检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：杨静雅华中农业大学

学位级别：硕士

桃褐腐病是一种严重危害果树的真菌性病害,在我国分布极为广泛,全国主要的桃产区均有发生,对我国桃产业造成严重威胁。引起桃褐腐病的链核盘菌遍布我国22个省级行政区,其中美澳型核果链核盘菌(Monilinia fructicola)是我国桃褐腐病菌的... 详细信息

桃褐腐病是一种严重危害果树的真菌性病害,在我国分布极为广泛,全国主要的桃产区均有发生,对我国桃产业造成严重威胁。引起桃褐腐病的链核盘菌遍布我国22个省级行政区,其中美澳型核果链核盘菌(Monilinia fructicola)是我国桃褐腐病菌的优势种。目前对桃褐腐病菌的致病机制研究非常有限,致病相关基因的报道也极少。本课题以***野生型菌株Bmpc7为对象,基于基因组学和侵染早期转录组学分析,深入挖掘致病相关基因,筛选到MfCdtf1,MfHMG5和MfHMG6作为目标基因进行功能探究。转录组数据分析表明,MfCdtf1在桃褐腐病菌侵染早期表达量波动明显,在侵染1 h和24 h后MfCdtf1的表达量显著上升,而在孢子萌发时期则显著下降,表明MfCdtf1参与了桃褐腐菌致病侵染和孢子萌发阶段的基因表达调控。利用分割标记法获得了三个纯合的MfCdtf1敲除转化子和三个杂合的回补转化子。表型观察发现MfCdtf1基因的缺失使褐腐病菌的生长速率和致病力降低,产孢能力和色素合成能力丧失。在抗逆反应中,多种外源胁迫对敲除转化子ΔMfCdtf1的生长抑制率低于野生型菌株Bmpc7,表明MfCdtf1的缺失降低了桃褐腐病菌对多种外源胁迫的灵敏度。同时检测到两个在ΔMfCdtf1中表达量降低的草酸合成相关基因Mfsod1和Mfoah,以及三个在ΔMfCdtf1中表达量降低的黑色素合成相关基因Mf4HNR,MfALB1和MfBUF1。另外两个参与产孢调控的基因:MfHMG5在ΔMfCdtf1中表达量显著下降,而MfHMG6在ΔMfCdtf1中上调表达,但MfHMG5和MfHMG6在桃褐腐病菌侵染早期各时间段的表达量变化则趋势相同,都在侵染1 h后显著下降,而在孢子萌发时期显著上升。获得了MfHMG5的敲除和过表达转化子,MfHMG6的敲除和回补转化子,研究发现MfHMG5基因的缺失和过量表达降低了褐腐病菌的生长速率和产孢能力,但不影响褐腐病菌的致病力。MfHMG6基因的缺失降低了褐腐病菌的生长速率、致病力和产孢能力,且会使MfHMG5基因的相对表达量升高。该研究明确了MfCdtf1,MfHMG5和MfHMG6基因在褐腐病菌的生长发育及致病过程中发挥功能,为深入解析桃褐腐病菌的致病机制奠定了坚实基础。

关键词：桃褐腐病美澳型核果链核盘菌转录因子信号途径致病机制

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假单胞菌JD37和深绿木霉LD对采后桃果防病保鲜作用及其机制的研究

假单胞菌JD37和深绿木霉LD对采后桃果防病保鲜作用及其机制的研究

引用

作者：余雅婷上海师范大学

学位级别：硕士

桃子(Prunus persica L.)含有丰富的氨基酸、蛋白质、维生素、膳食纤维、脂肪、糖、有机酸、钙、磷和铁等营养物质,广受消费者的喜爱,种植范围遍布全世界。真菌引起各种的病害,包括桃褐腐病、花枯萎病、嫩枝溃疡病,制约了桃产业的发展... 详细信息

桃子(Prunus persica L.)含有丰富的氨基酸、蛋白质、维生素、膳食纤维、脂肪、糖、有机酸、钙、磷和铁等营养物质,广受消费者的喜爱,种植范围遍布全世界。真菌引起各种的病害,包括桃褐腐病、花枯萎病、嫩枝溃疡病,制约了桃产业的发展。目前,果农仍主要使用化学农药防治这些病害,但对健康和环境存在不良影响,还会诱发病原菌的抗性;物理手段对防治有一定效果,但是降低了桃果肉的品质。因此,迫切需要寻求一种更加安全、行之有效的生物方法来解决桃果实采后腐烂损失和果品贮藏保鲜的问题。为了防治桃果病害,本论文首先探讨了实验室保藏的一株具有生防作用的桔黄假单胞菌JD37(Pseudomonas aurantiaca JD37)对桃果实病原菌的抗性,同时,从发病桃果实中分离了一株具有广谱抗菌活性的木霉菌,初步鉴定为深绿木霉LD(Trichoderma atroviride LD)。随后本论文从发病桃果实组织中成功分离出了桃褐腐病的致病优势菌株TD,经形态观察和18S r DNA序列分析,初步鉴定为美澳型核果链核盘菌(Monilinia fructicola)。平板对峙实验结果显示,JD37和LD对其均有良好的抑制作用。而且还发现,当JD37和LD联用时,对病原菌TD的抑制效果更好,共培养的上清液稀释4倍后的抑菌率仍高达85%,气体挥发物的抑菌率提高至73%。为了深入了解JD37的抑菌机理,利用高效液相色谱法结合生物信息学分析,在其发酵液中发现了吡咯菌素(pyrrolnitrin,Prn),一种重要的抑菌活性物质。进一步,本论文研究了JD37和LD抑制病原菌TD感染桃果实的作用。通过在感染病原菌TD的桃果实中接种JD37和LD发酵液,分别检测了病斑面积、反映植物受损程度的丙二醛(MDA)含量和反映植物系统抗性的相关防御物质——过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性。实验结果显示,在两株菌的作用下病害发生率和病斑面积显著降低,当两者联用效果最佳。联用组的病害发生率降至35%,病斑面积小;MDA含量一直处于低水平;同时,POD、PPO和PAL活性呈前期快速上升的趋势,且均在第2天就分别达到峰值236 U/g FW、130.2 U/g FW和131.7 U/g FW。因此,果实发病率低的原因可能是生防菌株产生的抑菌活性物质以及提高了桃果实系统抗性共同作用的结果。本论文还研究了JD37和LD对采后桃果防腐保鲜的作用。将一定浓度的JD37和LD发酵液对采后健康桃果进行均匀喷洒,在自然条件下储存,29天后检测发病指数和营养成分等生理指标。结果显示,经过生防菌株处理后的桃果实外观饱满、自然腐败发生率低、疾病严重程度轻、果实质量损失少,果皮颜色新鲜、通透性小,果品各营养成分维持度较好,尤以两菌株联合作用时效果更佳。综上述所,本论文发现桔黄假单胞菌JD37与深绿木霉LD联用能有效减少桃果病害的发生和病斑的蔓延,而且对采后桃果的防腐保鲜效果好,因此,JD37与LD的联用在采后桃果抗病、防腐和保鲜上具有较大的应用潜力。

关键词：桔黄假单胞菌JD37 深绿木霉美澳型核果链核盘菌生物防治生物保鲜

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桃褐腐病菌MfGh27A、MfMel1和MfSR基因的生物学功能研究

桃褐腐病菌MfGh27A、MfMel1和MfSR基因的生物学功能研究

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作者：谷文倩华中农业大学

学位级别：硕士

桃褐腐病作为我国桃产业中最重要的病害之一,主要由美澳型核果链核盘菌（Monilinia fructicola）引起。该病在我国发生极为广泛,严重影响桃果实产量及品质。半乳糖苷酶是细胞壁半乳甘露聚糖降解的关键酶。***病菌在侵染初期,寄主会分泌... 详细信息

桃褐腐病作为我国桃产业中最重要的病害之一,主要由美澳型核果链核盘菌（Monilinia fructicola）引起。该病在我国发生极为广泛,严重影响桃果实产量及品质。半乳糖苷酶是细胞壁半乳甘露聚糖降解的关键酶。***病菌在侵染初期,寄主会分泌大量酚类和ROS类物质,抑制病原菌过氧化物酶体和半乳糖代谢等通路,使病原菌中半乳糖代谢相关通路基因表达显著下降。对本实验室前期转录组数据分析,发现糖苷水解酶家族成员MfMel1、MfGh27A两个基因在侵染桃果实过程中有不同水平下调,因此对该基因是否与桃褐腐病菌致病性进行研究。杀菌剂广泛连续大量施用,使得桃褐腐病菌极易产生抗药性。DMI类杀菌剂主要抑制麦角甾醇的合成,在***发现甾醇合成转录因子SR的同源基因MfSR,并对其功能进行分析。主要结果如下:对***侵染阶段1 h,3 h,6 h,12 h,24 h和菌丝转录组数据进行分析,鉴定特异性差异表达基因。发现MfMel1基因在侵染1 h、3 h、6 h过程中表达量显著下调,其中侵染1 h时下调16倍,因此选取该基因,对其进行深入研究。MfMel1基因敲除后,与野生型亲本菌株Bmpc7相比,敲除转化子△MfMel1生长速率与孢子萌发率无显著差异,但孢子数显著降低,说明MfMel1基因与菌株产孢量相关。敲除转化子△MfMel1对葡萄糖外源渗透压胁迫敏感性增强。△MfMel1菌株在0.01%SDS、600μg/ml刚果红、150 g/L甘油、200 g/L蔗糖、6 m M H2O2、4%Na Cl、1.2 m M山梨醇培养基上菌丝形态、生长速率与Bmpc7相比无显著差异。致病力测定显示,敲除转化子对桃果实致病力显著下降。α-半乳糖苷酶活性测定发现△MfMel1菌株α-半乳糖苷酶酶活显著下降。以上结果说明MfMel1基因缺失导致***菌株的α-半乳糖苷酶酶活显著下降、产孢量减少、对桃果实致病力下降。转录组数据显示,MfGh27A基因在侵染初期表达量显著下调,其中12 h的表达量下调13倍,因此选取该基因进行深入研究。敲除转化子△MfGh27A在0.01%SDS、600μg/ml刚果红、150 g/L甘油、200 g/L葡萄糖、6 m M H2O2、4%Na Cl培养基上与Bmpc7相比无显著差异。桃果实接种发现,敲除转化子的致病力无变化。在200 g/L蔗糖和1.2 m M山梨醇的耐受性测定表明,敲除转化子生长均被促进,说明MfGh27A基因敲除影响高渗途径。在6 m M H2O2培养基上,敲除菌株敏感性降低,说明MfGh27A参与桃褐腐病菌的氧化还原途径。α-半乳糖苷酶活性测定表明,敲除转化子与野生型菌株相比酶的活性显著下降。以上结果说明,MfGh27A基因与***的渗透压转导途径和氧化还原通路相关,且在α-半乳糖苷酶合成中发挥重要作用。为了研究MfSR基因是否参与DMI类杀菌剂抗性产生,经过原生质体转化得到了2个该基因的敲除纯合子,并得到相应的回补转化子。表型分析结果表明,野生型菌株、敲除菌株与回补菌株在DMI类杀菌剂培养基上生长无差异。敲除MfSR基因不会使桃褐腐病菌对DMI类杀菌剂的敏感性产生变化,并且对致病性无影响。在外源胁迫实验中,△MfSR菌株在0.01%SDS、600μg/ml刚果红、150 g/L甘油、200g/L蔗糖、200 g/L葡萄糖、4%Na Cl、1.2 m M山梨醇培养基上与Bmpc7相比无显著差异。△MfSR菌株在6 m M H2O2培养基上生长受到抑制,而回补菌株能恢复到Bmpc7的生长水平,说明MfSR基因参与氧化还原胁迫反应。以上结果表明MfSR基因在***氧化应答反应中发挥作用。

关键词：桃褐腐病菌美澳型核果链核盘菌糖苷水解酶抗药性侵染机制

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不同寄主来源的Monilinia fructicola 对多菌灵的敏感性及其遗传结构特征

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农药学学报 2020年第3期22卷 423-431页

作者：陈凤平张玥周挺李雄刘西莉福建农林大学植物病理学系福州350002 中国烟草总公司福建省公司福州350003 中国农业大学植物病理学系北京100193 西北农林科技大学植物病理学系陕西杨凌712100

美澳型核果链核盘菌Monilinia fructicola(***)Honey是引起多种果树褐腐病的重要病原菌,多菌灵是防治该病害的重要杀菌剂。为明确不同寄主来源的菌株对多菌灵的敏感性及遗传结构差异,研究测定了来源于樱桃、李子和毛桃的17株菌株对多菌... 详细信息

美澳型核果链核盘菌Monilinia fructicola(***)Honey是引起多种果树褐腐病的重要病原菌,多菌灵是防治该病害的重要杀菌剂。为明确不同寄主来源的菌株对多菌灵的敏感性及遗传结构差异,研究测定了来源于樱桃、李子和毛桃的17株菌株对多菌灵的敏感性,同时基于Tub2核苷酸序列分析了来源于樱桃和毛桃的32株***群体的遗传多样性和群体分化特征。结果表明:来自樱桃、李子和毛桃的17株菌株中,多菌灵的EC50<1μg/mL和>1μg/mL的菌株比例分别为58.8%和41.2%,其中EC50>50μg/mL的菌株比例为17.6%。来自毛桃的菌株群体多样性比来自樱桃的高,其核苷酸多样性分别为3.25×10^−3和0.94×10^−3,单倍型多样性分别为0.883和0.242;两群体间存在显著的遗传分化,分化程度较高,其FST值达到0.148。单倍型网络分析结果显示:来自樱桃和毛桃的群体分别含有3种和9种单倍型,其中共有单倍型2种;不同单倍型在进化过程中主要发生了两个途径的进化,其中一个途径只出现了来自毛桃群体的1种单倍型,其他单倍型经过不同的突变步骤形成另一个途径。寄主特异性检验结果发现,来自樱桃的菌株具有一定的寄主特异性,而来自毛桃的菌株与寄主的关联性较差。综合研究表明,***对多菌灵的抗性频率较高,且来自不同寄主的群体遗传结构差异性较大。

关键词：美澳型核果链核盘菌褐腐病多菌灵遗传多样性遗传结构

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浙江省樱桃褐腐病病原菌种类及其对常见药剂的抗性检测

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果树学报 2020年第9期37卷 1394-1403页

作者：张艳婷仇智灵李阿根吴鉴艳毛程鑫张传清浙江农林大学农业与食品科学学院浙江临安311300 杭州市余杭区农业生态与植物保护管理总站杭州311100 杭州市临安区农业农村局浙江临安311300

【目的】明确樱桃褐腐病病原菌种类,探究病原菌对啶酰菌胺、苯醚甲环唑、甲基硫菌灵及嘧菌酯的抗性现状。【方法】根据科赫式法则对采集的樱桃褐腐病病样进行了病原菌分离、鉴定及致病性测定,并测定了该病原菌对啶酰菌胺、苯醚甲环唑、... 详细信息

【目的】明确樱桃褐腐病病原菌种类,探究病原菌对啶酰菌胺、苯醚甲环唑、甲基硫菌灵及嘧菌酯的抗性现状。【方法】根据科赫式法则对采集的樱桃褐腐病病样进行了病原菌分离、鉴定及致病性测定,并测定了该病原菌对啶酰菌胺、苯醚甲环唑、甲基硫菌灵及嘧菌酯的抗性。【结果】浙江省樱桃褐腐病病原菌共有3种:美澳型核果链核盘菌Monilinia fructicola占65.6%,核果链核盘菌***占18.8%,果生链核盘菌***占15.6%。所有菌株在接种樱桃果实后,均能引起发病,但病斑大小有显著差异,其中樱桃褐腐病病原菌***的致病力最强,***次之,***的致病力最弱。浙江省樱桃褐腐病病原菌对甲基硫菌灵、苯醚甲环唑和啶酰菌胺均表现为敏感,仅检测到2株嘧菌酯抗性菌株,抗药性频率为6.25%。抗药性机制研究发现,在抗性菌株的Cyt b编码区未发生G143A点突变现象。【结论】浙江省樱桃褐腐病病原菌共有3种,除了6.25%的嘧菌酯抗性菌株,樱桃褐腐病病原菌对其他3种常用药剂均表现为敏感。

关键词：樱桃褐腐病美澳型核果链核盘菌核果链核盘菌果生链核盘菌抗药性

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桃褐腐病菌转录因子编码基因MfSre1、MfADR1和MfSre1N的生物学功能研究

桃褐腐病菌转录因子编码基因MfSre1、MfADR1和MfSre1N的生物学功...

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作者：江山华中农业大学

学位级别：硕士

甾醇脱甲基化酶抑制剂(DMIs),如丙环唑(propiconazole)、戊唑醇(tebuconazole)和三唑酮(triazolone)等,对链核盘菌引起的桃褐腐病有优良的防效,在全世界范围内被广泛使用。此类杀菌剂通过和真菌细胞色素P450家族蛋白CYP51结合,抑制麦角... 详细信息

甾醇脱甲基化酶抑制剂(DMIs),如丙环唑(propiconazole)、戊唑醇(tebuconazole)和三唑酮(triazolone)等,对链核盘菌引起的桃褐腐病有优良的防效,在全世界范围内被广泛使用。此类杀菌剂通过和真菌细胞色素P450家族蛋白CYP51结合,抑制麦角甾醇的合成,影响膜结构、膜蛋白功能及流动性,起到杀菌作用。研究发现,DMI杀菌剂的靶标基因CYP51过量表达是导致病原菌产生DMI杀菌剂抗性的主要原因。因此,寻找参与调控CYP51基因表达的转录因子,对阐明DMI杀菌剂抗性分子机理具有重要意义。目前对植物病原真菌中麦角甾醇合成相关的转录因子研究非常有限。本文对桃褐腐病菌甾醇合成途径相关转录因子的功能进行分析,以期明确其是否参与调控病原菌对DMI杀菌剂的抗药性。本研究以美澳型核果链核盘菌(Monilinia fructicola)的DMI杀菌剂抗性菌株Bmpc7为材料,通过PEG介导原生质体转化法构建敲除转化子,对麦角甾醇合成途径相关的转录因子编码基因MfSre1、MfADR1和MfSre1N功能进行分析。结果如下:1.桃褐腐病菌中甾醇调节元件结合蛋白(SREBP)的同源基因是MfSre1。该基因的敲除对菌株的菌丝生长速率、产孢、致病性没有显著影响(P>0.5)。与抗性菌株Bmpc7相比,MfSre1敲除转化子S1-S9对DMI杀菌剂、过氧化氢和高浓度甘油渗透胁迫的敏感性均没有显著性变化,但对金属离子、糖类及细胞壁细胞膜破坏剂的敏感性明显降低,对DCF杀菌剂的抗性水平上升。2.前期研究发现,MfCYP51基因上游启动子区域插入65bp(Mona)片段会导致基因表达水平升高,使菌株获得DMI杀菌剂抗性。分析Mona片段启动子活性区域,发现该区域内包含转录因子ADR1的2个重要识别位点,桃褐腐病菌中ADR1基因的同源基因为MfADR1。敲除转化子与野生型菌株相比,菌丝生长速率、产孢、致病性和对DMI杀菌剂、Na、过氧化氢的敏感性未见显著差异。但敲除转化子对高浓度甘油的敏感性明显升高,表明MfADR1基因可能参与高渗甘油途径的调节。***1N具有helix-loop-helix亮氨酸家族功能结构域,能特异性结合甾醇调控元件,与SREBP途径相关。桃褐腐病菌MfSre1N基因敲除转化子在菌落形态、产孢量和致病性等方面同样没有显著变化,与DMI杀菌剂和Na的外源胁迫敏感性也无关,但与MfADR1基因相似,可能影响高渗甘油途径导致对甘油的敏感性升高。

关键词：桃褐腐病美澳型核果链核盘菌转录因子麦角甾醇合成途径

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山西省欧李褐腐病病原菌鉴定

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西北农业学报 2015年第4期24卷 101-104页

作者：郝晓娟周芳李新凤王美琴王建明李俊林山西农业大学农学院山西太谷030801 山西省植保植检总站太原030001

为明确山西省欧李褐腐病病原菌种类,采用组织分离法、致病性测定、形态学鉴定及rDNA-ITS序列测定对病原菌进行研究。结果显示,该菌在PDA培养基上菌落呈同心轮纹状,灰白或灰黄色,产孢丰富;分生孢子梗较短,有分枝;分生孢子串生,无色,单胞... 详细信息

为明确山西省欧李褐腐病病原菌种类,采用组织分离法、致病性测定、形态学鉴定及rDNA-ITS序列测定对病原菌进行研究。结果显示,该菌在PDA培养基上菌落呈同心轮纹状,灰白或灰黄色,产孢丰富;分生孢子梗较短,有分枝;分生孢子串生,无色,单胞,柠檬形或卵圆形,孢子大小为（7.5~20.0）μm×（7.5~11.5）μm。经形态学鉴定为美澳型核果链核盘菌（Monilinia fructicola）。rDNA-ITS序列与Monilinia fructicola的同源性为100%,分子鉴定与形态学鉴定结果一致。

关键词：欧李褐腐病病原菌鉴定美澳型核果链核盘菌

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十种杀菌剂对欧李褐腐病菌的室内毒力测定

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北方园艺 2014年第5期 103-105页

作者：周芳郝晓娟程超王美琴李新凤王建明山西农业大学农学院山西太谷030801

以10种杀菌剂为试材,以欧李褐腐病菌为研究对象,采用菌丝生长速率法和孢子萌发抑制法测定了10种杀菌剂对欧李褐腐病菌(Monilinia fructicola)的室内毒力,以筛选出防治欧李褐腐病的有效药剂。结果表明:430g/L戊唑醇悬浮剂、24%腈苯唑悬... 详细信息

以10种杀菌剂为试材,以欧李褐腐病菌为研究对象,采用菌丝生长速率法和孢子萌发抑制法测定了10种杀菌剂对欧李褐腐病菌(Monilinia fructicola)的室内毒力,以筛选出防治欧李褐腐病的有效药剂。结果表明:430g/L戊唑醇悬浮剂、24%腈苯唑悬浮剂、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、80%多菌灵可湿性粉剂、70%甲基硫菌灵可湿性粉剂、500g/L异菌脲悬浮剂、50%腐霉利可湿性粉剂对欧李褐腐病菌菌丝生长的半致死浓度(EC50)均低于0.700mg/L,其中430g/L戊唑醇悬浮剂对菌丝的抑制效果最好,EC50为0.027mg/L;80%代森锰锌可湿性粉剂对菌丝的抑制效果最差,EC50为57.645mg/L。供试的10种药剂对孢子萌发的EC50均低于2.500mg/L,抑制作用最强的是500g/L异菌脲悬浮剂,EC50为0.024mg/L;效果最差的是80%代森锰锌可湿性粉剂,EC50为2.496mg/L。24%腈苯唑悬浮剂、430g/L戊唑醇悬浮剂、500g/L异菌脲悬浮剂可以用于欧李褐腐病的防治。

关键词：欧李褐腐病美澳型核果链核盘菌杀菌剂毒力

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欧李褐腐病病原菌生物学特性及其寄主范围

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果树学报 2014年第1期31卷 101-104,I0002页

作者：郝晓娟高莹李新凤王建明李生才王美琴李俊林山西农业大学农学院山西太谷030801 山西省植保植检总站山西太原030001

【目的J明确欧李褐腐病菌的生物学特性和寄主范围。【方法]通过测定欧李褐腐病菌菌丝和孢子在不同条件下的生长和萌发情况，对病菌的生物学特性进行了研究；采用刺伤接种法对病菌寄主范围进行了研究。【结果l欧李褐腐病菌菌丝7～27℃内... 详细信息

【目的J明确欧李褐腐病菌的生物学特性和寄主范围。【方法]通过测定欧李褐腐病菌菌丝和孢子在不同条件下的生长和萌发情况，对病菌的生物学特性进行了研究；采用刺伤接种法对病菌寄主范围进行了研究。【结果l欧李褐腐病菌菌丝7～27℃内均可生长，最适生长温度为22℃；最适pH范围7．O～9．0；在12h光暗交替条件下生长最快；最适碳源为葡萄糖、蔗糖和半乳糖，最适氮源为蛋白胨。孢子萌发最适温度为17—27oC；最适pH为6．0—8．0：光照对孢子萌发没有显著影响。该病原菌能侵染梨、苹果、油桃、樱桃、杏、柑橘、葡萄，不能侵染金桔和圣女果。病菌对樱桃和油桃的致病力最强，对柑橘的致病力最弱。【结论】生物学特性和寄主范围研究结果为综合防治该病害提供了科学依据。

关键词：欧李褐腐病美澳型核果链核盘菌生物学特性寄主范围

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