检索结果-内蒙古大学图书馆

目的研究基于探针熔解曲线分析的多位点熔解分型技术（McMLMT）的霍乱弧菌快速分型方法。方法选取厦门市CDC于1998-2010年霍乱病原监测中从各种水体和水产品等监测样品中分离的霍乱弧菌分离株（ctx-）作为试验菌株，共108株。筛选霍乱弧菌7个管家基因，针对每个基因设计特异引物和覆盖多态性位点的4条荧光探针，建立各基因的双管双色PCR熔解曲线分析（PCR—MCA）检测体系，检测108株试验菌株，获取28个熔点值（Tm值），转化为等位基因编码并确定型别。同时对7个管家基因的多态性区域序列参照多位点序列分型方法（MLST法）进行分型。两种方法的分型数据以BioNumerics软件进行聚类分析比较，并与其中部分菌株PFGE分型数据比较，评估McMLMT的分辨能力和可靠性。结果构建并优化了霍乱弧菌McMLMT分型体系。应用McMLMT分型体系检测霍乱弧菌，108株霍乱弧菌的28个Tm值按管家基因分组并依顺序编码后，可分为18型（D=0．7233）；同时参照MLST方法直接以7个基因的多态性区域序列进行分型，分型结果与McMLMT一致；其中46株PFGE型别不同的菌株，McMLMT法可分为13个熔解类型（D=0．6145），PFGE法可分为A～K的11群（相似度为85％，D=0．8589）。结论采用McMLMT分型方法可以对批量菌株进行快速分型，分辨力与MLST法相同，与PFGE法在相似度为85％分群的分辨力相似。

关键词：弧菌,霍乱细菌分型技术聚类分析

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肠炎沙门菌可变数目串联重复序列位点用于多位点可变数目串联重复序列分型分析的评价

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中华预防医学杂志 2011年第6期45卷 516-521页

作者：张力韩辉周海健崔志刚闫梅英章丽娟阚飙中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206 中国检验检疫科学研究院卫检所

目的评价不同肠炎沙门菌可变数目串联重复序列（VNTR）位点用于多位点可变数目串联重复序列（MLVA）分型的可行性.方法选取已报道使用的肠炎沙门菌11个VNTR位点,对中国不同时间和地区分离的16株菌进行初步评价,选取具有单一扩增条带... 详细信息

目的评价不同肠炎沙门菌可变数目串联重复序列（VNTR）位点用于多位点可变数目串联重复序列（MLVA）分型的可行性.方法选取已报道使用的肠炎沙门菌11个VNTR位点,对中国不同时间和地区分离的16株菌进行初步评价,选取具有单一扩增条带的位点进行104株肠炎沙门茵的MLVA分型分析.对这些菌株同时进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析,比较MLVA分型方法与PFGE分型方法对菌株分型能力的强弱.结果初筛得到7个VNTR位点用于扩大菌株的分析,这些位点将104株菌分为16个MLVA型别,D值为0.7222,这些菌株同时被分为22个PFGE型别,D值为0.7974.对两种方法各自所分的最大组包含的菌株进行比较,发现PFGE具有更强的分辨能力;从频数分布看,PFGE方法分型结果比较分散,MLVA分型较为集中.结论用于国际肠炎沙门菌分型具有扩增多态性的VNTR位点在国内分离株中并不都具有多态性结果,在MLVA方法学建立中应选择更多的VNTR位点进行广泛的筛选才有利于国际实验室间的方法的统一.

关键词：细菌分型技术串联重复序列电泳,凝胶,脉冲场沙门菌,肠炎

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不同串联重复序列位点组合用于中国结核分枝杆菌基因分型的能力比较分析

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中华预防医学杂志 2009年第3期43卷 215-222页

作者：李兆娜刘梅吕冰赵秀芹刘志广焦伟伟孙琳贾文祥申阿东万康林首都医科大学附属北京儿童医院儿研所 100045 四川大学基础医学院与法学院传染病预防控制国家重点实验室中国疾病预防控制中心传染病预防控制所结核室

目的初步评价不同串联重复序列（VNTR）位点在中国8省市结核分枝杆菌基因分型中的应用，寻找适合中国地区结核分枝杆菌基因分型的位点组合。方法从中国8个省（市、自治区）2800余株结核分枝杆菌临床分离菌株中以简单数字表法随机抽取14... 详细信息

目的初步评价不同串联重复序列（VNTR）位点在中国8省市结核分枝杆菌基因分型中的应用，寻找适合中国地区结核分枝杆菌基因分型的位点组合。方法从中国8个省（市、自治区）2800余株结核分枝杆菌临床分离菌株中以简单数字表法随机抽取140株，采用多位点数目可变串联重复序列分析方法（MLVA）对27个数目可变VNTR位点进行基因多态性检测，采用BioNumerics数据库软件进行单位点和不同位点组合的分辨率（Hunter-Gaston指数，HGI）分析，并比较分析其对140株菌的基因分型鉴定能力。同时采用间隔区寡核苷酸分型（Spoligotyping）将140株菌分为北京家族和非北京家族，评价上述不同VNTR位点组合在北京家族和非北京家族中的分型能力。结果140株菌主要可分为2个基因群，即北京家族112株，占80％；非北京家族28株，占20％。Spoligotyping分型对140株结核分枝杆菌的HGI为0．4589。MLVA分析结果显示不同位点在不同菌株群存在明显的多态性，不同位点的HGI具有较大差异（0～0．809），对全部菌株、北京家族菌株、非北京家族菌株的HGI达到0．5以上的VNTR位点数分别为8、7和14个。27个VNTR位点进行不同的位点组合：优化筛选的8位点组合、国际推荐的12个、15个和24个位点组合。4个组合的HGI分别为0．9991、0．9882、0．9980和0．9986；在北京家族菌株中，上述组合的HGI依次为0．9987、0．9318、0．9969和0．9975；在非北京家族菌株中分别为1、0．9894、1和1。结论不同的VNTR位点和不同VNTR位点组合在中国8省市结核分枝杆菌中的HGI均存在明显差异；本研究优化的8个位点组合MLVA分型方法在中国结核分枝杆菌流行病学研究可能具有良好的应用前景。

关键词：分枝杆菌,结核重复序列核酸细菌分型技术序列标记位点

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沙门菌毒力岛1缺失山夫登堡沙门菌的特性

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中华预防医学杂志 2011年第10期45卷 899-903页

作者：李迎慧许学斌扈庆华石晓路林一曼邱亚群深圳市疾病预防控制中心微生物检验科 518055 上海市疾病预防控制中心微生物室

目的研究沙门菌毒力岛1（SPI-1）缺失山夫登堡沙门菌的特性。方法于2006年从上海10例腹泻患者粪便中分离得到10株山夫登堡沙门菌，运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）、PCR、毒力基因测序及细胞侵袭试验对其进行分子分型、侵袭基因及细胞侵袭... 详细信息

目的研究沙门菌毒力岛1（SPI-1）缺失山夫登堡沙门菌的特性。方法于2006年从上海10例腹泻患者粪便中分离得到10株山夫登堡沙门菌，运用脉冲场凝胶电泳（PFGE）、PCR、毒力基因测序及细胞侵袭试验对其进行分子分型、侵袭基因及细胞侵袭能力检测，并与2002年深圳分离株（C02013）进行比较。结果10株山夫登堡沙门菌分离株编号依次为S09007～S09012、S09014～S09017，分为3种PFGE条带型，与深圳株存在明显差异，为不同来源。PCR扩增结果显示，10株菌株SPI．1上的侵袭蛋白基因（invA）、效应蛋白基因（sipA）及基因段．fhlA—hilA、hilA—spaP、spaP—invH扩增阴性。测序结果显示，10株分离株均为SPI-1基因大部分缺失菌株，orgA至invH基因缺失，orga基因部分缺失。与2002年深圳菌株相比，sprB—orgC基因存在。2002年深圳菌株和2006年上海菌株在基因缺失位置均多出1段约1000bp的基因片段，为1个简单的插入序列。10株菌（S09007～S09012、S09014～S09017）对Hela细胞的侵袭率分别为（0．0053±0．0014）％、（0．0046±0．0006）％、（0．0047±0．0003）％、（0．0064±0．0012）％、（0．0065±0．0011）％、（0．0070±0．0020）％、（0．0115±0．0030）％、（0．0099±0．0039）％、（0．0180±0．0035）％和（0．0031±0．0012）％，低于invA阳性对照株STM1344的（5．0800±0．6333）％；低于或接近invA基因缺失人工突变株STMinvA-的（0．0193±0．0045）％。结论SPI-1基因不是山夫登堡沙门菌引起人体腹泻所必需的基因。

关键词：沙门菌属毒力细菌分型技术基因细菌

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2006-2008年深圳市食源性病例和外环境的副溶血性弧菌分离株分型特征比较

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微生物学报 2011年第4期51卷 518-523页

作者：段永翔鞠长燕刘李俞慕华温群文曾玲荣广东省深圳市南山区疾病预防控制中心深圳518054 四川大学公共卫生学院成都610041

【目的】比较深圳市食源性病例和外环境中分离的副溶血性弧菌在血清分布、毒力基因携带情况和分子分型方面的特征。【方法】血清凝集法检测菌株血清型,多重PCR检测毒力基因tdh和trh基因携带情况,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析基因分型特征... 详细信息

【目的】比较深圳市食源性病例和外环境中分离的副溶血性弧菌在血清分布、毒力基因携带情况和分子分型方面的特征。【方法】血清凝集法检测菌株血清型,多重PCR检测毒力基因tdh和trh基因携带情况,脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析基因分型特征。【结果】98株食源性病例分离株的主要血清型为O3:K6(40.8%)、O1:KUT(7.1%)、O4:K8(7.1%),35株环境分离株中未发现O3:K6。83.7%(82/98)的食源性病例分离株携带tdh基因、不携带trh基因,88.6%(31/35)的环境分离株不携带tdh基因和trh基因。PFGE显示,最主要的克隆群是P1,包括全部的O3:K6(29株),O4:K68(4株),O11:K36(3株),O1:K25(2株),都是食源性病例分离株,没有环境分离株。环境分离株中未见明显的克隆群。【结论】深圳市食源性病例中分离的副溶血性弧菌多数具有溶血性、携带tdh基因,不携带trh基因,基因分型显示具有优势菌群,主要血清群为O3:K6;环境分离株血清群散在分布,多数不具溶血性,不携带tdh和trh基因,基因分布成多态性,没有发现优势菌群。

关键词：副溶血性弧菌细菌分型技术食源性疾病

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严重烧伤患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体的建库及相关特征分析

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中华烧伤杂志 2016年第9期32卷 517-522页

作者：杨子晨邓柳洋龚雅利殷素鹏姜北姜广涛彭毅志胡福泉第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部微生物学教研室

目的建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。方法2014、2015年，重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年，广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不... 详细信息

目的建立烧伤ICU住院患者创面分离泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库并分析相关特征。方法2014、2015年，重庆市1家医院烧伤ICU住院患者创面分离出131株泛耐药鲍氏不动杆菌；2015年，广东省6家医院烧伤ICU住院患者创面分离出98株泛耐药鲍氏不动杆菌。收集前述229株菌进行如下实验。（1）分析重庆市、广东省来源菌株的多位点序列分型（MLST）。（2）采用污水共培养法选用上述菌株及两地来源污水分离噬菌体，记录分离噬菌体的数量及成功次数、失败次数。（3）根据2015年重庆市和广东省分型比例最大的菌株，选用其对应噬菌体与来源地所有菌株进行交叉感染，观察噬菌体与同型或不同型菌株交叉感染时的裂解情况并计算裂解比。（4）任取一型别噬菌体液等分为3份，通过倍比稀释法测定噬菌体的滴度。将每份噬菌体液再分为3小份，分别于－20 ℃、4 ℃、室温条件下采用LB液体培养基保存，保存1、2个月时检测噬菌体滴度，评价噬菌体的稳定性。对数据行Fisher确切概率法检验、χ^2检验、单因素方差分析。结果（1）2014年重庆市来源的菌株以序列型368（45%，31/69）为主，2015年重庆市来源的菌株以序列型75（26%，16/62）、序列型195（24%，15/62）为主。2015年广东省来源的菌株以序列型977（46%，45/98）为主。（2）以重庆市来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果（成功分离8次、分离失败1次、分离9株噬菌体）明显优于使用广东省来源的污水（成功分离1次、分离失败7次、分离1株噬菌体），以广东省来源的菌株为基础使用当地来源的污水分离噬菌体的效果（分离8次均成功，分离6株噬菌体）明显优于使用重庆市来源的污水（分离7次均失败，分离0株噬菌体），差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。以两地来源菌株为基础使用各自来源地的污水分离噬菌体的效果比较，差异无统计学意义（P〉0.05）。（3）序列型75、序列型977泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体对同型菌株的裂解比分别为13/16、8/9，均明显高于它们对不同型菌株的裂解比（分别为11/115、3/53, χ^2值分别为48.23、68.46，P值均小于0.001）。（4）与保存前比较，－20 ℃、4 ℃和室温条件保存1个月噬菌体滴度降低约1个数量级，保存2个月噬菌体滴度降低约2个数量级。保存1、2个月，3种储存条件噬菌体的滴度相近（F值分别为1.29、1.07，P值均大于0.05）。结论本研究成功建立229株泛耐药鲍氏不动杆菌噬菌体库。不同地域、不同时间的泛耐药鲍氏不动杆菌的MLST各异，使用与菌株同一地区来源的污水分离噬菌体的效果好，噬菌体的裂解能力与菌株MLST关系密切，可按照地域划分建立噬菌体库。此外，噬菌体在LB液体培养基中稳定性良好且对储存条件无特殊要求。

关键词：烧伤重症监护病房鲍氏不动杆菌细菌噬菌体细菌分型技术泛耐药

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中国七城市儿童耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染分离株分子学特征的研究

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中华儿科杂志 2012年第1期50卷 38-44页

作者：刘颖超耿文静吴德静李向梅王传清陆权邓秋莲郑跃杰刘岚李昌崇尚云晓赵长安杨永弘沈叙庄首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所儿科学国家重点学科省部共建儿科重大疾病研究重点实验室100045 复旦大学附属儿科医院新生儿科上海交通大学附属儿童医院呼吸科广州市儿童医院检验科深圳市儿童医院呼吸科重庆医科大学附属儿童医院检验科温州医学院附属第二医院育英儿童医院中国医科大学附属盛京医院小儿内科广州妇幼保健院儿科

目的探讨我国7个城市儿童耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）感染分离株的分子特征。方法收集2005至2009年全国7个城市（北京、上海、深圳、广州、温州、沈阳、重庆）9所三级儿童医院分离的134株MRSA。采用PCR和测序对MRSA进行多位点... 详细信息

目的探讨我国7个城市儿童耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（MRSA）感染分离株的分子特征。方法收集2005至2009年全国7个城市（北京、上海、深圳、广州、温州、沈阳、重庆）9所三级儿童医院分离的134株MRSA。采用PCR和测序对MRSA进行多位点序列分型（MLST）和spa分型，采用多重PCR进行SCCmec分型，同时检测pvl基因。结果MRSA大多数来源于肺炎和皮肤软组织感染分离株，占82．1％；共检测到16个MLST型，最主要的sT型是ST59（44．8％），其次是ST239（16．4％）；SCCmec分型共有Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和V型4型，其中Ⅳ型是最常见的SCCmec型（50．0％），其次是V型（23．9％）和Ⅲ型（23．9％），Ⅳ型中最常见的亚型是Ⅳa（77．6％）；检测到26种spa分型，最重要的spa型是t437（47．8％）；菌株的pvl携带率与菌株SCCmec分型有关，SCCmecⅣ和Ⅴ型菌株的pvl携带率大于Ⅱ和Ⅲ型（58．6％vs．14．3％，P〈0．05），且差异有统计学意义。不同疾病来源和不同地区来源的菌株，其流行克隆不同。结论2005至2009年我国儿童MRSA感染分离株的流行克隆为ST59-MRSA—IVa（t437）和***—m（t037），可能分别属于社区获得性MRSA与医院获得性MRSA。因此，开展对于MRSA临床流行病学监测和分子生物学的研究十分必要，能够为制定本地区防治措施提供循证依据，从而有效降低MRSA在社区和医院内的发病。

关键词：葡萄球菌金黄色甲氧西林抗药性细菌分型技术

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2010年广东省沙门菌监测及其病原学特征分析

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中华预防医学杂志 2012年第5期46卷 424-429页

作者：何冬梅柯碧霞邓小玲柯昌文梁兆铭谭海玲李柏生刘美真陈经雕广东省疾病预防控制中心病原微生物检验所广州510300

目的了解广东省腹泻患者沙门菌感染情况，分析沙门菌菌株的血清型分布、耐药性和分子特征。方法2010年对广东省广州、中山、东莞、珠海、茂名、阳江和江门等地的16家哨点医院的8405例腹泻患者进行了沙门菌监测，收集到8405份粪便标本，... 详细信息

目的了解广东省腹泻患者沙门菌感染情况，分析沙门菌菌株的血清型分布、耐药性和分子特征。方法2010年对广东省广州、中山、东莞、珠海、茂名、阳江和江门等地的16家哨点医院的8405例腹泻患者进行了沙门菌监测，收集到8405份粪便标本，进行分离培养。对分离到的沙门菌进行血清分型、药物敏感试验和PFGE分子分型。应用x。检验分析不同季节、不同地区沙门菌分离情况的差异；应用BioNumerics软件对电泳图谱进行分析，确定菌株问的相关性。结果2010年广东省沙门菌监测阳性率为3．58％（301／8405），男女之比为1．34：1（166／124）；各年龄段均可感染沙门菌，以婴儿为主，占57．48％（173／301）。春、夏、秋、冬各季节沙门菌的分离率分别为3．48％（61／1751）、4．97％（134／2695）、3．08％（73／2370）、2．08％（33／1589），不同季节间比较，差异有统计学意义（X^2=27．29，P〈0.01）。不同地区沙门菌分离率分别为：珠海15．43％（25／162）、茂名7．53％（18／239）、东莞6．51％（39／599）、阳江3．64％（14／385）、中山3．03％（70／2309）、广州2．90％（126／4349）、汀门2．49％（9／362），地区之间比较，差异有统计学意义（X^2=100．75，P〈0．01）。除1株沙门菌末能分型外，其余300株菌分为42种血清型，以鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌为主，分别占45．18％（136／301）和10．96％（33／301）。沙门菌虽然对头孢类抗菌药物敏感率达85％以上，但卅现ACSSuT耐药谱（埘氨苄两林、氯霉素、链霉素、磺胺甲二唑和四环素多重耐药）总耐药率达34．88％（105／301），而鼠伤寒沙门菌总耐药率更高，达65．44％（89／136）。136株鼠伤寒沙门菌分成51个PFGE型，表现出较大的遗传多样性。33株肠炎沙门菌分成18个PFGE型。PFGE图谱相同者可有不同的耐药谱，反之亦然。结论在广东省引起感染性腹泻的沙门菌主要为鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌。鼠伤寒沙门菌是广东省耐药最严重的血清型。沙门菌耐药谱和PFGE图谱无明显关联。

关键词：沙门菌属腹泻沙门菌感染细菌分型技术

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16S rRNA在肉毒梭菌分型鉴定中的应用

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第二军医大学学报 2011年第11期32卷 1186-1188页

作者：卢卫嘉毛晓燕熊颖张超王建锋兰州生物制品研究所兰州730046

目的建立一种快速、可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法以从LCL063、830110、LC175、LCL155、66418、N153、61082、ALASKA、IWANAI共9株梭菌中提取的基因组DNA为模板,利用16SrRNA特异性引物分别进行PCR扩增并进行T-A克隆转化、... 详细信息

目的建立一种快速、可靠的对肉毒梭菌进行分型鉴定的手段。方法以从LCL063、830110、LC175、LCL155、66418、N153、61082、ALASKA、IWANAI共9株梭菌中提取的基因组DNA为模板,利用16SrRNA特异性引物分别进行PCR扩增并进行T-A克隆转化、测序。通过Clustal和Mega软件分析16SrDNA序列,以NJ法和MP法构建进化树,分析其种属特异性。结果 16SrRNA分型结果可判断出LCL063、830110、LCL175为产E型毒素的酪酸梭菌。IWANAI与ALASKA株为E型肉毒梭菌。与传统分型鉴定得到的结果一致。结论 16SrRNA在肉毒梭菌分型鉴定中具有快速、准确的优势,随着核糖体库的不断完善,有望成为细菌分型鉴定的标准依据。

关键词： 16SrRNA 肉毒梭菌进化树细菌分型技术

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