检索结果-内蒙古大学图书馆

国际中医中药杂志 2011年第9期33卷 807-810页

作者：陈凯曹炜徐瑞霞郭小文王阶浙江省新华医院风湿病科杭州310005 中国中医科学院广安门医院风湿病科北京100053 中国中医科学院广安门医院心血管病科北京100053 中国医学科学院阜外心血管病医院中心实验室北京100037 北京中医药大学2009级硕士研究生 100029

目的在体外以缺氧无血清诱导大鼠骨髓问充质干细胞（BMSCs）凋亡，探讨丹酚酸B抗缺氧无血清诱导的大鼠BMSCs凋亡作用。方法体外分离、培养大鼠BMSCs，用分别含0．1、l、10、100mg／L丹酚酸B的完全培养液预处理1h后用磷酸盐缓冲液冲洗2... 详细信息

目的在体外以缺氧无血清诱导大鼠骨髓问充质干细胞（BMSCs）凋亡，探讨丹酚酸B抗缺氧无血清诱导的大鼠BMSCs凋亡作用。方法体外分离、培养大鼠BMSCs，用分别含0．1、l、10、100mg／L丹酚酸B的完全培养液预处理1h后用磷酸盐缓冲液冲洗2次，再加入含0．1、1、10、100mg／L丹酚酸B的不含血清培养液，共4组，然后与凋亡模型组一起缺氧培养6h，正常对照组常规培养6h，采用Hoechst染色及倒置相差、荧光显微镜观察和AnnexinV／PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡。结果缺氧无血清可引起大鼠BMSCs明显凋亡，0．1、1、10mg／L丹酚酸B处理组大鼠BMSCs早期凋亡率较模型组显著降低（P〈0．05）；而中晚期凋亡率和凋亡模型组比较无统计学差异。结论0．1、1、10mg／L丹酚酸B可抗缺氧无血清诱导的大鼠BMSCs早期凋亡，从而提高移植干细胞的存活率。

关键词：丹酚酸B 骨髓间充质干细胞缺氧无血清凋亡

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阿托伐他汀抗缺氧无血清条件下小鼠心肌干细胞凋亡的作用

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中国分子心脏病学杂志 2016年第4期16卷 1787-1791页

作者：李清李娜田夏秋黄沛森陈桂浩徐珺杨跃进北京协和医学院中国医学科学院国家心血管病中心阜外医院心血管疾病国家重点实验室冠心病中心北京市100037

目的在体外缺氧无血清条件下模拟心肌缺氧微环境,研究阿托伐他汀(Atorvastatin,ATV)对小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells,CSCs)的抗凋亡作用及可能发挥作用的分子机制。方法分离培养小鼠CSCs,在缺氧无血清条件下用ATV处理12 h,应用流... 详细信息

目的在体外缺氧无血清条件下模拟心肌缺氧微环境,研究阿托伐他汀(Atorvastatin,ATV)对小鼠心肌干细胞(cardiac stem cells,CSCs)的抗凋亡作用及可能发挥作用的分子机制。方法分离培养小鼠CSCs,在缺氧无血清条件下用ATV处理12 h,应用流式细胞术和Hoechst 33342荧光染色观察细胞凋亡,并利用Western blotting方法检测通路蛋白单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的磷酸化水平。结果缺氧无血清条件引起明显的细胞凋亡,ATV处理组细胞凋亡率显著降低(p<0.05),且呈一定的浓度依赖性。ATV处理组AMPK磷酸化水平明显升高(p<0.05),加入AMPK阻断剂CompoundC可以显著阻断这种效应。结论在缺氧无血清条件下,一定浓度的ATV对CSCs具有显著抗凋亡作用,且AMPK/mTOR通路可能参与了该过程。

关键词：阿托伐他汀缺氧无血清心肌干细胞凋亡 AMPK

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溶血磷脂酸对骨髓间充质干细胞凋亡和自噬的调节及其相互关系的研究

溶血磷脂酸对骨髓间充质干细胞凋亡和自噬的调节及其相互关系的研...

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作者：王宪云北京协和医学院

学位级别：博士

干细胞移植因其可能促进心肌梗死(myocardial infarction, MI)后损伤心肌的修复和再生已经成为当前的研究热点。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, MSCs)具备许多其它干细胞没有的优点而被认为是细胞移植治疗心肌... 详细信息

干细胞移植因其可能促进心肌梗死(myocardial infarction, MI)后损伤心肌的修复和再生已经成为当前的研究热点。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, MSCs)具备许多其它干细胞没有的优点而被认为是细胞移植治疗心肌梗死的理想种子细胞。MSCs主要通过分化成心肌细胞、促进血管新生或者旁分泌作用等实现心肌损伤后的修复。然而,心肌梗死导致心肌缺血缺氧和大量氧自由基的产生使移植的干细胞存活率急剧下降,严重影响了干细胞效应功能的发挥。因此,深入了解心脏微环境中干细胞凋亡和抗凋亡机制能够为提高干细胞的治疗效果提供有效的理论依据。我们之前的研究已经对缺氧无血清和过氧化氢刺激诱导的MSCs凋亡及其机制进行了深入研究,并且进一步证明了溶血磷脂酸(Lysophophatidic acid, LPA)作为一种内源性的生物活性磷脂信号小分子可以通过G蛋白偶联的LPA受体有效抑制缺氧无血清(hypoxia/serum deprivation, H/SD)诱导的MSCs的凋亡,但是LPA对过氧化氢诱导的MSCs凋亡是否起抑制作用尚不清楚。自噬是哺乳动物细胞降解和回收利用生物大分子和细胞器的主要代谢通路,在调节H/SD和氧化应激条件下细胞的存活和凋亡过程中起到了重要作用,但是自噬是否参与H/SD和过氧化氢条件下对MSCs的保护作用尚不明确。并且,LPA对自噬的作用是否有利于MSCs的存活也是一个未知数。因此,我们以大鼠骨髓间充质干细胞为研究对象,体外利用过氧化氢和缺氧无血清模拟心肌梗死后的氧化应激和缺血环境,研究LPA是否能够抑制过氧化氢诱导的大鼠MSCs凋亡,探讨自噬对过氧化氢和缺氧无血清环境诱导的MSCs凋亡所起的作用,并进一步验证LPA对自噬的调节是否参与LPA对MSCs凋亡过程的调节,并对其调节机制进行深入分析,最终达到对LPA调节的MSCs凋亡和自噬及其关系进行确认的目的。研究内容主要包括以下两部分： ***对过氧化诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的调节及其机理研究(1)H202诱导大鼠MSCs凋亡呈浓度和时间依赖性。不同浓度过氧化氢(50,100,150,200,250μM)处理MSCs不同时间(0,2,4,6,8h),Hoechst33342染色显示,随着H202浓度升高皱缩的细胞核和断裂的DNA的比率不断升高,Western blot结果实验显示随着处理时间延长活性caspase3的表达水平逐渐升高,其中250μM H2O2处理MSCs4h时,H202诱导的MSCs凋亡水平开始呈现出显著变化,因此这个处理条件作为制备氧化应激模型的基础条件。 (2)LPA显著抑制H202诱导的MSCs凋亡。表现为：利用不同浓度LPA(1,5,10,25,50μM)分别预处理1h后用H202处理4h,Hoechst33342染色显示受损细胞形态百分比明显降低,Western blot分析显示cleaved-caspase3的表达也明显降低,流式细胞学分析表明Annexin v+/pI和AnnexinV+/PI+细胞的比例明显降低,这些数据表明LPA能够显著抑制过氧化氢诱导的MSCs凋亡作用。 (3)LPA抑制H202诱导的凋亡主要通过Gi蛋白偶联的Lpar3受体激活PI3K/AKT和ERK1/2途径实现。表现在：①Lpar1/3受体抑制剂Ki16425和Gi蛋白特异抑制剂PTX显著逆转了LPA的抗凋亡作用,表现为cleaved-caspase3的表达升高和Annexin V+/PI-田胞百分比增加；②siRNA分别敲低Lparl和Lpar3, Western blot和流式细胞术结果证明Lpar3介导了抗过氧化氢诱导的凋亡作用；③siRNA分别敲低Gi2和Gi3的实验证明Gi2和Gi3蛋白同时参与了LPA介导的抗凋亡途径；④用LPA分别处理MSCs不同时间(0,5,10,15,30,60min),发现LPA分别在5min和10min可以激活AKT和ERK1/2的磷酸化,Ki16425和PTX可以有效抑制LPA激活AKT和ERK1/2通路；⑤ERK1/2通路抑制剂U0126和P13K通路抑制剂LY294002显著抑制了LPA的抗凋亡作用。这些数据表明,LPA可以通过Gi蛋白偶联的Lpar3受体激活P13K/AKT和ERK1/2信号通路抑制过氧化氢诱导的MSCs的凋亡 (4)过氧化氢诱导MSCs自噬对细胞存活起保护作用。表现为：①H202可诱导自噬标志物LC3B Ⅱ/Ⅰ比例的升高和P62表达下降,BECN的表达在各组间没有显著变化；②自噬激动剂GF109203x和抑制齐Bafilomycin A1处理MSCs显示GF109203x可以显著减弱过氧

关键词：溶血磷脂酸骨髓间充质干细胞过氧化氢缺氧无血清凋亡自噬

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