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结核分支杆菌Ag85B-MPT64融合基因疫苗的构建及其在小鼠体内的表达

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中华结核和呼吸杂志 2003年第10期26卷 646-647页

作者：骆旭东朱道银陈全蒋英江山重庆医科大学微生物与免疫学研究室 400016

我们将结核杆菌Ag85B和MPT64编码基因用疏水甘氨酸接头,经过基因拼接(gene SOEing)法融合构建DNA疫苗并研究其免疫原性,为进一步研究其融合基因疫苗的免疫保护作用奠定基础.

关键词：结核分支杆菌 Ag85B MPT64 融合基因疫苗小鼠

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结核分支杆菌Hsp70和Hsp65 DNA疫苗免疫原性比较研究

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中华结核和呼吸杂志 2002年第11期25卷 700-701页

作者：戴五星黄海浪高红皇甫永穆华中科技大学同济医学院生化与分子生物学系武汉430030

分支杆菌热休克蛋白(Hsp)既有增强免疫应答的作用,又保持了分支杆菌本身的抗原特性.我们采用分子生物学技术,将结核分支杆菌Hsp70基因克隆到真核表达质粒pcDNA3中,构成裸露DNA疫苗(DNA70).采用英国Lowrie教授赠送的Hsp65 DNA疫苗和本室... 详细信息

分支杆菌热休克蛋白(Hsp)既有增强免疫应答的作用,又保持了分支杆菌本身的抗原特性.我们采用分子生物学技术,将结核分支杆菌Hsp70基因克隆到真核表达质粒pcDNA3中,构成裸露DNA疫苗(DNA70).采用英国Lowrie教授赠送的Hsp65 DNA疫苗和本室构建的Hsp70 DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,然后观察其对小鼠免疫应答的影响,探讨两种疫苗的抗感染机制及比较两种疫苗的免疫原性.

关键词：结核分支杆菌 Hsp70 Hsp65DNA 疫苗免疫原性比较研究结核病预防

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结核分支杆菌外分泌蛋白——Ag85复合体的研究进展

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南方医科大学学报 2001年第S1期25卷 74-76页

作者：江晓玲俞守义第一军医大学流行病学研究室广东广州510515

抗原Ag85复合物是结核杆菌的一种重要的外分泌蛋白,能诱导实验动物Th1型细胞免疫应答,该应答抵抗结核杆菌再感染的能力仅次于BCG所诱导的应答,并对其他分支杆菌如麻风杆菌也有一定的免疫保护作用。鉴于目前BCG作为疫苗存在的不足,以Ag8... 详细信息

抗原Ag85复合物是结核杆菌的一种重要的外分泌蛋白,能诱导实验动物Th1型细胞免疫应答,该应答抵抗结核杆菌再感染的能力仅次于BCG所诱导的应答,并对其他分支杆菌如麻风杆菌也有一定的免疫保护作用。鉴于目前BCG作为疫苗存在的不足,以Ag85编码基因研制DNA疫苗已引起了较为普遍的重视。

关键词： Ag85 结核分支杆菌疫苗

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点突变对结核分支杆菌KatG蛋白活性和结构的影响

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复旦学报（医学版） 2004年第1期31卷 24-27页

作者：莫凌翁心华陈澍邵凌云张文宏复旦大学附属华山医院传染科上海200040

目的探讨点突变对结核分支杆菌KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性和蛋白结构的影响,深入研究INH耐药的发生机制。方法采用三步法PCR对KatG基因的4个位点进行定点诱变,在大肠埃希菌BL21体系中表达和纯化相应诱变蛋白,并测定其过氧化氢... 详细信息

目的探讨点突变对结核分支杆菌KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性和蛋白结构的影响,深入研究INH耐药的发生机制。方法采用三步法PCR对KatG基因的4个位点进行定点诱变,在大肠埃希菌BL21体系中表达和纯化相应诱变蛋白,并测定其过氧化氢酶、过氧化物酶活性、二硫键的形成及荧光光谱变化,最后利用酵母细胞色素C氧化酶模型进一步探讨点突变对KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性和结构的影响。结果完成KatG基因4个位点的诱变及相应诱变蛋白的表达和纯化。过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定发现3个诱变蛋白[KatG(W321G)、KatG(R418Q)和KatG(A456S)]活性基本丧失,诱变蛋白KatG(S315T)活性也有明显下降。荧光光谱显示KatG(R418Q)和KatG(A456S)的荧光强度较野生型明显降低。4个点突变均不影响KatG蛋白间二硫键的形成。结论所引入的4个突变可能对KatG蛋白的结构造成影响,从而导致KatG蛋白的功能即过氧化氢-过氧化物酶活性下降。

关键词：点突变结核分支杆菌 KatG 过氧化氢-过氧化物酶活性蛋白结构基因突变

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结核分支杆菌抗拒巨噬细胞吞噬及在胞内的生存机制

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中华结核和呼吸杂志 2001年第6期24卷 375-377页

作者：汪正清第三军医大学微生物学教研室重庆400038

WHO指出全世界现有结核病人2 000万,每年新发生约900万例,每年死亡300万人,全世界业已受结核分支杆菌感染者达17亿,占世界人口的1/3,结核病在世界很多地区已经失控而威胁人的生命.结核再次成为严重的世界性疾病.由于人口剧增、移民增加... 详细信息

WHO指出全世界现有结核病人2 000万,每年新发生约900万例,每年死亡300万人,全世界业已受结核分支杆菌感染者达17亿,占世界人口的1/3,结核病在世界很多地区已经失控而威胁人的生命.结核再次成为严重的世界性疾病.由于人口剧增、移民增加、旅游业发展、耐药性的产生、人类免疫缺陷病毒(HIV)感染流行、吸毒、酗酒与贫困等原因,结核病呈日益严重回升趋势.结核分支杆菌(***)属胞内寄生菌,在感染早期被巨噬细胞吞噬后,可抵抗宿主的杀伤,维持胞内繁殖和扩散,在结核分支杆菌致病性上有重要意义.文中主要从生物学上讨论结核分支杆菌入侵巨噬细胞并在胞内存活繁殖的机制.

关键词：结核病结核分支杆菌抗巨噬细胞吞噬胞内生存机制

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结核分支杆菌katG蛋白的高表达与纯化

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中华传染病杂志 2000年第1期18卷 17-19页

作者：张文宏翁心华季朝能毛裕民陈一平陈澍邬祥惠上海医科大学附属华山医院传染病科 200040 复旦大学遗传学研究所

目的　表达与纯化结核分支杆菌katG 蛋白,为深入研究异烟肼耐药机制奠定基础。方法　将含有katG 基因的pET24bkatG 表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) 菌株,在异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG) 诱导下表达,分别对不同诱导时间的表达产... 详细信息

目的　表达与纯化结核分支杆菌katG 蛋白,为深入研究异烟肼耐药机制奠定基础。方法　将含有katG 基因的pET24bkatG 表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3) 菌株,在异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG) 诱导下表达,分别对不同诱导时间的表达产物进行SDSPAGE 以及考马斯亮蓝染色。获得稳定的高表达菌株后采用Xpress TM蛋白纯化系统对超声破菌液进行纯化。最后对纯化产物进行过氧化氢酶活性的初步检测。结果　对诱导后的重组大肠杆菌菌液进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE) 以及考马斯亮蓝染色后发现相对分子质量约为80 000 。表达蛋白量约占总蛋白量的17.7% 。对重组katG基因表达产物进行纯化的结果发现,以350 m mol/L咪唑洗脱时的纯化效果最理想,蛋白纯度可达90 % 以上。对表达产物进行过氧化氢酶活性初步检测证明,重组的katG 基因产物具有过氧化氢酶活性。结论　通过pET24bkatG 表达质粒转化大肠杆菌可获得基因重组的katG 高表达菌株,表达产物具有一定酶活性。

关键词：结核分支杆菌基因表达 KatG蛋白异烟肼

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结核分支杆菌与非结核分支杆菌快速鉴别的实验研究

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中国老年学杂志 2005年第1期25卷 36-38页

作者：华树成李丹李洋吉林大学第一医院呼吸内科吉林长春130021

目的探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多... 详细信息

目的探讨提供一种从菌种水平快速检测和鉴别分支杆菌的方法。方法应用三对分别对应于分支杆菌(分子量65000)表面抗原、结核分支杆菌插入序列IS6110及人类β珠蛋白基因的部分序列的特异性寡核苷酸引物对受试菌种及临床标本中的DNA进行多重PCR扩增,其扩增产物分别为439bp、268bp及123bp,并对439bp进行BstEⅡ和HaeⅢ两种限制性内切酶消化,同时,将135例临床标本进行培养、涂片,和多重PCR联合限制性片段长度多态性分析(mPCRRFLP)检测。结果mPCRRFLP方法可将12种受试的标准菌种分别区分到种及亚种水平。本方法在临床实验中亦体现出较高的灵敏性及特异性。结论mPCRRFLP分析是对结核分支杆菌与非结核分支杆菌进行菌种分类鉴定的一种快速有效的方法。

关键词：聚合酶链式反应限制性片段长度多态性分析结核分支杆菌非结核分支杆菌

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耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变位点的分析

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复旦学报（医学版） 2001年第5期28卷 413-415页

作者：庞茂银翁心华张文宏胡忠义复旦大学附属华山医院传染科上海200040 上海市疾病预防控制中心上海200336

目的　研究上海地区耐利福平结核分支杆菌rpoB基因的突变特点 ,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义。方法　对 5 8株结核分支杆菌rpoB基因片段 (约 2 13bp)进行PCR扩增 ,其中包括核心突变区的 6 9个碱基 ,并对PCR产物进行DNA测序。其中... 详细信息

目的　研究上海地区耐利福平结核分支杆菌rpoB基因的突变特点 ,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义。方法　对 5 8株结核分支杆菌rpoB基因片段 (约 2 13bp)进行PCR扩增 ,其中包括核心突变区的 6 9个碱基 ,并对PCR产物进行DNA测序。其中耐药株 36株 ,敏感株 2 2株。结果　所有 5 8株中 ,36株耐药株均存在rpoB基因突变 ,氨基酸突变率 5 31位为 47.2 % ,5 2 6位为 2 5 .0 % ,2 2株敏感株均无突变。结论　rpoB基因核心突变区发生突变是结核分支杆菌对利福平耐药的主要原因 ,其中 5 31位丝氨酸和 5 2

关键词：结核分支杆菌耐药性利福平基因突变 ropB基因

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结核分支杆菌基因组后时代的展望

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中华结核和呼吸杂志 2001年第7期24卷 391-393页

作者：庄玉辉解放军第三○九医院结核病研究室北京100091

早在1990年,国际上就正式启动人类基因组计划.时隔10年,于2000年6月科学家宣布人的22与21号染色体的全序列测定已经相继完成,测序工作进入绘制完整序列图阶段.在2001年2月12日,中、美、日、德、法、英等6国科学家和美国塞莱公司联合公... 详细信息

早在1990年,国际上就正式启动人类基因组计划.时隔10年,于2000年6月科学家宣布人的22与21号染色体的全序列测定已经相继完成,测序工作进入绘制完整序列图阶段.在2001年2月12日,中、美、日、德、法、英等6国科学家和美国塞莱公司联合公布了更准确、更完整的人类基因组图谱.这意味着人类在破译生命密码的征途上迈出了决定性的一步,是具有划时代意义的伟大事件.在这一背景下,模式生物基因组测序的对象也相继开展起来,如酵母、线虫、果蝇和42种微生物(包括致病病原体)以及小鼠基因组序列测定已经完成.1998年英国Sanger中心和法国Pasteur研究所[1]科学家合作完成了结核分支杆菌H37RV株的全基因组测序工作,从而彻底改变了长期困绕着人们的结核分支杆菌遗传背景不清的传统观念,这对于结核病病原菌及其与宿主之间相互关系的本质认识和一些棘手难题的解决提供了极好的机遇.正当人们跨进21世纪时, 人类基因组研究正逐步向“后基因组时代”迈进,即从结构基因组向功能基因组学过渡的时代.后基因组学时代的任务是收集、整理、检索和分析基因序列中表达的蛋白质结构与功能的信息,从中找出规律性东西,以造福于人类.文中就结核分支杆菌后基因组学时代值得考虑的若干问题做一概要介绍,供参考.

关键词：结核分支杆菌基因组后基因组时代比较基因组织学研究

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结核分支杆菌耐药性分子机理研究的若干进展

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中华结核和呼吸杂志 1997年第6期20卷 329-331页

作者：庄玉辉解放军第三○九医院结核病研究室

结核分支杆菌耐药性分子机理研究的若干进展庄玉辉关于分支杆菌耐药性机理问题迄今有三种观点：（１）细胞膜或壁结构与组成发生变化，使细胞膜通透性改变，药物通透性降低，摄取量减少；（２）质粒或转座子介导的耐药性；（３）药物靶... 详细信息

结核分支杆菌耐药性分子机理研究的若干进展庄玉辉关于分支杆菌耐药性机理问题迄今有三种观点：（１）细胞膜或壁结构与组成发生变化，使细胞膜通透性改变，药物通透性降低，摄取量减少；（２）质粒或转座子介导的耐药性；（３）药物靶编码基因突变。随着耐多药结核病（Ｍ...

关键词：结核分支杆菌耐药性机理研究进展

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