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绵羊痒螨钙网蛋白对兔外周血单个核细胞Th1/Th2和Th17/Treg免疫平衡的影响

畜牧兽医学报 2025年第4期56卷 1910-1918页

作者：李艳娥梁友萍樊洁吴芳燕尧香悦李毛却乎次仁仓决郝桂英古小彬四川农业大学动物医学院青海省黄南藏族自治州泽库县畜牧兽医站西藏日喀则市定日县加措乡农牧综合服务中心西昌学院动物科技学院

旨在探讨绵羊痒螨钙网蛋白（PsoCRT）对健康新西兰兔外周血单个核细胞（PBMC）Th1/Th2和Th17/Treg免疫平衡的影响。采用RT-PCR技术从绵羊痒螨混合阶段虫体总RNA中扩增得到去除信号肽的PsoCRT基因，经原核表达、纯化后得到重组蛋白（rPso... 详细信息

旨在探讨绵羊痒螨钙网蛋白（PsoCRT）对健康新西兰兔外周血单个核细胞（PBMC）Th1/Th2和Th17/Treg免疫平衡的影响。采用RT-PCR技术从绵羊痒螨混合阶段虫体总RNA中扩增得到去除信号肽的PsoCRT基因，经原核表达、纯化后得到重组蛋白（rPsoCRT）;分别以5、10、20、40、80μg·mL-1rPsoCRT刺激兔PBMC,利用荧光定量PCR检测细胞中Th1/Th2、Th17/Treg主效细胞因子（IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10）和关键转录因子（T-bet、GATA-3、RORc、Foxp3）的转录水平。结果显示：PsoCRT基因全长1 254 bp,属于典型的钙网蛋白家族；原核表达获得重组蛋白rPsoCRT大小约64 ku,可促进兔PBMC中Th1细胞IFN-γ和T-bet转录水平的升高，但抑制Th2细胞IL-4转录，而对GATA-3转录无影响，导致IFN-γ/IL-4和T-bet/GATA-3比值升高，平衡向Th1发生偏移；Th17细胞IL-17A和Treg细胞Foxp3 mRNA转录水平下降，而IL-10和RORc转录水平无显著变化，导致IL-17A/IL-10和RORc/Foxp3比值降低，平衡向Treg发生偏移。综上，PsoCRT可引起兔PBMC中Th1/Th2和Th17/Treg主效细胞因子和转录因子转录水平失衡，导致宿主免疫平衡偏向Th1和Treg免疫应答。

关键词：绵羊痒螨钙网蛋白 Th1/Th2 Th17/Treg 免疫平衡

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绵羊痒螨重组精氨酸激酶诱导兔皮肤嗜酸性粒细胞的聚集

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畜牧兽医学报 2023年第5期54卷 2186-2194页

作者：黄翠锐郝桂英周宇田焱杨富升唐丽杨光友谢跃何冉徐璟古小彬四川农业大学动物医学院成都611130 西昌学院动物科学学院西昌615013

本研究旨在探究绵羊痒螨精氨酸激酶(arginine kinase of Psoroptes ovi s,Pso AK)对兔皮肤嗜酸性粒细胞聚集的影响。以永生化角质形成细胞(HaCaT)和痒螨致敏兔分别为体外模型和体内模型,重组Pso AK(r Pso AK)分别刺激HaCaT细胞和皮内注... 详细信息

本研究旨在探究绵羊痒螨精氨酸激酶(arginine kinase of Psoroptes ovi s,Pso AK)对兔皮肤嗜酸性粒细胞聚集的影响。以永生化角质形成细胞(HaCaT)和痒螨致敏兔分别为体外模型和体内模型,重组Pso AK(r Pso AK)分别刺激HaCaT细胞和皮内注射痒螨致敏兔后,采用RT-qPCR检测重组蛋白处理后HaCaT细胞和注射部位兔皮肤组织中与嗜酸性粒细胞聚集相关因子(IL-4、IL-5、IL-13、TSLP、IL-25、IL-33、CCL5、CCL11、IL-4R)转录水平,以及通过变色酸2R特殊染色观察,并统计兔皮肤组织中聚集的嗜酸性粒细胞数量。结果表明,与空白和载体蛋白对照组相比,0.1μg·mL^(-1)r Pso AK可显著促进HaCaT细胞中IL-13、IL-33、CCL5和CCL11转录水平的增加(P<0.05),以及兔皮肤内IL-4R和CCL5转录水平的增加(P<0.01),其他因子无显著变化(P>0.05);同时,与PBS和载体蛋白对照组相比,r Pso AK可诱导皮肤中嗜酸性粒细胞的数量极显著增加(P<0.001)。综上所述,Pso AK能够促进部分嗜酸性粒细胞聚集相关细胞因子和趋化因子转录水平的增加,且诱导兔皮肤内嗜酸性粒细胞的聚集,表明Pso AK是引发痒螨病皮损区嗜酸性粒细胞聚集的抗原分子,其参与了绵羊痒螨感染的致病过程。

关键词：绵羊痒螨重组精氨酸激酶兔皮肤嗜酸性粒细胞聚集

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绵羊痒螨重组丝氨酸蛋白酶抑制剂对小鼠银屑病样皮肤炎症的影响

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畜牧兽医学报 2024年第12期55卷 5774-5783页

作者：田焱杨富升李艳娥梁友萍樊洁吴芳燕古小彬四川农业大学动物医学院成都611130

课题组前期发现绵羊痒螨的重组丝氨酸蛋白酶抑制剂4和5(recombinant serine protease inhibitors 4 and 5,r Pso SP4和r Pso SP5)可体外抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶的活性,因此推测其可能具有抗炎活性,为证实上述推测,评价了r P... 详细信息

课题组前期发现绵羊痒螨的重组丝氨酸蛋白酶抑制剂4和5(recombinant serine protease inhibitors 4 and 5,r Pso SP4和r Pso SP5)可体外抑制糜蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶的活性,因此推测其可能具有抗炎活性,为证实上述推测,评价了r Pso SP4和r Pso SP5是否可以改善小鼠银屑病样皮肤炎症。BALB/c小鼠随机分为5组,用凡士林或咪喹莫特乳膏(imiquimod cream,IMQ)连续涂抹背部皮肤6 d,建立空白对照组和银屑病模型,期间模型组每日皮内注射PBS(IMQ组)或pET32a(+)载体蛋白(IMQ+pET32a(+)组)或r Pso SP4(IMQ+r Pso SP4组)或r Pso SP5(IMQ+r Pso SP5组),每天观察小鼠银屑病样皮损区变化,于第7天处死小鼠,比较各组皮损组织病理变化和皮损组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的转录水平。结果表明:IMQ造模成功,小鼠呈现典型的银屑病样皮损;与模型组(IMQ组)相比,IMQ+r Pso SP4组可有效改善小鼠银屑病样皮损,包括显著抑制小鼠体重减轻(第4~6天,P<0.05,P<0.01,P<0.001)和皮损区红斑(第5~6天)、鳞屑(第4~6天)、皮肤增厚程度(第4~6天)及PASI评分(第3~6天)显著减少(P<0.05,P<0.001)。此外,与IMQ组相比,IMQ+r Pso SP4组皮损区组织病理损伤显著减轻,表皮厚度显著降低(P<0.05),浸润的炎性细胞数量极显著减少(P<0.001),皮损区IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平极显著降低(P<0.001,P<0.0001),而IMQ+r Pso SP5组对小鼠银屑病样皮损无明显改善。综上,r Pso SP4可显著改善小鼠银屑病样皮损,具有显著的抗炎活性,而r Pso SP5的抗炎活性不明显。

关键词：绵羊痒螨 r Pso SP4 r Pso SP5 银屑病样皮肤炎症抗炎活性

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绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子重组蛋白对兔外周血单个核细胞Th1/Th2型和Th17/Treg型特征因子表达的影响

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畜牧兽医学报 2020年第3期51卷 594-601页

作者：郑友乐陈宇航谢跃杨光友何冉古小彬四川农业大学动物医学院动物寄生虫病研究中心成都611130

为了初步探讨绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子(PoMIF)对健康新西兰兔外周血单个核细胞(PBMC)中Th1/Th2和Th17/Treg细胞平衡的变化。采用RT-PCR从绵羊痒螨总RNA中扩增得到MIF全长基因,经原核表达、纯化重组PoMIF(rPoMIF)蛋白,并分析其氧化... 详细信息

为了初步探讨绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子(PoMIF)对健康新西兰兔外周血单个核细胞(PBMC)中Th1/Th2和Th17/Treg细胞平衡的变化。采用RT-PCR从绵羊痒螨总RNA中扩增得到MIF全长基因,经原核表达、纯化重组PoMIF(rPoMIF)蛋白,并分析其氧化还原酶和互变异构酶活性。筛选与健康新西兰兔PBMC孵育的最佳rPoMIF浓度,且用最佳浓度rPoMIF(0.2μg·mL^-1)与PBMC共同孵育0、1、6、12、24、36 h后收集细胞,用荧光定量PCR检测其Th1/Th2/Th17/Treg细胞相对应的特征性转录因子T-bet/GATA-3/RORc/Foxp3和特征性细胞因子IFN-γ/IL-4/IL^-17A/IL^-10 mRNA表达变化。结果表明:PoMIF全长363 bp,rPoMIF大小为32 ku(含pET32a标签蛋白19 ku),且具有互变异构酶活性;rPoMIF刺激后PBMC中Th1细胞的T-bet和IFN-γ先下降后上升,Th2细胞的GATA-3和IL-4均呈下降趋势,且T-bet/GATA-3和IFN-γ/IL-4比值在12、24和36 h均升高;Th17细胞的RORc和IL^-17A在各时间点下降,而Treg细胞的Foxp3和IL^-10在各时间点升高,且RORc/Foxp3和IL^-17A/IL^-10比值在各时间点均变低。rPoMIF可造成家兔外周血单个核细胞的Th1/Th2和Th17/Treg平衡分别向Th1和Treg偏移。

关键词：绵羊痒螨兔巨噬细胞迁移抑制因子外周血单个核细胞 Th1/Th2平衡 Th17/Treg平衡

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绵羊痒螨对新西兰兔Toll样受体及其信号通路相关分子转录水平的影响

绵羊痒螨对新西兰兔Toll样受体及其信号通路相关分子转录水平的影...

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作者：尹潇潇四川农业大学

学位级别：硕士

绵羊痒螨(Psoroptes ovis)寄生于羊、牛、兔等家养动物和麋鹿等野生动物皮肤表面导致以皮肤炎症、结痂、剧痒、消瘦和脱毛为主要临床特征的一种慢性、传染性外寄生虫病,给动物养殖业造成巨大经济损失,同时威胁野生动物的生存。炎症反应... 详细信息

绵羊痒螨(Psoroptes ovis)寄生于羊、牛、兔等家养动物和麋鹿等野生动物皮肤表面导致以皮肤炎症、结痂、剧痒、消瘦和脱毛为主要临床特征的一种慢性、传染性外寄生虫病,给动物养殖业造成巨大经济损失,同时威胁野生动物的生存。炎症反应的触发主要依赖于固有免疫系统中Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)对病原微生物的识别,从而激活细胞内相关信号转导通路,最终调节炎症因子、细胞因子和共刺激分子的表达和释放来抵御病原的感染。目前,尚未见绵羊痒螨感染宿主后所激活的TLRs及其信号通路的相关研究。因此,本研究拟从在体和离体模型去探究绵羊痒螨对新西兰兔TLRs及其信号通路相关分子的影响,以期为后续深入研究绵羊痒螨感染对宿主固有免疫系统的影响提供基础资料。1痒螨病患兔耳部皮肤及外周血中TLRs转录水平的表达以健康新西兰兔为对照,采用荧光定量PCR检测自然感染绵羊痒螨的新西兰兔TLRs的转录水平。结果显示:与健康新西兰兔相比,感染痒螨的新西兰兔耳部皮肤中,TLR4、5 mRNA表达量极显著上调(P<0.01),TLR8、10、11、12 mRNA表达量显著上调(P<0.05),而TLR1、6、9 mRNA表达量上调,但差异不显著(P>0.05);TLR3 mRNA表达量极显著下降(P<0.01),TLR2表达量下降,但差异不显著(P>0.05)。与健康新西兰兔相比,感染痒螨的新西兰兔外周血中,TLR1、2、4、10、12 mRNA表达量呈极显著上调(P<0.01),TLR 9 mRNA表达量显著上调(P>0.05);但TLR 6表达量下调,不具统计学差异(P<0.05),未检测到TLR3、5、8和11。上述结果表明,绵羊痒螨感染新西兰兔后可改变宿主皮肤和外周血各类TLRs的转录水平。2痒螨病患兔耳部皮肤及外周血中TLRs信号通路相关分子的表达以健康新西兰兔为对照,采用荧光定量PCR检测自然感染绵羊痒螨的新西兰兔的TLRs信号通路相关分子的转录水平。结果显示:与健康新西兰兔相比,感染痒螨的新西兰兔耳部皮肤中,TRIF、IL-8的mRNA表达量呈极显著上升(P<0.01),p38、ERK1/2和NF-κB mRNA表达量均表现出上升,不具有统计学差异(P>0.05),而MyD88 mRNA表达量下降,亦不具统计学差异(P>0.05)。与健康新西兰兔相比,感染痒螨的新西兰兔外周血中,p38、ERK1/2和NF-κB mRNA表达量均呈极显著上升(P<0.01),IL-8 mRNA表达量上升(P<0.05),且TRIF、MyD88 mRNA表达量上升(P>0.05)。上述结果表明,痒螨感染新西兰兔后可改变宿主皮肤与外周血TLRs信号通路相关分子的表达。3绵羊痒螨排泄分泌抗原对新西兰兔原代角质形成细胞TLRs及其信号通路相关分子的影响以新西兰兔原代角质形成细胞作为离体模型,采用荧光定量PCR检测绵羊痒螨排泄分泌抗原对该细胞TLRs及其信号通路关键分子的影响。结果表明:与未刺激组相比,经痒螨抗原刺激后的原代角质形成细胞TLR1、2、3、4、6、12 mRNA表达量呈极显著上升(P<0.01),TLR5、8、9表达量上升,不具统计学差异(P>0.05),而TLR10和TLR11未检测到有效表达。痒螨抗原刺激后的原代角质形成细胞较未刺激组细胞的TLRs信号通路中的关键下游分子MyD88、TRIF、p38、ERK1/2、NF-κB、IL-8 mRNA表达量均呈极显著上升(P<0.01)。上述结果表明,绵羊痒螨排泄分泌抗原可改变新西兰兔原代角质形成细胞的TLRs及其信号通路关键分子的表达。

关键词：绵羊痒螨新西兰兔角质形成细胞 Toll样受体及其信号通路

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绵羊痒螨丝氨酸蛋白酶抑制剂PsoSP1和PsoSP2的原核表达及其诊断价值评估

绵羊痒螨丝氨酸蛋白酶抑制剂PsoSP1和PsoSP2的原核表达及其诊断价...

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作者：陈宇航四川农业大学

学位级别：硕士

绵羊痒螨(Psoroptes ovis)是各种野生动物和家养动物皮肤表面的主要寄生虫,以兔、绵羊和水牛为常见宿主,患病动物表现出皮肤炎症、瘙痒及结痂等临床症状,造成饲料转化率下降、产毛量降低等,甚至造成死亡,给养殖业造成巨大经济损失。尽... 详细信息

绵羊痒螨(Psoroptes ovis)是各种野生动物和家养动物皮肤表面的主要寄生虫,以兔、绵羊和水牛为常见宿主,患病动物表现出皮肤炎症、瘙痒及结痂等临床症状,造成饲料转化率下降、产毛量降低等,甚至造成死亡,给养殖业造成巨大经济损失。尽早诊断所有患病动物是防控痒螨病的前提,但现有结痂镜检的病原学诊断方法对早期和隐形感染病例极易漏检,因此,急需开发痒螨病的早期诊断方法。丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)参与了多种寄生虫的抗凝血、繁殖发育和抑制宿主免疫反应等重要生物学过程,且在蠕虫病中具有较高的血清学诊断价值。本研究在课题组前期组学揭示***中存在Serpin基础上,扩增和原核表达***的2种Serpin(PsoSP1和PsoSP2)基因,并分析其在***不同发育阶段的表达量与定位;建立上述2种重组蛋白的间接ELISA,并评价其对兔痒螨病的血清学诊断作用与早期诊断效果。一、绵羊痒螨PsoSP1和PsoSP2基因的原核表达、转录水平与虫体定位分析本研究经扩增成功获得PsoSP1和PsoSP2基因片段长度分别约1572 bp和723bp,经原核表达获得重组融合蛋白rPsoSP1和rPsoSP2分别约75 k Da和46.29 k Da,且2种重组融合蛋白均能被患痒螨病的阳性兔血清识别,表明具有反应原性。实时荧光定量PCR结果显示PsoSP1和PsoSP2基因在雌螨中的表达量极显著高于雄螨、幼螨和若螨(P<0.01),且成虫、幼虫PsoSP1的表达量高于PsoSP2。免疫荧光组化结果显示PsoSP1定位于雌螨的卵巢,PsoSP2定位于雌螨的口器。本研究结果为阐明PsoSP在***生理活动中的作用及后续重组蛋白诊断方法的建立打下基础。二、绵羊痒螨rPsoSP1和rPsoSP2用于兔痒螨病的血清学诊断价值评估本研究以上述获得的2种绵羊痒螨rPsoSP1和rPsoSP2作为包被抗原,建立间接ELISA方法并评价其在兔痒螨病中的早期诊断价值。结果显示以rPsoSP1建立的间接ELISA方法(rPsoSP1-iELISA)的最佳包被浓度为46μg/m L,临界值为0.633,敏感性和特异性分别为96.00%和90.91%;以重组蛋白rPsoSP2建立的间接ELISA方法(rPsoSP2-iELISA)的最佳包被浓度为64.5μg/m L,临界值为0.490,敏感性和特异性分别为90.00%和78.18%;rPsoSP1-iELISA的曲线下面积(AUC)(0.983)较rPsoSP2-iELISA的AUC(0.956)更接近1,表明rPsoSP1较rPsoSP2有更高的血清学诊断价值,故选用rPsoSP1-iELISA进行早期诊断评价,发现该诊断方法在新西兰兔感染***后第2周(无明显结痂症状)的血清阳性率达80%(8/10),第4周阳性率达(100%),表明rPsoSP1具有早期诊断兔痒螨病的作用。进一步采用rPsoSP1-iELISA检测有***流行史的某兔场共158份血清,发现兔血清的阳性率为52.53%(83/158),高于传统病原学诊断的阳性率(11.39%,18/158)。综上,rPsoSP1-iELISA可用于兔痒螨病的血清学诊断与早期诊断,且该方法较传统病原学诊断方法能检测出更多的亚临床感染病例,为今后兔痒螨病的诊断和控制提供技术支持。

关键词：绵羊痒螨丝氨酸蛋白酶抑制剂转录水平与蛋白定位间接ELISA 兔血清学诊断

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绵羊痒螨重组巨噬细胞迁移抑制因子诱导兔皮肤嗜酸性粒细胞聚集

绵羊痒螨重组巨噬细胞迁移抑制因子诱导兔皮肤嗜酸性粒细胞聚集

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作者：葛优四川农业大学

学位级别：硕士

绵羊痒螨(Psoroptes ovis)是寄生于家养和野生动物皮肤表面的一种常见外寄生虫,其具有高度传染性,给养殖业造成严重经济损失,同时危害野生动物的生存。***引起的皮肤损伤是宿主的主要病变,皮损区呈现以嗜酸性粒细胞(EOS)浸润为主的皮肤... 详细信息

绵羊痒螨(Psoroptes ovis)是寄生于家养和野生动物皮肤表面的一种常见外寄生虫,其具有高度传染性,给养殖业造成严重经济损失,同时危害野生动物的生存。***引起的皮肤损伤是宿主的主要病变,皮损区呈现以嗜酸性粒细胞(EOS)浸润为主的皮肤炎症反应,且EOS的数量与***感染严重程度和易感性密切相关,表明EOS的聚集可能对***致病具有重要作用,但具体哪些***抗原可促进EOS聚集尚不清楚,有待进一步研究。巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)被证实可促进EOS成熟和趋化,利于组织EOS浸润,课题组前期分析发现***转录组中存在MIF同源基因,故推测***的MIF可能被虫体分泌至皮损区促进宿主皮肤EOS聚集。因此,本研究拟从离体和在体模型去证实上述推测,为进一步理解***的致病过程奠定理论基础。一、绵羊痒螨MIF的虫体转录水平与组织定位本研究经生物信息学分析发现绵羊痒螨MIF(PoMIF)含2个α螺旋、6个β折叠和MIF保守结构域,三级结构呈典型的三聚体形式,符合MIF家族结构特征,且Po MIF在NJ树中与宿主MIF处于不同的分支,亲缘关系较远。荧光定量PCR结果显示,Po MIF基因在雌螨中的表达量极显著高于雄螨、幼螨和若螨(P<0.01),且其在饥饿虫体中的表达量极显著高于饱食虫体(上调8.9倍)(P<0.01)。免疫荧光定位显示,天然Po MIF蛋白主要分布于雌螨的卵巢和输卵管,其在皮损区分布于表皮的棘层和颗粒层,表明该蛋白可被虫体所分泌。综上,Po MIF是一种排泄分泌蛋白,且其可能参与了***虫体的生理发育过程。二、rPoMIF对致敏兔PBMC和HaCaT细胞嗜酸性粒细胞浸润相关因子转录水平的影响本研究以致敏兔(allergic rabbits)的外周血单个核细胞(PBMC)和人永生化角质形成细胞(Ha Ca T)为体外模型,CCK8筛选重组Po MIF(r Po MIF)最佳刺激浓度和作用时间,在最佳条件处理后,经荧光定量PCR检测嗜酸性粒细胞浸润相关分子的转录水平。结果显示r Po MIF刺激PBMC和Ha Ca T的最适浓度分别为1μg/m L和100 ng/m L,最适处理时间均为24 h;最佳刺激条件下,r Po MIF可显著上调兔PBMC和Ha Ca T趋化因子CCL5、CCL11的表达水平(P<0.05),同时上调Ha Ca T细胞因子IL-3、IL-4和IL-5的表达,但对IL-13的表达无显著影响。而在PBMC中,r Po MIF仅轻微促进细胞因子IL-4、IL-5和IL-13表达,但无显著影响。综上,r Po MIF可上调兔PBMC和Ha Ca T细胞嗜酸性粒细胞浸润相关基因的表达。三、rPoMIF对兔皮肤嗜酸性粒细胞聚集的影响本研究以***致敏兔为在体模型,皮内注射rPoMIF,收集各注射点皮肤,观察组织病理学变化及嗜酸性粒细胞计数。结果发现,r Po MIF引起皮肤真皮层毛细血管扩张、出血以及嗜酸性粒细胞聚集,其中嗜酸性粒细胞的数量比PBS和p ET32a空载蛋白注射组高约30倍(P<0.0001)。荧光定量PCR检测发现r Po MIF显著促进皮肤中细胞因子IL-5,趋化因子CCL5和CCL11以及细胞黏附受体P-选择素和ICAM-1的表达,而对IL-4和IL-13无显著影响。用Miles assay评价r Po MIF对血管通透性的影响。结果显示r Po MIF极显著地增强了染料复合物从血管中的渗出,是PBS对照组的3.6倍。上述结果表明r Po MIF皮内注射可促进皮肤中嗜酸性粒细胞聚集。

关键词：绵羊痒螨排泄分泌蛋白巨噬细胞迁移抑制因子嗜酸性粒细胞聚集

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绵羊痒螨重组MIF蛋白刺激兔角质形成细胞的转录组学分析与其对细胞增殖和凋亡的影响

绵羊痒螨重组MIF蛋白刺激兔角质形成细胞的转录组学分析与其对细...

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作者：郑友乐四川农业大学

学位级别：硕士

绵羊痒螨(Psoroptes ovis)是寄生于家养和野生动物皮肤表面的主要寄生虫,给养殖业造成巨大的经济损失,表皮角质形成细胞是***与宿主接触的第一道细胞和主要靶细胞,因此,本研究以角质形成细胞作为体外模型,探究绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制... 详细信息

绵羊痒螨(Psoroptes ovis)是寄生于家养和野生动物皮肤表面的主要寄生虫,给养殖业造成巨大的经济损失,表皮角质形成细胞是***与宿主接触的第一道细胞和主要靶细胞,因此,本研究以角质形成细胞作为体外模型,探究绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子重组蛋白(rPocMIF)功能,以期为理解痒螨病致病机理提供更多依据。1绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子(PocMIF)的原核表达和酶活测定PocMIF基因含357 bp的开放阅读框,编码118个氨基酸,预测相对分子质量为13.00 ku;经p ET-32a(+)表达后的重组蛋白(rPocMIF)主要以上清形式存在,镍柱纯化后SDS-PAGE显示约32 ku的单一条带,符合预期大小;纯化后rPocMIF的内毒素含量为0.029 EU/m L,符合要求,且rPocMIF具有互变异构酶活性,活性随浓度增加而增加。2 rPocMIF刺激兔角质形成细胞的转录组学分析RNA-seq技术分析rPocMIF刺激兔原代角质形成细胞不同时相(1、6、12、24 h)。结果显示,蛋白处理组共鉴定出15183个m RNA序列;与阴性对照组比,蛋白处理组刺激1、6、12和24 h共有的显著变化m RNA 711个;GO和pathway通路富集分析揭示与细胞周期、细胞分化和河马通路等占优势;将差异基因富集到25个趋势模型中,其中9种趋势富集显著;PPI分析得出的hub蛋白主要和细胞的增殖、凋亡、分化相关;qPCR结果与转录组的结果趋势一致。综上,rPocMIF具有调节角质形成细胞增殖和凋亡的潜在作用,但有待进一步证实。3 rPocMIF对兔角质形成细胞细胞增殖和凋亡的影响初探rPocMIF刺激兔原代角质形成细胞12、24、36、48、60、72 h,用CCK8试剂盒检测细胞增殖情况,同时用流式细胞术检测蛋白刺激48 h后的细胞凋亡情况。结果显示,与空载蛋白组和阴性组相比,rPocMIF刺激36～72 h角质形成细胞的增殖水平显著(P<0.05)升高,rPocMIF刺激48 h的角质形成细胞总凋亡率和早期凋亡率都显著下降(P<0.05)。上述结果表明,rPocMIF可促进兔角质形成细胞的增殖和抑制其凋亡。

关键词：绵羊痒螨巨噬细胞迁移抑制因子角质形成细胞转录组学增殖凋亡

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绵羊痒螨发育分期观察及生物学特性研究

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中国兽医科技 2000年第7期30卷 5-7页

作者：陈志蓉连宏军徐雪平范进江王宏伟新疆农垦科学院新疆石河子832000 石河子紫泥泉种羊场新疆石河子832025

经动物感染试验 ,对绵羊痒螨主要虫期的形态特征、发育变化、寄生行为以及生活史进行了观察。绵羊痒螨的发育经过卵、幼螨、若螨、成螨 4个发育阶段 ,每阶段有一静止蜕皮转变期 ,其若二螨与雄螨在交配前期的徘徊行为 ,雌痒螨的带卵越冬... 详细信息

经动物感染试验 ,对绵羊痒螨主要虫期的形态特征、发育变化、寄生行为以及生活史进行了观察。绵羊痒螨的发育经过卵、幼螨、若螨、成螨 4个发育阶段 ,每阶段有一静止蜕皮转变期 ,其若二螨与雄螨在交配前期的徘徊行为 ,雌痒螨的带卵越冬使痒螨世代发展延续。自然变温与恒温条件下离体痒螨的观察表明 ,痒螨产卵、孵化、静止脱皮以及各期的发育受温度的影响较大 ,3 0℃是痒螨发育的最适温区 ,2 0 2 6℃发育迟缓呈延长倾向 ,高于 40℃或低于 10℃会导致发育、繁殖停滞。

关键词：绵羊痒螨发育期生物学特性

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绵羊痒螨的生物学特性及其危害与防制研究

绵羊痒螨的生物学特性及其危害与防制研究

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作者：陈志蓉西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究对新疆地区绵羊痒螨病的流行情况及发生危害进行了详细的调查,通过动物感染试验、同步跟踪调查,重点研究了绵羊痒螨的生长发育、繁殖规律、寄生习性等生物学特性,揭示了绵羊痒螨病在新疆特定地理环境和气候条件下季节发生的规律... 详细信息

本研究对新疆地区绵羊痒螨病的流行情况及发生危害进行了详细的调查,通过动物感染试验、同步跟踪调查,重点研究了绵羊痒螨的生长发育、繁殖规律、寄生习性等生物学特性,揭示了绵羊痒螨病在新疆特定地理环境和气候条件下季节发生的规律及其危害性,探讨了防制绵羊痒螨病的早期诊断与病程判断方法。获得以下主要结论: 1、对新疆绵羊痒螨病的流行及发生原因的调查表明:绵羊痒螨病在新疆地区以群发和区域性流行为主。流通羊只管理失范,成为绵羊痒螨病发生的隐患;而同区域内防制措施的不统一,用口服、注射药物替代药浴的做法,以及药浴防制质量不高、监督管理不严等是近年来绵羊痒螨病流行的主要原因。 2、绵羊痒螨的季节发生动态与传播方式的研究显示:春、秋季是绵羊痒螨病的高发期,春季绵羊痒螨病的发生(4～5月)时间较短,但随着炎热、干燥的夏季(6～7月)的到来,绵羊痒螨的发育受到抑制,进入潜伏期;该病以秋季的发生(8～12月)持续时间最长,危害最严重,但当严冬来临(1月下旬至2月中旬)绵羊痒螨又进入潜伏期,并仅以成雌螨这一种虫态滞育越冬。研究还表明羊只相互间的直接接触是本病传播的主要途径,由于新疆地区春、秋发病季节早晚温差较大,夜间动物的紧密接触可直接导致本病的迅速蔓延。 3、绵羊痒螨生物学特性的研究显示:绵羊痒螨历经卵、幼螨、若螨、成螨四个发育阶段。卵的发育经过胚盘期、胚带期、鄂体期、前足期、后足期、末体期和胚熟期七期。适宜的气候条件下,绵羊痒螨一个繁殖周期(从卵到再产卵)约需12d,雌螨每天约产1枚卵。外界温、湿度、光照强度等因素对绵羊痒螨发育和活动行为均有较为明显的影响:绵羊痒螨表现出对环境具有较强的敏感性、适应性和忍耐力;绵羊痒螨还有明显的负趋光性,畏光,怕高热等特点。自然变温与恒温条件下离体绵羊痒螨生存期的观察表明:绵羊痒螨产卵、孵化、静止蜕皮以及各期的发育受温度的影响较大,30℃是绵羊痒螨发育的最适温度,20～26℃发育迟缓呈延长倾向,高于40℃或低于10℃会导致发育受阻、死亡加快。 4、对绵羊痒螨寄生侵蚀危害的研究发现:绵羊痒螨的寄生由点状侵蚀逐渐向周围扩散形成多个灶点,随着病情的发展各病灶相接,连成成片的侵蚀区,同时对宿主寄生部位皮组织的损伤程度也随病程的深入而加重。对离体绵羊痒螨重新回归动物体的试验显示:离体绵羊痒螨具有较强的忍饥耐低温能力,只要在外界能存活下来,其重回羊体后可造成同样的侵蚀危害。 5、对绵羊痒螨病早期诊断、病程判断与防制研究方面:在临床上可直接通过对寄生部的侵蚀观察,依据病灶的大小、侵蚀程度、痂皮状况、原母灶位置以及灶周围绵羊痒螨的寄生状态而初步判断螨病的感染处于何期。并根据绵羊痒螨怕热、畏光等生物学特性,采取加热法、光照法等方法检出病原予以确诊。这些方法对没有实验室条件的农牧团场或在野外放牧条件下都非常适用,且方法简便可行,较为准确,可及时采取相应的治疗措施,将螨病危害降低到最小程度。

关键词：绵羊痒螨生物学特性寄生侵蚀诊断

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