检索结果-内蒙古大学图书馆

中华眼镜蛇毒细胞毒素14的药物动力学

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中国药理学报 1992年第6期13卷 544-546页

作者：郭慕平王晴川福建医学院

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眼镜蛇毒细胞毒素—白介素4受体单抗免疫毒素的制备及其抗胰腺癌作用

眼镜蛇毒细胞毒素—白介素4受体单抗免疫毒素的制备及其抗胰腺癌...

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作者：庄权权福建医科大学

学位级别：硕士

免疫毒素(Immuonotoxin, IT)是由能与肿瘤细胞表面受体或细胞表面靶抗原特异结合的单克隆抗体和对肿瘤细胞具有杀伤作用的毒素分子通过化学交联构建而成。细胞毒素(Cytotoxin, CTX)是眼镜蛇毒中一类重要的活性蛋白,约占蛇毒总蛋白量的4... 详细信息

免疫毒素(Immuonotoxin, IT)是由能与肿瘤细胞表面受体或细胞表面靶抗原特异结合的单克隆抗体和对肿瘤细胞具有杀伤作用的毒素分子通过化学交联构建而成。细胞毒素(Cytotoxin, CTX)是眼镜蛇毒中一类重要的活性蛋白,约占蛇毒总蛋白量的40%,由60-63个氨基酸残基组成,分子量在7000Da左右,国内外许多报道都证实其具有很强的抗肿瘤作用。白介素-4受体(IL4R)已被发现在胰腺癌细胞表面高表达,但是在正常胰腺组织和人肺癌细胞H1299则不表达或者低表达,目前以IL4R作为靶点的免疫毒素研究已取得一系列令人鼓舞的结果。为探索细胞毒素是否能与抗IL-4R单克隆抗体(Monoclonal antibody of IL-4 receptor, MAIL4R)偶联构建成免疫毒素,以选择性杀伤高表达IL-4R的胰腺癌细胞,本实验拟从眼镜蛇毒中分离出CTX,将CTX与MAIL4R进行了偶联,并观察和比较偶联物对胰腺导管上皮癌PANC-1细胞,原位胰腺癌BXPC-3细胞和肺腺癌H1299细胞的作用,为寻找胰腺癌治疗新方法提供实验资料。 1. CTX的分离纯化眼镜蛇毒粗毒经过SP-Sepharose FF阳离子交换色谱,获得13个蛋白质组分。其中组分XI使大鼠离体心脏标本收缩张力增加、幅度缩小、最后停于收缩期,呈现明显的心脏毒性;同时对分别刺激大鼠膈肌和膈神经引起的收缩均有抑制作用,呈现明显的细胞毒性作用,鉴定为眼镜蛇毒细胞毒素(CTX)组分。将XI组分过Sephasil Peptide C18柱精细纯化,经SDS-PAGE(Tris-Tricine系统)鉴定,CTX-XI呈均一蛋白区带;分子量为7235Da左右。自动电位滴定法测定PLA2,活力为0,得到CTX纯品暂命名为CTX-XI。 2.免疫毒素MAIL4R-CTX偶联物的制备将CTX和MAIL4R用N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯(SPDP)法进行偶联,构建CTX和MAIL4R的偶联物,偶联物MAIL4R-CTX在SDS-PAGE中为一条分子量大于100kD的单一条带,还原后则可见为两条带;该偶联物既能与抗眼镜蛇毒血清产生较强的抗原-抗体反应,也能直接与羊抗小鼠的抗体产生反应;与该偶联物共同孵育的人胰腺癌BXPC-3细胞被染成棕色,而不表达IL-4R的人肺腺癌H1299细胞未被染色,表明偶联物与人胰腺癌BXPC-3细胞具有很好的结合性,而与人肺癌H1299细胞不结合。 3. CTX、MAIL4R和MAIL4R-CTX体外抗肿瘤活性采用MTT法观察CTX、MAIL4R和CTX-MAIL4R对体外培养的PANC-1细胞,BXPC-3细胞和H1299细胞增殖的抑制作用,并测定其半数抑制浓度(IC50)。CTX对PANC-1,BXPC-3和H1299细胞均有快速的杀伤作用,CTX浓度为8μg/ml时,对PANC-1,BXPC-3和H1299细胞4h杀伤率分别为89.8%、88.0%和89.3%,对3株细胞的杀伤强度没有明显的区别;MAIL4R对上述细胞明显无杀伤作用;MAIL4R-CTX浓度为9.4μg/ml时,对PANC-1和BXPC-3细胞4h杀伤率分别为73.1%和84.4%,而对H1299细胞杀伤率仅为29.8%。结论:采用SP-Sepharose FF阳离子交换色谱和Sephasil Peptide C18反相色谱两步得到一个不含磷脂酶A2的CTX纯品。用SPDP法可以成功构建CTX与MAIL4R免疫毒素,该免疫毒素对高表达IL4R的胰腺癌细胞具有选择性杀伤作用。

关键词：眼镜蛇毒细胞毒素白介素-4 受体单抗免疫毒素胰腺癌

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眼镜蛇毒细胞毒素的生物素—抗生物素蛋白—酶联免疫吸附检测

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中国药理学报 1992年第2期13卷 189-192页

作者：郭慕平王晴川福建医学院

采用夹心酶联免疫吸附检测技术, 建立了一种眼镜蛇毒细胞毒素的生物素- 抗生物素蛋白-酶联免疫吸附检测方法, 灵敏度0.5ng·ml~(-1), 工作范围1 —320ng·ml~(-1), 组内组间变异系统分别为4.9%和8.1%。图4参7

关键词：眼镜蛇毒液类细胞毒素生物素

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舟山眼镜蛇毒细胞毒素的克隆、表达及免疫学活性鉴定

舟山眼镜蛇毒细胞毒素的克隆、表达及免疫学活性鉴定

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作者：陈瑜福建医科大学

学位级别：硕士

目的蛇毒是一种成分复杂的天然生物毒素,含有多种酶类和药理活性多肽,就眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒而言,含有细胞毒素(cytotoxin,CTX)、神经毒素(neurotoxin,NT)和多种酶类等,其中CTX在体外对多种瘤细胞具有直接溶解作用。从蛇毒中分... 详细信息

目的蛇毒是一种成分复杂的天然生物毒素,含有多种酶类和药理活性多肽,就眼镜蛇(Naja naja atra)蛇毒而言,含有细胞毒素(cytotoxin,CTX)、神经毒素(neurotoxin,NT)和多种酶类等,其中CTX在体外对多种瘤细胞具有直接溶解作用。从蛇毒中分离细胞毒素资源有限,成本高,技术难,质量标准难统一。本文拟应用基因克隆的方法,构建舟山眼镜蛇毒细胞毒素(cytotoxin,CTX)原核表达载体(pET42α(+)- CTX),并在大肠杆菌中表达CTX重组蛋白。旨在为开发眼镜蛇毒细胞毒素作为抗肿瘤药物提供药学和药理学资料;也为深入研究细胞毒素结构与功能关系创造条件。方法从舟山眼镜蛇毒中分离纯化细胞毒素(CTX),测定N-末端及C-末端的氨基酸序列并据此设计引物,含KpnⅠ酶切位点、SacⅠ酶切位点。P1:5’-GGGGTACCAAAACTCTGCTGCTGACCTTG-3’, P2:5’-CGAGCTCTCAGTTGCATCTGTCTGTATTG-3’, 以提取的舟山眼镜蛇毒腺总RNA为模板,RT-PCR方法合成扩增其中的细胞毒素基因序列(CTX cDNA)。将CTX cDNA定向克隆到原核表达载体pET42α(+)中,获得重组DNA(pET42α(+)- CTX),经KpnⅠ/ SacⅠ酶切鉴定后,热激转化至大肠杆菌DH5α。获得单克隆(CTX-pET42α(+)-DH5α)增殖后,抽提质粒,并用KpnⅠand SacⅠ双酶切图谱分析、T7引物PCR和DNA序列测定,鉴定阳性转化子DNA序列,该序列与文献报导的蛇毒CTX基因序列一致;将鉴定确认的阳性转化子重组质粒(pET42α(+)-CTX),应用CaCl2法转化至大肠杆菌表达菌*** BL21(DE3)中,测序鉴定。IPTG诱导CTX融合蛋白表达,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定表达产物;GSTrap FF亲和层析纯化融合蛋白CTX,Western-blotting方法鉴定表达产物的抗原性。结果 1. RT-PCR扩增得到的CTX cDNA243bp左右,与预期的CTX基因大小基本一致。 2.构建原核表达质粒pET42α(+)- CTX,经双酶切、T7引物PCR和DNA序列测定,证实CTX基因已正确插入质粒载体的多克隆位点。得知CTX的cDNA大小约为243bp。 3.在大肠杆菌*** BL21(DE3)中成功表达融合蛋白CTX,SDS-PAGE凝胶电泳显示CTX以可溶性蛋白及包涵体形式存在,融合蛋白分子量为:37.9kD。 4.纯化得到融合CTX,具有眼镜蛇毒细胞毒素的抗原性。结论成功构建CTX基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达,获得CTX融合蛋白具有眼镜蛇毒细胞毒素的抗原性。

关键词：眼镜蛇蛇毒细胞毒素克隆表达鉴定

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中华眼镜蛇毒细胞毒素14的纯化及其抗癌活性

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中国药理学报 1993年第3期14卷 279-282页

作者：仲晓燕刘广芬福建医学院

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中华眼镜蛇毒细胞毒素对膀胱癌放射增敏作用的实验研究

中华眼镜蛇毒细胞毒素对膀胱癌放射增敏作用的实验研究

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作者：王丽军昆明医学院

学位级别：硕士

目的：探讨中华眼镜蛇毒细胞毒素-12（Cytotoxin-12，CTX-12，MT-12）联合放射治疗对Balb／c裸鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长抑制及诱导凋亡作用，初步探讨CTX-12是否具有对裸鼠移植膀胱癌的放射增敏作用。方法：取置于无特定病原体（SPF）... 详细信息

目的：探讨中华眼镜蛇毒细胞毒素-12（Cytotoxin-12，CTX-12，MT-12）联合放射治疗对Balb／c裸鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长抑制及诱导凋亡作用，初步探讨CTX-12是否具有对裸鼠移植膀胱癌的放射增敏作用。方法：取置于无特定病原体（SPF）的三级层流室饲养Balb／c雌性裸小鼠40只，取对数生长期的BIU-87细胞株用胰酶消化后配成1.5×10～7个／ml单细胞悬液，在无菌条件下于裸鼠右侧背部皮下接种0.2ml／只（相当于3.0×10～6个细胞），建立裸小鼠皮下移植瘤的动物模型，接种时确保每只小鼠的接种部位以及肿瘤细胞数量一致，共接种40只。待肿瘤体积达到0.60±0.09cm3时，将动物随机分成四组：蛇毒+放射组（CTX+R），单纯蛇毒组（CTX），单纯放射组（R），空白对照组（B）。化疗药物及放射剂量均采用根据文献报道和动物体表面积换算出的最佳生理剂量。蛇毒剂量标准为0.5mg／kg（相当于0.01mg／只）溶解于生理盐水0.15ml进行腹腔注射，单次放射治疗的剂量均为4Gy，进行隔天照射，共照射8次，总照射剂量32Gy。空白对照组（B）腹腔注入等量的生理盐水。分组治疗期间每3天利用游标卡尺测量肿瘤最长径和最短径，换算出肿瘤体积，绘制出各组裸鼠移植瘤生长曲线图。停药后次日随机处死每组别6只实验动物，称瘤重并计算抑瘤率、进行放射增敏效应测定、膀胱肿瘤标本HE染色光学显微镜下观察其病理组织学特点及TUNEL系统检测凋亡情况、透射电镜观察凋亡细胞的形态学改变、利用流式细胞术检测各组肿瘤组织凋亡峰和凋亡率、观察荷瘤鼠存活数。结果：与对照组比较，中华眼镜蛇细胞毒素-12单独应用或与放疗结合、单纯放疗组均有抑制Balb／c裸小鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长作用（P＜0.05）；但蛇毒联合放射治疗组局部肿瘤生长受到明显抑制，抑瘤率达到77.9％（P＜0.001），明显高于单纯蛇毒组（46.7％，P＜0.05）和单纯放疗组（18.2％，P＜0.01）；蛇毒联合放疗组局部肿瘤生长延缓天数（瘤体积0.6～1.2cm3）超过19天，高于单纯蛇毒组（10天，P＜0.05）和单纯放疗组（5天，P<＜0.01）；光镜和透射电镜下均能观察到凋亡细胞的核固缩、染色质边集、核碎裂、凋亡小体形成等形态学特征，凋亡细胞的形态学和数量变化均以蛇毒联合放射治疗组为著。流式细胞术检测蛇毒联合放射治疗组肿瘤组织凋亡峰和凋亡率最明显（50.8±1.45，p＜0.01），单纯蛇毒组凋亡率为（35.9±1.67，P＜0.05），单纯放射组和空白对照组的凋亡率分别是（21.7±0.98，P＜0.05）、（7.6±0.21）；放射增敏效应测定提示中华眼镜蛇细胞毒素-12对膀胱癌有放射增敏作用；联合放疗组90天内存活的鼠最多（4个），单纯蛇毒组有2个存活，单纯放疗组1个存活，空白对照组的裸鼠全部死亡。结论：中华眼镜蛇细胞毒素-12（CTX-12）可显著地增强Balb／c裸鼠皮下移植膀胱肿瘤细胞放射治疗敏感性，且从治疗过程中观察裸鼠的生存质量没有增加任何不良反应。CTX-12联合放疗腹腔用药能显著抑制Balb／c裸小鼠皮下移植膀胱肿瘤的生长。诱导凋亡可能是蛇毒细胞毒素抗膀胱肿瘤的机制之一。CTX-12联合放疗能显著诱导肿瘤细胞凋亡，同时诱导肿瘤细胞凋亡很可能也是CTX-12实现膀胱肿瘤放疗增敏的重要途径之一。透射电镜是观察凋亡细胞形态特征最可靠的方法。

关键词：膀胱肿瘤放射敏感性眼镜蛇毒细胞毒素凋亡

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利用定点突变分析猪霍乱沙门氏杆菌细胞毒素flagellin的毒性可能区域

利用定点突变分析猪霍乱沙门氏杆菌细胞毒素flagellin的毒性可能...

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作者：黄信璁国立台湾大学

学位级别：硕士

P56是从Salmonella choleraesuis CH12440培养上清液纯化出来，分子量为56kDa的蛋白质，以此蛋白质处理小鼠巨噬细胞(mouse marcophage)，会导致细胞变性及坏死，故P56可视为一种细胞毒素(cytotoxin)。经由胺基酸序列比对发现P56为构成... 详细信息

P56是从Salmonella choleraesuis CH12440培养上清液纯化出来，分子量为56kDa的蛋白质，以此蛋白质处理小鼠巨噬细胞(mouse marcophage)，会导致细胞变性及坏死，故P56可视为一种细胞毒素(cytotoxin)。经由胺基酸序列比对发现P56为构成细菌鞭毛的次单位-flagellin，且将P56基因命名为sal15，但现今仍未有文献报导flagellin具有细胞毒性。与其他S. choleraesuis菌株之flagellin DNA序列 (Genbank number X03394 )做比较，发现S. choleraesuis CH12440之flagellin基因多了36 bp的序列，而初步研究发现如将此段序列删除则其毒性消失。本论文的主题是对这一区域做更进一步的探讨。首先，将可能毒性区域的36 bp DNA序列插入不具毒性的E. coli之 fliC基因之中，测验是否能赋予E. coli的FliC毒性，结果发现无论DNA序列是否多出了36个bp，FliC都具有毒杀小鼠巨噬细胞株RAW264.7及P388D1的能力。另外，将Sal15此区域中的胺基酸序列K 247、A 252、D 253利用PCR进行定点突变改变为T 247、T 252、G 253，但是此三个重组蛋白质的毒性均无显着的下降，故此三个胺基酸与Sal15的毒性无明显的关系。另一方面，探讨Sal15是否是导致巨噬细胞的凋亡(apoptosis)，目前已知当细胞凋亡时PARP-1 [poly(ADP-ribose) polymerase-1]会被分解、抑制，故利用PARP-1作为细胞凋亡标记，进行西方墨点法，但结果得知PARP-1并没有被分解、抑制，故推测Sal15导致巨噬细胞的死亡并非经由凋亡的途径。

关键词：猪霍乱沙门氏杆菌鞭毛细胞毒素

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舟山眼镜蛇细胞毒素CTX1抗肿瘤作用及机制

舟山眼镜蛇细胞毒素CTX1抗肿瘤作用及机制

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作者：吴敏燕广州医学院

学位级别：硕士

背景与目的:化疗药物耐药情况普遍存在是临床抗肿瘤用药的一大难题。生物毒素为临床抗肿瘤治疗提供了新的思路。眼镜蛇毒细胞毒素又称心脏毒素,是从眼镜蛇毒中分离出的毒性蛋白,对多种肿瘤细胞有选择性杀伤作用,在蛇毒抗肿瘤研究中占重... 详细信息

背景与目的:化疗药物耐药情况普遍存在是临床抗肿瘤用药的一大难题。生物毒素为临床抗肿瘤治疗提供了新的思路。眼镜蛇毒细胞毒素又称心脏毒素,是从眼镜蛇毒中分离出的毒性蛋白,对多种肿瘤细胞有选择性杀伤作用,在蛇毒抗肿瘤研究中占重要地位。目前研究表明它可通过细胞膜作用、线粒体途径或者溶酶体等途径发挥作用。舟山眼镜蛇细胞毒素CTX1是本课题组从舟山眼镜蛇毒中分离纯化的小分子多肽,CTX1抗肿瘤作用目前未见文献报道,本实验拟研究CTX1的抗肿瘤作用及相关作用机制。研究内容包括:1、CTX1对体外细胞株相对活力和P388腹水瘤小鼠生存期的影响。2、CTX1对肿瘤细胞死亡的影响。3、CTX1对线粒体膜通透性和凋亡蛋白Caspase 8、Caspase9的影响。4、CTX1对溶酶体膜通透性和组织蛋白酶B(Cathepsin B)的影响。5、Caspase家族广谱抑制剂Z-VAD-FMK和Cathepsin B抑制剂CA-074 Me对CTX1诱导的肿瘤细胞死亡的影响。实验方法: 1 CTX1抗肿瘤作用评价 1.1细胞相对活力测定:MTS法检测CTX1对多种细胞(MCF-7、H22、K562、P388和16HBE)相对活力的影响。 1.2 P388腹水瘤昆明小鼠生存期评价 2 CTX1对肿瘤细胞死亡的影响 2.1流式细胞术检测Annexin V-FITC、PI双染后细胞死亡情况。 2.2荧光显微术观察活细胞培养体系细胞死亡情况(MCF-7细胞:Annexin V-FITC、PI双染;K562细胞:PI染色)。 2.3乳酸脱氢酶(LDH)活力检测 3线粒体膜电位检测:Rhodamine 123染色后用流式细胞仪检测细胞荧光强度。 4 CTX1对溶酶体膜通透性和Cathepsin B活性的影响 4.1溶酶体特异性染色:LysoTracker Red DND-99或LysoTracker Green DND-26染色后于荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察。 4.2 Cathepsin B活性检测:根据Cathepsin B活性检测试剂盒处理后于全波长多功能读数仪检测。 5 Western blotting检测相关蛋白(GAPDH、Caspase 8、Caspase 9、Cathepsin B)表达水平。结果: 1. CTX1对体外细胞株相对活力和P388腹水瘤小鼠生存期的影响 1.1用MTS方法检测细胞相对活力:CTX1对多种细胞(MCF-7、H22、K562、P388和16HBE)的活力具有抑制作用,并呈现剂量依赖和时间依赖关系。与肿瘤细胞株相比,CTX1对人支气管上皮细胞株16HBE活力的抑制作用较弱,这说明CTX1对肿瘤细胞株有选择性抑制作用。CTX1对多种肿瘤细胞株的半数抑制浓度(IC50)不同,说明CTX1对不同肿瘤细胞株具有选择性抑制作用。 1.2 CTX1(1/3LD50,1.40 mg/kg/day)可明显延长P388腹水瘤小鼠的生存期及累积生存率,与阴性对照组相比具有统计学差异(P<0.05)。 2. CTX1对肿瘤细胞死亡的影响 2.1流式细胞术检测细胞死亡发现,CTX1诱导肿瘤细胞(K562、P388)死亡,呈现剂量依赖和时间依赖关系,主要引起细胞晚期凋亡和坏死,早期凋亡均不明显。 2.2荧光显微术观察细胞死亡: K562或者MCF-7对照组绝大部分细胞大小正常,胞膜光滑,状态良好,未被PI染色。随着CTX1浓度增加和作用时间延长,PI染色的细胞数(即死亡细胞)明显增多。在MCF-7实验中, CTX1处理过的细胞基本未被Annexin V-FITC染色,说明CTX1并不诱导早期凋亡。 2.3随着CTX1浓度增加,P388细胞培养体系中LDH活力逐渐增加。 3 CTX1对线粒体膜通透性和凋亡蛋白Caspase 8、Caspase9的影响 3.1 CTX1导致线粒体膜电位丢失:P388细胞经罗丹明123染色后用流式细胞仪检测,CTX1(1、2、4μg/ml)处理组荧光强度较对照组明显减弱,低荧光强度的P388细胞所占百分率随着CTX1剂量的增加而增加(P<0.05)。 3.2 Western blotting检测结果显示:CTX1未引起GAPDH、Caspase 8、Caspase 9蛋白表达的明显变化。 4 CTX1对溶酶体膜通透性和Cathepsin B的影响 4.1溶酶体染色后可见CTX1处理组MCF-7或P388细胞荧光强度较阴性对照组减弱,反映了溶酶体膜完整性丢失。CTX1诱导溶酶体膜通透性增加(LMP)。 4.2 CTX1引起Cathepsin B活性增加:加药

关键词：舟山眼镜蛇细胞毒素 CTX1 抗肿瘤溶酶体

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黄酮类希夫碱配合物的合成、表征、抗氧化、细胞毒素活性及与DNA结合的研究

黄酮类希夫碱配合物的合成、表征、抗氧化、细胞毒素活性及与DNA...

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作者：汪宝堆兰州大学

学位级别：硕士

本文主要报道了具有生物活性的黄酮类希夫碱及配合物的合成、表征及它的生物活性测定。共合成了十个配体和三十六个稀土配合物。其中有四个配体及十二个对应的配合物(附录)由于时间关系，表征不够完善，所以未能写进去。简要介绍了... 详细信息

本文主要报道了具有生物活性的黄酮类希夫碱及配合物的合成、表征及它的生物活性测定。共合成了十个配体和三十六个稀土配合物。其中有四个配体及十二个对应的配合物(附录)由于时间关系，表征不够完善，所以未能写进去。简要介绍了黄酮类化合物药理作用的研究进展以及金属配合物与DNA的相互作用等。　设计合成了柚皮素(苯甲酰基)腙及四个稀土元素配合物，并用元素分析、摩尔电导、差热分析、红外和核磁共振对其结构进行分析表征。基和羟基自由基的能力，并计算其清除率。对抗细胞毒素活性也进行了研究。结果表明配合物比配体有更高的生物活性。　　　对黄酮(苯甲酰基)腙配体及配合物与DNA相互作用方的方式进行了研究。结果表明配合物及配体与DNA皆为插入作用，但配合物的插入作用比配体强。

关键词：黄酮类希夫碱抗氧化细胞毒素

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中华眼镜蛇细胞毒素及其偶联膀胱癌单克隆抗体的体外抑制膀胱癌细胞增殖的实验性研究

中华眼镜蛇细胞毒素及其偶联膀胱癌单克隆抗体的体外抑制膀胱癌细...

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作者：丁明霞昆明医学院

学位级别：硕士

目的研究四种细胞毒素（CTX-10,CTX-11,CTX-12和CTX-13）对膀胱癌细胞株（BIU-87和EJ）的抑制增殖作用,筛选出活性最强的一种CTX与膀胱癌单克隆抗体（BDI-1）构建成免疫毒素（IT）,并研究IT的体外抑制膀胱癌细胞株增殖的活性。方法用... 详细信息

目的研究四种细胞毒素（CTX-10,CTX-11,CTX-12和CTX-13）对膀胱癌细胞株（BIU-87和EJ）的抑制增殖作用,筛选出活性最强的一种CTX与膀胱癌单克隆抗体（BDI-1）构建成免疫毒素（IT）,并研究IT的体外抑制膀胱癌细胞株增殖的活性。方法用结晶紫法和[3H]-TdR掺入法检测CTXs对膀胱癌细胞株的抑制增殖活性,通过双功能偶联剂（SPDP）将CTX-12与BDI-1连接成IT,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定IT连接是否成功,并用DAB染色法和[3H]-TdR掺入法检测IT的活性。结果四种CTXs对BIU-87和EJ细胞株均有抑制增殖的活性,并有良好的量效依赖关系,CTX-10,CTX-11,CTX-12和CTX-13对BIU-87细胞作用6小时的IC50分别是6.03,6.27,2.25和2.89mg/l;对EJ细胞作用6小时的IC50分别是8.02,7.89,3.05和2.76mg/l。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳证明CTX-12与BDI-1能够连接成IT,IT对BIU-87和EJ细胞株具有特异性结合性,而与Lovo细胞没有结合性。IT仍具有抑制肿瘤细胞增殖的活性,其BIU-87、EJ和Lovo细胞作用6小时的IC50分别为97.12,85.28和193.4mg/l,而作用半小时更换培养液培养至6小时的IC50分别为94.64,81.28和865mg/l。结论四种CTXs对膀胱癌细胞株均有抑制增殖的活性,CTX-12与BDI-1能够连接成IT,并具有特异性抑制增殖的活性。IT和四种CTXs都有潜力成为新的抗膀胱癌药物。本实验为进一步的体内和临床实验打下基础。

关键词：细胞毒素膀胱癌免疫毒素增殖细胞株

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