检索结果-内蒙古大学图书馆

功能材料 2014年第24期45卷 24119-24123页

作者：邱玉宇魏取福王肖娜蔡维维徐阳江南大学无锡医学院江苏无锡214122 江南大学纺织服装学院生态纺织教育部重点实验室江苏无锡214122

调试熔体静电纺聚乳酸（PLA）过程中的电压场和温度场的参数,对不同条件下的纤维膜进行测试,研究电压场与温度场与纤维直径间的关系,并评价熔体静电纺PLA 膜的细胞毒性.以聚乳酸（PLA）为原料,采用熔体静电纺丝方法,电压调整在20-26kV范... 详细信息

调试熔体静电纺聚乳酸（PLA）过程中的电压场和温度场的参数,对不同条件下的纤维膜进行测试,研究电压场与温度场与纤维直径间的关系,并评价熔体静电纺PLA 膜的细胞毒性.以聚乳酸（PLA）为原料,采用熔体静电纺丝方法,电压调整在20-26kV范围,空间温度在10-70℃之间,分别进行熔体纺丝实验,将制得的纤维膜进行细胞毒性评价.熔体静电纺丝PLA 纤维的平均直径随电压的升高逐渐增大,当空间温度为50℃时,所得纤维平均直径为最小.细胞活力测试证实熔体静电纺PLA 膜无细胞毒性,具有良好的组织工程材料的应用前景.

关键词：熔体静电纺聚乳酸(PLA)膜制备细胞毒性评价

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三维细胞支架的制备及在卷烟烟气细胞毒性评价中的应用

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烟草科技 2018年第5期51卷 39-45页

作者：李茹洋尚平平王宜鹏贾云祯孙培建孙学辉聂聪杨松中国烟草总公司郑州烟草研究院

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架,采用高内相乳液法制备材料,以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养,评价3R4F和CM8两种参比卷烟烟气总粒相物(TPM)的细胞毒性,并与二维平板培养细胞的实验结果进行了对比。结果表明:... 详细信息

为开发用于卷烟烟气体外毒理学评价的三维细胞支架,采用高内相乳液法制备材料,以其为载体进行人肺腺癌细胞A549的三维培养,评价3R4F和CM8两种参比卷烟烟气总粒相物(TPM)的细胞毒性,并与二维平板培养细胞的实验结果进行了对比。结果表明:(1)A549细胞在三维细胞支架上可以吸附、增殖并融合形成细胞层,且在亲水改性支架上增殖更快;(2)培养21d后,三维细胞支架上A549细胞的吸光度(OD值)为3.601,高于二维平板上细胞长满(培养7 d)时的OD值(3.055);(3)3R4F和CM8卷烟烟气TPM浓度与二维平板和三维细胞支架培养的A549细胞存活率均具有良好的剂量-反应关系,且在高TPM浓度时,三维细胞体系下的细胞存活率高于二维细胞体系。该研究为卷烟烟气体外毒理学评价提供了一种新的三维细胞培养方法。

关键词：三维细胞支架二维平板细胞高内相乳液人肺腺癌细胞卷烟烟气细胞毒性评价

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渗滤液中酚类雌激素的去除及细胞毒性评价研究

渗滤液中酚类雌激素的去除及细胞毒性评价研究

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作者：索俊昌暨南大学

学位级别：硕士

垃圾经过长期填埋后产生的渗滤液，由于其生化性差、毒性大及环境激素含量高等特点被公认为是目前难降解的废水。环境激素可以通过影响体内激素的合成、分泌、传递、结合、启动以及消除等环节，从而对个体的生殖、发育以及行为产生多方... 详细信息

垃圾经过长期填埋后产生的渗滤液，由于其生化性差、毒性大及环境激素含量高等特点被公认为是目前难降解的废水。环境激素可以通过影响体内激素的合成、分泌、传递、结合、启动以及消除等环节，从而对个体的生殖、发育以及行为产生多方面的影响。因此，研究探讨渗滤液中环境激素的去除及毒性效应具有重要意义。本文采用高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）对广州某封场12年的垃圾填埋场渗滤液中酚类环境激素进行检测，研究探讨了IME-Fenton法对配制水样及渗滤液中酚类激素的降解及毒性评价。主要研究结果如下：　　（1）渗滤液中NP和OP的含量分别为11.00-12.67μg/L和2.60-3.20μg/L;IME-Fenton法对配制NP和OP水溶液降解最佳条件为：NP和OP的初始浓度为2.0mg/L和2.5 mg/L时,初始pH=3，Fe投加量为20.0 g/L，Fe/C=2:1，反应90 min，NP和OP去除率达到了68％以上;反应液过滤调pH=3，投加0.75%(V/V)的H2O2反应60 min后，NP和OP的去除率达到了85%以上。渗滤液经IME-Fenton在最佳条件处理后，COD去除率达到了80.64%，BOD5/COD也提高到了0.35;渗滤液中的OP未检测出来，NP去除率也达到了90%以上;（2）探讨了腐殖酸、铵根和磷酸根离子对配制水样中NP去除效果的影响及渗滤液经IME-Fenton处理前后对大型蚤和斑马鱼的综合毒性。结果表明，NP的初始浓度为2.0mg/L，NP的去除率随着腐殖酸和铵根离子的增加而下降，随着PO43-量增加先增大后下降。当腐殖酸、NH4+和PO43-的浓度达到3.0 mg/L时，NP的去除率由87.6%分别下降到了69.5%、71.5%和86.8%;经处理后渗滤液对大型蚤和斑马鱼的96 h LC50分别由0.35%和0.56%降低到0.64%和0.91%，表明渗滤液生物毒性下降了。　　（3）探讨了渗滤液原液、经IME和IME-Fenton处理后酚类提取物对MCF-7细胞的增殖效应。结果表明，这三种溶液中酚类提取物都是在浸染MCF-7细胞72 h后增殖达到最大。原液酚类提取物在稀释105倍后对MCF-7细胞的增殖达到了275%，经IME和IME-Fenton处理后酚类提取物在稀释104倍后增殖效应分别下降了85%和110%。细胞损伤修复实验表明渗滤液经IME和IME-Fenton处理后酚类提取物减缓了MCF-7细胞的迁移速度。

关键词：老龄渗滤液雌激素内分泌干扰物细胞毒性评价

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N-酰基-L-硒代蛋氨酸衍生物的合成、细胞毒性评价及初步药动学研究

N-酰基-L-硒代蛋氨酸衍生物的合成、细胞毒性评价及初步药动学研究

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作者：唐灿武汉轻工大学

学位级别：硕士

硒元素是一种重要的微量元素,在各种生物体内发挥着不可替代的作用,它与生命体的各种生理功能有着非常紧密的联系。20世纪中期以来,科学家们对于硒元素的探索越来越深入,人们意识到硒元素对于生物体的健康作用非常显著,有机硒产品的开... 详细信息

硒元素是一种重要的微量元素,在各种生物体内发挥着不可替代的作用,它与生命体的各种生理功能有着非常紧密的联系。20世纪中期以来,科学家们对于硒元素的探索越来越深入,人们意识到硒元素对于生物体的健康作用非常显著,有机硒产品的开发与研究也成为了一个热门的课题。硒代蛋氨酸是一种生物相容性较好的有机硒化物,具有广泛的应用前景。然而,硒代蛋氨酸结构简单,应用功能单一,限制了其诸多应用范围。本研究通过对硒代蛋氨酸进行化学修饰,既保留了硒代蛋氨酸的有机硒活性,又扩宽了硒代蛋氨酸在食品、医药、化妆品等领域的应用范围,为硒代蛋氨酸类有机硒化物的开发与应用提供一种新的思路与方法。本论文主要以L-硒代蛋氨酸为基础原料,通过L-硒代蛋氨酸与月桂酰氯和油酰氯的缩合反应和甲酯化反应,对L-硒代蛋氨酸进行结构修饰,得到N-酰基-L-硒代蛋氨酸甲酯衍生物,通过核磁共振氢谱、碳谱以及二维核磁(HSQC、HMBC)谱图确证,并对其主要位置的C、H原子信号进行了详尽的归属。通过对合成反应过程中关键的Schotten-Baumann缩合反应步骤进行正交工艺优化,得出最佳合成反应工艺条件:N-月桂酰基-L-硒代蛋氨酸的最佳反应条件为反应温度为0℃,反应p H为9,反应时间4 h,n(氨基酸):n(月桂酰氯)为2:1,在此反应条件下,平均产率为76.39%。N-油酰基-L-硒代蛋氨酸最佳反应温度为25℃,反应p H为11,反应时间6 h,n(氨基酸):n(月桂酰氯)为2:1,平均反应产率为69.12%。对合成的两种化合物进行了细胞毒性性评价,通过MTT比色法表述两种化合物对于细胞活性的影响,通过试验确证N-月桂酰基-L-硒代蛋氨酸甲酯和N-油酰基-L-硒代蛋氨酸甲酯对人体正常肝细胞(HL-7702)和大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)均无显著的毒性。当两种化合物浓度在0-1920μmol/L时,两种细胞存活率均在75%以上,表明化合物的细胞毒性较小。通过细胞毒性评价确认目标化合物无明显毒性后,选取N-月桂酰基-L-硒代蛋氨酸甲酯进行大鼠血浆药代动力学初步评价,通过开发建立N-月桂酰基-L-硒代蛋氨酸甲酯的定量方法,考察大鼠灌胃给药N-月桂酰基-L-硒代蛋氨酸甲酯后,大鼠体内血药浓度的变化情况和主要的药代动力学参数。建立的方法选择性强、线性范围宽(80～20000 ng/m L)、灵敏度较好(LLOQ为80 ng/m L)。通过分析得出N-月桂酰基-L-硒代蛋氨酸甲酯在雌雄个体之间,存在着明显的吸收差异性,雄性大鼠的吸收速度和吸收量均大于雌性大鼠,并且药物在大鼠血浆达峰较快,半衰期较短,药物进入体内后,主要富集与各个脏器和组织内。通过对N-月桂酰基-L-硒代蛋氨酸甲酯的进行初步的药代动力学评价,为相关或类似的硒代氨基酸衍生物的研究和生物学评价提供思路和相关的探究。

关键词：硒 L-硒代蛋氨酸合成细胞毒性评价药代动力学

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毒理学研究中的体外细胞毒性评价

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生命科学 2014年第3期26卷 319-324页

作者：刘涛郭辰赵晓红首都师范大学生命科学学院北京100048 北京联合大学功能食品研究院北京100191

体外细胞毒性评价作为传统动物模型毒性评价的替代方法正在得到越来越多的研究和应用,而其向高通量阶段的迈进则为新毒物和新药物的检测与目的物的筛选提供了更加快捷、高效的手段。将对体外细胞毒性评价常用细胞类型、体外细胞毒性评... 详细信息

体外细胞毒性评价作为传统动物模型毒性评价的替代方法正在得到越来越多的研究和应用,而其向高通量阶段的迈进则为新毒物和新药物的检测与目的物的筛选提供了更加快捷、高效的手段。将对体外细胞毒性评价常用细胞类型、体外细胞毒性评价的指标,及其检测技术方法的研究现状、进展和存在问题进行阐述,希望能为相关的研究提供一定的参考。

关键词：毒理学体外试验细胞毒性评价高通量筛选

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组织工程血管材料体外细胞毒性评价实验研究

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中华实用诊断与治疗杂志 2011年第6期25卷 539-542页

作者：张燕搏姜明王强唐秀杰杨秀滨胡平吴清玉北京协和医学院中国医学科学院阜外心血管病医院小儿心脏中心北京市100037 清华大学化工系北京市100086 清华大学第一附属医院心外科北京市100016 北京协和医学院中国医学科学院阜外心血管病医院成人心脏中心北京市100037

目的:为构建组织工程化血管选择支架材料,对材料进行体外细胞毒性评价。方法:以L929为实验细胞,采用四唑盐比色法、琼脂覆盖法对自行合成的4种构建组织工程血管的支架材料进行体外细胞毒性评价实验。结果:以辛酸亚锡为催化剂合成的聚氨... 详细信息

目的:为构建组织工程化血管选择支架材料,对材料进行体外细胞毒性评价。方法:以L929为实验细胞,采用四唑盐比色法、琼脂覆盖法对自行合成的4种构建组织工程血管的支架材料进行体外细胞毒性评价实验。结果:以辛酸亚锡为催化剂合成的聚氨酯、聚羟基烷酸酯、聚丁二酸丁二酯,经四唑盐比色法及琼脂覆盖法实验为合格的医用材料,四唑盐比色法中吸光度值与阴性对照材料比较差异无统计学意义(P>0.05)。以二月桂酸二丁基锡为催化剂合成的聚氨酯经四唑盐比色法及琼脂覆盖法实验为不合格的医用材料,四唑盐比色法中吸光度值与阴性对照材料比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:四唑盐比色法、琼脂覆盖法在评判生物材料毒性方面,是快速、简便、有效的方法。以辛酸亚锡为催化剂合成的聚氨酯、聚羟基烷酸酯、聚丁二酸丁二酯可用于进一步的实验研究。

关键词：血管组织工程四唑盐比色法琼脂覆盖法细胞毒性评价体外

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纳米银对神经细胞毒性作用与基于神经芯片的神经网络电活性的联合分析

纳米银对神经细胞毒性作用与基于神经芯片的神经网络电活性的联合...

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作者：侯昆东南大学

学位级别：博士

随着纳米银在生物医学领域的应用越来越广泛,纳米银的神经毒性已引起了极大的关注。已有的研究报道表明,纳米银对神经元的毒性,主要采取传统细胞生物学方法进行研究神经元细胞学特性的改变。然而,神经元不但具有普通细胞的细胞学特性,... 详细信息

随着纳米银在生物医学领域的应用越来越广泛,纳米银的神经毒性已引起了极大的关注。已有的研究报道表明,纳米银对神经元的毒性,主要采取传统细胞生物学方法进行研究神经元细胞学特性的改变。然而,神经元不但具有普通细胞的细胞学特性,还具有电生理特性,并且其功能的发挥高度依赖其电生理特性的变化。因此,在评价纳米银对神经元的毒性作用时,不仅要考虑细胞学特性的变化,研究纳米银对电生理特性的影响也至关重要。所以单独使用细胞实验评估生物材料对神经元的毒性作用是不全面的,在对神经元的相关研究中电生理学方法评估也是不可或缺的重要研究手段。只有把两者结合起来联合研究,才能深入理解纳米银对神经元毒性作用的机理。目前,尚未见纳米银对海马神经元网络电兴奋性影响的报道,更未见联合电生理与细胞学方法研究纳米银对海马神经元毒性的报道。本课题组已经进行了有关纳米银细胞毒性的一系列研究,并且采用电生理学方法研究了外界因素和药物等对神经网络电兴奋性的影响。本论文首先采用基于微电极阵列(Micro-Electrode Array,MEA)的电压阈值测定法(Voltage Threshold Measurement Method,VTMM)研究纳米银对海马神经元网络和大鼠海马脑切片电兴奋性的影响,并研究NMDA受体在纳米银对海马神经元网络电兴奋性影响中的作用及其机制。接着,研究纳米银对大鼠海马神经元ROS含量、ATP含量、细胞凋亡率和细胞突起长度等细胞/分子学水平指标的影响。最后,联合分析研究纳米银对大鼠海马神经元的细胞学和电生理特性的毒性作用,并探讨纳米银对神经元毒性的可能细胞分子学机理,从而加深人们对纳米银对中枢神经毒性作用的认识。本论文的具体内容如下: 1)采用硼氢化钠还原硝酸银的方法制备纳米银,采用透射电镜和分光光度计表征结果显示制备的纳米银粒径较为均一,无大规模团聚现象,粒径约20nm。从孕期18天的SD大鼠的胎鼠大脑海马提取了细胞,培养2周后对提取的细胞进行了鉴定。结果显示从海马区提取的细胞多数为神经元细胞。通过纳米银的细胞内摄取实验发现纳米银可以进入海马神经元中,这可能是产生神经毒性的原因。采用MTT法分析了不同浓度纳米银对海马神经元细胞活力的影响,分别选择了无细胞毒性的5μM和有细胞毒性的100μM两种浓度的纳米银对海马神经元的影响进行研究。 2)基于VTMM研究了无细胞毒性5μM和有细胞毒性100μM纳米银对海马神经元网络和海马脑切片电兴奋性的影响。结果表明,5μM纳米银对海马神经元网络4-72h是兴奋性的;而100μM纳米银作用海马神经元网络4-24h为兴奋作用,随着时间延长,其兴奋性逐渐减弱,48h开始具有抑制作用,并随着时间延长,抑制性逐渐增强。对比海马神经元和海马脑切片两种神经网络的电压阈值测试结果,研究发现5μM和100μM纳米银作用两种神经网络4h都表现为兴奋性作用。 3)为了探索NMDA受体在纳米银对海马神经元网络电兴奋性影响中的作用及其机制,首先采用VTMM方法研究了纳米银和NMDA拮抗剂MK-801共同作用后海马神经元网络的电兴奋性;接着研究了纳米银对海马神经元NMDA受体数量以及神经元内Ca2+含量的影响,并探讨其与神经元电兴奋性变化的关系。结果表明,NMDA受体在纳米银对神经元网络电兴奋性影响中发挥重要作用,NMDA受体的激活介导纳米银对海马神经元的毒性作用。 4)为了深入理解纳米银对神经元细胞毒性影响的机理,本论文研究了无细胞毒性5μM纳米银和有细胞毒性100μM纳米银对神经元ROS含量、ATP含量、细胞凋亡率和突起长度等细胞分子学指标的影响。结果表明,无细胞毒性浓度5μM纳米银会导致ROS含量轻度增加,但除此之外没有造成海马神经元其他细胞/分子水平指标显著变化。有细胞毒性浓度100μM纳米银导致的导致了 ROS含量升高、ATP含量降低、细胞凋亡和神经元突起长度缩短。 5)联合分析纳米银对海马神经元的细胞学特性与电生理特性的影响,探讨了纳米银对神经元的细胞毒性机制。结果表明:无细胞毒性5μM纳米银主要引起海马神经元网络的电兴奋性作用,会触发Ca2+与NMDA受体数量间的负反馈调节机制。随着毒性增加,有细胞毒性100μM纳米银短时间(4-24h)作用对神经元网络也起兴奋作用。但随着作用时间延长(48-72h),100μM纳米银对海马神经元的细胞毒性不断增强,导致Ca2+含量升高、ROS生成增加、细胞凋亡增加、ATP含量降低和细胞突起长度缩短,这最终导致电兴奋性持续下降。通过细胞分子指标的变化尝试解释了电兴奋性变化的细胞分子机理,在现有研究基础上进一步加深了对纳米银对中枢神经系统毒性作用机制的理解。

关键词：纳米银神经网络微电极阵列神经细胞毒性电压阈值法电兴奋性细胞毒性评价联合分析

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羟甲基糠醛-赖氨酸席夫碱的鉴定及其细胞毒性研究

羟甲基糠醛-赖氨酸席夫碱的鉴定及其细胞毒性研究

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作者：王歌暨南大学

学位级别：硕士

5-羟甲基糠醛（HMF）是食品热加工过程中产生的内源性污染物。研究发现,氨基酸可与HMF反应形成席夫碱等各种产物。赖氨酸具有a-氨基和活泼的ε-氨基,是最容易发生美拉德褐变的氨基酸,理论上两个氨基都可与HMF发生反应。目前关于赖氨酸与... 详细信息

5-羟甲基糠醛（HMF）是食品热加工过程中产生的内源性污染物。研究发现,氨基酸可与HMF反应形成席夫碱等各种产物。赖氨酸具有a-氨基和活泼的ε-氨基,是最容易发生美拉德褐变的氨基酸,理论上两个氨基都可与HMF发生反应。目前关于赖氨酸与HMF的反应产物研究不多,对其反应产物的安全性还不清楚。本研究鉴定并分离制备了赖氨酸e-NH2与HMF反应形成的席夫碱,建立了食品中席夫碱的定量检测方法并检测其在食品中的含量,采用胃正常黏膜上皮细胞（GES-1细胞）、结肠癌细胞（Caco-2细胞）、人脐静脉细胞（***926细胞）3个细胞系,分别研究了席夫碱和HMF对细胞增殖的影响,并探究了席夫碱和HMF在Caco-2细胞中的作用机制与吸收转化,主要结果如下:1.席夫碱的制备与分离鉴定探究了4个因素对HMF消除率的影响,分别是pH、反应温度、反应时间、反应物比例。基于单因素实验,在以下条件（HMF消除率为74.7%）制备席夫碱:HMF:L-Lys=1:2,调节pH为11、160°C油浴中反应25 min。依次采用HP-20型大孔树脂、反相硅胶柱分离纯化,获得目标产物。经HRMS确定该化合物分子式为C12H18N2O4,相对分子质量是254.13。经NMR鉴定确定该化合物的结构,它是由HMF中的羰基与赖氨酸的ε-氨基通过美拉德反应形成的席夫碱。2.食品中席夫碱含量的检测利用液相-质谱（LC-MS/MS）联用技术,建立了一种食品中席夫碱的定量检测方法。将食品样品经正己烷除去脂溶性物质、超声水提,旋蒸浓缩后得到样品溶液,采用LC-MS/MS测定。测定选用m/z 255.1/84.1和m/z 255.1/130.0分别为定量离子对和定性离子对。利用不同浓度席夫碱标准品建立标准曲线并计算样品中席夫碱的含量。在电喷雾离子源正离子多反应监测模式下,测定5种食品中席夫碱的含量在0.05～1.90μg/kg之间,其含量远低于HMF（9.98～12.54 mg/kg）。3.席夫碱对细胞增殖的影响采用3个细胞系分别研究了HMF和席夫碱对细胞增殖的影响。与HMF相比,席夫碱的细胞毒性在GES-1细胞、Caco-2细胞、***926细胞3个细胞系中都下降。培养48h后,席夫碱对应三种细胞的IC50值相比HMF分别增加了25倍,6.3倍和108倍。4.席夫碱在Caco-2细胞中的作用机制与吸收转化（1）采用10 mM、20 mM的HMF和席夫碱作用于Caco-2细胞48 h,探究HMF和席夫碱对Caco-2细胞周期、凋亡的影响。HMF和席夫碱都能将大量的细胞阻滞在S期,影响Caco-2细胞的正常分裂。HMF具有浓度依赖性,浓度越高,效果越明显,而席夫碱不具有浓度依赖性。细胞凋亡结果显示,与HMF相比,席夫碱可以通过减少细胞的晚期凋亡而降低对Caco-2细胞的毒性作用。（2）选取2 mM的HMF和席夫碱分别作用于Caco-2细胞0～150 min,探究Caco-2细胞对两种药物的吸收作用。作用150 min后,Caco-2细胞对HMF和席夫碱的吸收率分别达到8.45%,10.52%;两种药物在Caco-2细胞内被检测出的含量很少,推测两种药物被吸收后通过代谢或者与其他物质结合转化为新物质。

关键词：羟甲基糠醛赖氨酸席夫碱细胞毒性评价细胞吸收

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基于生物碱的博落回蜂产品鉴别及其对细胞毒性的影响

基于生物碱的博落回蜂产品鉴别及其对细胞毒性的影响

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作者：赵玲玲西北大学

学位级别：硕士

博落回系罂粟科植物,广泛分布于我国东、南各省,其主要有效成分为异喹啉类生物碱。这些生物碱具有显著的生理活性和毒性作用,过量摄入可能会对人体造成不适、引发严重的疾病甚至死亡。蜜蜂通过采集花蜜或花粉可将有毒生物碱成分转移至... 详细信息

博落回系罂粟科植物,广泛分布于我国东、南各省,其主要有效成分为异喹啉类生物碱。这些生物碱具有显著的生理活性和毒性作用,过量摄入可能会对人体造成不适、引发严重的疾病甚至死亡。蜜蜂通过采集花蜜或花粉可将有毒生物碱成分转移至蜂产品中,从而给消费者的健康带来潜在的危险。目前我国对博落回蜂产品的研究尚不够充分,也未见相关文献报道博落回蜂蜜和花粉的鉴别及毒性评价研究。本研究基于电镜扫描确认博落回蜂花粉的形态,依据蜂蜜国家标准测定方法分析了博落回蜂蜜的理化性质,根据博落回在生物碱的特征提出基于特征生物碱来鉴别博落回蜂产品,通过优化提取方法和分析条件建立了博落回蜂产品中异喹啉类生物碱的UHPLC-MS/MS测定方法,根据生物碱的种类和含量筛选出合适的博落回蜂产品的生物碱标记物。另外,还初步考察了博落回蜂蜜和花粉中生物碱单体对细胞增殖和活力的影响,旨在为蜂产品质量评价和风险评估标准的制订提供依据。本研究主要分为以下四部分:第一部分:优化了博落回蜂花粉形态分析的前处理方法,通过电镜扫描获得了博落回蜂花粉的花粉形态。依据国标蜂蜜的方法测定了博落回蜂蜜的基本理化指标,包括花粉形态、水分、p H、糖(葡萄糖、果糖、蔗糖)含量、蛋白质含量、淀粉酶活性及总酚。结果表明,花粉形态验证了蜂蜜和花粉样本的来源及真实性,其余各项指标基本符合国家标准。第二部分:建立了Qu ECh ERS-UHPLC-MS/MS测定博落回蜂蜜和花粉中异喹啉类生物碱的分析方法。在0.01-10μg/L浓度范围内,7种生物碱的线性相关系数均大于0.99,基质匹配校准法很好地扣除了基质效应,蜂蜜和花粉在0.001,0.01,0.1 mg/kg三个添加水平下的基质平均回收率在76.0-98.7%之间,精密度在2.1-7.1%之间。蜂蜜和花粉的方法检出限分别为0.04-0.2μg/kg、1.0-6.1μg/kg,定量限分别为0.1-0.5μg/kg、2.6-13.0μg/kg。该方法简单快速,准确可靠,选择性好,适用于博落回蜂产品中异喹啉类生物碱的定性和定量分析。第三部分:基于建立的Qu ECh ERS-UHPLC-MS/MS方法测定了主要博落回蜂产品中异喹啉类生物碱的种类和含量。结果显示,博落回花粉中有7种生物碱,蜂蜜中主要有4种生物碱,而蜂王浆中未检出生物碱。这几种生物碱均不存在普通蜂蜜(油菜,洋槐,枣花,荆条等130个)和花粉(油菜、荷花等30个)样品中,其中原阿片碱和别隐品碱是博落回蜂蜜和花粉中最主要的生物碱,因此,我们可以将这两个生物碱作为潜在的标志物鉴别博落回蜂产品。第四部分:选用小鼠皮下成纤维L929细胞及正常人L02肝细胞为对象,考察了7种异喹啉类生物碱对这两种细胞的增殖与活力的影响。结果表明在一定浓度范围内,这几种生物碱均表现出不同程度的细胞增殖抑制作用。生物碱刺激L929细胞的影响比L02细胞严重,其中血根碱和白屈菜赤碱的细胞毒性最明显,在浓度分别为1μmol/L和4μmol/L时L929细胞的存活率为60%左右,最大浓度20μmol/L时L02细胞几乎没有细胞活力。通过本研究的生物碱细胞毒性数据结合博落回蜂产品中生物碱的含量结果分析可知,在日常摄入最大量蜂蜜和花粉的情况下,博落回花粉可能会对人体健康带来潜在的风险,而博落回蜂蜜对人体健康风险较小。

关键词：博落回蜂蜜博落回花粉异喹啉类生物碱超高效液相色谱-串联质谱细胞毒性评价

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丙氨酸、丝氨酸消除丙烯醛机理及其互作产物的细胞毒性研究

丙氨酸、丝氨酸消除丙烯醛机理及其互作产物的细胞毒性研究

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作者：邹照佳暨南大学

学位级别：硕士

丙烯醛(Acrolein,Acr)是具有高反应活性的α,β-不饱和醛,广泛存在于环境、食品加工过程和生物体中。实验室前期研究发现,氨基酸可以与含有羰基的化合物发生反应降低了二羰基化合物的毒性。同时许多研究发现,理论上休闲食品薯片油炸过... 详细信息

丙烯醛(Acrolein,Acr)是具有高反应活性的α,β-不饱和醛,广泛存在于环境、食品加工过程和生物体中。实验室前期研究发现,氨基酸可以与含有羰基的化合物发生反应降低了二羰基化合物的毒性。同时许多研究发现,理论上休闲食品薯片油炸过程中产生的丙烯醛含量比实际油炸薯片中检测到的丙烯醛含量高2到3个数量级,在此过程中氨基酸的含量也大大降低了。我们推测两者在加工过程中能反应生成其他物质降低了丙烯醛的含量。本研究采用马铃薯中的主要氨基酸与丙烯醛反应,制备表征了主要产物,并建立了其定量检测方法,确定了薯片中加合物的含量。最后,以丙氨酸和丝氨酸为例,研究了氨基酸与丙烯醛的互作产物对三种细胞系细胞毒性的影响,并探讨了互作产物的形成对细胞凋亡的影响及其机制。主要内容如下:1.丙氨酸和丝氨酸对丙烯醛的消除作用在不同反应条件下,研究了丙氨酸、丝氨酸对丙烯醛的消除效率和反应中产物的生成情况,发现两种氨基酸均能高效消除丙烯醛。不同温度下,丙氨酸和丝氨酸均可以有效消除丙烯醛,并且温度、pH、反应比例都会影响氨基酸对丙烯醛的消除效率。比较了不同温度下(37℃、50℃、160℃)氨基酸与丙烯醛反应后产物的生成情况,发现不同温度下形成的反应产物不同,较低温度下(37℃、50℃)主要产生一种反应产物,该互作产物的最大吸收波长为220 nm,而在热加工温度下(160℃)还会生成另一全新产物,最大吸收波长为195 nm。2.氨基酸-丙烯醛互作产物的制备、分离纯化和检测方法的建立基于不同条件下氨基酸对丙烯醛的消除效果,对互作产物的制备条件进行了优化,氨基酸与丙烯醛的反应比例为2:1时制备效率最高。选取马铃薯中含量较高的9种氨基酸,制备了其与丙烯醛的互作产物,并采用反相硅胶ODS和葡聚糖凝胶LH-20两种填料相结合对反应后的混合物进行分离纯化,获得纯度达93%以上的目标产物。经HPLC-MS/MS、HRMS、NMR对产物进行结构鉴定后,发现氨基酸与丙烯醛的互作产物多呈现环状或多不饱和结构,并总结出氨基酸与丙烯醛的主要反应机理:迈克尔加成反应和羰氨反应是氨基酸消除丙烯醛的主要途径,含氮六元环是低温和高温下都比较倾向于形成的稳定结构。利用高效液相质谱联用技术(HPLC-MS/MS),建立了一种食品中氨基酸-丙烯醛的定量检测方法,测定出两种不同薯片中丙氨酸、丝氨酸、天冬酰胺与丙烯醛的互作产物的含量约为100μg/kg,且含量变化与氨基酸的种类存在着较大关系。3.氨基酸-丙烯醛反应产物的细胞毒性及其作用机制分别研究了丙氨酸、丝氨酸与丙烯醛的反应混合物、分离纯化后的互作产物纯品和丙烯醛在GES-1细胞、Caco-2细胞、HUVEC细胞这3个细胞系中的细胞毒性。结果发现,丙烯醛对三种细胞的毒副作用都较大,培养24 h后细胞的IC50分别为71.81μM(GES-1细胞)、53.66μM(Caco-2细胞)、16.20μM(HUVEC细胞),而分离纯化后的互作产物即使在最大浓度处理下,细胞存活率依然保持在近80%及以上。通过检测细胞内的氧化应激水平、DNA损伤情况、细胞凋亡水平,发现丙烯醛会通过上调三种细胞内的ROS水平诱发氧化应激,同时诱导细胞的核凝聚,影响DNA合成以及引起DNA片段化进而诱发细胞凋亡增加细胞死亡率,而氨基酸与丙烯醛互作产物的形成则可通过降低细胞内氧化应激水平、减少DNA损伤和细胞凋亡来降低丙烯醛的毒性。

关键词：丙烯醛氨基酸互作产物细胞毒性评价

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