检索结果-内蒙古大学图书馆

中华结核和呼吸杂志 2001年第5期24卷 306-308页

作者：彭理年肖瑜蒋伙刚董德琼遵义医学院附属医院检验科贵州省遵义市563003 遵义医学院附属医院呼吸内科贵州省遵义市563003

目的　探讨应用十二烷基硫酸钠 (SDS)处理标本在结核分支杆菌聚合酶链反应 (PCR)中的价值。方法　从 186例活动性结核病人收集痰、胸腹水、脑脊液、尿、血液等标本 2 6 6份 ,标本分别用SDS和常规方法进行处理。两种方法处理的标本同时用... 详细信息

目的　探讨应用十二烷基硫酸钠 (SDS)处理标本在结核分支杆菌聚合酶链反应 (PCR)中的价值。方法　从 186例活动性结核病人收集痰、胸腹水、脑脊液、尿、血液等标本 2 6 6份 ,标本分别用SDS和常规方法进行处理。两种方法处理的标本同时用PCR 反相膜杂交试验检测结核分支杆菌 ,并将结果进行比较。结果　用SDS和常规方法处理的标本 ,PCR 反相膜杂交试验结核分支杆菌的检出率分别为 6 5 0 % (173/ 2 6 6 )和 5 1 5 % (136 / 2 6 6 )。通过配对计数资料卡方检验 ,SDS法和常规法之间的差异具有非常显著性意义 (χ2 =35 0 3,P <0 0 0 1)。结论　SDS法可以应用于临床标本结核分支杆菌PCR检测 ,提高结核分支杆菌PCR的检出率。

关键词：聚合酶链反应结核分支杆菌标本处理十二烷基硫酸钠

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利用基因芯片检测结核分支杆菌及其利福平耐药性的研究

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中华流行病学杂志 2003年第5期24卷 385-388页

作者：何敏曾尔良郑艳燕汤卓卢祥婵孙碧辉许丁空张志勇杨莉广西医科大学医学科学实验中心南宁530021 上海博星基因芯片有限公司广西医科大学公共卫生学院南宁市第四人民医院

目的　探讨结核杆菌耐利福平 (RFP)检测基因芯片在结核病诊断及其耐药性检测中的应用价值。方法　采用结核杆菌耐RFP芯片对 35株RFP耐药的临床分离菌株 ,10 2例肺结核患者、2 7例非结核病的其他患者的痰标本中的结核杆菌及其RFP耐药性... 详细信息

目的　探讨结核杆菌耐利福平 (RFP)检测基因芯片在结核病诊断及其耐药性检测中的应用价值。方法　采用结核杆菌耐RFP芯片对 35株RFP耐药的临床分离菌株 ,10 2例肺结核患者、2 7例非结核病的其他患者的痰标本中的结核杆菌及其RFP耐药性进行了检测 ,基因芯片检测结果与痰涂片、细菌培养及结核杆菌标准化药敏试验结果比较。结果　结核杆菌耐RFP检测芯片检测 35株耐药株 ,有 33株判定为RFP耐药株 ,与传统药敏试验结果的符合率为 94 .2 9%。对 2 7份其他患者的痰液标本进行结核杆菌检测 ,特异性为 92 .5 9%。对 10 2份结核患者痰标本中结核杆菌进行检测 ,痰涂片法阳性率 35 .2 9% (36 /10 2 ) ,细菌培养法阳性率 2 8.4 3% (2 9/10 2 ) ,基因芯片法阳性率 77.4 5 %(79/10 2 )。传统的药敏试验报告 10 2份痰标本仅 2 9份培养出结核分支杆菌 ,其中 8份RFP耐药株 ,而基因芯片法检测 10 2份痰标本中发现 2 0份耐RFP结核杆菌。主要基因突变位点为 5 31、5 2 6和5 16。结论　采用结核杆菌耐RFP检测芯片检测结核杆菌及RFP耐药性具有快速简便、特异性高的特点。

关键词：基因芯片检测结核分支杆菌利福平耐药性研究

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用IS6110限制性片段长度多态性方法分析中国南方部队结核分支杆菌DNA指纹特征

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中华流行病学杂志 2003年第7期24卷 591-594页

作者：曾年华王志斌肖红王珊珊黄佳亮苏建新姜普林唐博恒广州军区联勤部军事医学研究所流行病学研究室 510507

目的　分析南方部队结核病患者和当地患者中结核分支杆菌分离株DNA指纹特征 ,探讨南方部队结核病的分子流行病学特征。方法　用限制性内切酶PvuⅡ消化结核分支杆菌DNA ,后用琼脂糖凝胶电泳 ,再用Southern免疫转印 ,用 [α3 2 P] dCTP... 详细信息

目的　分析南方部队结核病患者和当地患者中结核分支杆菌分离株DNA指纹特征 ,探讨南方部队结核病的分子流行病学特征。方法　用限制性内切酶PvuⅡ消化结核分支杆菌DNA ,后用琼脂糖凝胶电泳 ,再用Southern免疫转印 ,用 [α3 2 P] dCTP标记的DNAIS61 1 0序列中的 2 4 5bp片段作探针 ,进行杂交后得到限制性片段长度多态性图谱 ,结合一般流行病学资料加以分析比较。结果共检测 1 85株结核分支杆菌分离株。检测菌株的IS61 1 0拷贝数范围为 1～ 2 2。部队患者和当地患者的IS61 1 0拷贝数分布差异无显著性。部队患者结核菌分离株的IS61 1 0拷贝数主要集中在 6～ 2 0个 ,当地分离株主要集中在 7～ 2 0个 ;全部菌株指纹特征分成 8个组 ,部队分离株和当地分离株均主要集中在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3个组里。耐药菌株指纹特征在各组中的分布与敏感菌株差异有显著性 ;患者是否接种卡介苗在各组中的分布差异无显著性。结论　南方部队患者与当地患者结核菌分离株在遗传关系上较接近 ,在基因水平上相关程度较强。提示部队结核病的发生与当地结核分支杆菌菌株的传播密切相关。

关键词： IS6110 限制性片段长度多态性中国南方部队结核分支杆菌 DNA指纹特征流行病学

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抗结核药物诱导结核分支杆菌形成L型及其特性的观察

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中华结核和呼吸杂志 2001年第1期24卷 52-55页

作者：王和陈峥宏贵阳医学院微生物学教研室 550004

目的　观察常用抗结核药物对结核分支杆菌L型的诱导作用以及结核分支杆菌L型在非高渗透压培养基内的某些特性及其抗菌药物敏感性 ,探讨结核分支杆菌L型形成的机制及其在结核病的发生、诊断及治疗上的意义。方法　将结核分支杆菌接种于... 详细信息

目的　观察常用抗结核药物对结核分支杆菌L型的诱导作用以及结核分支杆菌L型在非高渗透压培养基内的某些特性及其抗菌药物敏感性 ,探讨结核分支杆菌L型形成的机制及其在结核病的发生、诊断及治疗上的意义。方法　将结核分支杆菌接种于含有利福平、异烟肼、乙胺丁醇的非高渗透压培养基内 ,逐日在显微镜下观察结核分支杆菌L型的形成情况。L型形成后将培养物过滤 ,获得结核分支杆菌L型纯培养物并对其形态、培养、抗菌药物敏感性、结核分支杆菌特异性基因等进行观察。结果　结核分支杆菌在常规药敏试验浓度的利福平、异烟肼、乙胺丁醇的作用下均可形成L型。结核分支杆菌L型对这些抗结核药物不再敏感 ,但对链霉素、红霉素、氧氟沙星、诺氟沙星等抗菌药物均敏感。结核分支杆菌L型在非高渗透压培养基内呈圆球或不规则形态的细胞 ,单个、成双或链状排列 ,沉于培养基底部生长 ,不粘附瓶壁 ,不运动 ,抗酸染色阴性 ,革兰染色阴性或阳性 ,保留了结核分支杆菌特异性PCR引物基因序列。结论　利福平、异烟肼、乙胺丁醇虽然能够杀灭结核分支杆菌细菌型 ,但也能够诱导其形成L型而造成这些抗结核药物对结核治疗无效。非高渗培养基传代培养的结核分支杆菌L型保留了与其亲代细菌型一致的PCR引物基因序列。

关键词：结核分支杆菌细菌L型抗结核药物诱导结核病治疗

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白细胞介素12调节小鼠Th1/Th2的抗结核分支杆菌感染研究

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中华结核和呼吸杂志 2000年第6期23卷 358-360页

作者：张天托川上和义唐英春张扣兴饶宪斋藤厚中山医科大学附属第三医院内科广州510630 日本琉球大学医学部第一内科

目的　观察、评价白细胞介素 12 (IL 12 )对结核分支杆菌感染小鼠细胞因子的影响和疗效。方法　将BALB/c小鼠 42只 ,制成小鼠结核分支杆菌感染模型 ,随机分为对照组 (PBS)和IL 12共两组 (每组 2 1只 )。给予PBS或IL 12治疗 ,检测血清γ... 详细信息

目的　观察、评价白细胞介素 12 (IL 12 )对结核分支杆菌感染小鼠细胞因子的影响和疗效。方法　将BALB/c小鼠 42只 ,制成小鼠结核分支杆菌感染模型 ,随机分为对照组 (PBS)和IL 12共两组 (每组 2 1只 )。给予PBS或IL 12治疗 ,检测血清γ干扰素 (IFN γ)、IL 4、IL 10水平 (ELISA法 )和器官菌落计数 ,观察治疗后生存率。结果　IL 12组小鼠无一死亡 ,肺、肝、脾菌落数分别为 (2 2 7±10 7)× 10 5cfu/ml,(4± 3)× 10 5cfu/ml和 (1 5± 0 5 )× 10 5cfu/ml,INF γ(10 90± 40 6 )pg/ml。PBS组 8只死亡 ,肺、肝、脾菌落数分别为 (6 5 9± 40 5 )× 10 5cfu/ml、(2 3± 19)× 10 5cfu/ml和 (10 8± 3 5 )× 10 5cfu/ml,IFN γ(5 48± 2 14)pg/ml,两组比较差异有显著性。而血清IL 4水平变化不大 ,两组比较差异无显著性。结论　IL 12诱导IFN γ产生 ,促进Th1细胞反应 ,改变了Th1/Th2平衡。

关键词：结核分支杆菌白细胞介素12 结核病药物疗法

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结核分支杆菌rpsL基因突变的快速检测

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广东医学 2005年第4期26卷 469-470页

作者：宋艳斌马文丽郑文岭南方医科大学分子生物学研究所广州510515 广州军区肿瘤分子生物学研究所广州510010

目的　建立快速检测结核分支杆菌rpsL基因突变的方法。方法　用聚合酶链反应(PCR)直接从结核分支杆菌基因组扩增rpsL基因,并直接进行测序鉴定。结果　用引物P1,P2 扩增H3 7RvDNA获得约4 6 0bp片段,经序列测定后,显示与GeneBank中公布的... 详细信息

目的　建立快速检测结核分支杆菌rpsL基因突变的方法。方法　用聚合酶链反应(PCR)直接从结核分支杆菌基因组扩增rpsL基因,并直接进行测序鉴定。结果　用引物P1,P2 扩增H3 7RvDNA获得约4 6 0bp片段,经序列测定后,显示与GeneBank中公布的序列一致(同源性99% )。2 8株结核分支杆菌耐SM分离株中,2 0株rpsL基因突变位于4 3位密码子,另8株分离株未出现rpsL基因突变。结论　rpsL基因突变是SM耐药性的重要分子机制,本研究为进一步研究链霉素作用方式和耐药机制提供了有力手段。

关键词：结核分支杆菌 rpsL基因基因突变快速检测基因测序

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结核分支杆菌的实验诊断新技术

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临床荟萃 2003年第5期18卷 293-296页

作者：王玲张才军昆明医学院微生物学与免疫学教研室云南昆明650031

结核分支杆菌引起的感染和死亡,随着抗结核药物的开发和应用曾一度得到有效的控制,但从20世纪80年代以来,结核病出现疫情回潮现象.

关键词：结核分支杆菌诊断技术实验室

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结核分支杆菌HSP65的基因表达及其免疫学特性研究

结核分支杆菌HSP65的基因表达及其免疫学特性研究

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作者：席丽西北农林科技大学

学位级别：硕士

结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)热休克蛋白6(5Heat Shock Protein 65, HSP65)是热休克蛋白60家族成员之一,由groEL2基因编码,是一种高度保守的蛋白质。该蛋白具有很强的免疫原性,在结核杆菌感染过程中,HSP65是机体对抗... 详细信息

结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)热休克蛋白6(5Heat Shock Protein 65, HSP65)是热休克蛋白60家族成员之一,由groEL2基因编码,是一种高度保守的蛋白质。该蛋白具有很强的免疫原性,在结核杆菌感染过程中,HSP65是机体对抗其入侵的重要的免疫保护性抗原之一,提示HSP65可能成为结核病预防和治疗的一个关键因素。本研究采用分子生物学方法分别构建MTB HSP65的原核重组质粒和真核重组质粒,测定分析了HSP65蛋白和真核重组质粒在小鼠体内的免疫学特性和抵抗MTB感染的保护力。 1.采用PCR方法从MTB H37Rv株DNA基因组中扩增HSP65基因,与pMD18-T载体连接,酶切鉴定阳性重组质粒pMD-hsp65,经测序证实与Genebank公布的MTB HSP65基因序列完全一致。利用酶切位点将HSP65基因从pMD-hsp65中亚克隆入pPRO EX HTa原核表达载体,酶切鉴定阳性重组质粒pPRO-hsp65,并用IPTG进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE的结果表明,在相对分子量为65 Ku的位置有目的蛋白表达。用抗MTB HSP65的mAb及TB患者血清进行Western-blot鉴定,结果证实在相应的位置有特异性的结合条带。采用Ni-NTA亲和色谱柱在变性条件下纯化得到了HSP65蛋白。 2.利用酶切位点将HSP65基因从pMD18-hsp65中亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),酶切鉴定阳性重组质粒pcDNA-hsp65。将重组质粒用阳离子聚合物法稳定转染P815(H-2d)细胞。分别经RT-PCR和间接免疫荧光法证实,该重组质粒可在稳定转染的P815细胞中转录和特异性地表达。经过G418压力筛选,得到8株能稳定表达HSP65蛋白的P815细胞系。 3.用HSP65原核表达蛋白及真核重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测两种疫苗各项免疫学指标。结果表明,HSP65亚单位疫苗和基因疫苗均可在小鼠体内刺激产生较强的体液和细胞免疫应答,并各有特点;均可显著减少感染小鼠体内的脾荷菌数,表明其可抵抗MTB的感染,但这种保护作用均未超过BCG。上述结论为进一步研究HSP65疫苗的免疫学特性及与其他疫苗的优势组合,用于TB新型疫苗的开发提供了实验数据和物质基础。

关键词：结核分支杆菌 HSP65 原核重组质粒真核重组质粒

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结核分支杆菌H<,37>R<,V>细胞壁中LAM同种型的结构分析与功能鉴定

结核分支杆菌H<,37>R<,V>细胞壁中LAM同种型的结构分析与功能鉴定

引用

作者：张囡囡大连医科大学

学位级别：硕士

目的:1.建立一种简便、高效、快捷的提纯LAM的方法.2.分离纯化H<,37>R<,V> LAM的同种型.3.H<,37>R<,V> LAM同种型的结构分析和功能鉴定,为深入了解LAM的免疫机制奠定基础.结论... 详细信息

目的:1.建立一种简便、高效、快捷的提纯LAM的方法.2.分离纯化H<,37>R<,V> LAM的同种型.3.H<,37>R<,V> LAM同种型的结构分析和功能鉴定,为深入了解LAM的免疫机制奠定基础.结论:1.该实验建立了一种简便,快捷的提纯LAM的方法.此方法收获量大,纯度高,并且适用于对各种菌株中LAM的提纯.2.利用疏水亲和层析获得了三种R<,V>LAM的同种型.3.三种R<,V>LAM的同种型在平均分子量及对抗LAM的单克隆抗体C-S35反应上无明显差异.4.R<,V>LAM的同种型Ⅰ,Ⅱ与Ⅲ在亲水端的单糖数量上有所差异,表现为亲水性的不同.5.三种H<,37>R<,V>LAM同种型的疏水端含有相同成分的脂肪酸,但在各自的含量上有很大差异.6.三种同种型在免疫特性上并不完全相同.7.双向电泳将LAM根据等电点的不同分离为更多的LAM分子,这为对LAM异质性的进一步研究提供了新的方法.

关键词：结核分支杆菌 LAM 疏水性亲和层析同种型甘露糖帽脂肪酸

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结核分支杆菌高特异性分子信标设计及荧光芯片运用的初步研究

结核分支杆菌高特异性分子信标设计及荧光芯片运用的初步研究

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作者：匡红第三军医大学

学位级别：硕士

目前对结核分支杆菌(Bacillus Tuberculosis,TB)的检测,主要靠痰涂片、培养及PCR检测等技术,存在耗时长,敏感度低和特异性差等缺点,常常导致误诊和漏诊,从而给病人带来巨大的经济负担。因此建立快速、敏感、简便的结核分支杆菌鉴定检测... 详细信息

目前对结核分支杆菌(Bacillus Tuberculosis,TB)的检测,主要靠痰涂片、培养及PCR检测等技术,存在耗时长,敏感度低和特异性差等缺点,常常导致误诊和漏诊,从而给病人带来巨大的经济负担。因此建立快速、敏感、简便的结核分支杆菌鉴定检测系统是目前国内外实验诊断学急需解决的问题,也是有效治疗和控制该类致病菌的有效手段之一。本研究通过自行设计结核分支杆菌高特异性的分子信标,并以其为探针固定在芯片表面,从而将分子信标探针的高灵敏性、高特异性优势运用于生物芯片领域,建立了一种快速鉴定结核分支杆菌的分子信标探针荧光芯片技术,为结核分支杆菌流行病学调查提供了新的技术手段。目的:设计结核分支杆菌高特异性的分子信标并构建分子信标探针型荧光芯片,建立快速鉴定结核分支杆菌的检测技术。方法: 1.根据GenBank找到结核分支杆菌基因序列,选择序列号为IS986的基因序列,在Primer Premier V5.0软件上设计结核分支杆菌特异性引物。并对反应体系中MgCl2、引物、dNTP浓度以及引物退火温度优化后建立结核分支杆菌PCR反应扩增体系。通过对TB标准株、TB临床分离株和临床阳性标本扩增产物的直接测序、灵敏性试验以及特异性试验对PCR反应体系进行综合评估。 2.从TB PCR反应体系的扩增片段内部取一段序列设计,经用beacon designer 2.1软件分析设计分子信标。对反应体系中的分子信标探针、MgCl2、引物以及dNTP的浓度进行优化后建立TB分子信标直接加入PCR扩增体系的杂交试验。 3.通过对杂交温度、杂交时间以及杂交方式的优化,建立PCR反应后再加入TB分子信标杂交试验。 4.运用荧光分光光度计和荧光显微镜对MB PCR杂交产物荧光信号的观测条件进行摸索。并进行不同荧光-淬灭分子对标记分子信标的观测试验。 5.通过对传统生物素(biotin)-亲和素(avidin)连接方式和自行设计的单侧延长臂的分子信标连接方式的对比研究,对TB分子信标与芯片固定方式进行探索。 6.提高单侧延长臂的分子信标芯片杂交效率部分优化包括:5/寡核苷酸探针浓度;分子信标探针浓度及纯度;杂交温度、杂交时间、杂交液配方;点样大小与点样浓度对荧光信号检测的影响;阴-阳性区分的临界值。 ***-MB芯片的临床应用和方法学比较。主要结果: *** PCR反应体系阳性扩增结果为在琼脂糖凝胶电泳上出现245bp的条带。MgCl2、引物以及dNTP在TB PCR体系中优化后最佳终浓度分别为:4mmol/L、0.04μmol/L以及0.3 mmol/L。TB PCR体系的退火温度优化后为55℃。TB标准株及TB临床分离株和临床阳性标本扩增产物的直接测序结果与GenBank中公布的序列完全一致。TB PCR反应体系对其它细菌无交叉反应。检测限度为10拷贝/μl的DNA。 ***分子信标直接加入PCR扩增体系的TB分子信标、MgCl2、引物以及dNTP最佳终浓度分别为:0.04μmol/L、5.0mmol/L、0.04μmol/L、0.3mmol/L。 ***反应后再加入TB分子信标杂交试验中水浴、PCR仪、恒温摇床的最适杂交温度和适杂时间分别为:55℃,6h;55℃,4h;50℃,7h。阴-阳性效果区分:水浴﹥恒温摇床﹥PCR仪。 4.荧光分光光度仪检测MB PCR杂交阳性产物、MB PCR杂交阴性产物(茎环结构未打开)、无游离分子信标探针PCR产物(空白对照)三者的荧光光亮度比值为:6.102/0.136/0.003。荧光显微镜观测MB PCR杂交阳性产物、MB PCR杂交阴性产物(茎环结构未打开)荧光强度明显区别。本试验Cy3-BDH组成分子信标荧光-淬灭效率较Cy3-DABCLYE高,FAM- DABCLYE组成分子信标荧光-淬灭效率较FAM–BDH高。 5.生物素-亲和素(biotin-avidin)能很好的结合在芯片上但这种修饰有相当技术难度;且生物素-亲和素连接无特异性。本设计单侧延长臂分子信标采用淬灭分子中间标记,茎结构单侧(淬灭分子一侧)延长臂,能很好的结合在芯片上,且修饰技术难度低、特异性高。 6.单侧延长臂分子信标芯片杂交效率的优化结果:5/寡核苷酸探针最适浓度为40μmol/L。对较理想区分阴阳性的信号强度:Cy3-BDH荧光-淬灭分子对标记分子信标探针浓度约10μmol/L,而FAM-DABCLYE分子对标记分子信标探针浓度约15μmol/L,经65℃杂交17h有

关键词：结核分支杆菌分子信标 PCR 单侧延长臂分子信标荧光芯片

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