检索结果-内蒙古大学图书馆

中华结核和呼吸杂志 1999年第3期22卷 138-141页

作者：何秀云庄玉辉张晓刚熊志红昌增益北京解放军第三○九医院清华大学生命科学院

目的通过结核分支杆菌３８０００蛋白质抗原编码基因在大肠杆菌中稳定表达，以获得大量纯化的３８０００蛋白质抗原，进而研究其免疫学特性。方法采用ＤＮＡ重组技术构建结核分支杆菌３８０００蛋白质抗原表达载体，双酶切和聚合酶链反... 详细信息

目的通过结核分支杆菌３８０００蛋白质抗原编码基因在大肠杆菌中稳定表达，以获得大量纯化的３８０００蛋白质抗原，进而研究其免疫学特性。方法采用ＤＮＡ重组技术构建结核分支杆菌３８０００蛋白质抗原表达载体，双酶切和聚合酶链反应（ＰＣＲ）鉴定转化子，阳性重组子转化大肠杆菌，并诱导表达外源蛋白；十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）和免疫印迹法鉴定３８０００蛋白质抗原在大肠杆菌中的表达；对染色的凝胶扫描，以测定目的蛋白质表达水平。诱导的工程菌抽提包涵体，以确定３８０００蛋白质抗原在大肠杆菌中的表达形式。结果菌体蛋白经ＳＤＳＰＡＧＥ，含阳性重组质粒的菌体蛋白中出现一条新蛋白带，表达量占菌体总蛋白的３６％～４０％。肺结核患者的血清和结核分支杆菌免疫的羊血清与重组３８０００蛋白质均呈阳性反应。３８０００蛋白质抗原在大肠杆菌中表达方式主要以包涵体形式。结论构建的大肠杆菌重组体能高效表达结核分支杆菌３８０００蛋白质抗原，包涵体的表达形式有利于蛋白质纯化和蛋白质稳定。

关键词：结核分支杆菌抗原 38000蛋白质高效表达

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结核分支杆菌16000抗原基因在大肠杆菌中的高效表达及其产物纯化

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中华结核和呼吸杂志 1999年第11期22卷 645-647页

作者：熊志红庄玉辉张晓刚何秀云董恩军昌增益解放军第三○九医院结核病研究室北京100091 清华大学生物系

目的　获得高效表达结核分支杆菌１６０００抗原的大肠杆菌工程菌，将培养物纯化后得到重组１６０００蛋白抗原纯品，并检测其免疫学特性。方法　用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法获得目的基因构建大肠杆菌高效表达株。聚丙烯酰胺凝... 详细信息

目的　获得高效表达结核分支杆菌１６０００抗原的大肠杆菌工程菌，将培养物纯化后得到重组１６０００蛋白抗原纯品，并检测其免疫学特性。方法　用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法获得目的基因构建大肠杆菌高效表达株。聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳＰＡＧＥ）分析重组蛋白抗原的相对分子质量大小及表达形式。ＤＥＡＥ及ＰＥＩ凝胶纯化重组蛋白。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹及酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）分析重组蛋白的免疫原性。结果　构建了具有正确基因序列的重组表达载体，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达，重组蛋白占菌体总蛋白的４０％，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹结果证实该重组蛋白能与抗结核分支杆菌多克隆抗体发生特异免疫结合反应。ＥＬＩＳＡ分析中，该纯化的重组抗原能区别抗结核抗体阳性患者血清及正常人血清。结论　实验中获得了能高效表达１６０００蛋白抗原的大肠杆菌工程菌，以可溶性形式存于胞浆内。该重组蛋白具有特异的免疫原性。

关键词：结核分支杆菌抗原 16000蛋白基因表达

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结核分支杆菌链霉素耐药基因的检测

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中华结核和呼吸杂志 1996年第6期19卷 342-345页

作者：吴雪琼庄玉辉何秀云李国利张晓刚北京解放军第三○九医院结核病研究室

目的了解结核分支杆菌链霉素（Ｓｍ）耐药基因突变情况，建立快速检测耐药突变株的方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析了２２株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因，并应用ＰＣＲ－限制性片段长度... 详细信息

目的了解结核分支杆菌链霉素（Ｓｍ）耐药基因突变情况，建立快速检测耐药突变株的方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）分析了２２株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｓＬ基因，并应用ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）进一步分析其突变的部位和性质。结果以Ｈ３７Ｒｖ标准株为对照，５株敏感株的ｒｐｓＬ基因未见ＳＳＣＰ泳动异常、有ＭｂｏⅡ酶切位点；１３株耐Ｓｍ株中，１１株（８６％）有ｒｐｓＬ基因泳动异常、无ＭｂｏⅡ酶切位点；４株耐其它抗结核药物株中，也有１株ＳＳＣＰ泳动异常、并无ＭｂｏⅡ酶切位点。结论大多数结核分支杆菌Ｓｍ耐药分离株有ｒｐｓＬ突变，而突变位点大多位于第４３位密码子。应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰ可能成为快速检测结核分支杆菌耐药突变株的新方法。

关键词：结核分支杆菌聚合酶链反应药物耐受性

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结核分支杆菌H_(37)Rv株菌体抗原单克隆抗体制备、特性分析及纯化

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中华结核和呼吸杂志 2000年第11期23卷 672-675页

作者：陆学东张小艳张银辉陕西省人民医院老年病研究中心西安710068

目的　利用单克隆抗体技术分析分支杆菌多肽抗原的共性和个性 ,建立纯化单克隆抗体的最佳方法。方法　按常规方法制备单克隆抗体。分泌单克隆抗体阳性杂交细胞株的筛选采用ELISA法 ,确认采用免疫印迹法。 2 4种分支杆菌菌株均生长于改... 详细信息

目的　利用单克隆抗体技术分析分支杆菌多肽抗原的共性和个性 ,建立纯化单克隆抗体的最佳方法。方法　按常规方法制备单克隆抗体。分泌单克隆抗体阳性杂交细胞株的筛选采用ELISA法 ,确认采用免疫印迹法。 2 4种分支杆菌菌株均生长于改良罗氏培养基上 ,H3 7Rv株分别生长于改良罗氏培养基和苏通液体培养基上。单克隆抗体的纯化采用硫酸铵沉淀法、辛酸沉淀法和离子交换法。结果　经筛选获得 14株单克隆抗体杂交细胞瘤。其中 ,C2 、7C12 单克隆抗体所抗的 76 0 0 0、16 0 0 0抗原成份为分泌抗原 ,76 0 0 0抗原存在于 2 4种分支杆菌菌体中 ,为共同抗原。 16 0 0 0抗原仅存在于H3 7Rv ,H3 7Ra,牛分支杆菌 ,BCG株中。单克隆抗体免疫印迹结果显示 ,分支杆菌H3 7Rv株在不同培养条件下 ,其 40 0 0 0 / 380 0 0多肽抗原表达不同。单克隆抗体纯化以硫酸铵沉淀法回收率最高 ,离子交换法获得的单抗纯度最高 ,辛酸沉淀法可以有效地去除白蛋白 ,并具有简单、省时等优点。单克隆抗体的相对亲和力均在 10 -4 ～ 10 -7之间。结论　C2 、7C12 单克隆抗体均抗结核分支杆菌H3 7Rv株的分泌抗原成份。 40 0 0 0 / 380 0 0多肽抗原为结核分支杆菌H3 7Rv株固体培养菌体特有。单抗纯化结果显示离子交换层析法适用于科研分析。

关键词：单克隆抗体结核分支杆菌抗原制备纯化

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结核分支杆菌H_(37)Rv与H_(37)Ra株mRNA基因差异显示研究

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中华结核和呼吸杂志 2000年第11期23卷 669-671页

作者：王甦民刘枫春赵兵北京市结核病胸部肿瘤研究所 101149

目的　采用mRNA差异显示技术研究H3 7Rv株与H3 7Ra株的基因差异 ,为获取结核分支杆菌毒力相关基因奠定基础。方法　提取结核分支杆菌H3 7Rv株和H3 7Ra株RNA ,经逆转录、PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影进行mRNA的差异显示。回... 详细信息

目的　采用mRNA差异显示技术研究H3 7Rv株与H3 7Ra株的基因差异 ,为获取结核分支杆菌毒力相关基因奠定基础。方法　提取结核分支杆菌H3 7Rv株和H3 7Ra株RNA ,经逆转录、PCR扩增、聚丙烯酰胺凝胶电泳和放射自显影进行mRNA的差异显示。回收差异条带、再扩增和序列分析 ,进行同源性查询。结果　经差异显示后 ,共回收与H3 7Ra株不同的H3 7Rv株mRNA差异条带 10条。经结果查询 ,发现其中 2条差异条带与结核分支杆菌H3 7Rv株DNA序列具有同源性 ,而与H3 7Ra无同源性。结论　mRNA差异显示方法具有高效、灵敏等优点 ,可在基因水平掌握同一种属或不同种属不同株间的差异 ,用于结核分支杆菌相关毒力基因的研究。研究获得的H3 7Rv株与H3

关键词：结核分支杆菌 mRNA差异显示毒力相关基因

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结核分支杆菌耐喹诺酮分子机制的研究

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中国抗生素杂志 2005年第2期30卷 103-106页

作者：安慧茹王巍李洪敏何珂刘真李素梅解放军309医院北京100091

目的了解结核分支杆菌耐喹诺酮药物的分子机制,建立快速的药敏的方法。方法通过16SrRNA聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析77株分支杆菌临床分离株;通过PCR-SSCP和直接测序技术(PCR-DS)分析结核分支杆菌的gyrA基因突变的情... 详细信息

目的了解结核分支杆菌耐喹诺酮药物的分子机制,建立快速的药敏的方法。方法通过16SrRNA聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术分析77株分支杆菌临床分离株;通过PCR-SSCP和直接测序技术(PCR-DS)分析结核分支杆菌的gyrA基因突变的情况。结果75株为结核分支杆菌复合群。以结核分支杆菌标准菌株H37Rv和卡介苗为对照,30株喹诺酮敏感株的gyrA基因的SSCP图谱均泳动正常,测序分析与对照株相同。45株耐喹诺酮的菌株中,34株(75.6%)gyrA基因SSCP图谱泳动异常;测序证实10株为90位密码子的突变,24株为94位密码子突变,所有gyrA突变株的氧氟沙星4μg/ml≤MICs≤32μg/ml,左氧氟沙星2μg/ml≤MICs≤16μg/ml。结论gyrA基因突变,尤其90位和94位密码子突变是结核分支杆菌耐喹诺酮的主要分子机制,PCR-SSCP可能成为测定部分结核分支杆菌喹诺酮耐药基因型的简便、快速的方法,并有望直接用于临床标本喹诺酮敏感性试验。

关键词：结核分支杆菌喹诺酮 gyrA基因药物耐受性聚合酶链反应单链构象多态性 DNA直接测序

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结核分支杆菌重组38000蛋白的免疫原性特征

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中华结核和呼吸杂志 2000年第8期23卷 485-488页

作者：何秀云庄玉辉张晓刚熊志红董蒽军史迎昌昌增益 100091北京清华大学生命科学院

目的　了解结核分支杆菌重组 380 0 0蛋白 (rMT38)诱发家兔产生抗体的能力及作为血清学诊断试剂的价值。方法　将家兔分为 6组 :PPD +生理盐水 (A组 ) ,rMT38+生理盐水 (B组 ) ,rMT38+佐剂 (C组 ) ,1/ 2rMT38+1/ 2rMT16 +生理盐水 (D组 ... 详细信息

目的　了解结核分支杆菌重组 380 0 0蛋白 (rMT38)诱发家兔产生抗体的能力及作为血清学诊断试剂的价值。方法　将家兔分为 6组 :PPD +生理盐水 (A组 ) ,rMT38+生理盐水 (B组 ) ,rMT38+佐剂 (C组 ) ,1/ 2rMT38+1/ 2rMT16 +生理盐水 (D组 ) ,1/ 2rMT38+1/ 2rMT16 +佐剂 (E组 ) ,rMT16 +佐剂 (F组 ) )。用ELISA法测C、E两组血清是否与分支杆菌PPD有交叉反应。双向扩散和ELISA法检测rMT38免疫的血清反应。ELISA法检测 389份人血清 ,包括肺结核病人 145例、卡介苗接种阳转健康者 78例、健康献血者 10 5例、非结核呼吸道疾病 31例及脓肿分支杆菌感染者 30例。结果C、E两组血清用双向扩散和ELISA检测抗体滴度分别为 1∶16、1∶4和 1∶6 40 0、1∶32 0 0 ;双向扩散检测A、B、D、F组血清与rMT38均未见免疫沉淀线 ;ELISA检测A、F组血清 ,抗体为阴性 ,B、D组抗体滴度均为 1∶40 0。C组血清与所试分支杆菌PPD用ELISA检测均为阴性 ;E组血清与牛、结核分支杆菌PPD呈阳性反应。兔血清抗体效价结果显示 :5个月后 ,C、E组血清效价均下降 ,但仍能检测到抗体 ;B、D组血清 2个月抗体检测为阴性。肺结核病组rMT38和PPD检测敏感性分别为 6 9 0 %和 75 2 % ;健康组、非结核呼吸道疾病组。

关键词：结核分支杆菌重组38000蛋白免疫原性诊断

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结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变微通道电泳检测方法的建立

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中华结核和呼吸杂志 2003年第12期26卷 785-789页

作者：王吉崔振玲景奉香金庆辉赵建龙胡忠义徐元森中国科学院上海微系统与信息技术研究所上海200050 华东师范大学生物系上海市肺科医院

目的　建立一种用微通道电泳芯片分析系统检测结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变的方法。方法　以丙烯酰胺及其衍生物的聚合物溶液作为筛分介质 ,溶液中掺入微量的吖啶橙作为荧光标记物 ,对结核分支杆菌的异烟肼耐药相关的katG和inhA基因... 详细信息

目的　建立一种用微通道电泳芯片分析系统检测结核分支杆菌异烟肼耐药基因突变的方法。方法　以丙烯酰胺及其衍生物的聚合物溶液作为筛分介质 ,溶液中掺入微量的吖啶橙作为荧光标记物 ,对结核分支杆菌的异烟肼耐药相关的katG和inhA基因进行单链构象多态性 (SSCP)分析 ,检测其与耐药性相关的突变。对于突变部位附近没有二级结构的inhA基因 ,设计了特别的引物使扩增产物增加一个能与突变部位配对的区域 ,从而使野生型片段呈现独特的构象。结果　此方法可实现对katG基因野生型片段与 315位密码子突变型片段的区分 ,以及对inhA基因调节序列野生型与突变型片段的区分。 30个临床分离株中的 2 3个耐药株有 2 2个被检出 ,效率达 95 %。结论　微通道电泳方法用于结核杆菌耐药基因突变检测 ,具有快速、灵敏的优点 ,可望将之应用于临床耐药性检测。

关键词：结核分支杆菌异烟肼耐药基因基因突变微通道电泳检测

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结核分支杆菌抗原85B DNA疫苗转染人气道上皮细胞对哮喘患者Th1/Th2平衡的调节作用

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中华结核和呼吸杂志 2003年第8期26卷 465-469页

作者：吴健徐军钟南山北京大学第一医院呼吸科广州医学院广州呼吸病研究所

目的　研究结核分支杆菌抗原 85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用。方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG Ag85B ,经脂质体介导转... 详细信息

目的　研究结核分支杆菌抗原 85B(简称Ag85B)DNA疫苗经人气道上皮转化后的培养上清液对尘螨过敏哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)Th1/Th2细胞因子释放的调控作用。方法亚克隆构建表达Ag85B基因的真核表达载体pMG Ag85B ,经脂质体介导转化离体培养气道上皮细胞16HBE ,并收集转化细胞培养上清液 ,用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测转基因气道上皮Ag85BmRNA水平的表达 ,螨过敏哮喘组 (18例 )和正常组 (13例 )PBMC在离体单独与螨或与Ag85B转染上清液共同培养 ,酶联免疫吸附测定 (ELISA)法测定其培养上清液中白介素 5 (IL 5 )、γ干扰素 (IFN γ)的水平。结果　RT PCR法扩增转染的 16HBE细胞中有 992bp长度的预期片断。无刺激状态下 ,哮喘患者和正常人PBMC培养上清液的IL 5、IFN γ无差异 ,螨刺激可促进哮喘患者PBMC分泌IL 5 ,刺激和未刺激处理分别为 (17 1± 1 9)pg/ml和 (11 9± 0 9)pg/ml(P =0 0 2 ) ;螨 +Ag85B转染上清液与单纯螨刺激比较 ,前者IFN γ水平显著高于后者 ,分别为 (111 5± 15 9)pg/ml和 (5 8 8± 7 8)pg/ml(P =0 0 4 ) ,IFN γ/IL 5的比值分别为 7 2± 4 8和 4 9± 2 5 (P =0 0 8)。正常人不同刺激方法间比较 ,所有指标差异均无显著性 (P >0 0 5 )。结论　螨过敏的变应性?

关键词：结核分支杆菌抗原85B DNA疫苗气道上皮细胞哮喘 Th1细胞 Th2细胞调节作用

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结核分支杆菌耐药性快速测定方法及其评价

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中华结核和呼吸杂志 2003年第2期26卷 107-109页

作者：胡忠义上海市肺科医院 200433

近年来,结核分支杆菌(MTB)耐药性问题日趋严重,已成为结核病控制的三大难题之一.由于传统的耐药性测定方法需时较长,远不能满足临床治疗的需要.因此,寻找快速、准确的耐药性测定方法已成为结核基础研究领域的一个重要课题,也是临床实践... 详细信息

近年来,结核分支杆菌(MTB)耐药性问题日趋严重,已成为结核病控制的三大难题之一.由于传统的耐药性测定方法需时较长,远不能满足临床治疗的需要.因此,寻找快速、准确的耐药性测定方法已成为结核基础研究领域的一个重要课题,也是临床实践中亟待解决的问题[1,2].文中就耐药性快速测定的几种新方法研究进展综述如下.

关键词：结核分支杆菌耐药性快速测定方法评价

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