结构基因质... 详细信息

背景与目的:慢病毒载体具有可感染非分裂细胞、目的基因整合至靶细胞基因组长期表达、免疫原性低等优点,适于体内基因治疗。本研究探讨慢病毒介导的双自杀基因对淋巴瘤细胞Raji的杀伤作用。方法:将表达慢病毒的3种质粒,即包装结构基因质粒pCMVΔ8.2、包膜基因质粒***、目的基因质粒pHR'***或pHR'***分两组(pHR'***为实验组、pHR'***为对照组),经脂质体导入病毒包装细胞293T,包装成病毒后,收集病毒上清,浓缩后转染Raji细胞,用荧光显微镜及RT-PCR检测基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或无环鸟苷(GCV),用MTT法测定Raji细胞的生长抑制率,检测CD和HSV-tk双自杀基因对Raji细胞的作用。结果:表达慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞。荧光显微镜下观察可见大量的绿色荧光,透射电镜下观察可见富集的病毒颗粒。慢病毒介导的双自杀基因在Raji细胞中高效、稳定表达。单独使用GCV或5-FC对细胞的生长抑制率分别为51%、50%,与未转染组Raji细胞比较,差异有显著性(P<0.01);联合使用5-FC和GCV对细胞的生长抑制率为73%,明显高于单独使用5-FC或GCV(P<0.01)。结论:慢病毒介导的双自杀基因可高效稳定转染淋巴瘤细胞;双自杀基因系统较单一自杀基因系统(CD/5-FC或HSVtk/GCV)对淋巴瘤细?

关键词：慢病毒携带自杀基因淋巴瘤细胞杀伤作用实验研究

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潜伏膜蛋白2A嵌合抗原受体-T细胞的制备及对鼻咽癌细胞杀伤作用的研究

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中华耳鼻咽喉头颈外科杂志 2018年第12期53卷 925-930页

作者：陈渊陈仁杰黄骁辰汤根兄蒯兴旺章明炯张大为唐奇朱进冯振卿南京医科大学第二附属医院耳鼻咽喉头颈外科 200031

目的制备靶向潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein2A,LMP2A)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞,观察LMP2ACAR-T细胞体内外对鼻咽癌细胞的杀伤作用。方法2016年9月至2017年12月,本研究以基因工程技术构建抗LMP2A慢病毒表达载体,测序鉴定并通过Western blot法验证抗LMP2ACAR在293T细胞中的表达;通过质粒包装体系制备LMP2ACAR慢病毒,并感染人T细胞,制备LMP2ACAR-T细胞;CCK-8法检测LMP2ACAR-T细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用。酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测LMP2A抗原激活后的LMP2ACAR-T细胞白细胞介素(IL)-2与干扰素(IFN)-γ的分泌水平。体内实验观察LMP2ACAR-T细胞对鼻咽癌移植瘤的抑瘤作用。SPSS21.0统计学软件用于统计分析。结果PCR结果显示抗LMP2ACAR片段大小约为1500bp,与理论值相一致,测序显示序列正确;Westernblot结果显示抗LMP2A慢病毒表达载体能在293T细胞中表达;CCK-8法结果发现在效靶比为20∶1、10∶1与5∶1时,LMP2ACAR-T细胞对LV-LMP2A-CNE1细胞的杀伤率分别为(72.11±9.75)%、(54.65±5.42)%与(36.68±3.80)%,与CD19CAR-T细胞、T细胞相比差异有统计学意义(P<0.05),而对CNE1细胞的杀伤作用与CD19CAR-T细胞和T细胞相比差异无统计学意义;ELISA法结果发现LMP2ACAR-T细胞与LV-LMP2A-CNE1细胞共培养上清中IL-2与IFN-γ的含量,显著高于与CNE1细胞共培养上清,差异具有统计学意义(P<0.05);体内实验中LMP2ACAR-T细胞组瘤体体积为(80.3±10.0)mm3,显著小于各对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功制备的LMP2ACAR-T细胞对LMP2A阳性的鼻咽癌细胞具有显著靶向杀伤效应。

关键词： 293T细胞细胞杀伤作用潜伏膜蛋白2A 鼻咽癌细胞抗原受体制备 Westernblot 嵌合

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HSV-tk/GCV自杀基因系统对喉癌细胞杀伤作用的体外研究

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 582-585页

作者：刘志成诗银鱼兵第四军医大学唐都医院耳鼻喉科陕西西安710038

目的　研究逆转录病毒介导的HSV tk/GCV系统对人喉癌细胞的体外杀伤作用。方法　构建携带HSV tk基因的逆转录病毒载体 ,并以该重组逆转录病毒感染人喉癌细胞Hep 2。以G4 18筛选的抗性克隆 (命名为Hep 2 /tk) ,用MTT比色法观察GCV在体外... 详细信息

目的　研究逆转录病毒介导的HSV tk/GCV系统对人喉癌细胞的体外杀伤作用。方法　构建携带HSV tk基因的逆转录病毒载体 ,并以该重组逆转录病毒感染人喉癌细胞Hep 2。以G4 18筛选的抗性克隆 (命名为Hep 2 /tk) ,用MTT比色法观察GCV在体外对Hep 2 /tk细胞的杀伤作用。结果　Hep 2 /tk细胞与未转染tk基因的Hep 2 /0、Hep 2细胞相比较 ,三者的生长速度无明显差别。Hep 2 /tk细胞对GCV高度敏感 ,即低浓度GCV(0～ 1mg/L)处理Hep 2 /tk细胞 7d,可将其大部分细胞杀死 ,增加GCV的浓度 (>1mg/L)不能显著增强其对Hep 2 /tk细胞的杀伤作用。结论　人喉癌细胞Hep 2对HSV tk/GCV系统高度敏感。

关键词： HSV-tk/GCV自杀基因系统喉癌细胞杀伤作用体外研究基因治疗更昔洛韦

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脂膜微囊承载紫杉醇在体外对C6胶质瘤细胞杀伤作用的实验研究

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中华神经外科杂志 2005年第8期21卷 500-503页

作者：宫崧峰李新钢李刚张元鹏王东海徐淑军何士玥山东大学齐鲁医院神经外科实验室 250012 山东大学齐鲁医院神经外科 250012 美国康州哈特福德神经外科实验室

目的在体外实验中研究脂膜微囊承载抗胶质瘤药物紫杉醇抑制C6胶质瘤细胞的作用,并探讨脂膜微囊靶向性抗瘤的机理。方法应用紫杉醇-脂膜微囊(Taxol-LCM)或单用脂膜微囊(LCM)处理C6细胞系,后用免疫荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察脂膜... 详细信息

目的在体外实验中研究脂膜微囊承载抗胶质瘤药物紫杉醇抑制C6胶质瘤细胞的作用,并探讨脂膜微囊靶向性抗瘤的机理。方法应用紫杉醇-脂膜微囊(Taxol-LCM)或单用脂膜微囊(LCM)处理C6细胞系,后用免疫荧光显微镜或激光共聚焦显微镜观察脂膜微囊在肿瘤细胞内的分布特点,用药前后肿瘤细胞形态的改变和细胞内超微结构的变化,以及动态的观察脂膜微囊进入细胞的全过程。结果紫杉醇(Taxol)可结合于脂膜微囊(LCM),可以被胶质瘤细胞内吞,起到很强的的杀伤肿瘤细胞的作用;其内吞过程为脂膜微囊先结合于细胞膜表面,后在细胞内重新分布,最终被细胞浆内的酸性成分所降解。结论脂膜微囊可以承载紫杉醇在体外起到杀伤胶质瘤细胞的作用,且脂膜微囊的代谢与细胞内的酸性成分有关。

关键词：脂膜微囊紫杉醇胶质瘤 C6胶质瘤细胞细胞杀伤作用体外实验实验研究肿瘤细胞形态细胞内吞杀伤肿瘤细胞

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6B11抗独特型微抗体负载树突状细胞对卵巢癌细胞系细胞杀伤作用的体外研究

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中国妇产科临床杂志 2004年第2期5卷 127-131,102,F004页

作者：杨文兰崔恒冯捷昌晓红李小平北京大学人民医院妇科肿瘤中心 100044

目的　用 6B1 1抗独特型微抗体体外负载树突状细胞 (DC) ,以期诱导出抗原特异性的抗肿瘤免疫反应。方法　分离培养HLA -A2 +健康人外周血树突状细胞 ,培养过程中用 6B1 1微抗体负载 ,无关抗原F (ab)’2负载及未负载组为对照。光镜、电... 详细信息

目的　用 6B1 1抗独特型微抗体体外负载树突状细胞 (DC) ,以期诱导出抗原特异性的抗肿瘤免疫反应。方法　分离培养HLA -A2 +健康人外周血树突状细胞 ,培养过程中用 6B1 1微抗体负载 ,无关抗原F (ab)’2负载及未负载组为对照。光镜、电镜下观察树突的形态 ;流式细胞仪检测DC表面分子表达 ;3 H -TdR掺入法测DC刺激自体T细胞增殖 ;51 Cr 6h释放试验测激活的T细胞对卵巢癌细胞系的杀伤。结果　培养的树突细胞有典型形态 ,CD80、CD86、HLA -DR等表面分子呈高表达 (分别为 6 5 %、 86 2 %、 93 7% ) ;6B1 1微抗体负载的DC不仅能刺激自体T细胞的增殖 ,而且其诱导的CTL细胞对HLA -A2 +、OC1 6 6 - 9+卵巢癌细胞系HOC1A有特异性的杀伤 ,结论　 6B1 1抗独特型微抗体模拟卵巢癌抗原OC1 6 6 - 9负载树突状细胞在体外可以诱导出抗原特异性的细胞毒T细胞 ,为进一步研究 6B1

关键词： 6811抗独特型微抗体树突状细胞卵巢癌癌细胞细胞杀伤作用免疫反应

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墓头回对HL—60细胞杀伤作用的实验研究

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世界今日医学杂志 2003年第2期4卷 91-92页

作者：赵丽陈龙赵玲甘肃中医学院730000 兰州医学院第一附屈医院甘肃省兰州市730000

目的探讨应用细胞培养技术观察墓头回水提物对白血病现—60细胞系的杀伤及凋亡作用。方法将不同浓度的墓头回水提物与HL-6O细胞进半固体培养，观察对其集落形成的影响，同时进行加药前后HL-60形态学及DNA电泳观察。结果墓头回水提物... 详细信息

目的探讨应用细胞培养技术观察墓头回水提物对白血病现—60细胞系的杀伤及凋亡作用。方法将不同浓度的墓头回水提物与HL-6O细胞进半固体培养，观察对其集落形成的影响，同时进行加药前后HL-60形态学及DNA电泳观察。结果墓头回水提物在较大浓度时对肿瘤细胞的形成具有明显的抑制作用，未观察到对HL-60细胞有促凋亡的作用。结论墓头回水提物对HL-60细胞有明显的抑制作用，但其作用机制有待进一步证实。

关键词：墓头回 HL-60 细胞杀伤作用实验研究

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CD/5-FC系统对小鼠胃癌细胞杀伤作用的研究

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实用癌症杂志 2002年第5期17卷 471-474页

作者：姬舒荣刘晖张奕顾琴龙刘炳亚朱正纲林言箴同济大学附属同济医院 200065 上海第二医科大学瑞金医院 200025

目的探讨CD5-FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞的体外杀伤作用及其机制。方法以逆转录病毒载体介导CD基因转导小鼠胃癌细胞株MFC,采用MTT法测定CD5-FC系统的体外杀伤作用及其“旁观者”效应;利用Hoechst33258荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳... 详细信息

目的探讨CD5-FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞的体外杀伤作用及其机制。方法以逆转录病毒载体介导CD基因转导小鼠胃癌细胞株MFC,采用MTT法测定CD5-FC系统的体外杀伤作用及其“旁观者”效应;利用Hoechst33258荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳法检测凋亡细胞,同时采用半定量RT-PCR技术检测凋亡相关基因的表达。结果转导CD基因可使MFC对5-FC高度敏感,并且显示出强大的“旁观者”效应。经5-FC作用后,荧光染色可见到典型的凋亡细胞核形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA梯度,同时发现凋亡相关基因bcl-2基因表达下调,而bax与caspase-3基因表达上调。结论CD5-FC自杀基因系统对小鼠胃癌细胞MFC具有强大的杀伤作用。

关键词： CD/5-FC系统小鼠胃癌细胞杀伤作用自杀基因系统作用机理胞嘧啶脱胺酶

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KIR2DS1受体介导人NK细胞对白血病细胞杀伤作用研究

KIR2DS1受体介导人NK细胞对白血病细胞杀伤作用研究

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第八届中国肿瘤内科大会、第三届中国肿瘤医师大会暨中国抗癌协会肿瘤临床化疗专业委员会2014年学术年会

作者：王静苏丽萍山西医科大学研究生学院山西医科大学附属肿瘤医院

目的：本实验研究活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR2DS1对自然杀伤细胞杀伤活性的影响;检测表达KIR2DS1基因的NK细胞对不同白血病细胞(携带不同HLA-Cw抗原)杀伤作用的差异,以初步了解KIR/配体与NK细胞毒活性的相关性,为临床上异基因... 详细信息

目的：本实验研究活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR2DS1对自然杀伤细胞杀伤活性的影响;检测表达KIR2DS1基因的NK细胞对不同白血病细胞(携带不同HLA-Cw抗原)杀伤作用的差异,以初步了解KIR/配体与NK细胞毒活性的相关性,为临床上异基因造血干细胞移植选择合适的供者以增强移植后移植物抗白血病效应提供依据. 方法：***-SSP法和PCR-SBT法分别检测KIR基因和HLA-Cw基因.2.根据KIR和HLA-Cw基因的检测结果进行分组：①根据HLA-Cw基因将健康供者及AML患者分为C1、C2、C1/C2组.②根据是否表达KIR2DS1基因将健康供者NK细胞分KIR2DS1阳性组和KIR2DS1阴性组.3．分选NK细胞，采用NK富集试剂盒分选NK细胞。***细胞培养。5．采集白血病细胞。6．封闭KIR2DS1基因：采用抗-KIR2DS1单克隆抗体封闭KIR2DS1基因，检测封闭前后NK细胞杀伤活性差异。***细胞毒作用检测：采用CCK-8(cell counting kit-8)比色法，检测NK细胞对K562细胞、白血病细胞的杀伤作用差异。结果：***细胞通过富集试剂盒富集后，分选后CD3-/CD56、细胞含量为(91.2±5.94)％。2．纯化的NK细胞实验组扩增倍数显著高于空白对照组（P<0.05）。***患者新鲜骨髓液分离的单个核细胞，经流式细胞仪检测，测得白血病细胞比例大于90%。4．与对照组（未加入刺激因子）比较，刺激因子组对K562细胞的杀伤率比未加刺激因子组杀伤率明显增高（P<0.05）。5．效靶比分别为5:1、10：1、20：1时，KIR2DS1阳性组NK细胞加入封闭抗体后，分别较封闭前明显减低（P<0.05）。6．效靶比为5:1时，实验组NK细胞对K562细胞的杀伤率较空白对照组明显增高（P<0.05）;不同效靶比下，KIR2DS1阳性NK细胞对靶细胞的杀伤率分别高于KIR2DS1阴性NK细胞对白血病细胞的杀伤率（P<0.05）。C1组KIR2DS1阳性NK细胞对C2组靶细胞的杀伤率%高于C1组和C1/C2组靶细胞，（P<0.05）。结论：1．活化性KIR2DS1受体可介导NK细胞发挥异源反应性，杀伤白血病细胞，增强GVL效应。2．表达HLA-C1分子的KIR2DS1阳性NK细胞对表达HLA-C2分子的白血病细胞的杀伤作用强，选择合适的KIR/HLA-Cw供者有利于受者移植后GVL效应的增强。

关键词：白血病自然杀伤细胞 KIR2DS1受体细胞杀伤作用

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CpG ODN活化外周血单个核细胞对淋巴瘤HUT-78细胞杀伤作用的研究

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中国实用医刊 2010年第9期37卷 27-28页

作者：洪帆张明智曹玉柱付晓瑞郑州大学第一附属医院肿瘤五病区 450052

目的探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在肿瘤免疫治疗中的作用.方法将CpG ODN刺激体外培养的人外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法检测其分泌细胞因子白细胞介素-12(IL-12)、干扰素-γ(INF-γ)的表达, MTT法检测CpG ODN作用后的PBMC对淋... 详细信息

目的探讨CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在肿瘤免疫治疗中的作用.方法将CpG ODN刺激体外培养的人外周血单个核细胞(PBMC),ELISA法检测其分泌细胞因子白细胞介素-12(IL-12)、干扰素-γ(INF-γ)的表达, MTT法检测CpG ODN作用后的PBMC对淋巴瘤细胞株HUT-78细胞杀伤活性.结果与对照组相比,经CpG ODN作用后的PBMC对HUT-78细胞杀伤活性显著提高(P＜0.05),同时CpG ODN能明显促进PBMC分泌细胞因子IL-12、INF-γ(P＜0.05).结论 CpG ODN可增强PBMC介导的抗淋巴瘤细胞的作用,其杀伤活性与分泌细胞因子有关.

关键词： CpG ODN 活化人外周血单个核细胞淋巴瘤细胞细胞杀伤作用 cells PBMC 分泌细胞因子 IL-12 细胞杀伤活性细胞因子白细胞介素 inhibiting effect CpG寡聚脱氧核苷酸 antitumor effect treated 肿瘤免疫治疗 INF-γ ELISA法检测体外培养瘤细胞株

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补骨脂素对人白血病细胞杀伤作用的体外观察

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中西医结合杂志 1990年第6期10卷 370-370页

作者：陆泽华杨易灿比素芸郝蕾吴一纯第四军医大学西京医院西安710032

补骨脂素系从补骨脂中提取的有效成分。本实验采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定补骨脂素对人白血病细胞的杀伤作用,现报告如下。资料与方法一、本院住院白血病患者4例,均为男性,年龄12～31岁。按 FAB(法-美-英)分类诊断标准,确诊为急性淋巴... 详细信息

补骨脂素系从补骨脂中提取的有效成分。本实验采用四氮唑蓝(MTT)比色法测定补骨脂素对人白血病细胞的杀伤作用,现报告如下。资料与方法一、本院住院白血病患者4例,均为男性,年龄12～31岁。按 FAB(法-美-英)分类诊断标准,确诊为急性淋巴细胞型白血病(ALL)未缓解2例(1例外周血WBC4100/mm^3、幼稚细胞占13%,骨髓像原始+早幼淋巴细胞占91%;另1例外周血 WBC2100/mm^3、幼稚细胞占2%,异淋占7%,骨髓像中原始+早幼淋巴细胞为76.4%);急性粒细胞白血病部分分化型(M_2)2例(均系初诊:1例外周血 WBC75000/mm^3,其中幼稚细胞占75%,骨髓像原始+早幼粒细胞为80.2%;另1例外周血 WBC7000/mm^3,无幼稚细胞,

关键词：补骨脂素白血病细胞杀伤作用

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