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目的: 探讨TNF-α导致细胞骨架重排和当归的逆转作用. 方法: 常规培养人脐静脉内皮细胞, 分成下列各组: ①对照组: 常规培养; ②当归组: 培养液中加入当归注射液20 mg/ml; ③ TNF-α组: 培养液中加入TNF-α 100 U/ml; ④ TNF-α+当归组: 培养液中同时加入TNF-α 100 U/ml和当归20 mg/ml. 4 h后用Phalloidine rhodamine标记骨架蛋白F-actin, 用Olympus LX70荧光显微镜(CellScan, Scanalytics-Bionis)检测细胞骨架分布. 结果: 荧光显微镜下, 在内皮细胞的每一个横切面, 对照组细胞骨架均排列在细胞周围, Factin分布均匀, 粗细匀称; 当归注射液不影响正常内皮细胞的细胞骨架排列, 但可见部分actin肌丝增粗; TNF-α作用后整个细胞腔面细胞骨架排列紊乱, 在细胞中部横切面, 增粗的actin肌丝横跨整个细胞; 将当归注射液与TNF-α共同作用于内皮细胞, 可见细胞骨架排列在细胞周围, 但与正常细胞状态略有不同. 结论: TNF-α可以导致细胞骨架重排, 这种重排与剪切力导致的重排相似. 当归能逆转TNF-α导致的细胞骨架重排, 使F-actin排列在细胞周围. 这种作用的意义及信号转号途径目前还不完全清楚. 本室的其他实际显示, 当归注射液可以降低氧化低密度脂蛋白导致的ICAM-1表达增加, 逆转TNF-α导致的ICAM-1重排. 当归抗动脉粥样硬化可能与这些作用有关.

关键词：细胞骨架重排当归注射液培养人脐静脉内皮细胞荧光显微镜排列紊乱培养液氧化低密度脂蛋白常规培养抗动脉粥样硬化横切面对照组作用的意义信号转号显微镜下逆转作用骨架蛋白分布均匀细胞腔同作用剪切力

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斑马鱼原肠胚细胞运动

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遗传 2013年第4期35卷 441-448页

作者：张霆莫显明四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞生物学研究室成都610041

在斑马鱼原肠胚期,细胞通过重排形成3个胚层:内胚层,中胚层和外胚层。细胞重排的过程包含了3种极为保守的运动形式,即外包运动、内卷运动和集中延伸运动。其中,脊索前板祖细胞的前部延伸对于中内胚层祖细胞的定位以及最终分化形成胚层... 详细信息

在斑马鱼原肠胚期,细胞通过重排形成3个胚层:内胚层,中胚层和外胚层。细胞重排的过程包含了3种极为保守的运动形式,即外包运动、内卷运动和集中延伸运动。其中,脊索前板祖细胞的前部延伸对于中内胚层祖细胞的定位以及最终分化形成胚层尤为重要。脊索前板祖细胞也是目前研究体内细胞运动机制的良好模型。原肠胚期细胞运动受诸多信号通路调控,如Wnt/PCP信号通路,但细胞行为的分子机制尚不明确。目前细胞粘附和细胞骨架重排是研究斑马鱼原肠胚期细胞运动的热点之一。此外,胚胎外组织(卵黄合胞体层)对于原肠胚细胞运动的影响也受到了更多的关注。文章主要探讨了在斑马鱼原肠胚期细胞运动过程中控制细胞行为的关键因素以及一些尚未理清的问题,并为将来在细胞水平上构建完整的原肠运动调控分子的图谱提供参考。

关键词： 3胚层外包运动内卷运动集中延伸运动前部延伸迁移细胞粘附细胞骨架重排

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CD54和LFA-1的相互作用在6A8α-甘露糖苷酶表达抑制的JurkatT细胞的黏附性增强中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第6期25卷 433-437页

作者：曲莉刘荣刘音朱立平中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所免疫学系北京100005

目的研究CD54和LFA-1的相互作用在6A8α甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS)的黏附性增强中的作用。方法用细胞凝集试验确证AS细胞间黏附的增强,用细胞与细胞间黏附分子1人IgG的Fc片段(ICAM1Fc)的黏附试验和阻断性抗CD11a抗体的阻断试... 详细信息

目的研究CD54和LFA-1的相互作用在6A8α甘露糖苷酶表达抑制的Jurkat细胞(AS)的黏附性增强中的作用。方法用细胞凝集试验确证AS细胞间黏附的增强,用细胞与细胞间黏附分子1人IgG的Fc片段(ICAM1Fc)的黏附试验和阻断性抗CD11a抗体的阻断试验研究CD54LFA1的作用,用单克隆抗体MEM148检测AS细胞LFA-1亲和力的变化,用单克隆抗体NKIL16检测AS细胞LFA1亲合力的变化,用鬼笔环肽染色细胞骨架,用JurkatRaji细胞间的作用作模型研究6A8α甘露糖苷酶表达抑制对T和B细胞间黏附的影响,用ConA结合试验检测细胞中蛋白质N糖基化的变化。结果(1)AS细胞间的黏附性增强主要与CD54及CD11a表达的增强相关,也与LFA-1亲和力的增高相关;(2)AS细胞的细胞骨架发生重排;(3)AS细胞与Raji细胞间的黏附也增强;(4)ConA与AS细胞的结合增强。结论CD54和LFA-1的相互作用在ASJurkatT细胞的黏附性增强中起重要作用。细胞骨架重排也可能起作用。AS细胞的蛋白质发生了N-糖基化修饰。

关键词： LFA-1 CD54 相互作用表达抑制黏附性 T细胞强中 6A8α-甘露糖苷酶 Jurkat细胞细胞间黏附分子 CD11a 单克隆抗体 N-糖基化细胞凝集试验细胞骨架重排试验研究 Fc片段人IgG 结合试验 ConA Raji 亲和力蛋白质 AS 阻断性

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肺炎链球菌触发肺Ⅱ型上皮细胞微丝肌动蛋白重排的钙信号转导机制

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第一军医大学学报 2004年第2期24卷 168-171,176页

作者：徐邦牢尹一兵广州市第一人民医院检验科广东广州510180 重庆医科大学检验系重庆400016

目的通过体外实验研究肺炎链球菌(***)是否可通过肺型上皮细胞(A549)钙信号转导途径触发微丝肌动蛋白(F-actin)细胞骨架重排,进而导致***对A549细胞的侵袭。方法采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察***作用A549细胞前后F-ac... 详细信息

目的通过体外实验研究肺炎链球菌(***)是否可通过肺型上皮细胞(A549)钙信号转导途径触发微丝肌动蛋白(F-actin)细胞骨架重排,进而导致***对A549细胞的侵袭。方法采用F-actin特异性FITC-phalloidin荧光染料,观察***作用A549细胞前后F-actin细胞骨架重排情况,以重排百分率表示;用F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D预处理A549细胞,观察***对A549细胞的侵袭;使用Ca2+信号转导抑制剂dantrolene预处理A549细胞,观察其与F-actin细胞骨架重排百分率间是否存在剂量依赖关系;用Fura-2/AM荧光探针负载A549细胞后测定***粘附A549细胞30、60、90 min的胞内[Ca2+]i。结果***作用A549细胞后,经FITC-phalloidin荧光染色,F-actin细胞骨架呈黄绿色块状聚集;F-actin细胞骨架重排抑制剂细胞松弛素D可明显降低***对A549细胞的侵袭,在其浓度为0.25 μg/ml时,未得到可测的细菌数;Ca2+信号转导抑制剂可部分抑制A549细胞F-actin细胞骨架重排,且与F-actin细胞骨架重排百分率间存在量效关系;***粘附A549细胞30、60、90 min后的胞内[Ca2+]i高于对照[(187.4±17.3 nmol/L)],并达到饱和,分别为(487.5±38.1)、(548.2±35.6)和(557.2±47.5)nmol/L。结论***可通过Ca2+细胞信号转导途径触发A549细胞F-actin细胞骨架重排,进?

关键词：肺炎链球菌肺Ⅱ型上皮细胞微丝肌动蛋白钙信号转导细胞骨架重排

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CXCL1通过促进蛋白激酶B磷酸化导致bEND.3小鼠脑微血管内皮细胞骨架收缩和通透性增加

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第2期39卷 117-123页

作者：韩雨红董逸舒李雪蒙熊倩倩陈晓芬李柏青汪洪涛宋传旺吴凤娇慢性疾病免疫学基础与临床安徽省重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院检验医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的探讨脓毒症脑病炎症中CXC趋化因子配体1(CXCL1)及其受体CXC趋化因子受体2(CXCR2)对脑内皮细胞骨架重排和通透性的影响及其相关机制。方法野生型小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立脓毒症脑病模型,ELISA检测全脑组织肿瘤坏死因子... 详细信息

目的探讨脓毒症脑病炎症中CXC趋化因子配体1(CXCL1)及其受体CXC趋化因子受体2(CXCR2)对脑内皮细胞骨架重排和通透性的影响及其相关机制。方法野生型小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立脓毒症脑病模型,ELISA检测全脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和CXCL1含量。使用500 ng/mL LPS和200 ng/mL TNF-α刺激bEND.3脑微血管内皮细胞后,Western blot法检测细胞CXCR2的表达。以150 ng/mL CXCL1刺激bEND.3细胞,免疫荧光染色观察脑内皮细胞骨架纤维型肌动蛋白(F-actin)重排的变化。脑内皮细胞通透性实验中,将bEND.3细胞随机分为PBS对照组、CXCL1组、CXCL1联合选择性CXCR2拮抗剂SB225002组,Transwell^(TM)小室检测各组通透性变化情况。CXCL1刺激bEND.3细胞后,Western blot法检测细胞中蛋白激酶B(AKT)和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达。结果腹腔注射LPS导致小鼠全脑组织中TNF-α和CXCL1水平显著升高;LPS和TNF-α刺激可增高bEND.3细胞CXCR2蛋白的表达。CXCL1刺激bEND.3细胞使其细胞骨架收缩,细胞间隙形成增加,且细胞渗透性增加,而CXCR2拮抗剂SB225002预处理可显著抑制CXCL1引起的脑内皮细胞肌动蛋白应力纤维和细胞间隙的形成、以及通透性的增高,同时CXCL1(150 ng/mL)刺激使得脑内皮细胞AKT的磷酸化水平明显升高。结论CXCL1通过AKT磷酸化激活引起脑内皮细胞骨架收缩、细胞通透性增加,CXCR2拮抗剂SB225002可有效抑制CXCL1诱导的细胞骨架收缩和通透性升高。

关键词：脂多糖 bEND.3脑微血管内皮细胞 CXC趋化因子配体1(CXCL1) CXC趋化因子受体2(CXCR2) 脑内皮细胞细胞骨架重排

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瘦素对慢性肾脏病患者内皮功能紊乱的影响及分子机制研究

瘦素对慢性肾脏病患者内皮功能紊乱的影响及分子机制研究

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作者：丁南南山东大学

学位级别：博士

背景/目的慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是全球危害人类健康的公共卫生问题,具有高发病率、高致残率、高医疗费用、低知晓率的流行病学特点。心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是慢性肾脏病(CKD)最主要的并发症,也是CK... 详细信息

背景/目的慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是全球危害人类健康的公共卫生问题,具有高发病率、高致残率、高医疗费用、低知晓率的流行病学特点。心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是慢性肾脏病(CKD)最主要的并发症,也是CKD患者最主要的死亡原因,其死亡率约占慢性肾脏病患者总死亡率的44%～51%。心血管疾病的传统危险因素不足以解释CKD患者心血管事件高发的原因,因此,其他非传统危险因素如内皮细胞功能紊乱引起了许多学者的重视。内皮细胞功能紊乱是心血管事件的起始因素,且临床及实验研究均证实,血管内皮细胞功能的改变与慢性肾脏病的发生和发展密切相关。因此,寻找CKD患者血管内皮功能紊乱的影响因素并深入研究内皮细胞功能紊乱的发生机制、早期准确地对CKD患者血管内皮功能进行检测评估,对CKD患者心血管疾病的诊断、治疗及预后具有重要意义。瘦素是一种脂肪细胞因子。以往研究认为,瘦素主要在调节机体摄食和能量代谢中发挥重要作用。随着研究的深入,瘦素在神经内分泌、血管新生、生殖发育、免疫调节和创伤修复等方面的作用也逐渐被人们认识。近年来大量临床研究显示,血清瘦素水平与心血管疾病的发生密切相关,而且体外实验也提示瘦素可以诱导高血压及蛋白尿的发生,并可促进动脉粥样硬化的发生发展。肾脏是瘦素清除的主要器官,已有研究表明,瘦素在慢性肾脏病患者血清中的浓度升高。然而,关于瘦素与慢性肾脏病的关系,特别是瘦素对慢性肾脏病患者内皮功能紊乱的影响的相关研究甚少。因此,本研究旨在评估慢性肾脏病患者的血清瘦素水平以及血管内皮的功能状态,分析CKD患者血清瘦素水平与内皮功能障碍的关系,并通过体外实验验证瘦素对内皮细胞功能改变的影响,探讨其作用的可能的分子学机制,从而为理解慢性肾脏病患者心血管事件的高发病率、改善CKD预后提供新的思路,并为进一步研究有效干预和治疗CKD患者内皮功能障碍提供新的理论依据。研究方法本研究分为临床研究和体外细胞实验两部分,分别完成慢性肾脏病患者血清瘦素水平与内皮功能紊乱的相关性分析及瘦素诱导内皮细胞功能紊乱的分子机制研究。1临床研究本研究共纳入140例临床病情稳定的成人非糖尿病性CKD病人及140例性别、年龄匹配的健康成年人,收集所有研究对象的性别、年龄、身高、体重、血压等基本资料及血脂、血糖、肝肾功能、超敏C反应蛋白等实验室指标,并采集空腹血标本,通过ELISA检测研究对象血清瘦素含量以及内皮功能紊乱的血清学指标sICAM-1和sVCAM-1的浓度。采用无创超声测定右肱动脉血流介导的血管舒张功能(flow-mediated dilation,FMD)进一步评估46例病人及30例健康人的血管内皮功能,该指标用肱动脉直径的舒张百分比表示。采用SPSS软件对临床资料进行统计学分析,比较两组间同一指标的差异,并采用Spearman相关来分析CKD病人两个变量之间的相关性,借此探讨慢性肾脏病患者血清瘦素水平变化及其与内皮功能状态的关系。双侧P值<0.05定义为有显著统计学差异。2体外实验2.1瘦素对HUVECs黏附分子合成的影响:体外培养脐静脉内皮细胞,使用瘦素(100 ng/ml)刺激HUVECs不同时间,收集HUVECs上清,离心后采用ELISA检测上清液中可溶性ICAM-1、VCAM-1的水平,并以此确定后续实验中瘦素对HUVECs的刺激时间;瘦素(100 ng/ml)刺激HUVECs 24小时后,分别采用western blot和实时荧光定量PCR检测ICAM-1、VCAM-1在蛋白质水平及mRNA水平的表达。2.2瘦素对内皮细胞迁移的影响:同时采用Transwell(聚碳酯膜,滤膜孔径:8.0 μm)迁移实验及划痕实验检测瘦素对HUVECs活动力的影响。2.3瘦素对内皮细胞单层通透性的影响:Transwell上室(聚酯膜,滤膜孔径:0.4 μm)培养HUVECs形成内皮细胞单层,通过检测内皮单层对FITC-dextan的通透性,探索瘦素对内皮细胞单层通透性的影响。2.4瘦素对内皮细胞骨架重排的影响:免疫荧光染色后采用激光共聚焦显微镜观察瘦素刺激下脐静脉内皮细胞细胞骨架蛋白F-actin和vinculin的变化。2.5瘦素诱导内皮功能紊乱的分子机制:western blot检测瘦素处理后AKT/GSK3β通路的活性变化及其对β-catenin信号的影响,包括AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSK3β蛋白的表达情况;β-catenin总蛋白和核蛋白的表达变化。为验证AKT及β-catenin信号通路在瘦素诱导的内皮细胞功能紊乱中的作用,我们进一步构建了 AKTshRNA质粒及β-cateninshRNA慢病毒,并分别转染细胞,检测AKT或β-catenin基因敲除后瘦素刺激下黏附分子的

关键词：慢性肾脏病内皮功能紊乱瘦素细胞骨架重排 AKT信号通路

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MiR-1a-3p/Twinfilin 1在轮胎磨损颗粒吸入暴露致肺损伤中的作用机制研究

MiR-1a-3p/Twinfilin 1在轮胎磨损颗粒吸入暴露致肺损伤中的作用...

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作者：石腾青岛大学

学位级别：硕士

背景随着机动车保有量的持续增加以及新能源汽车逐步取代化石燃料动力汽车,交通来源的颗粒物组分也发生着巨大变化。轮胎磨损颗粒(Tire wear particles,TWP)作为交通来源颗粒物之一,其在环境中的含量呈现逐年上升的趋势。然而目前对轮... 详细信息

背景随着机动车保有量的持续增加以及新能源汽车逐步取代化石燃料动力汽车,交通来源的颗粒物组分也发生着巨大变化。轮胎磨损颗粒(Tire wear particles,TWP)作为交通来源颗粒物之一,其在环境中的含量呈现逐年上升的趋势。然而目前对轮胎磨损颗粒的研究主要集中在海洋、淡水等水体中,大气作为轮胎磨损颗粒的重要传播途径,其对健康的影响尚缺乏明确的证据。目的当前,轮胎磨损颗粒在大气环境中的影响可能已经包含在总颗粒物(PM,PM)污染所致的发病率和死亡率中。本研究旨在对TWP吸入暴露诱导的呼吸毒性,以及表观遗传机制在这一过程中发挥的作用进行初步探讨。方法1.将轮胎清洗干净经锉刀研磨、液氮速冻、研磨仪研磨、超声分散、滤网过滤制成实验用TWP,测定颗粒的物理和化学性质,用于后续研究。40只7-8周龄C57BL/6小鼠,雌雄各半,随机分为对照组和低(0.125 mg/kg)、中(0.5 mg/kg)、高(1 mg/kg)暴露组;使用手持式液体气溶胶肺输送装置将TWP产生的气溶胶均匀地分散到小鼠的肺部,对照组使用同样方式暴露生理盐水。单次暴露后第28天称量末次体重后用戊巴比妥钠麻醉小鼠,测量肺功能、支气管肺泡灌洗液中细胞计数等相关指标;小鼠解剖后收集脏器、称重并计算脏器系数,肺脏进行组织病理学检查。2.肺组织研磨,Trizol法提取总RNA,进行miRNA测序并预测下游靶向m RNA,双荧光素酶报告基因验证miRNA与m RNA直接结合位点。实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR)检测相关基因表达水平。在细胞层面,将miRNA mimic/inhibitor转染细胞后用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹分别于RNA、蛋白水平上探讨miRNA对其靶基因Twinfilin 1的调控作用。3.免疫荧光(Immunofluorescence,IF)染色检测小鼠肺组织中E-cadherin的表达以及TWP处理后人支气管上皮细胞(BEAS-2B)中Twinfilin 1的表达;细胞划痕实验检测TWP处理后BEAS-2B细胞迁移功能变化;鬼笔环肽(Phalloidin)染色观察TWP处理后细胞骨架形态变化。结果1.干粉状态下轮胎磨损颗粒呈长条和絮状,边缘较锋利,分散在溶液中的水合粒径集中分布在100 nm处,Zeta电位为-18.41 mv,悬浮在空气中可能团聚成更大尺寸的颗粒物。***染毒小鼠PEF、FVC、FEV均明显下调而FEV/FVC未有明显变化;暴露组小鼠肺组织出现明显炎性细胞浸润、肺实质区域增大、胶原分泌异常累积。这提示TWP暴露小鼠出现限制性通气功能障碍、肺损伤以及纤维化样的病理改变。***测序结果提示miR-1a-3p的下调参与了TWP诱导的肺损伤。***、miRDB、Starbase数据库预测发现Twinfilin 1在miR-1a-3p的靶向m RNA中表达丰度较高,且二者间呈显著负相关。5.双荧光素酶报告基因实验证实,细胞骨架调节基因Twinfilin 1与miR-1a-3p间存在靶向结合位点。通过细胞转染、免疫荧光、细胞划痕实验进一步证实miR-1a-3p/Twinfilin 1参与的细胞骨架重排在TWP暴露引起的肺损伤中起到重要的调节作用。结论轮胎磨损颗粒吸入暴露可导致小鼠出现限制性通气功能障碍和纤维化样病理改变。在这一过程中,miR-1a-3p通过靶向细胞骨架调节蛋白Twinfilin 1来抑制F-肌动蛋白的形成,进而引起肺纤维化样损伤。我们的研究描述了表观遗传学参与轮胎磨损颗粒诱导的肺损伤调控的可能机制,该发现可能会使我们更好地理解轮胎磨损颗粒吸入毒性的关键机制。

关键词：轮胎磨损颗粒吸入暴露肺纤维化表观遗传细胞骨架重排

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