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2 篇 医学
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主题

2 篇 成纤维细胞
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2 篇 肝素结合类表皮生...
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1 篇 转基因
1 篇 心肌肌钙蛋白t
1 篇 神经系统
1 篇 修饰基因

机构

1 篇 中国医学科学院实...
1 篇 中国协和医科大学

作者

2 篇 冯娟
1 篇 张连峰
1 篇 彭健豪

语言

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检索条件"主题词=肝素结合类表皮生长因子"

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排序：

肝素结合类表皮生长因子参与DCM模型小鼠心脏间质纤维化

肝素结合类表皮生长因子参与DCM模型小鼠心脏间质纤维化

引用

亚洲实验动物学会联合会（AFLAS）第三次会议暨中国实验动物学会（CALAS）第八届学术年会

作者：冯娟彭健豪张连峰中国医学科学院实验动物研究所北京协和医学院比较医学中心卫生部人类疾病比较医学重点实验室

目的探讨肝素结合类表皮生长因子对DCM模型小鼠心脏间质纤维化的作用。方法 Western blotting检测野生型和DCM模型小鼠心脏中HB-EGF的表达,H&E和Masson染色检测DCM模型小鼠心脏组织学,Realtime PCR检测DCM模型小鼠心脏Ⅰ型胶原和Ⅲ... 详细信息

目的探讨肝素结合类表皮生长因子对DCM模型小鼠心脏间质纤维化的作用。方法 Western blotting检测野生型和DCM模型小鼠心脏中HB-EGF的表达,H&E和Masson染色检测DCM模型小鼠心脏组织学,Realtime PCR检测DCM模型小鼠心脏Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。显微注射法建立HB-EGF转基因C57BL/6J小鼠,PCR鉴定基因表型,Western blotting检测表达水平。病理检测HB-EGF转基因小鼠心脏的组织学,Realtime PCR检测HB-EGF转基因小鼠心脏Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。原代培养C57BL/6J小鼠心肌成纤维细胞,重组人HB-EGF(10ng/ml)刺激心肌成纤维细胞后,BrdU免疫组织化学法检测心肌成纤维细胞的增殖,Realtime PCR检测Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs),ERK1/2和JNK信号通路的变化。结果野生型小鼠心脏HB-EGF的表达随月龄增加而逐渐降低,而DCM转基因小鼠心脏中HB-EGF随月龄增加病情加重而增加,并伴随有间质纤维化以及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达增加(1.7倍和1.6倍)。用HB-EGF转基因小鼠研究HB-EGF的功能,发现HB-EGF可增加心脏间质纤维化,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达(1.8倍)。用重组人HB-EGF刺激原代培养心肌成纤维细,30 min即引起Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原表达显著增加,24h引起心肌成纤维细胞明显增殖,10 min即可引起ERK1/2,JNK磷酸化水平增加。结论结果证实HB-EGF参与DCM模型小鼠心脏间质纤维化。HB-EGF促进Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,可能通过MAPKs信号通路发挥上述作用。

关键词：肝素结合类表皮生长因子转基因模型心肌细胞成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶

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扩张型心肌病转基因小鼠模型的建立和心肌病修饰基因的筛选

扩张型心肌病转基因小鼠模型的建立和心肌病修饰基因的筛选

引用

作者：冯娟中国协和医科大学

学位级别：博士

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,Realtime PCR检测基因的拷贝... 详细信息

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入α-MHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,Realtime PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,组织学和电镜检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的病理改变。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的定位。超声心动图检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的结构和功能。记录cTnTR141W转基因小鼠的生存状况。逆转录PCR检测cTnTR141W转基因小鼠的心脏肥大分子标志物。结果建立了3个系的cTnTR141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnTR141W的表达水平是内源性cTnT的1.5倍～2.0倍。cTnTR141W转基因小鼠心脏组织学检测显示,室壁变薄,心室扩张,间质纤维化。电镜检测显示肌纤维变细,部分溶解。免疫组织化学检测显示,突变的cTnT蛋白聚集在cTnTR141W转基因小鼠心脏的肌小节中。M型超声心动图检测显示,左室收缩末期内径和左室舒张末期内径明显增加58.3%（p＜0.01）和27.8%（p＜0.01）,左室收缩期容积和左室舒张期容积显著增加191.2%（p＜0.01）和75.9%（p＜0.01）,射血分数和短轴缩短率分别降低39.9%（p＜0.01）和45.4%（p＜0.01）。从2月龄到8月龄,转基因小鼠左室收缩末期容积和左室舒张末期容积增加2倍左右,EF%降低36.7%,FS%降低39.7%。4月龄后转基因小鼠出现早期死亡,至8月龄早期死亡率达11.1%。心脏肥大的分子标记物检测显示Nppb表达增加29%,Actal增加4倍,而Atp2a2降低58%。结论cTnTR141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,和人类扩张型心肌病具有类似的病理表型。成功建立了cTnTR141W扩张型心肌病转基因小鼠模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。目的比较cTnTR92Q和cTnTR141W转基因小鼠,筛选肥厚型心肌病和扩张型心肌病的重要修饰基因。方法M型超声心动图检测cTnTR92Q和cTnTR141W转基因小鼠心脏的结构和功能。病理检测心脏组织学。透射电镜检测心脏的超微结构。免疫组织化学检测突变的cTnT蛋白的定位。基因表达芯片分析cTnTR92Q和cTnTR141W转基因小鼠心脏的基因表达差异,RT-PCR验证基因芯片分析结果。结果cTnTR92Q转基因小鼠显示室壁增厚,心腔缩小,心肌细胞排列紊乱,间质纤维化,心肌纤维变粗;射血分数和短轴缩短率增加,左室容积显著下降。cTnTR141W转基因小鼠显示室壁变薄,心室扩张,间质纤维化,心肌纤维变细,部分溶解;射血分数和短轴缩短率下降,左室容积显著增加。突变的cTnT蛋白在cTnTR92Q和cTnTR141W转基因小鼠心肌细胞的肌小节中分布不同。基因表达芯片分析显示1200个基因表现出不同的调控。RT-PCR验证30个表达改变的基因,包括肌小节蛋白基因,细胞骨架蛋白基因,钙调节相关蛋白基因,离子通道蛋白基因,细胞外基质基因,信号传导相关基因和未知基因等。结论cTnTR92Q和cTnTR141W突变蛋白的表达导致小鼠HCM和DCM两种相反的病理表型。在相同的遗传背景下,通过全基因表达芯片发现多种基因在HCM和DCM心脏中有相反的表达调控。其中Gas5、Riok1、Ask1、Meox1、Ryk、Dkk3和Wif-1等细胞外因子或表面受体有可能是控制心肌细胞向相反方向分化的重要修饰基因,为进一步认识心脏生长发育和心肌病的发病机制提供线索。目的探讨肝素结合类表皮生长因子对心脏的作用。方法Western blotting检测野生型和DCM模型小鼠心脏中HB-EGF的表达,HE和Masson染色检测DCM模型小鼠心脏组织学,Realtime PCR检测DCM模型小鼠心脏Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。显微注射法建立HB-EGF转基因C57BL/6J小鼠,PCR鉴定基因表型,Western blotting检测表达水平。病理检测HB-EGF转基因小鼠心脏的组织学,Realtime PCR检测HB-EGF转基因小鼠心脏Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。原代培养C57BL/6J小鼠心肌成纤维细胞,重组人HB-EGF（10ng/mL）刺激心肌成纤维细胞后,BrdU免疫组织化学法检测心肌成纤维细胞的增殖,Realtime PCR检测Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达,Westernblot检测丝裂原活化蛋白

关键词：心肌肌钙蛋白T 基因突变扩张型心肌病转基因模型心肌肌钙蛋白T 基因芯片转基因模型修饰基因肝素结合类表皮生长因子转基因模型心肌细胞成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶红色荧光蛋白转基因模型荧光成像系统神经系统绿色荧光蛋白转基因形态学

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