目前,结核病仍是全世界最为致命的传染病,尤其耐多药肺结核病（Multidrug-resi stant tuberculosis,MDR-TB）是全球结核病控制的关键性难题。缺乏有效的早期诊断方法,以及治疗周期长、副作用大,病人不易耐受等不足,使MDR-TB疫情得不到有效控制。中医治疗MDR-TB具有较好的减毒增效作用。然而,对MDR-TB中医证候的分型和诊断缺乏客观生物学依据,导致中医治疗MDR-TB疗效的优势不能稳定发挥。在本论文的第一部分研究中,我们使用微阵列、生物信息学分析和实时定量聚合酶链反应（Real-time Quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）的方法,研究 MDR-TB患者、药物敏感性肺结核病（drug-sensitive tuberculosis,DS-TB）患者和健康对照（healt h control,HC）者血浆中差异表达的长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）,以及lncRNA对MDR-TB的潜在诊断价值。在第二部分中,采用iTRAQ-2DLC-MS/MS（isobaric tags for relative and absolute quantification-coupled twodimensional liquids chromatography-tandem mass spectrometry）结合生物信息学分析方法,对 MDR-TB 不同中医证候患者血清进行蛋白质筛选、鉴定,生物学功能分析,酶联免疫吸附试验（en zyme-linked immune sorbent assay,ELISA）验证分析,并运用受试者工作特征（receiv er operating characteristic,ROC）曲线评估差异蛋白的诊断效果。第一部分研究发现,相比DS-TB组,有543个lncRNA（195个mRNA）在MDR-TB组中差异表达,其中181个（63个mRNA）上调,362个下调（132个mRNA）;相比HC组,有699个lnc RNA（231个mRNA）在MDR-TB组中差异表达,包括345个（123个mRNA）上调,354个下调（108个mRNA）。基因本体论（Gene ontology,GO）,京都基因和基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG）,以及编码-非编码共表达（coding-noncoding co-expression,CNC）分析表明,MDR-TB 组中差异 lncRNA的功能主要富集在物质代谢、炎症免疫和蛋白修饰等方面,例如脂肪酸降解通路、赖氨酸降解通路。RT-qPCR验证发现3条lncRNA在MDR-TB组中上调,包括NR110750（P=0.036）、uc.212-（P=0.011）和 NR131237（P=0.008）。第二部分研究发现,71个蛋白质在MDR-TB三证中差异性表达。β转化生长因子诱导蛋白（Transforming gr owth factor-beta-induced protein ig-h3,TGFBI）在肺阴虚（pulmonary Yin deficiency,PYD）证组中低表达（P=0.002）;枯草杆菌前蛋白转化酶（Pro-protein convertase subtil isin/kexin type 9,PCSK9）在阴虚火旺（Hyperactivity of Fire due to Yin deficiency,HFYD）证组中高表达（P<0.0001）;趋化因子 14（C-C motif chemokine 14,CCL14）在气阴两虚（deficiency of Qi and Yin,DQY）证组中低表达（P=0.004）。因此,血清蛋白质TGFBI、PCSK9和CCL14分别是MDR-TB肺阴虚证、阴虚火旺证和气阴两虚证新的潜在蛋白标志物。第一部分研究揭示了血浆lncRNAs作为MDR-TB生物标志物的潜在诊断价值,以及这些差异表达的lncRNA在MDR-TB发病机制中的潜在机制。第二部分的研究为MDR-TB中医证候分型提供了生物学依据,对根据不同中医证候选取不同治疗方案具有重要意义。
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