检索结果-内蒙古大学图书馆

激活豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞连接蛋白43下调衰老蛋白P16和P21的表达

四川大学学报（医学版） 2021年第2期52卷 188-193页

作者：胡娜司超张治平马克涛张亮石河子大学医学院医学教学实验中心石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院眼科石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院耳鼻喉科石河子832000 石河子大学医学院生理学教研室石河子832000

目的通过D-半乳糖(D-galactose,D-gal)干预制备豚鼠耳蜗螺旋动脉(SMA)平滑肌细胞衰老模型,分析连接蛋白43(Cx43)与衰老相关蛋白P16和P21表达的相关性,探讨Cx43在细胞衰老中可能发挥的作用。方法用贴壁法培养豚鼠SMA平滑肌细胞,应用免疫... 详细信息

目的通过D-半乳糖(D-galactose,D-gal)干预制备豚鼠耳蜗螺旋动脉(SMA)平滑肌细胞衰老模型,分析连接蛋白43(Cx43)与衰老相关蛋白P16和P21表达的相关性,探讨Cx43在细胞衰老中可能发挥的作用。方法用贴壁法培养豚鼠SMA平滑肌细胞,应用免疫荧光技术检测平滑肌细胞标记物。实验分对照组、D-gal组和D-gal+缝隙连接激动剂AAP10干预组(AAP10组)。CCK-8检测各组平滑肌细胞活性,确定D-gal干预浓度及时间;qRT-PCR检测各组Cx43m RNA表达;Western blot检测各组Cx43、P16和P21的蛋白表达量;免疫荧光技术检测各组P16、P21的表达分布情况。结果免疫荧光检测结果显示细胞肌动蛋白(α-SM-actin)阳性表达率达90%以上;CCK-8检测结果显示D-gal最佳干预浓度为30 mg/mL,干预时间为48 h;qRT-PCR检测发现D-gal组平滑肌细胞上Cx43 mRNA水平较对照组降低(P<0.01);AAP10组较D-gal组细胞Cx43 mRNA水平上调(P<0.01);Western blot检测发现D-gal组平滑肌细胞上Cx43蛋白水平较对照组降低(P<0.01);P16和P21蛋白表达较对照组升高(P<0.01);AAP10组较D-gal组细胞Cx43蛋白表达上调(P<0.01),P16、P21蛋白表达下调(P<0.01);免疫荧光结果显示P16和P21主要表达于细胞核上,P16和P21蛋白在D-gal组较对照组细胞荧光强度升高,AAP10组较D-gal组荧光强度下降(P<0.01)。结论上调Cx43的表达可以逆转D-gal诱导的SMA上衰老相关蛋白P16和P21的表达异常。提示Cx43可能参与细胞衰老过程,为延缓细胞衰老提供理论依据和可能的干预靶点。

关键词：细胞衰老耳蜗螺旋动脉 Cx43 D-半乳糖

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耳蜗螺旋动脉上连接蛋白43与老年性耳聋的关系研究

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中国全科医学 2019年第27期22卷 3339-3346页

作者：司超张治平范志茹张亮李丽司军强李新芝马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子市832000 石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子市832000 石河子大学医学院第一附属医院耳鼻喉科新疆石河子市832000 石河子大学医学院病理生理学教研室新疆石河子市832000

背景老年性耳聋是指随着年龄的增长而缓慢出现听力阈值增加的疾病,耳蜗螺旋动脉(SMA)在维持耳蜗血供和听力方面发挥重要的作用。连接蛋白43(Cx43)在血管壁上广泛表达,对血管的舒缩功能有着重要的影响,但Cx43在SMA上的表达与老年性耳聋... 详细信息

背景老年性耳聋是指随着年龄的增长而缓慢出现听力阈值增加的疾病,耳蜗螺旋动脉(SMA)在维持耳蜗血供和听力方面发挥重要的作用。连接蛋白43(Cx43)在血管壁上广泛表达,对血管的舒缩功能有着重要的影响,但Cx43在SMA上的表达与老年性耳聋的关系尚不清楚。目的以D-半乳糖(D-gal)诱导的老年性耳聋豚鼠为研究对象,研究SMA上Cx43与老年性耳聋的关系。方法2018年5月,将无耳疾3月龄SPF级豚鼠36只随机分为Control组、NS组、D-gal组,各12只。D-gal组在正常饲养的基础上,颈背部皮下注射D-gal500mg·kg^-1·d^-1;NS组在正常饲养的基础上,颈背部皮下注射0.9%氯化钠溶液(体积等同D-gal组);对照组正常饲养,不做任何处理;共6周。取Control组豚鼠交配产下的3只新生豚鼠,处死分离SMA,贴壁法培养原代SMA血管平滑肌细胞(VSMCs),鉴定后取第3代SMAVSMCs制备细胞衰老模型:对照组为正常培养48h;衰老组为在正常培养基础上加入30g/LD-gal培养48h;AAP10组为在正常培养的基础上加入100nmol/LAAP10预处理,而后加入30g/LD-gal培养48h。采用Morris水迷宫测试实验检测Control组、NS组、D-gal组豚鼠测试第1、2、3、4、5天逃避潜伏期及第6天穿越平台的次数;比较Control组、NS组、D-gal组豚鼠听性脑干反应(ABR)阈值,肝组织、脑组织、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平,SMA上Cx43mRNA及Cx43表达水平。比较对照组、衰老组、AAP10组VSMCs内SOD活性、MDA水平,VSMCs中Cx43表达水平。结果组别与时间在豚鼠逃避潜伏期中存在交互作用(F交互=6.99,P交互<0.05);组别与时间在豚鼠逃避潜伏期中主效应显著(F组间=53.43,F时间=38.15;P组间<0.05,P时间<0.05)。D-gal组豚鼠测试第3、4、5天逃避潜伏期长于Control组和NS组(P<0.05);D-gal组豚鼠测试第6天穿越平台次数少于Control组和NS组(P<0.05)。D-gal组豚鼠ABR阈值高于Control组和NS组,肝组织、脑组织、血清SOD活性低于Control组和NS组,肝组织、脑组织、血清MDA水平高于Control组和NS组(P<0.01)。衰老组VSMCs内SOD活性低于对照组和AAP10组,MDA水平高于对照组和AAP10组(P<0.01);AAP10组VSMCs内SOD活性低于对照组,MDA水平高于对照组(P<0.01)。D-gal组豚鼠SMA上Cx43mRNA及Cx43表达水平低于Control组和NS组(P<0.01)。衰老组VSMCs中Cx43表达水平低于对照组和AAP10组(P<0.05);AAP10组VSMCs中Cx43表达水平低于对照组(P<0.05)。结论 D-gal致衰老情况下豚鼠SMA上Cx43表达水平的变化可能与老年性耳聋有关,为临床后续的研究方向奠定了基础。

关键词：听觉丧失,传导性连接蛋白43 耳蜗螺旋动脉 D-半乳糖

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豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的原代培养及鉴定

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西安交通大学学报（医学版） 2018年第6期39卷 917-921页

作者：肖靖杰张治平王洋司超张亮张伟李丽李新芝马克涛石河子大学医学院新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832000 石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院耳鼻喉科新疆石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院老干二科新疆石河子832000 石河子大学医学院病理生理学教研室新疆石河子832000

目的联合2种常用的细胞培养方法从豚鼠耳蜗螺旋动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠耳蜗中分离出螺旋动脉,应用1.25g/L的胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,运用自然纯化法及根据不同细胞贴壁能力的差异性对细胞进... 详细信息

目的联合2种常用的细胞培养方法从豚鼠耳蜗螺旋动脉中提取平滑肌细胞,为相关实验研究提供材料。方法从豚鼠耳蜗中分离出螺旋动脉,应用1.25g/L的胰蛋白酶进行消化并将组织块贴壁,运用自然纯化法及根据不同细胞贴壁能力的差异性对细胞进行纯化,通过形态学观察及免疫荧光、免疫组化和Western blot对细胞进行鉴定。结果 85%的组织块存活,第4代平滑肌细胞纯度达95%。镜下可见细胞呈典型的"峰-谷"样生长,免疫荧光、免疫组化及Western blot结果显示平滑肌细胞特异性的肌动蛋白呈阳性表达。结论通过本研究方法,可以得到大量高纯度的豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞,有望为内耳循环系统紊乱导致的病理生理变化的体外研究及血管平滑肌药物评价提供一个理想的研究材料。

关键词：豚鼠耳蜗螺旋动脉细胞培养肌动蛋白

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急性缺氧对豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞电生理特性的影响

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中国现代医学杂志 2011年第32期21卷 3979-3983页

作者：张治平李新芝司军强朱贺石文艳魏丽丽马克涛石河子大学医学院第一附属医院耳鼻喉科新疆石河子832002 石河子大学医学院第一附属医院生理学教研室新疆石河子832002

目的观察急性缺氧对豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞电生理特性的影响。方法应用全细胞膜片钳技术观察急性缺氧对微动脉段上平滑肌细胞膜电流、膜电位(RP)、膜电容(Cinpu)t、膜电导(Ginpu)t或膜电阻(Rinpu)t的影响。结果①急性缺氧显著增加... 详细信息

目的观察急性缺氧对豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞电生理特性的影响。方法应用全细胞膜片钳技术观察急性缺氧对微动脉段上平滑肌细胞膜电流、膜电位(RP)、膜电容(Cinpu)t、膜电导(Ginpu)t或膜电阻(Rinpu)t的影响。结果①急性缺氧显著增加平滑肌细胞Rinput,降低Ginput和Cinput。Rinput从(480±88)MΩ增加到(2229±310)MΩ(P<0.01),Cinput从(77.3±8.3)pF减少至(11.4±0.7)pF(P<0.01)。48%(15/31)急性缺氧净电流的I/V曲线几乎是线性,翻转电位(-32.6±2.5)mV与细胞静息膜电位(-35.8±4.5)mV十分接近(P>0.05)。②急性缺氧电压依赖的增强部分平滑肌细胞(16/31)外向电流,主要增强0^+40 mV区间的电流幅度,背景灌流18β-甘草次酸阻断细胞间的缝隙连接后,急性缺氧使0 mV激活电流幅度从(27.8±7.5)pA增加到(89.3±12.8)pA(P<0.01),+20 mV从(88.0±18.5)pA增加到(211.1±32.5)pA(P<0.01),+40 mV从(213.9±21.6)pA增加到(448.0±46.5)pA(P<0.01)。预灌流四乙胺后,急性缺氧对SMA平滑肌细胞外向电流的增强作用显著减弱。结论急性缺氧通过激活SMA平滑肌细胞膜上大电导Ca2+激活K+通道,血管舒张,保证耳蜗循环的血液供应,同时通过抑制SMA平滑肌细胞间缝隙连接使急性缺氧产生的伤害信息局限在局部。

关键词：急性缺氧平滑肌细胞耳蜗螺旋动脉缝隙连接大电导Ca2+激活K+通道

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氟灭酸对豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞膜电位和兴奋性接头电位的作用

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武汉大学学报（医学版） 2010年第3期31卷 292-297页

作者：李丽马克涛赵磊李静司军强石河子大学医学院生理学教研室新疆石河子832002 华中科技大学同济医学院药学院湖北武汉430030 武汉大学医学院生理学系湖北武汉430071

目的:观察氯通道阻断剂氟灭酸(NFA)对耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞膜电位和电刺激血管周围交感神经纤维引起兴奋性接头电位(EJP)的影响。方法:在耳蜗螺旋动脉平滑肌离体标本上,运用细胞内微电极记录技术研究非甾体类抗炎药物对平滑肌细胞的... 详细信息

目的:观察氯通道阻断剂氟灭酸(NFA)对耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞膜电位和电刺激血管周围交感神经纤维引起兴奋性接头电位(EJP)的影响。方法:在耳蜗螺旋动脉平滑肌离体标本上,运用细胞内微电极记录技术研究非甾体类抗炎药物对平滑肌细胞的作用。结果:100μmol/L NFA引起低静息膜电位平滑肌细胞产生了(14.7±4.4)mV的超极化反应,引起高静息膜电位平滑肌细胞仅产生了(1.4±0.8)mV的超极化反应(P<0.01)。NFA引起低静息膜电位平滑肌细胞的反应是浓度依赖性的,这一超极化反应能被钙激活钾通道的阻断剂北非蝎毒素(charybdotoxin)和iberiotoxin阻断。另外,在高静息膜电位的平滑肌细胞,NFA对刺激引起的平滑肌细胞EJP有更明显的抑制作用(P<0.01),但对低静息膜电位的平滑肌细胞引起的EJP作用不明显(P>0.05)。结论:NFA既能通过阻断钙激活的氯通道抑制平滑肌细胞产生的EJP,又能激活钙激活钾通道使平滑肌细胞产生超极化反应,表现出对平滑肌细胞作用的多样性。

关键词：耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞微电极记录技术氟灭酸超极化兴奋性接头电位

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尼氟灭酸通过钙库钙释放引起豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞超极化(英文)

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生理学报 2008年第6期60卷 743-750页

作者：李丽马克涛赵磊司军强华中科技大学同济医学院药理学系石河子大学地方与民族高发病教育部省部共建重点实验室电生理研究室武汉大学医学院生理教研室

本研究旨在观察氯离子通道阻断剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)引起豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞产生超极化的机制。以豚鼠为实验动物,运用细胞内微电极和全细胞膜片钳记录技术,观察NFA和其它药物对急性分离的耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的作... 详细信息

本研究旨在观察氯离子通道阻断剂尼氟灭酸(niflumic acid,NFA)引起豚鼠耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞产生超极化的机制。以豚鼠为实验动物,运用细胞内微电极和全细胞膜片钳记录技术,观察NFA和其它药物对急性分离的耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的作用。结果显示:NFA、indanyloxyacetic acid94(IAA-94)和disodium4,4’-diisothiocyanatostilbene-2,2’-disulfonate(DIDS)可使低静息膜电位的细胞产生超极化,但对高静息膜电位的细胞无明显作用。低静息膜电位细胞的平均静息电位为(-42.47±1.38)mV(n=24),100μmol/LNFA、10μmol/LIAA-94和200μmol/LDIDS分别使细胞超极化至(13.7±4.3)mV(n=9,P<0.01),(11.4±4.2)mV(n=7,P<0.01)和(12.3±3.7)mV(n=8,P<0.01),这种氯离子通道阻断剂引起细胞超极化反应的效应呈浓度依赖性。NFA引起的超极化和外向电流几乎完全被100nmol/L iberiotoxin、100nmol/L charybdotoxin、10mmol/L tetraethylammonium、50μmol/LBAPTA-AM、10μmol/L ryanodine和0.1～10mmol/L caffeine阻断,但不能被100μmol/L nifedipine、100μmol/L CdCl2和无Ca2+灌流外液阻断。结果提示:氯离子通道的阻断剂NFA可通过平滑肌细胞内钙库的钙释放增加细胞内钙,进而激活钙依赖的钾通道,产生耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞的超极化反应。

关键词：耳蜗螺旋动脉平滑肌细胞尼氟灭酸超极化钙库

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