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生物化学与生物物理学报 2003年第11期35卷 1005-1010页

作者：郑继平王令春王芃罗刚李淑琴段海清黄翠芬张兆山北京生物工程研究所北京生物工程研究所北京100071

定居因子CFA/I和CS6是肠毒素大肠杆菌 (ETEC)中重要的两种优势抗原 ,是ETEC疫苗研制的首选组分。采用基因重组技术将二者构建在以asd基因为选择标记的重组质粒上 ,与asd基因缺失突变型减毒福氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主载体平衡致死系统... 详细信息

定居因子CFA/I和CS6是肠毒素大肠杆菌 (ETEC)中重要的两种优势抗原 ,是ETEC疫苗研制的首选组分。采用基因重组技术将二者构建在以asd基因为选择标记的重组质粒上 ,与asd基因缺失突变型减毒福氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主载体平衡致死系统。实验结果表明 ,重组疫苗候选株能够稳定表达CFA/I和CS6抗原 ,并可在菌体表面形成相应菌毛。重组菌口服免疫BALB/c小鼠后 ,可诱生相应的抗CFA/I和CS6的特异性血清抗体IgG和分泌型抗体sIgA ,说明以志贺氏菌为载体 ,可以构建同时表达多个定居因子抗原的ETEC多价菌苗

关键词：肠毒素大肠杆菌 CFA/I CS6 减毒福氏志贺氏菌多价疫苗

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肠毒素大肠杆菌CS3定居因子抗原和融合肠毒素基因在减毒痢疾杆菌中的共表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2003年第1期35卷 49-54页

作者：刘陶陶李淑琴张兆山郑继平刘秀丽罗刚黄翠芬北京生物工程研究所 100071 北京生物工程研究所

肠毒素和定居因子抗原 (CFAs)是肠毒素大肠杆菌 (ETEC)两种主要的致病因素。有效的ETEC疫苗应包括这两种成分。采用基因重组技术 ,将定居因子CFA/II的共有抗原成分CS3菌毛抗原和LT B/ST融合肠毒素基因克隆至以asd基因为选择标记的重组... 详细信息

肠毒素和定居因子抗原 (CFAs)是肠毒素大肠杆菌 (ETEC)两种主要的致病因素。有效的ETEC疫苗应包括这两种成分。采用基因重组技术 ,将定居因子CFA/II的共有抗原成分CS3菌毛抗原和LT B/ST融合肠毒素基因克隆至以asd基因为选择标记的重组质粒上 ,与asd基因剔除的弗氏志贺氏菌Fwl0 1构成了宿主载体平衡致死系统。结果表明 ,在无抗生素条件选择的情况下 ,该重组菌可稳定表达CS3菌毛抗原和LT B/ST融合肠毒素抗原。通过口服和鼻饲方式免疫小鼠 ,可诱生相应的血清IgG抗体 ,同时能够检测到分泌型IgA的产生 ,表明该重组菌可以有效的诱导产生粘膜免疫。

关键词：肠毒素大肠杆菌 CS3菌毛肠毒素弗氏志贺氏菌宿主载体平衡致死系统

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肠毒素大肠杆菌定居因子CS6抗原基因在痢疾杆菌中的表达

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生物化学与生物物理进展 2004年第2期31卷 154-158页

作者：罗刚李淑琴王令春赵莹郑继平段海清张兆山吉林大学生命科学学院长春130023 北京生物工程研究所北京100071

通过体外重组的方法 ,将asd基因插入重组表达质粒 ,使抗生素抗性失活 ,并与弗氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主载体平衡致死系统 .通过蛋白质印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6 .重组菌... 详细信息

通过体外重组的方法 ,将asd基因插入重组表达质粒 ,使抗生素抗性失活 ,并与弗氏志贺氏菌FWL0 1构成宿主载体平衡致死系统 .通过蛋白质印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6 .重组菌通过口服和鼻饲免疫小鼠后 ,可以诱生CS6血清IgG抗体 ;同时可以检测到分泌型IgA产生 ,表明重组菌可以诱导相应的黏膜免疫反应 .

关键词：肠毒素大肠杆菌痢疾杆菌宿主-载体平衡致死系统活载体疫苗基因表达 CS6抗原基因

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肠毒素大肠杆菌定居因子抗原基因CFA-I在痢疾杆菌中的表达

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第3期33卷 277-280页

作者：张波李淑琴陈冠军黄翠芬张兆山山东大学生命科学院微生物技术国家重点实验室!济南250100 北京生物工程研究所!北京100071

通过体外重组的方法 ,构建了包含asd基因的重组表达质粒 pZHY2 1,与福氏志贺氏菌Fwl0 1构成了宿主载体平衡致死系统 ,Western印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CFA I。电镜结果显示 ,... 详细信息

通过体外重组的方法 ,构建了包含asd基因的重组表达质粒 pZHY2 1,与福氏志贺氏菌Fwl0 1构成了宿主载体平衡致死系统 ,Western印迹结果表明 ,在没有抗生素条件选择的情况下 ,稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CFA I。电镜结果显示 ,在重组菌株的菌体表面 ,表达产物能够装配成菌毛。重组菌通过口服和鼻饲免疫小鼠后 ,可以诱生CFA I的抗体 ;同时可以检测到分泌型IgA产生 ,表明重组菌可以诱导相应的粘膜免疫反应

关键词：肠毒素大肠杆菌 CFA-I 痢疾杆菌平衡致死系统

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肠毒素大肠杆菌定居因子CS3和肠毒素融合抗原基因在减毒鼠伤寒沙门氏菌中的共表达(英文)

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Acta Genetica Sinica 2002年第4期29卷 370-376页

作者：徐兵张兆山李淑琴舒东黄翠芬军事医学科学院生物工程研究所北京100071

不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)是产肠毒素大肠杆菌的主要致病因素 ,CS3为该菌的优势定居因子 ,是定居因子CFA/II菌毛抗原的共有抗原组分。采用基因操作技术将编码CS3和融合肠毒素蛋白基因转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗候选株X4 0... 详细信息

不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)是产肠毒素大肠杆菌的主要致病因素 ,CS3为该菌的优势定居因子 ,是定居因子CFA/II菌毛抗原的共有抗原组分。采用基因操作技术将编码CS3和融合肠毒素蛋白基因转化到减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗候选株X4 0 72中进行表达。用重组菌株口服免疫小鼠后 ,免疫动物能产生抗CS3、LT和ST的血清抗体。特别有意义的是 ,所产生的抗ST抗体能中和天然ST的生物活性。

关键词：肠毒素大肠杆菌定居因子CS3 肠毒素融合抗原基因减毒鼠伤寒沙门氏菌共表达

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肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型的建立以及疫苗候选株保护效果的评价

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世界华人消化杂志 2006年第28期14卷 2753-2758页

作者：王志斌姜普林曾年华李淑琴王令春李燕熊仕秋张兆山广州军区疾病预防控制中心广东省广州市510507 北京生物工程研究所北京市100071 中山大学基础医学院广东省广州市510089

目的:建立肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型以及应用模型对疫苗候选株免疫效果进行评价．方法:通过鼻饲半数致死量(LD50)肠毒素大肠杆菌E44813,E44815和E11881A观察小鼠肺病理学变化、肺部细菌清除情况变化,建立肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型;... 详细信息

目的:建立肠毒素大肠杆菌攻毒小鼠模型以及应用模型对疫苗候选株免疫效果进行评价．方法:通过鼻饲半数致死量(LD50)肠毒素大肠杆菌E44813,E44815和E11881A观察小鼠肺病理学变化、肺部细菌清除情况变化,建立肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型;应用鼻饲小鼠模型观察疫苗候选株FE1,FE3,FE6保护效果．结果:鼻饲LD50剂量肠毒素大肠杆菌小鼠的病理特征是肺组织存在大量的淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和浆细胞,为多病灶支气管肺炎,肺部细菌清除缓慢,至第7天仍能检测到105数量级的细菌．应用疫苗候选株免疫后进行攻毒,小鼠没有发病和死亡,病理特征主要是淋巴细胞少量增多,肺部细菌清除迅速,至第7天已检测不到细菌,与对照有显著性差异(0 CFU／g vs 6．2×105,5．4×105,2．3×105 CFU／g,P<0．05)．结论:肠毒素大肠杆菌鼻饲小鼠模型能够为疫苗筛选和评价提供了有效途径,同时也证实了疫苗候选株FE1,FE3,FE6具有良好的免疫保护效果．

关键词：肠毒素大肠杆菌攻毒实验小鼠模型疫苗菌株保护效果

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肠毒素大肠杆菌定居因子CS6抗原基因在大肠杆菌中的高效表达

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军事医学科学院院刊 2004年第3期28卷 232-234页

作者：罗刚杨晓李淑琴张兆山军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的 :构建表达肠毒素大肠杆菌 (ETEC)定居因子CS6的重组质粒 ,并在大肠杆菌DH5α中高效表达。方法 :利用基因工程的方法 ,将含有CS6基因的质粒pMG2 33用限制性内切酶ClaⅠ酶切 ,得到长约 3.1kb的CS6片段 (含有CS6结构基因及调控基因的... 详细信息

目的 :构建表达肠毒素大肠杆菌 (ETEC)定居因子CS6的重组质粒 ,并在大肠杆菌DH5α中高效表达。方法 :利用基因工程的方法 ,将含有CS6基因的质粒pMG2 33用限制性内切酶ClaⅠ酶切 ,得到长约 3.1kb的CS6片段 (含有CS6结构基因及调控基因的DNA片段 ) ;并与用限制性内切酶ClaⅠ酶切的表达载体质粒pBV32 1连接 ,得到含有CS6片段的重组质粒pMG2 35 ,转化至大肠杆菌DH5α。结果 :SDS PAGE、Western印迹及免疫荧光观察的结果表明 ,重组菌DH5α/pMG2 35可高效表达相对分子质量为 14 6 0 0的CS6抗原蛋白 ,并在重组菌表面表达 ,表达产物可被抗CS6多克隆抗体识别。结论 :重组菌可稳定表达肠毒素大肠杆菌定居因子抗原CS6。

关键词：肠毒素大肠杆菌 CS6 重组克隆基因表达

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共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/Ⅰ、CS6与单独表达CFA/Ⅰ、CS6痢疾载体候选疫苗株的免疫原性比较

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军事医学科学院院刊 2004年第3期28卷 235-238页

作者：郑继平王令春王芃李淑琴罗刚黄翠芬张兆山军事医学科学院生物工程研究所北京100071

目的 :评价同一菌株表达多种肠毒素大肠杆菌 (ETEC)定居因子时的免疫效果 ,为构建多价疫苗提供依据。方法 :以同等剂量分别口服免疫BALB/c小鼠 ,比较并评价共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/Ⅰ、CS6的减毒弗氏痢疾菌苗株FWL0 1(pZCF16 ... 详细信息

目的 :评价同一菌株表达多种肠毒素大肠杆菌 (ETEC)定居因子时的免疫效果 ,为构建多价疫苗提供依据。方法 :以同等剂量分别口服免疫BALB/c小鼠 ,比较并评价共表达肠毒素大肠杆菌定居因子CFA/Ⅰ、CS6的减毒弗氏痢疾菌苗株FWL0 1(pZCF16 )与单独表达CFA/Ⅰ的FWL0 1(pZHY2 1)和表达CS6的FWL0 1(pZLG6 )免疫效果。结果 :免疫BALB/c小鼠全部产生了抗CFA/Ⅰ和 (或 )CS6的特异性血清抗体IgG和分泌性抗体sIgA。共表达CFA/Ⅰ、CS6的减毒弗氏痢疾菌苗株FWL0 1(pZCF16 )免疫动物后 ,血清和黏膜抗体滴度与单独表达CFA/Ⅰ的FWL0 1(pZHY2 1)和表达CS6的FWL0 1(pZLG6 )的免疫效果相似。结论 :共表达ETECCFA/Ⅰ和CS6的减毒弗氏痢疾菌苗株FWL0 1(pZCF16 )能够像单独表达相应抗原的菌苗株一样有效激发机体抗CFA/I和CS6的体液及肠道黏膜免疫应答 ,为构建ETEC多价疫苗奠定了基础。

关键词：肠毒素大肠杆菌 CFMⅠ CS6 弗氏志贺菌免疫

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猪肠毒素大肠杆菌(ETEC)F18受体基因型检测报告

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遗传 2002年第6期24卷 656-658页

作者：施启顺谢新民柳小春黄生强贺长青湖南农业大学动物科技学院长沙410128

采用PCR-RFLP法检测了湖南境内大白、长白、杜洛克3品种共158头猪的***18受体基因型。结果表明,抗性基因型AA的频率为0.11,敏感型AG、GG的频率分别为0.35和0.54。

关键词：猪肠毒素大肠杆菌 F18受体基因型检测报告

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中外猪种肠毒素大肠杆菌F4受体黏附差异比较

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2006年第2期32卷 158-160页

作者：蒋隽柳小春刘鑫贺长青施启顺湖南农业大学动物科技学院湖南长沙410128

为给筛选肠毒素大肠杆菌(ETEC)抗病性的分子遗传标记提供依据,采用体外黏附测定大约克和沙子岭初生仔猪ETECF43种抗原型(ab,ac,ad)的黏附性,并进行了比较.结果表明,F4 ab黏附素对大约克猪和沙子岭猪均黏附强烈,而F4 ac则表现为不黏附;... 详细信息

为给筛选肠毒素大肠杆菌(ETEC)抗病性的分子遗传标记提供依据,采用体外黏附测定大约克和沙子岭初生仔猪ETECF43种抗原型(ab,ac,ad)的黏附性,并进行了比较.结果表明,F4 ab黏附素对大约克猪和沙子岭猪均黏附强烈,而F4 ac则表现为不黏附;两个品种中均存在较高频率的F4 abR+-acR-;F4ad黏附素对沙子岭猪的黏附较强烈(0.400),而对大约克猪并不强烈黏附(0.242).上述结果也暗示,猪F4 ab受体和F4 ac受体存在较强的连锁,而与F4ad受体无此关系.

关键词：肠毒素大肠杆菌 F4 体外黏附测定仔猪

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