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医学研究生学报 2011年第7期24卷 687-690页

作者：张兴虎万文辉齐玉琴黄方范振芳钱晓明南京军区南京总医院干部病区南京医学硕士研究生210002

目的树突状细胞(dendritic cells,DC)在机体免疫应答的启动中起着至关重要的作用。文中主要探讨高龄老年人外周血DC亚群和表面标志的改变。方法应用流式细胞仪直接检测30例高龄老年人(≥80岁)外周血及30例普通老年人(60～70岁)外周血中D... 详细信息

目的树突状细胞(dendritic cells,DC)在机体免疫应答的启动中起着至关重要的作用。文中主要探讨高龄老年人外周血DC亚群和表面标志的改变。方法应用流式细胞仪直接检测30例高龄老年人(≥80岁)外周血及30例普通老年人(60～70岁)外周血中DC的亚群(DC1和DC2)占白细胞总数的比值,进一步从高龄老年人外周血分离获得单核细胞,用人粒-巨噬细胞集落刺激因子(human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,hGM-CSF)和人白细胞介素-4(humaninterleukin-4,hIL-4)培养1周获得DC,并将普通老年人外周血培养得到的DC设为对照组,观察2组DC表面标志CD1a、HLA-DR、CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、CD40、CCR-7和CD209的改变。结果高龄老年人组外周血DC1占白细胞总数的比值及DC1/DC2的比值均低于普通老年人组,前组培养获得的DC的CD1a的细胞阳性率明显较后组低,同样前组DC表达CD40、CD80、CD86、CD209分子的水平均低于后组。结论随着增龄,DC细胞亚群和其表面标志发生了一定的改变,提示这些改变可能参与了老年人免疫衰老的发病机制。

关键词：高龄老人树突状细胞细胞亚群细胞表面标志

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从脐血单个核细胞诱导树突状细胞

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华东理工大学学报（自然科学版） 2002年第6期28卷 588-591页

作者：徐莉康自珍蔡海波谭文松华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室上海200237

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪... 详细信息

探讨了从脐血单个核细胞定向诱导 DC的方法以进一步研究树突状细胞的功能与特性。从脐血中获取单个核细胞 ,在培养液中加入 GM- CSF、TNF- α、IL- 3、IL- 4,培养 1 4d后流式细胞仪分析细胞表面标志 CD1 a;培养末期加入 LPS,流式细胞仪分析细胞表面标志 CD83及 HLA- DR。发现用 GM- CSF+TNF-α+IL - 4可获得 ( 3 6 .79± 3 .1 5 ) % CD1 a+ 细胞 ,LPS可使 CD83及 HLA- DR的比例从 ( 0 .5 7± 0 .5 6 ) %及 ( 40 .2 7± 6 .3 3 ) %分别升至 ( 3 2 .79± 1 2 .90 ) %及 ( 95 .5 2± 3 .45 ) %。实验证明脐血单个核细胞作为另一种主要来源 ,经特定细胞因子诱导可生成大量 DC,并能通过 LPS刺激

关键词：脐血树突状细胞单个核细胞定向诱导细胞表面标志

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2-甲氧基雌二醇诱导骨髓瘤细胞系CZ-1细胞分化作用初探

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中华血液学杂志 2005年第4期26卷 197-199页

作者：高巍然侯健第二军医大学长征医院血液科上海200003

目的观察2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系CZ-1细胞诱导分化作用.方法通过细胞形态观察,细胞表面标志分析和细胞分泌轻链蛋白水平的测定,观察2-甲氧基雌二醇对CZ-1细胞的诱导分化作用.结果 CZ-1细胞经0.1～0.5μmol/L 2-甲氧基雌二醇作用4... 详细信息

目的观察2-甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系CZ-1细胞诱导分化作用.方法通过细胞形态观察,细胞表面标志分析和细胞分泌轻链蛋白水平的测定,观察2-甲氧基雌二醇对CZ-1细胞的诱导分化作用.结果 CZ-1细胞经0.1～0.5μmol/L 2-甲氧基雌二醇作用48 h后细胞形态向成熟阶段发展,表现为细胞胞核缩小,胞浆丰富,核浆比例下降,核仁减少或消失,核染色质变粗、变密.细胞表面标志CD49e阳性表达率由(12.20±1.57)%增加到(24.80±1.26)%,差异有统计学意义(P＜0.05);CZ-1细胞分泌轻链蛋白由(35.97±2.60)μg/ml升高到(79.67±1.88)μg/ml,差异有统计学意义(P＜0.05).结论较低浓度2-甲氧基雌二醇可诱导骨髓瘤细胞向成熟阶段分化.

关键词：雌二醇骨髓瘤细胞甲氧基诱导细胞分化细胞形态观察细胞分泌细胞表面标志核仁

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正常人周围血初始和记忆T细胞亚群及细胞因子表达的探讨

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第1期23卷 2-5页

作者：刘杰吴长有中山大学基础医学院免疫学教研室热带病防治研究教育部重点实验室广东广州510080

目的:利用多色流式检测技术探讨初始和记忆T细胞亚群与细胞因子表达之间的关系。方法:自正常人静脉血中分离PBMC,经超抗原(SEB)刺激5h后,加入多种抗细胞表面标记和抗细胞因子抗体进行染色,利用流式细胞术检测,并利用FlowJo软件分析结果... 详细信息

目的:利用多色流式检测技术探讨初始和记忆T细胞亚群与细胞因子表达之间的关系。方法:自正常人静脉血中分离PBMC,经超抗原(SEB)刺激5h后,加入多种抗细胞表面标记和抗细胞因子抗体进行染色,利用流式细胞术检测,并利用FlowJo软件分析结果。结果:根据CD45RO表达与否,将CD4+和CD8+T细胞分为初始和记忆T细胞,再根据归巢受体(CD62L)和趋化因子受体(CCR7)的表达与否,将初始和记忆T细胞进一步分为不同的亚群。当T细胞受到SEB激活后,CD45RO+和CD45RO-的CD4+或CD8+T细胞均表达IL-2、IFN-γ和TNF-α。进一步分析结果表明,CD62Lhi和CD62LhiCCR7+细胞不表达细胞因子,而CD62LloCCR7lo和CCR7+T细胞均表达细胞因子,其中CD62LloCCR7lo细胞表达细胞因子的阳性率明显高于CCR7+细胞亚群。结论:只利用CD45RO表达与否区分初始和记忆T细胞是不够准确的,同时检测CD62L的表达,可明显地提高其准确性。

关键词：初始和记忆T细胞 T细胞亚群细胞表面标志细胞因子

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视黄酸对小儿淋巴结B细胞发育的作用及其途径

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中华儿科杂志 2005年第5期43卷 360-363页

作者：魏东杨毅王卫平复旦大学附属儿科医院儿科研究所上海200030

目的探讨视黄酸(RA)对儿童淋巴结B细胞成熟分化的影响,及其与视黄酸受体基因表达水平变化的关系。方法本组24例,按年龄分为<1岁组、1～3岁组和～5岁组,每组8例。取患儿正常淋巴结分离细胞进行体外培养,分为RA组,RA+视黄酸受体α(RAR... 详细信息

目的探讨视黄酸(RA)对儿童淋巴结B细胞成熟分化的影响,及其与视黄酸受体基因表达水平变化的关系。方法本组24例,按年龄分为<1岁组、1～3岁组和～5岁组,每组8例。取患儿正常淋巴结分离细胞进行体外培养,分为RA组,RA+视黄酸受体α(RARα)拮抗剂(Ro415253)组(RA+Ro),脂多糖组(LPS),(LPS+RA)组和对照组。分别加入atRA、Ro415253、LPS。培养24、48h收集细胞。采用流式细胞术分析细胞表面标志,观察B细胞的成熟分化;RT荧光定量PCR测定视黄酸受体基因mRNA。结果<1岁组,RA组成熟B细胞的百分比明显高于对照组(24h:23%±5%vs17%±3%;48h:28%±6%vs22%±4%)(P均<0.05);LPS+RA组活化B细胞数明显高于LPS组(24h:82%±10%vs76%±8%;48h:83%±8%vs78%±10%)(P均<0.05)。同时,RARα基因表达水平也显著上调,而该受体拮抗剂可抑制RA的调节作用。1～3岁组淋巴结B细胞的成熟和活化呈现完全相同的调节变化,而～5岁组RA的这些调节作用不明显。结论RA能促进体外培养的淋巴结B细胞的分化发育和活化,该作用在3岁以下小儿明显。RARα基因的表达调节可能是介导RA作用的主要途径。

关键词：淋巴结细胞发育荧光定量PCR测定视黄酸受体α 细胞表面标志基因mRNA 基因表达水平 3岁以下小儿成熟分化体外培养 RARα 调节作用 B细胞流式细胞术受体拮抗剂水平变化分离细胞分化发育主要途径表达调节对照组

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CPP-Id对小鼠树突细胞表面共刺激分子表达的影响

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癌症 2005年第12期24卷 1484-1488页

作者：常建华史艳侠张晓实姜文奇管忠震华南肿瘤学国家重点实验室中山大学肿瘤防治中心内科广东广州510060 中山大学肿瘤防治中心内激生科广东广州510060

背景与目的:B细胞淋巴瘤的独特型(idiotype,Id)免疫球蛋白可作为肿瘤特异性抗原诱发免疫反应抑制肿瘤的发展。本实验拟探讨小鼠淋巴瘤细胞株A20中Id-CTL表位的存在,了解细胞穿透肽(cell-penetratingpeptide,CPP)负载的Id(CPP-Id)进入树... 详细信息

背景与目的:B细胞淋巴瘤的独特型(idiotype,Id)免疫球蛋白可作为肿瘤特异性抗原诱发免疫反应抑制肿瘤的发展。本实验拟探讨小鼠淋巴瘤细胞株A20中Id-CTL表位的存在,了解细胞穿透肽(cell-penetratingpeptide,CPP)负载的Id(CPP-Id)进入树突细胞(dendriticcell,DC)的量,以及在细胞内的分布和进入细胞的时相,同时检测其对DC表面标志表达的影响。方法:用RT-PCR方法扩增A20细胞株的Id抗原CTL(cytotoxicitylymphocyte)表位的基因片段,并测序确定氨基酸的序列;通过流式细胞仪检测CPP-Id与Id进入小鼠DC的量的差异及抗原负载前后的DC表型的表达;共聚焦显微镜观察CPP-Id进入细胞的过程及时间;荧光显微镜观察CPP-Id在细胞内的分布。结果:RT-PCR扩增产物为660bp的片段,测序结果表明A20细胞株的Id抗原CTL表位的基因存在。共聚焦显微镜检测显示CPP-Id能在最初200s内快速进入DC,单纯Id进入DC的量很少。10μmol/L的CPP-Id负载的DC细胞平均荧光强度(MFI)高于单独使用Id组(4.35±0.48vs.1.14±0.33,P<0.005);两者负载的DC表面标记CD80、CD86、CD54及MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子表达均比未成熟DC明显增加。结论:CPP-Id比Id进入小鼠DC的量明显增加,CPP肽可以提高Id抗原进入细胞的效率;CPP-Id体外冲击DC后,可以使DC表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子,协同刺激分子CD80、CD86以及粘附分子CD54表达显著增高,有利于活化CTL。

关键词：树突细胞淋巴瘤 A20细胞独特型细胞穿透肽细胞表面标志小鼠

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黄芪甲苷对脂肪源性干细胞体外生物学行为的影响

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中国药理学通报 2013年第2期29卷 220-224页

作者：王葳姜燕王巍巍张金元上海中医药大学上海201203 解放军第四五五医院肾脏科南京军区肾病研究所上海200052

目的探讨黄芪甲苷(Astragaloside IV,Ast)对体外培养人脂肪源性间充质干细胞(human adipose-derived mesen-chymal stem cells,hADSCs)生物学行为的影响。方法应用CCK8和PCNA法检测不同浓度和时间Ast孵育对hADSCs增殖情况的影响,选取出Ast最适干预条件并对hADSCs进行培养,观察药物干预后细胞形态、表面标志物、成骨及成脂分化潜能。结果 CCK8和PCNA结果均显示,Ast 20 mg.L-1干预48 h后细胞增殖最为明显,进一步选取Ast20 mg.L-1干预hADSCs 48 h,与对照组相比,两组细胞CD29、CD44、CD105的阳性率均为96%-99%;两组细胞成骨诱导与成脂诱导结果也无差异。结论 Ast可促进ADSCs增殖,以20 mg.L-1、孵育48 h为最适干预条件,且该条件干预后并不影响hADSCs细胞形态,表面标志物水平及多向分化能力。

关键词：黄芪甲苷脂肪源性干细胞细胞增殖细胞表面标志成骨分化成脂分化

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人骨髓间充质干细胞生物学特性及腺病毒介导的GFP标记

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西安交通大学学报（医学版） 2012年第5期33卷 587-592页

作者：谭云鹤种铁杨平郭子宽甘为民陈长虹翟宇强石硕文彭秀君西安交通大学医学院第二附属医院泌尿外科陕西西安710004 西安市中心医院泌尿外科陕西西安710003 军事医学科学院放射与辐射医学研究所实验血液学研究室北京100850

目的建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分离、培养以及鉴定的方法,同时应用腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)检测细胞转染的效率。方法应用人淋巴细胞分离液(Ficoll)对hMSCs进行分离,经贴壁纯化后用MTT法检测增殖能力;并对其成骨、成脂、... 详细信息

目的建立人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分离、培养以及鉴定的方法,同时应用腺病毒介导的绿色荧光蛋白(Ad-GFP)检测细胞转染的效率。方法应用人淋巴细胞分离液(Ficoll)对hMSCs进行分离,经贴壁纯化后用MTT法检测增殖能力;并对其成骨、成脂、成平滑肌诱导分别进行碱性磷酸酶(ALP)、油红O染色及α-SMA免疫细胞化学检测;采用流式细胞仪(FCM)检测细胞表面标志的表达。用Ad-GFP转染,并应用荧光显微镜与FCM检测转染效率。结果 hMSCs镜下为成纤维样形态,约在第4天进入对数增长期;分化诱导后ALP染色、Von kossa银染、油红O染色以及α-SMA均为阳性;FCM检测CD14、CD31、CD45表达阴性,CD44、CD73、CD106及PDGFRβ表达阳性;当感染复数MOI=200,细胞培养48h时感染效率较高,FCM检测显示为99.81%。结论经过对增殖、分化能力以及表面标志的分析,证明用Ficoll可以分离得到较纯的hMSCs,Ad-GFP可以很好地感染细胞,为组织工程种子细胞的体内示踪提供了途径。

关键词：间充质干细胞分化细胞表面标志 Ad-GFP 细胞转染人淋巴细胞分离液(Ficoll)

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CD54^+和CD54^-脂肪干细胞的成脂分化能力

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中国组织工程研究 2017年第17期21卷 2638-2643页

作者：李德全梁至洁韦金儒黄海黄敏红池刚毅黎洪棉南昌市第三医院乳腺肿瘤一科江西省南昌市330009 广西医科大学第五附属医院肝胆腺体外科广西壮族自治区南宁市530022 广西医科大学第五附属医院心血管内科广西壮族自治区南宁市530022 广西医科大学第五附属医院整形美容外科广西壮族自治区南宁市530022

背景:研究表明,脂肪干细胞具有多向分化潜能,但是其向成熟脂肪细胞分化的效率仍较低,只有30%-40%。因此,如何提高脂肪干细胞的成脂分化能力是软组织再生研究过程中需要解决的关键科学问题。目的:观察兔脂肪干细胞表面标志物CD54的表达... 详细信息

背景:研究表明,脂肪干细胞具有多向分化潜能,但是其向成熟脂肪细胞分化的效率仍较低,只有30%-40%。因此,如何提高脂肪干细胞的成脂分化能力是软组织再生研究过程中需要解决的关键科学问题。目的:观察兔脂肪干细胞表面标志物CD54的表达与其成脂分化能力的关系,并探讨同一诱导剂对CD54^+和CD54^-兔脂肪干细胞成脂分化的影响。方法:取新西兰大白兔(8-12周龄)腹股沟皮下脂肪垫3 mL,采用贴壁法体外分离培养兔脂肪干细胞并行多向分化诱导及细胞表型标志物鉴定。取第3代细胞经免疫磁珠分选得到CD54^+兔脂肪干细胞和CD54^-兔脂肪干细胞,经成脂诱导14d后行油红O染色,检测成熟脂肪细胞的密度及细胞内脂滴含量。RT-PCR检测脂肪干细胞成脂分化相关基因表达水平。结果与结论:(1)兔脂肪干细胞具有间充质干细胞特性,可向成熟脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞表型分化,细胞表面标志物CD29、CD44、CD49d、CD54、CD73、CD90和CD105表达均为阳性,而CD31、CD34和CD45表达阴性;(2)成脂诱导第14天,CD54^+兔脂肪干细胞分化为成熟脂肪细胞的密度和细胞内脂滴含量均高于CD54^-兔脂肪干细胞,差异均有显著性意义(P<0.05);(3)成脂诱导14 d后,CD54^+兔脂肪干细胞成脂相关基因ADD1、C/EBPα、PPARγ的mRNA表达水平明显高于CD54^-兔脂肪干细胞,差异均有显著性意义(P<0.05);(4)结果表明,CD54^+脂肪干细胞具有高成脂分化能力。

关键词：干细胞脂肪干细胞细胞表面标志成脂分化细胞诱导组织工程国家自然科学基金

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人肺癌NCI-H446细胞生成肿瘤干细胞球

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解剖学报 2012年第4期43卷 500-505页

作者：乐涵波刘晓光曾芳舟山医院胸心外科中国科学院北京基因组研究所免疫基因组学联合实验室细胞分子生物学实验室浙江舟山316004

目的探索人肺癌NCI-H446细胞系干细胞球体的培养,并鉴定其生物学特性。方法用无血清培养基培养人肺癌NCI-H446细胞得到肿瘤细胞球。将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基培养促使其分化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测肿瘤球和普通NCI-H... 详细信息

目的探索人肺癌NCI-H446细胞系干细胞球体的培养,并鉴定其生物学特性。方法用无血清培养基培养人肺癌NCI-H446细胞得到肿瘤细胞球。将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基培养促使其分化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测肿瘤球和普通NCI-H446细胞的增殖能力,并将肿瘤球和普通NCI-H446细胞分别植入裸鼠皮下,观察肿瘤形成;Transwell侵袭实验检测肿瘤球和普通NCI-H446细胞的侵袭能力的不同;流式细胞术检测CD133、CD44在肿瘤球和普通NCI-H446细胞中的表达,并筛选细胞表面标志物。结果在无血清培养基中,人肺癌NCI-H446细胞可以形成少量的肿瘤细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,在含血清环境中能够诱导肿瘤球分化而贴壁生长;在动物实验中,接种5×105个细胞时,肿瘤球细胞较普通NCI-H446细胞显示更强的致瘤能力;在侵袭实验中,肿瘤球细胞的侵袭能力高于普通NCI-H446细胞;干细胞标志物CD133及CD44在肿瘤球细胞的表达较普通NCI-H446细胞明显增高。结论人肺癌细胞NCI-H446中存在癌干细胞,且可以通过无血清培养、分离和富集。

关键词：肺癌 NCI-H446细胞系无血清培养癌干细胞细胞表面标志流式细胞术人

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