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金丝桃苷对SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌PGI2、TXA2及PAF的影响

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2007年第4期35卷 6-10页

作者：周宏超范光丽穆祥胡格索占伟西北农林科技大学动物科技学院北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京昌平102206 北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室

通过检测金丝桃苷对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌前列环素(PGI2)、血栓素(TXA2)及血小板活化因子(PAF)的影响,探索中药复方有效成分金丝桃苷对仔猪水肿病的疗效机制。将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为阴性对照组、阳性... 详细信息

通过检测金丝桃苷对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌前列环素(PGI2)、血栓素(TXA2)及血小板活化因子(PAF)的影响,探索中药复方有效成分金丝桃苷对仔猪水肿病的疗效机制。将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为阴性对照组、阳性对照组、不同质量浓度金丝桃苷处理组等6个组,采用ELISA法测定了培养3,6,9和12 h时细胞上清液中PGI2、TXA2及PAF质量浓度的变化。结果表明,不同质量浓度金丝桃苷处理组对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞过量分泌PG12、PAF无明显的抑制作用;1和5μg／mL质量浓度金丝桃苷处理组对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞TXA2的分泌具有明显的下调作用。南此可见,金丝桃苷通过抑制SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞TXA2的过量分泌,阻止血小板聚集,避免微血栓形成,以达到治疗疾病的目的;金丝桃苷保护大鼠肠黏膜微血管内皮细胞损伤的模型剂量为1和5μg／mL。

关键词： SLT-Ⅱe 肠黏膜微血管内皮细胞前列环素血栓素A2 血小板活化因子

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中药复方主要成分对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能的影响

中药复方主要成分对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能的...

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作者：周宏超西北农林科技大学

学位级别：博士

本试验以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(rat intestinal microvascular endothelial cells,RIMEC)为模型,探讨了猪水肿病主要毒力因子志贺样毒素Ⅱ型变异体(shiga like toxinⅡvariant,SLT-Ⅱe)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌功... 详细信息

本试验以体外培养的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(rat intestinal microvascular endothelial cells,RIMEC)为模型,探讨了猪水肿病主要毒力因子志贺样毒素Ⅱ型变异体(shiga like toxinⅡvariant,SLT-Ⅱe)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能及黏附分子表达的影响,并研究了筛选出的中药复方主要成分(茯苓酸、黄芪甲苷、黄芪多糖、大黄素、大黄酸、金丝桃苷及槲皮素)对SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能及黏附分子表达失调的影响,以期从调节微血管内皮细胞分泌功能,改善微循环角度,揭示中药复方治疗猪水肿病的抗炎机制和疗效机制。 1.建立了猪水肿病病理模型,并从临床治疗猪水肿病的24服中药复方制剂中筛选出一服防治效果最佳的中药复方制剂(由茯苓、黄芪、大黄及山楂等组成)。 2.采用猪水肿病主要毒力因子SLT-Ⅱe刺激大鼠肠黏膜微血管内皮细胞建立了猪水肿病的细胞病理模型,确定SLT-Ⅱe最佳作用剂量为1μg/mL。1μg/mL SLT-Ⅱe诱导大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素、sICAM-1的分泌浓度均显著高于相应对照组的分泌浓度。 3.应用ELISA、硝酸还原酶法及原位杂交等方法,检测了茯苓的主要成分茯苓酸对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能及黏附分子表达的影响,试验结果显示茯苓酸对SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、TXA2及sICAM-1的分泌具有较强的抑制作用。原位杂交结果显示SLT-Ⅱe主要诱导肠黏膜微血管内皮细胞iNOS mRNA的表达;茯苓酸下调SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞iNOS mRNA、ecNOS mRNA、ET-1 mRNA及ICAM-1 mRNA的表达。 4.采用ELISA、硝酸还原酶法及原位杂交等方法,检测了黄芪的主要成分黄芪甲苷、黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能及黏附分子表达的影响,试验结果显示黄芪甲苷对SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、sICAM-1的分泌具有较强的抑制作用。原位杂交结果显示黄芪甲苷对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞iNOS mRNA、ET-1 mRNA及ICAM-1 mRNA的表达有下调作用。黄芪多糖对SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、TXA2、sICAM-1的分泌具有下调作用。 5.使用ELISA、硝酸还原酶法及原位杂交等方法,检测了大黄的主要成分大黄素、大黄酸对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能及黏附分子表达的影响,试验结果显示大黄素对SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、PGI2、P-选凝素、sICAM-1的分泌具有较强的抑制作用。原位杂交结果显示大黄素对SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞iNOS mRNA、ET-1 mRNA及ICAM-1 mRNA的表达有下调作用。大黄素也可上调SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞AQP1 mRNA表达下降。大黄酸对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、P-选凝素、sICAM-1的分泌具有下调作用。 6.采用ELISA、硝酸还原酶法及原位杂交等方法,检测了山楂主要成分金丝桃苷、槲皮素对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能及黏附分子表达的影响,试验结果显示金丝桃苷对SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、TXA2、sICAM-1的分泌具有明显的下调作用。原位杂交结果显示金丝桃苷对SLT-Ⅱe诱导的肠黏膜微血管内皮细胞iNOS mRNA、ET-1 mRNA及ICAM-1 mRNA的表达有下调作用。槲皮素对SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO、ET-1、PGI2、TXA2、sICAM-1的分泌具有下调作用。通过上述较为系统研究,提示中药复方主要成分茯苓酸、黄芪甲苷、黄芪多糖、大黄素、大黄酸、金丝桃苷及槲皮素治疗猪水肿病的作用机制可能是下调微血管内皮细胞NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素、ICAM-1的分泌,调控微血管内皮细胞功能,调节AQP1的表达,改善体内微循环。

关键词：中药复方主要成分肠黏膜微血管内皮细胞 SLT-Ⅱe

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白头翁汤对大鼠体外PMNs溶菌酶的影响

白头翁汤对大鼠体外PMNs溶菌酶的影响

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中国畜牧兽医学会中兽医学分会2013年学术年会

作者：刘晓晔张涛穆祥北京农学院

现代中药抗菌机理的研究多采取体外抑菌实验,这并不能完全阐述中药的抑菌杀菌作用。本试验主要探讨白头翁汤对穿过RIMECs的PMNs和血液中提取的PMNs溶菌酶活性和含量的变化,来研究其抗菌机理。选取白头翁汤20μg/m1、LPS 1μg/ml以及白... 详细信息

现代中药抗菌机理的研究多采取体外抑菌实验,这并不能完全阐述中药的抑菌杀菌作用。本试验主要探讨白头翁汤对穿过RIMECs的PMNs和血液中提取的PMNs溶菌酶活性和含量的变化,来研究其抗菌机理。选取白头翁汤20μg/m1、LPS 1μg/ml以及白头翁汤+LPS共同作用于RIMECs和PMNs共培养小室,测定穿肠PMNs溶菌酶活性,发现白头翁汤+LPS组显著高于对照组和LPS组(P<0.05),其溶菌酶含量极显著高于对照组和LPS组(P<0.01)。但是无RIMECs参与下,无论有否白头翁汤的作用,PMNs溶菌酶活性和含量均无明显改变。结果提示白头翁汤治疗动物细菌性疾病机理很有可能是通过保护RIMECs不受LPS作用,从而使免疫细胞PMNs内溶菌酶活性和含量的提升来实现。

关键词：白头翁汤 LPS 肠黏膜微血管内皮细胞 PMNs 溶菌酶

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γ干扰素对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞免疫功能的影响

γ干扰素对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞免疫功能的影响

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作者：张楠楠内蒙古农业大学

学位级别：硕士

本试验在体外成功分离培养出大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs),为探讨γ干扰素对RIMMVECs免疫机理的影响,分别用不同浓度的γ干扰素刺激细胞,应用流式细胞术检测细胞粘附分子1这一重要免疫相关因子的表达,并同时检测细胞表面γ干扰... 详细信息

本试验在体外成功分离培养出大鼠肠黏膜微血管内皮细胞(RIMMVECs),为探讨γ干扰素对RIMMVECs免疫机理的影响,分别用不同浓度的γ干扰素刺激细胞,应用流式细胞术检测细胞粘附分子1这一重要免疫相关因子的表达,并同时检测细胞表面γ干扰素受体量的变化;应用ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中α干扰素和β干扰素的表达。结果:RIMMVECs基础性表达γ干扰素受体,各浓度组细胞在6h内ICAM-1表达量都大大增加;γ干扰素对细胞表达α干扰素和β干扰素的影响不大。结论:γ干扰素和IFN-γ受体结合后可激活内皮细胞,增强细胞的分泌功能,上调ICAM-1的表达量;γ干扰素能够参与RIMMVECs的免疫应答和炎症反应过程并发挥其相应的调节作用。

关键词： γ干扰素大鼠肠黏膜微血管内皮细胞细胞间粘附分子1 γ干扰素受体 α/β干扰素

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乳酸对LPS诱导的MIMVEC细胞信号通路NF-Κb的调控作用

乳酸对LPS诱导的MIMVEC细胞信号通路NF-Κb的调控作用

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中国畜牧兽医学会信息技术分会2011年学术研讨会

作者：刘静薛九州朱志宁任晓明北京农学院动物科学技术学院北京　102206

目的：探讨乳酸抑制脂多糖(LPS)致大鼠肠粘膜微血管内皮细胞(MIMVEC)中核因子κ B(NF-κ B)P65表达的作用。方法：原代培养MIMVEC，分为空白对照组、LPS阳性对照组、乳酸高浓度组、中浓度组和低浓度组，高、中、低浓度的乳酸预处理... 详细信息

目的：探讨乳酸抑制脂多糖(LPS)致大鼠肠粘膜微血管内皮细胞(MIMVEC)中核因子κ B(NF-κ B)P65表达的作用。方法：原代培养MIMVEC，分为空白对照组、LPS阳性对照组、乳酸高浓度组、中浓度组和低浓度组，高、中、低浓度的乳酸预处理细胞3 h后，LPS处理细胞4 h，用ELISA方法检测TNF-α和IL-6的表达量。用荧光定量PCR方法对NF-Κb Mrna进行定量检测;用Western blotting的方法检测NF-κ B p65蛋白表达的变化。结果：荧光定量PCR结果显示，LPS处理细胞4 h的乳酸高、中、低浓度组中NF-κ B Mrna的表达量是空白组对照的1.51倍、2.62倍、3.00倍，而LPS组中NF-κ B Mrna的表达量是空白对照组的7.36倍;Western blotting的结果显示，各组蛋白提取物中均存在分子量约为65 kd的、与兔抗NF-Κb P65多克隆抗体发生免疫阳性反应的蛋白条带，且乳酸高浓度组细胞中NF-κ B P66的表达与空白对照组相比差异不显著(P＞0.05);中浓度组和低浓度组细胞中NF-Κb P65的表达与空白对照组相比差异显著(P＜0.05)。LPS组NF-κ B P65的表达与其他各组相比均差异极显著(P＜0.01)。结论：乳酸对LPS所致的MIMVEC细胞NF-κ B激活具有明显的抑制作用，下调了转录因子NF-κ B的转录活性，进而抑制了炎性因子TNF-α和IL-6的表达。

关键词：乳酸预处理肠黏膜微血管内皮细胞乳酸抑制脂多糖核因子κ B 表达调控 ELISA法

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黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响

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北京农学院学报 2005年第4期20卷 58-60页

作者：解慧梅穆祥胡格刘易通于同泉路苹黄会岭河北农业大学动物科学技术学院河北保定071000 北京农学院动物科学技术系北京100094

笔者探讨黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响,结果表明:采用硝酸还原酶法黄芪多糖(900μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和3 h时极显著高于对照组(P0.05)。黄芪多糖可引起大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌量的升高。

笔者探讨黄芪多糖对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO的影响,结果表明:采用硝酸还原酶法黄芪多糖(900μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和3 h时极显著高于对照组(P<0.01),在6 h显著高于对照组细胞(P<0.05);黄芪多糖(450μg/mL)组细胞分泌NO量在1 h和6 h时显著高于对照组(P<0.05),在3 h与对照组差异不显著(P>0.05)。黄芪多糖可引起大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌量的升高。

关键词：黄芪多糖肠黏膜微血管内皮细胞 NO

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黄芪甲苷对SLT-Ⅱe诱导RIMEC分泌NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素及sICAM-1的影响

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中国兽医科学 2009年第10期39卷 922-927页

作者：周宏超范光丽刘钟杰穆祥西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 北京农学院兽医学(中医药)北京市重点实验室北京102206 中国农业大学动物医学院北京100094

将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱe组、不同浓度黄芪甲苷处理组等5个组,采用ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素及sICAM-1浓度的变化。结果显示,5μg/mL黄芪甲苷可下调SLT... 详细信息

将培养的肠黏膜微血管内皮细胞分为对照组、SLT-Ⅱe组、不同浓度黄芪甲苷处理组等5个组,采用ELISA法测定了培养3、6、9和12 h时细胞培养上清液中NO、ET-1、PGI2、TXA2、P-选凝素及sICAM-1浓度的变化。结果显示,5μg/mL黄芪甲苷可下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NO及sICAM-1的分泌,12 h内使NO及sICAM-1分泌浓度接近正常水平;1、5、10μg/mL黄芪甲苷不能下调SLT-Ⅱe诱导的大鼠肠黏膜微血管内皮细胞ET-1、PGI2、TXA2和P-选凝素的分泌。说明,黄芪甲苷通过抑制SLT-Ⅱe诱导肠黏膜微血管内皮细胞NO及sICAM-1的分泌,缓解局部炎症反应,达到治疗水肿病的目的。

关键词： SLT-Ⅱe 肠黏膜微血管内皮细胞 NO ET-1 PGI2 TXA2 P-选凝素 sICAM-1 黄芪甲苷

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加味白头翁汤主要成分对肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌的影响

加味白头翁汤主要成分对肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌的影响

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中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：王自力索占伟许剑琴穆祥王新中国农业大学动物医学院北京农学院动物科学系中国农业大学动物医学院北京农学院动物科学系山东莱阳农学院

目的探讨加味白头翁汤对治疗大肠杆菌病的作用机制,为防治大肠杆菌病的中药方剂提供试验依据方法:利用体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞,研究加味白头翁汤主要成分白头翁素、小檗碱、七叶亭、绿原酸对正常肠黏膜微血管内皮细胞作用3、6... 详细信息

目的探讨加味白头翁汤对治疗大肠杆菌病的作用机制,为防治大肠杆菌病的中药方剂提供试验依据方法:利用体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞,研究加味白头翁汤主要成分白头翁素、小檗碱、七叶亭、绿原酸对正常肠黏膜微血管内皮细胞作用3、6h后的NO分泌量的影响,以及对经大肠杆菌内毒素作用1h后肠黏膜微血管内皮细胞于3、6h后的NO分泌量的影响。结果:白头翁素可维持肠黏膜微血管内皮细胞NO正常分泌量,且可通过抗内毒素来保护肠黏膜微血管内皮细胞;小檗碱和绿原酸可引起肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌量的升高;七叶亭可抑制肠黏膜微血管内皮细胞合成分泌NO,对内毒素引起的肠黏膜微血管内皮细胞NO分泌升高具有抑制作用。

关键词：加味白头翁汤肠黏膜微血管內皮细胞内毒素一氧化氮分泌

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穿心莲内酯抗志贺样毒素Ⅱ型变异体损伤RIMMVECs的机理初探

穿心莲内酯抗志贺样毒素Ⅱ型变异体损伤RIMMVECs的机理初探

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作者：吴军中国农业大学

学位级别：硕士

为了探讨中药防治猪水肿病的作用机理，本试验采用体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的方法，探讨了志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-IIe)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的损伤剂量和分泌一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血栓素B<,2&gt... 详细信息

为了探讨中药防治猪水肿病的作用机理，本试验采用体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的方法，探讨了志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-IIe)对大鼠肠黏膜微血管内皮细胞的损伤剂量和分泌一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血栓素B<,2>(TXB<,2>)的影响，以及穿心莲内酯对SLT-IIe损伤后的肠黏膜微血管内皮细胞分泌功能的影响。试验结果表明：\n 1.10μg·mL<\'-1> SLT-IIe可以使NO、TXB<,2>分泌量显著或极显著(p<0.05或p<0.01)升高，提示SLT-IIe对肠黏膜微血管有直接的损伤作用。\n 2.在18 h时间段内，5μg·mL<\'-1>穿心莲内酯作用于肠黏膜微血管内皮细胞，其NO、ET-1、TXB<,2>分泌量与空白组差异均不显著(p>0.05)，提示5μg·mL<\'-1>穿心莲内酯是细胞试验的安全浓度。\n 3.10μg·mL<\'-1>SLT-IIe作用后的肠黏膜微血管内皮细胞，再经20μg·mL<\'-1>的穿心莲内酯作用后，在18 h内显著升高ET-1的分泌量(p<0.01)，而NO的分泌量无显著变化(p>0.05)，提示穿心莲内酯可以通过调节血管舒缩，从而起到保护微血管内皮细胞的作用。但是TXB<,2>分泌量与SLT-IIe组相比没有显著差异，提示穿心莲内酯对微血管内血栓的治疗作用不明显。\n 4.5μg·mL<\'-1>穿心莲内酯作用后，再经10μg·mL<\'-1>SLT-IIe作用后的肠黏膜微血管内皮细胞显著升高ET-1的分泌量(p<0.01)，NO和TXB<,2>分泌量与空白组相比无显著变化(p>0.

关键词：猪水肿病肠黏膜微血管内皮细胞志贺样毒素穿心莲内酯

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