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中国医学科学院学报 2009年第4期31卷 410-412页

作者：徐苗陈保文沈小兵苏城王国治中国药品生物制品检定所细菌一室北京100050

目的探讨耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响。方法将Balb/c小鼠随机分成生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组,分别注射生理盐水和不同剂量的耻垢分枝杆菌疫苗。取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,化学显色... 详细信息

目的探讨耻垢分枝杆菌疫苗对小鼠腹腔巨噬细胞产生一氧化氮的影响。方法将Balb/c小鼠随机分成生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组,分别注射生理盐水和不同剂量的耻垢分枝杆菌疫苗。取小鼠腹腔巨噬细胞体外培养,化学显色法测定培养上清中一氧化氮的含量。结果生理盐水对照组和耻垢分枝杆菌疫苗低、中、高剂量组产生的一氧化氮分别为(3.50±3.11)、(16.63±6.47)、(13.97±6.20)和(7.55±2.26)ng/ml,不同剂量疫苗免疫小鼠产生的一氧化氮水平均显著高于对照组(P<0.01)。结论耻垢分枝杆菌疫苗可促进小鼠巨噬细胞产生一氧化氮。

关键词：耻垢分枝杆菌疫苗一氧化氮

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耻垢分枝杆菌与结核分枝杆菌抗原的交叉免疫应答研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2017年第4期37卷 275-280页

作者：曹俊卢锦标谢安平徐苗王国治沈小兵陈保文郭述良重庆医科大学附属第一医院呼吸与危重症学科 400016 中国食品药品检定研究院结核病疫苗室北京100050

目的探讨耻垢分枝杆菌（Mycobacterla smegmatis，MS）与结核分枝杆菌（Mycobacteria tuberculosis,MTB）抗原及其免疫原性的交叉情况。方法以低温超声破碎方法提取MS和MTB菌体抗原．通过Westernblot观察菌体抗原与抗血清的交叉免疫应... 详细信息

目的探讨耻垢分枝杆菌（Mycobacterla smegmatis，MS）与结核分枝杆菌（Mycobacteria tuberculosis,MTB）抗原及其免疫原性的交叉情况。方法以低温超声破碎方法提取MS和MTB菌体抗原．通过Westernblot观察菌体抗原与抗血清的交叉免疫应答。将超声破碎的菌体抗原与不完全弗氏佐剂混匀后肌肉注射于小鼠，免疫后7d以ELISPOT技术及流式细胞学技术检测小鼠脾脏淋巴细胞经不同细菌抗原分别刺激后产生的各类细胞因子水平，ELISA技术检测血清中抗体效价水平。结果MS与MTB间存在一些交叉抗原。经两细菌致敏的小鼠均能对不同分枝杆菌抗原产生以细胞免疫为主的免疫应答，CIM^＋及CD8^＋T淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ水平均较未免疫组明显增高（P〈0．05），对非分枝杆菌属布氏杆菌的对照抗原几乎不产生细胞免疫应答。结论MS与MTB间存在这些共同抗原使MS致敏动物能引起针对结核分枝杆菌特异性免疫应答，为MS用于结核新疫苗佐剂等研究提供科学依据。

关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌交叉抗原免疫应答

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耻垢分枝杆菌EF-G敲低菌株的构建和耐药分析

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生物工程学报 2022年第3期38卷 1050-1060页

作者：狄玉昌白嘉诚迟明哲范伟兴张雪莲复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200433 中国动物卫生与流行病学中心山东青岛266032

GTPase延伸因子G(elongation factor G,EF-G)是蛋白质翻译过程中重要的翻译因子。作为唯一在翻译延伸和核糖体再生2个翻译环节发挥重要功能的翻译因子,EF-G成为潜在的抗菌药物作用靶点。耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmetics,Msm)和... 详细信息

GTPase延伸因子G(elongation factor G,EF-G)是蛋白质翻译过程中重要的翻译因子。作为唯一在翻译延伸和核糖体再生2个翻译环节发挥重要功能的翻译因子,EF-G成为潜在的抗菌药物作用靶点。耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmetics,Msm)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)基因组中均存在2个EF-G同源编码基因,分别为Msm EFG1(MSMEG_1400)和Msm EFG2(MSMEG_6535),fusA1(Rv0684)和fusA2(Rv0120c)。基因突变库和生物信息学推测Msm EFG1(MSMEG_1400)和fusA1(Rv0684)是生长必需基因。为探究分枝杆菌中EF-G的生物学功能及特点,利用成簇的规律间隔的短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interference,CRISPRi)技术构建了耻垢分枝杆菌中2个EF-G诱导型敲低菌株(Msm-ΔEFG1(KD)和Msm-ΔEFG2(KD)),研究发现EF-G2的敲低对细菌生长无影响,而EF-G1的敲低显著影响分枝杆菌的生长,成膜能力显著减弱、菌落形态显著变化、菌体长度显著增长,推测EF-G可能与细菌的分裂相关。最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)实验结果表明,抑制EF-G1的表达可增强分枝杆菌对利福平、异烟肼、红霉素、夫西地酸、卷曲霉素等抗菌药物的敏感性,提示EF-G1可能成为未来抗结核药物筛选的潜在靶标,为探究EF-G在分枝杆菌中的生理功能及作为潜在药物靶标提供基础。

关键词：耻垢分枝杆菌 EF-G 成簇规律间隔短回文重复序列干扰(CRISPRi) 最小抑菌浓度耐药

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耻垢分枝杆菌ClpC和ClpX敲低表达菌株的构建及表型分析

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中国生物工程杂志 2021年第6期41卷 13-22页

作者：白嘉诚迟明哲胡亚文郝梦张雪莲复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室上海200433 宁夏回族自治区第四人民医院银川750021

蛋白质平衡稳定对细菌的生长繁殖以及应对宿主免疫压力十分重要。Clp蛋白酶复合体在结核分枝杆菌的蛋白质降解和平衡稳定中发挥重要作用。Clp蛋白酶中负责识别底物蛋白并将其解折叠的蛋白质有两种:ClpC和ClpX。为初步探究分枝杆菌中ClpC... 详细信息

蛋白质平衡稳定对细菌的生长繁殖以及应对宿主免疫压力十分重要。Clp蛋白酶复合体在结核分枝杆菌的蛋白质降解和平衡稳定中发挥重要作用。Clp蛋白酶中负责识别底物蛋白并将其解折叠的蛋白质有两种:ClpC和ClpX。为初步探究分枝杆菌中ClpC和ClpX各自的功能特点,运用CRISPRi的方法成功构建了耻垢分枝杆菌的ClpC和ClpX诱导型敲低表达菌株,并对其生长相关表型进行分析。结果显示:与野生菌株相比,ClpC和ClpX的低表达均能严重影响耻垢分枝杆菌的生长。ClpC低表达可导致菌株丧失生物膜的形成能力,而ClpX低表达则导致菌株无法维持正常细胞形态,电镜显示细胞壁不完整且细胞呈丝状化,提示ClpC和ClpX可能在分枝杆菌中具有不同的生理功能。可为后期深入开展ClpC和ClpX对分枝杆菌生理调控功能研究及新型抗结核药物筛选提供基础。

关键词：耻垢分枝杆菌 ClpC ClpX

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耻垢分枝杆菌作为免疫调节剂的研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 752-755页

作者：徐苗陈保文沈小兵苏城罗永艾王国治中国药品生物制品检定所北京100050 重庆医科大学附属第一医院

目的探讨耻垢分枝杆菌制剂对不同免疫状态动物的免疫调节作用。方法注射环磷酰胺建立免疫功能低下的动物模型,以结核分枝杆菌感染(早期)或猪血清致敏建立免疫功能亢进的动物模型,然后将耻垢分枝杆菌制剂分别注射于正常、免疫功能低下和... 详细信息

目的探讨耻垢分枝杆菌制剂对不同免疫状态动物的免疫调节作用。方法注射环磷酰胺建立免疫功能低下的动物模型,以结核分枝杆菌感染(早期)或猪血清致敏建立免疫功能亢进的动物模型,然后将耻垢分枝杆菌制剂分别注射于正常、免疫功能低下和免疫功能亢进的动物,研究耻垢分枝杆菌制剂对不同模型动物T淋巴细胞增殖反应、迟发型超敏反应或速发型超敏反应的影响。结果耻垢分枝杆菌制剂可增强正常动物的T淋巴细胞增殖反应和迟发型超敏反应,促进免疫功能低下小鼠T淋巴细胞增殖功能的恢复,抑制免疫功能亢进豚鼠的迟发型超敏反应和猪血清致敏小鼠的速发型超敏反应。结论耻垢分枝杆菌制剂具有双向免疫调节作用。

关键词：耻垢分枝杆菌制剂双向免疫调节耻垢分枝杆菌免疫调节剂 T淋巴细胞增殖反应迟发型超敏反应分枝杆菌制剂速发型超敏反应免疫功能低下免疫功能亢进结核分枝杆菌感染

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耻垢分枝杆菌感染人脐带间充质干细胞模型的建立及其特征

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微生物学通报 2023年第11期50卷 5031-5044页

作者：康亚莉宁唤唤谢燕玲任瑞白鹭路延之康健韦垠张琳娜柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032 宁夏医科大学基础医学院生理学和神经生物学系宁夏银川750001 延安大学生命科学学院陕西延安716000

【背景】结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)休眠菌形成被认为是潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的主要原因,但目前缺乏体内和体外模型进行机制研究。新近研究表明Mtb可感染间充质干细胞(mesenchymal stem... 详细信息

【背景】结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)休眠菌形成被认为是潜伏结核感染(latent tuberculosis infection,LTBI)的主要原因,但目前缺乏体内和体外模型进行机制研究。新近研究表明Mtb可感染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)并以休眠状态在细胞中长期存活。然而Mtb感染细胞模型存在周期长和生物安全要求高等问题,需要探索可用的MSC感染细胞模型用于Mtb休眠机制的研究。【目的】建立快速生长型耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)感染人脐带间充质干细胞(human umbilical cord MSC,hUCMSC)的细胞模型并研究其特征。【方法】取分离好的hUCMSC,流式细胞术鉴定其表面标志性抗原;以Ms菌株感染hUCMSC,DiI标记细胞膜,荧光显微镜下观察细胞吞噬作用;平板法计数Ms胞内存活率;油红O染色观察细胞脂滴形成;鬼笔环肽荧光染色观察细胞骨架变化;实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测Ms感染的hUCMSC脂质代谢、静息和分化相关基因转录水平。【结果】Ms感染hUCMSC后在胞内以非复制方式存活,其感染率与感染复数呈正相关;Ms感染hUCMSC可诱导脂滴合成相关基因表达,而抑制降解相关基因转录水平,从而促进细胞内脂滴形成。Ms感染促进hUCMSC细胞骨架发生重构,RT-qPCR检测结果显示细胞增殖和分化相关基因表达增加,Ms感染促进hUCMSC向成脂、成骨细胞分化。【结论】本研究建立了可模拟Mtb休眠形成的Ms感染hUCMSC模型,可进一步用于LTBI机制的相关研究。

关键词：结核分枝杆菌耻垢分枝杆菌间充质干细胞休眠菌结核潜伏感染

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耻垢分枝杆菌MSMEG_6281过表达对菌株生长和形态的影响

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微生物学通报 2016年第7期43卷 1547-1554页

作者：姜涛任丽萍臧师竹张翠丽辛毅大连医科大学生物技术系辽宁大连116044 大连医科大学生物化学与分子生物学教研室辽宁大连116044

【目的】耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2155,mc2155)MSMEG_6281为结核分枝杆菌自溶素Rv3717的同源蛋白,通过建立过表达MSMEG_6281的耻垢分枝杆菌菌株,推测该蛋白对耻垢分枝杆菌肽聚糖代谢的影响。【方法】利用RT-PCR方法检... 详细信息

【目的】耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis mc2155,mc2155)MSMEG_6281为结核分枝杆菌自溶素Rv3717的同源蛋白,通过建立过表达MSMEG_6281的耻垢分枝杆菌菌株,推测该蛋白对耻垢分枝杆菌肽聚糖代谢的影响。【方法】利用RT-PCR方法检测乙胺丁醇(Ethambutol,EMB)作用后MSMEG_6281基因的表达变化;以耻垢分枝杆菌基因组DNA为模板,采用PCR技术克隆MSMEG_6281基因,构建分枝杆菌表达质粒p VV16-MSMEG_6281,进一步建立MSMEG_6281过表达的耻垢分枝杆菌菌株;利用生长曲线检测MSMEG_6281过表达对耻垢分枝杆菌生长的影响;利用扫描电子显微镜分析MSMEG_6281过表达引起的耻垢分枝杆菌形态变化。【结果】EMB处理引起MSMEG_6281基因表达上调;构建了过表达MSMGE_6281的耻垢分枝杆菌菌株(mc2155/p VV16-MSMEG_6281);过表达MSMGE_6281的耻垢分枝杆菌生长缓慢,菌体形态由短杆状转变为长杆状。【结论】MSMGE_6281的过表达可改变耻垢分枝杆菌形态。MSMGE_6281的功能与细胞壁肽聚糖水解相关,在mc2155细胞壁形态维持方面发挥重要作用。

关键词： MSMEG_6281 耻垢分枝杆菌细胞形态肽聚糖水解酶

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耻垢分枝杆菌皮肤软组织感染1例

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中国感染与化疗杂志 2020年第6期20卷 681-682页

作者：田金翌马序竹李妮清华大学附属北京清华长庚医院普通外科北京102218 清华大学附属北京清华长庚医院普通内科北京102218

耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis),是快速生长非结核分枝杆菌,首先从梅毒下疳和包皮垢中分离发现,因此命名为耻垢分枝杆菌[1].耻垢分枝杆菌广泛存在于自然环境中,可以在皮肤黏膜正常存在,由非结核分枝杆菌导致的感染中,耻垢分枝... 详细信息

耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis),是快速生长非结核分枝杆菌,首先从梅毒下疳和包皮垢中分离发现,因此命名为耻垢分枝杆菌[1].耻垢分枝杆菌广泛存在于自然环境中,可以在皮肤黏膜正常存在,由非结核分枝杆菌导致的感染中,耻垢分枝杆菌所占比例甚少.本文拟通过1例耻垢分枝杆菌皮肤软组织感染患者的临床诊疗经过,探讨对此少见非结核分枝杆菌感染的治疗.

关键词：耻垢分枝杆菌非结核分枝杆菌皮肤软组织感染

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耻垢分枝杆菌与卡介苗作为载体在鼠结核病治疗中的作用比较

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中国生物制品学杂志 2008年第7期21卷 545-548页

作者：杨春张黎何永林徐蕾李娜王渝伟朱道银重庆医科大学病原生物学教研室重庆400016 重庆医科大学免疫学教研室重庆400016

目的比较耻垢分枝杆菌(MS)与卡介苗(BCG)作为载体在鼠结核病治疗中的作用。方法分别以不同剂量的MS和BCG免疫BALB/c小鼠,观察二者的致病作用。以结核分枝杆菌H37Rv感染BALB/c小鼠4周后,分别用生理盐水、MS、GLS/IL-12、重组MS、BCG及GLS... 详细信息

目的比较耻垢分枝杆菌(MS)与卡介苗(BCG)作为载体在鼠结核病治疗中的作用。方法分别以不同剂量的MS和BCG免疫BALB/c小鼠,观察二者的致病作用。以结核分枝杆菌H37Rv感染BALB/c小鼠4周后,分别用生理盐水、MS、GLS/IL-12、重组MS、BCG及GLS/IL-12重组BCG治疗6次,于第6次治疗后7d处死小鼠,检测肺、脾荷菌量、血清IL-12和IFN-γ水平、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平及肺、脾组织中颗粒溶素表达,并观察小鼠肺组织病理改变。结果重组MS和重组BCG组器官荷菌量明显低于MS和BCG组;重组MS和重组BCG组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于MS和BCG组,MS和BCG组明显高于生理盐水组;重组MS和重组BCG组脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平明显高于其他组;MS与BCG组比较,重组MS与重组BCG比较,荷菌量、病理变化、肺、脾中的IL-12和IFN-γ水平差异均无显著意义;淋巴细胞中的IFN-γ和TNF-α水平,MS与BCG组差异有显著意义,而重组MS与重组BCG组差异无显著意义;重组MS和重组BCG组在肺、脾中均有颗粒溶素表达;MS所致病变比相同剂量BCG轻。结论MS与BCG一样,可将要表达的基因靶向递送到相应的组织,并诱导特异性细胞免疫,同时其在体内的副作用低于BCG,因此可作为良好的有机载体。

关键词：耻垢分枝杆菌卡介苗载体颗粒溶素结核病

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耻垢分枝杆菌转录因子Ms6174广泛调控功能的鉴定及其调控生物被膜形成的机理研究

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基因组学与应用生物学 2022年第11期41卷 2144-2155页

作者：王瑞王坤郑慧霞张景馨金梅李伟辉亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室南宁530004 广西大学生命科学与技术学院南宁530004

在前期研究中,利用耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)转座插入突变体文库筛选并鉴定到的转录因子的编码基因ms6174突变后影响了其细菌菌落表面形态。利用凝胶阻滞迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)和β-半乳糖... 详细信息

在前期研究中,利用耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis)转座插入突变体文库筛选并鉴定到的转录因子的编码基因ms6174突变后影响了其细菌菌落表面形态。利用凝胶阻滞迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)和β-半乳糖苷酶活性实验证实了Ms6174直接负调控其自身所在基因簇的表达。同时,利用EMSA实验、DNaseⅠ酶切实验以及蛋白质与染色质DNA荧光共定位等实验发现Ms6174具有拟核结合蛋白的特性,即Ms6174是耻垢分枝杆菌中新的拟核结合蛋白。进一步通过转录组测序分析发现,相较于耻垢分枝杆菌野生型菌株,ms6174敲除菌株中有682个基因的表达水平发生了显著变化,其中有387个基因上调表达,295个基因下调表达,142个脂质代谢相关基因的表达水平发生变化。最后,检测并比较了耻垢分枝杆菌ms6174敲除突变体菌株与野生型菌株的菌落形态与生物被膜形成的差异,发现敲除ms6174后耻垢分枝杆菌的菌落表面褶皱与气液表面生物被膜增多,因此,转录因子Ms6174负调控耻垢分枝杆菌生物被膜的形成。综上,本研究鉴定了分枝杆菌中一个新的拟核结合蛋白Ms6174,其通过调控耻垢分枝杆菌脂代谢相关基因的表达而影响细菌生物被膜的形成。本研究为发掘新的广泛调控因子拟核结合蛋白提供了基础,为解析分枝杆菌生物被膜形成的调控机理提供了依据。

关键词：耻垢分枝杆菌转录调控拟核结合蛋白生物被膜

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