检索结果-内蒙古大学图书馆

吉林大学学报（医学版） 2013年第4期39卷 720-725,I0002,I0003页

作者：李里南晓娟吴玉斌中国医科大学附属盛京医院小儿肾脏风湿免疫科辽宁沈阳110004 辽宁医学院附属第一医院儿科辽宁锦州121000

目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。... 详细信息

目的:观察体外转染配对盒基因2(PAX2)对WNT4通路的激活作用及WNT4通路对PAX2诱导转分化的作用,探讨PAX2转分化机制。方法:应用脂质体介导将重组质粒pEGFP-PAX2转染入体外培养的大鼠肾小管上皮细胞,经G418筛选,建立稳定表达PAX2细胞系。细胞分为稳定转染PAX2组、空载组和对照组。Western blotting法和实时荧光定量(Real-time)PCR法检测各组细胞WNT4和β-catenin表达。应用靶向WNT4基因的siRNA沉默稳定转染PAX2细胞的WNT4,应用荧光显微镜观察转染效率,进行沉默鉴定筛选出最佳干扰链。将最佳干扰链WNT4siRNA转染至稳定转染PAX2细胞。在沉默24、48、72和96h应用Westernblotting法和Real-time PCR法检测β-catenin、正常肾小管上皮细胞表型标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)和成纤维细胞表型标志物α-肌动蛋白(α-SMA)表达,同时筛选出沉默最佳时间点。应用免疫组织化学染色法检测沉默最佳时间点组E-cadherin和α-SMA蛋白表达。结果:Western blotting和Real-time PCR检测,稳定转染PAX2细胞组WNT4和β-catenin蛋白及mRNA表达水平较空载组和对照组明显增加(P<0.05)。阴性siRNA转染入稳定转染PAX2细胞24h后荧光显微镜观察,转染效率为47.46%±4.48%。3条WNT4干扰链分别转染至稳定转染PAX2细胞,Real-time PCR和Western blotting结果显示第3干扰链沉默效果最佳,WNT4mRNA表达抑制率为66.9%±3.8%(P<0.05);WNT4蛋白表达抑制率为63.7%±2.5%(P<0.05)。将最佳干扰链转染至稳定转染PAX2细胞,干扰24、48、72和96h后,各时间点细胞中的β-catenin mRNA及蛋白表达水平较对照组下调,72h组下调明显(P<0.05);各时间点细胞中E-cadherin mRNA及蛋白表达水平较对照组明显上调,72h组上调明显(P<0.05);各时间点细胞中α-SMA mRNA及蛋白表达水平较对照组明显下调,72h下调明显(P<0.05)。结论:PAX2转染至肾小管上皮细胞后激活了WNT4通路,PAX2在体外诱导正常肾小管上皮细胞间充质转分化可能是通过WNT4/β-catenin通路完成。

关键词： WNT4 配对盒基因2 肾小管上皮细胞转分化 RNA干扰

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血管紧张素Ⅱ对大鼠肾小管上皮细胞程序性坏死的影响

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上海交通大学学报（医学版） 2015年第6期35卷 813-818,823页

作者：王鱼璇甘华重庆医科大学附属第一医院肾内科重庆400016

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)程序性坏死的影响。方法体外合成RIP3 siRNA干扰片段,用siRNA-mate转染试剂转染NRK-52E细胞,Western blotting验证RIP3蛋白表达。MTT法测细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡率,... 详细信息

目的探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)程序性坏死的影响。方法体外合成RIP3 siRNA干扰片段,用siRNA-mate转染试剂转染NRK-52E细胞,Western blotting验证RIP3蛋白表达。MTT法测细胞存活率,流式细胞仪测细胞凋亡率,荧光酶标仪测细胞中的活性氧(ROS),实时定量PCR和Western blotting检测RIP1和RIP3 mRNA和蛋白的表达。结果 RIP3 siRNA转染NRK-52E后,与对照组比较,RIP3蛋白表达明显下降(P<0.01)。与对照组比较,AngⅡ组存活率下降,凋亡率及ROS、RIP1和RIP3表达明显升高(P<0.01)。与AngⅡ组比较,Z-VAD提高细胞存活率,降低凋亡率和ROS水平(P<0.01),上调RIP1和RIP3表达(P<0.01);Nec-1和RIP3 siRNA降低坏死率(P<0.01),对凋亡率无明显影响(P>0.05),并能降低ROS、RIP1和RIP3的表达(P<0.01)。结论 AngⅡ能诱导大鼠肾小管上皮细胞发生程序性坏死,与RIP1、RIP3及ROS生成有关。

关键词：程序性坏死血管紧张素Ⅱ 肾小管上皮细胞 RIP1 RIP3 活性氧

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肾小管上皮细胞C3aR的表达调控及其活化作用研究

肾小管上皮细胞C3aR的表达调控及其活化作用研究

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作者：张志诚南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景补体系统是一种生物级联反应体系,具有复杂而精密的调控机制,包含30多种血浆和细胞相关蛋白。补体系统组成成分大致可分为能与细胞结合的固有成分、各种调节因子以及相关的补体受体等。补体系统能被众多因素激活发生级联酶促反... 详细信息

研究背景补体系统是一种生物级联反应体系,具有复杂而精密的调控机制,包含30多种血浆和细胞相关蛋白。补体系统组成成分大致可分为能与细胞结合的固有成分、各种调节因子以及相关的补体受体等。补体系统能被众多因素激活发生级联酶促反应,这些因素包括病原体、自身抗体、细胞凋亡以及组织的缺血缺氧和坏死等。补体系统的激活主要通过三种途径,即经典途径、旁路途径和甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin, MBL)途径。三种活化途径生成的C3转化酶促使补体C3活化、裂解,释放C3b调理素、生成C5转化酶,最后形成C5b-9,也称作膜攻击复合物(membrane attack complex, MAC)。C5b-9能够破坏靶细胞的磷脂双分子层,导致细胞损伤以及凋亡,它还能够活化中性粒细胞、内皮细胞及上皮细胞,参与炎性反应。补体系统也是先天免疫的一个重要组成部分,它们可以识别来源于普通病原体的保守抗原,并做出迅速而强烈的回应。而除参与机体的宿主防御外,补体系统正常或异常激活还参与包括肾脏病在内多种疾病的发生及进展。以往人们对肾脏疾病中的补体系统功能的关注更多的是MAC效应,然而近年来,在补体活化过程中,由补体C3通过C3转化酶催化而裂解生成的小片段C3a以及其特异性受体C3aR在肾脏疾病病理过程中的作用逐渐受到学者们的广泛关注。补体系统经过三种途径激活后共同生成C3转化酶,并催化裂解补体C3,使其生成大片段C3b和其代谢物(iC3b,C3dg)以及小片段(C3a), C3b再经过一系列级联酶促反应,最终生成C5b-9。C3a是一个大约包含77个氨基酸残基的多肽,作为一种强效的促炎因子,除了能够参与机体的先天性免疫反应,C3a还能作用于广泛的免疫及非免疫性细胞发挥众多的生物学效应。例如,调节血管舒张,增加小血管的通透性,引发平滑肌的收缩。对于有吞噬功能的细胞(中性粒细胞、巨噬细胞),C3a有强烈的化学趋化作用,使吞噬细胞迁移至组织的损伤或炎症区域。C3a还能促进嗜碱性粒细胞和肥大细胞释放组胺,引发中性粒细胞的氧化猝发现象。C3a还参与组织的再生和纤维化过程,如促进肝脏组织的再生。C3aR是C3a的特异性受体,它属于G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors, GPCR)超级家族的一员,拥有一个通过胞内胞外环结构链接的7次跨膜结构域。在过去的十年中,已有许多文献报道C3aR表达于众多类型细胞上。众所周知,对于骨髓源性细胞,如单核细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、T细胞及肥大细胞等均能检测到C3aR的表达,当然,C3aR也会表达于如活化的星形胶质细胞、内皮细胞、上皮细胞以及平滑肌细胞这类非骨髓源性细胞上。而近几年的研究表明,在肾脏组织中,其小管上皮细胞和足细胞也均能表达C3aR,且多种肾脏疾病模式小鼠的肾组织中,C3aR mRNA及蛋白表达明显上调,这种表达上调在肾脏疾病发病前就己出现,说明C3a/C3aR轴异常激活参与肾脏疾病的发生发展,而不是单纯由疾病导致的伴随现象。肾脏疾病的发病机制与补体系统激活的关系错综复杂,许多研究发现,肾脏疾病如：各类自身抗体介导的肾小球肾炎,C3肾小球沉积病,移植肾后缺血再灌注损伤以及抗体介导的排斥反应均有补体级联反应的参与,且各个补体成分或调控因子所发挥的作用并不相同。作为补体系统中的一个组成部分,C3a/C3aR轴在肾脏疾病中的作用逐渐受到众多学者们的重视,而一些相关文献也表明C3a/C3aR轴正常或异常活化在肾脏疾病中起着更为直接和显著的作用,也预示着C3a/C3aR轴可能是治疗相关肾脏疾病的一个新治疗靶点。糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是一种进展性的肾脏纤维化疾病,是糖尿病常见的并发症,也是糖尿病患者的主要死亡原因之一。在以往的工作当中,我们观察到,DN患者以及糖尿病小鼠的肾组织中C3aR表达均显著上调,我们推测C3a/C3aR轴活化在DN中也发挥了重要作用,但是具体机制不清,为了更好地了解肾脏组织中C3aR表达调控因素,我们研究了多种炎性细胞因子(IFN-γ、C3a、IL-1β、TNF-α、TGF-β1)对人肾小管上皮细胞(HK2细胞)C3a受体表达调控。另外,肾小管间质纤维化、肾小球硬化是DN肾脏损害的重要表现,一些研究显示,上皮-间质细胞转分化(EMT)在肾脏纤维化中发挥重要作用,我们猜测C3a/C3aR轴的活化可能引发小管上皮细胞发生上皮-间质转分化进而加速肾脏纤维化的进展,因此,我们构建了鼠原代肾小管上皮细胞培养及鉴定的方法,并探究C3aR活化是否能够引起鼠小管上皮细胞发生上皮-间质细胞转分化。第一部分炎症细胞因子对人肾小管上皮细胞C3a受体的表达调控目的在以往的工作中,我们发现在糖尿病肾病患者的肾组织中C3aR表达增加,但其具体机制

关键词：炎症细胞因子肾小管上皮细胞原代培养 C3a受体表达增加上皮-间质细胞转分化

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肾小管上皮细胞INHBB基因表达在肾间质纤维化中的作用机制研究

肾小管上皮细胞INHBB基因表达在肾间质纤维化中的作用机制研究

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作者：蔡慧敏南京大学

学位级别：硕士

慢性肾脏病的高发病率给社会和患者家庭带来了沉重的经济负担。肾间质纤维化是进行性肾脏疾病的常见特征，肾功能下降与慢性间质损伤的严重程度相关。肾间质纤维化主要表现为细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)积聚，肾小管萎缩，炎... 详细信息

慢性肾脏病的高发病率给社会和患者家庭带来了沉重的经济负担。肾间质纤维化是进行性肾脏疾病的常见特征，肾功能下降与慢性间质损伤的严重程度相关。肾间质纤维化主要表现为细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)积聚，肾小管萎缩，炎症细胞浸润和肾小管微血管损失等组织病理学特征。在损伤的间质组织中，成纤维细胞增殖分化成肌成纤维细胞，并合成细胞外基质，导致肾纤维化的发生，此外，肾小管上皮细胞发生变化，表达促进间质炎症和纤维化的各种生物活性分子。然而，肾间质纤维化中成纤维细胞激活的确切机制仍然未知。越来越多的证据表明，肾小管上皮细胞（renaltubularepithelialcells，TECs）在促进肾间质成纤维细胞激活和慢性肾病(chronickidneydisease，CKD)发生的过程中起着重要的作用。因此，针对肾小管上皮细胞在肾纤维化发展进程中的作用机制研究成为近年来的研究热点。　　ActivinB是抑制素(inhibinβB;INHBB)的同型二聚体，属于转化生长因子-β(TGF-β)家族的多功能细胞因子，并在各种器官中表达。我们发现INHBB在肾单侧输尿管梗阻的肾小管上皮细胞中表达升高。同时，我们也在人的慢性肾病的组织样本中检测到INHBB表达升高。为了研究肾小管上皮细胞表达的INHBB对肾间质纤维化的作用，我们构建了肾小管上皮细胞特异性表达INHBB的质粒，小鼠体内实验结果表明肾小管上皮细胞过表达INHBB促进了肾间质纤维化的发生。为了深入研究INHBB基因表达促进肾间质纤维化发生的作用机制，我们构建了过表达INHBB的慢病毒，感染大鼠肾小管上皮细胞系(NRK-52E细胞）并筛选出稳定表达INHBB的稳转细胞株。制备条件培养基，刺激大鼠肾成纤维细胞系(NRK-49F细胞)，体外实验结果表明，肾小管上皮细胞表达INHBB可以促进肾间质成纤维细胞的增殖，增强Ⅰ型胶原(collagenⅠ，ColⅠ)的表达，并诱导α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)的产生。同时，成纤维细胞内Smad2的磷酸化水平升高。此外，在抑制肾小管上皮细胞INHBB表达后，对UUO诱导的纤维化肾组织进行组织染色和免疫组化染色发现，敲低INHBB的纤维化肾组织的纤维化程度显著降低，Ⅰ型胶原仅有少量积聚。上述结果表明肾小管上皮细胞表达的INHBB可能通过旁分泌的形式使成纤维细胞活化，从而对肾间质纤维化起作用。　　Sox9作为SRY(sexdeterminationregionofYchromosome)相关的高度保守HMG盒转录调控因子，不仅在发育过程中起关键作用，而且与皮肤，肝脏和心脏的纤维化病理有关。有研究表明，Sox9在受损肾脏的成纤维细胞中参与肾纤维化。有报道称，在小鼠毛囊发育过程中Sox9可能与INHBB基因的转录调控区结合。肾小管上皮细胞水平的Westernblot结果均显示，过表达Sox9能够上调INHBB的表达，表明Sox9可能上调INHBB的表达并通过自分泌的方式增强Activin/Smad的信号通路转导。动物实验的结果证实敲低肾小管上皮细胞中Sox9的表达能显著抑制UUO诱导的小鼠肾纤维化，而且在敲低Sox9的肾纤维化组织中INHBB的表达显著下降。综上所述，INHBB在UUO模型的纤维化肾脏中表达上调。肾小管上皮细胞中表达的INHBB通过自分泌和旁分泌的方式来调控成纤维细胞的Activin/Smad信号通路，促进间质成纤维细胞的增殖和活化，诱导α-SMA的表达，并增强间质成纤维细胞中Ⅰ型胶原的表达，从而促进了间质成纤维化的发生。这些结果表明，INHBB是肾脏中间质成纤维细胞活化的有效诱导剂，在受损肾脏中起促纤维化因子的作用，为治疗肾纤维化提供了新的理论依据和治疗靶点。

关键词：肾间质纤维化病理机制肾小管上皮细胞 INHBB抑制素 Sox9转录调控因子

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骨形态形成蛋白-7对体外培养肾小管上皮细胞TGF-β1诱导转分化的作用

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中国医学科学院学报 2004年第3期26卷 274-278,i003页

作者：谭小月郑法雷杨继红段琳李艳周秋根中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科北京100730

目的观察骨形态形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子β1穴TGF-β1雪诱导的人类肾小管上皮细胞穴HKC雪转分化的作用,并探讨其作用机制。方法将体外培养的HKC分为5组(1)无血清培养基阴性对照组;(2)TGF-β1阳性对照组;穴3雪BMP-7单独作用组;穴... 详细信息

目的观察骨形态形成蛋白-7(BMP-7)对转化生长因子β1穴TGF-β1雪诱导的人类肾小管上皮细胞穴HKC雪转分化的作用,并探讨其作用机制。方法将体外培养的HKC分为5组(1)无血清培养基阴性对照组;(2)TGF-β1阳性对照组;穴3雪BMP-7单独作用组;穴4雪BMP-7与TGF-β1共同作用组;穴5雪BMP-7预处理后加入TGF-β1组。间接免疫荧光法测定HKC角蛋白(keratin)的表达;免疫组织化学方法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及E-钙粘素(E-cadherin)表达;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数;半定量反转录PCR穴RT-PCR雪方法测定HKC细胞α-SMA、TGF-β1及其Ⅱ型受体mRNA的表达。结果TGF-β1与BMP-7共同作用HKC细胞48h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;BMP-7预处理后再加入TGF-β1作用HKC细胞48h,α-SMA表达较阳性对照组减弱,而E-钙粘素及角蛋白表达较阳性对照组增强,与阴性对照组相比差异无显著性;流式细胞技术测定α-SMA阳性HKC的百分数,在BMP-7与TGF-β1共同作用组明显低于阳性对照组(9.7%vs19.8%熏5.8%vs19.8%熏P<0.05)。BMP-7组预处理组亦明显低于阳性对照组(8.7%vs19.8%,P<0.05)。RT-PCR显示BMP-7与TGF-β1共同或者预处理HKC细胞熏α-SMAmRNA表达分别为阳?

关键词：骨形态形成蛋白-7 肾小管上皮细胞转分化转化生长因子-β1

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糖尿病肾周脂肪细胞来源小细胞外囊泡促进肾小管上皮细胞上皮-间质转化

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中华内分泌代谢杂志 2024年第7期40卷 586-593页

作者：余君言林嘉彬蔡雷琴林江虹洪晓思杨于霖任萌孙侃中山大学附属孙逸仙纪念医院内分泌科广州510120

目的探讨糖尿病状态下肾周脂肪组织(PRAT)脂肪细胞来源小细胞外囊泡(sEVs)对肾小管上皮细胞的生物行为影响以及其分子机制。方法提取原代db/m、db/db小鼠PRAT脂肪细胞进行体外培养, 收集培养上清并通过超速离心法提取sEVs(NDM-sEVs^(PRA... 详细信息

目的探讨糖尿病状态下肾周脂肪组织(PRAT)脂肪细胞来源小细胞外囊泡(sEVs)对肾小管上皮细胞的生物行为影响以及其分子机制。方法提取原代db/m、db/db小鼠PRAT脂肪细胞进行体外培养, 收集培养上清并通过超速离心法提取sEVs(NDM-sEVs^(PRAT-Adipo), DM-sEVs^(PRAT-Adipo))。将sEVs与人肾小管上皮细胞株(HK-2)细胞孵育, 观察其增殖、凋亡、自噬以及上皮-间质转化(EMT)水平。通过质谱技术分析sEVs蛋白成分, 探讨其作用的分子机制。结果 CCK8结果表明DM-sEVs^(PRAT-Adipo)干预后HK-2细胞的增殖水平与2个对照组(Ctrl组和NDM-sEVs^(PRAT-Adipo)干预组)相比无明显改变。Western印迹法结果表明, 对比2个对照组, DM-sEVs^(PRAT-Adipo)干预组的凋亡(Bcl-2、Cleaved-caspase 3、Caspase 3)和自噬(p62、LC3BⅠ、LC3BⅡ)水平无明显改变。Western印迹法和免疫荧光结果表明, 与2个对照组比较, DM-sEVs^(PRAT-Adipo)干预可上调HK-2的间质细胞标志蛋白(Vimentin、α-SMA、Snail2)表达水平, 下调上皮细胞标志蛋白ZO-1表达水平。sEVs质谱分析结果表明, DM-sEVs^(PRAT-Adipo)与NDM-sEVs^(PRAT-Adipo)的差异蛋白富集于EMT相关通路。其中, DM-sEVs^(PRAT-Adipo)富集血小板反应蛋白(THBS1), 该蛋白与EMT密切相关。结论糖尿病状态下, PRAT来源脂肪细胞分泌sEVs促进肾小管上皮细胞EMT上调, 此过程可能由sEVs中所富集的THBS1介导。

关键词：肾周脂肪组织糖尿病肾病小细胞外囊泡肾小管上皮细胞上皮-间质转化

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大黄素抑制HBSS诱导的肾小管上皮细胞自噬的分子机制

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中国中药杂志 2015年第10期40卷 1965-1970页

作者：胡浩孙伟顾刘宝涂玥刘红南京中医药大学肾病研究所江苏南京210029 江苏省中医院南京中医药大学附属医院肾内科江苏南京210029 江苏省省级机关医院内分泌科江苏南京210024

目的:探讨大黄素(emodin)对饥饿诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)自噬的调节作用及其可能机制。方法:首先,用Western blot检测大黄素对Hank's平衡盐溶液(Hank's balanced salt solution,HBSS)饥饿诱导的细胞自噬标志性蛋白—... 详细信息

目的:探讨大黄素(emodin)对饥饿诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)自噬的调节作用及其可能机制。方法:首先,用Western blot检测大黄素对Hank's平衡盐溶液(Hank's balanced salt solution,HBSS)饥饿诱导的细胞自噬标志性蛋白——哺乳动物同族物微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)Ⅰ/Ⅱ表达水平的影响;其次,用红色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(redfluorescent protein-microtubule associated protein light chain3,RFP-LC3)质粒瞬时转染NRK-52E细胞,以HBSS(1 m L)联合巴弗洛霉素A1(10 nmol·L-1)处理,予大黄素(10μmol·L-1)干预后,荧光显微镜下观察RFP-LC3荧光颗粒的变化;然后,以哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)抑制剂雷帕霉素(100 nmol·L-1)干预,观察阻断m TOR信号通路对大黄素抑制细胞自噬作用的影响;最后,通过诱导内源性m TOR抑制蛋白DEPTOR(DEP domain-containing m TOR-interacting protein)过表达,进一步评估m TOR信号通路对大黄素抑制细胞自噬的影响。结果:HBSS饥饿可诱导NRK-52E细胞LC3Ⅱ蛋白高表达,大黄素干预后可逆转HBSS诱导的LC3Ⅱ蛋白表达增加;HBSS联合巴弗洛霉素A1处理后可引起RFP-LC3荧光颗粒数目增多,大黄素干预后可抑制其数目的增加;雷帕霉素与大黄素、HBSS联合干预后,雷帕霉素可以恢复HBSS诱导的NRK-52E细胞LC3Ⅱ蛋白表达水平;而过表达内源性m TOR抑制蛋白DEPTOR同样可以阻断大黄素对LC3Ⅱ蛋白表达的抑制作用。结论:大黄素可以抑制HBSS诱导的肾小管上皮细胞LC3Ⅱ蛋白表达和自噬活化,其阻断自噬的作用可能是通过m TOR信号通路介导的。

关键词：大黄素自噬肾小管上皮细胞微管相关蛋白1轻链3 雷帕霉素

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TLR4介导可溶性尿酸诱导的肾小管上皮细胞自噬流异常

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中国病理生理杂志 2020年第8期36卷 1444-1449页

作者：易扬陈缘蒋远霞杨海波谢恺庆广西医科大学第二附属医院肾内科广西南宁530021 广西医科大学微生物学教研室广西南宁530021

目的:探寻Toll样受体4(TLR4)与可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞HK-2自噬的关系。方法:用可溶性尿酸或/和氯喹(CQ)刺激HK-2细胞,采用Western blot检测LC3-Ⅱ和P62的表达水平,通过透射电子显微镜观察细胞内自噬小体及自噬溶酶体形成。在可... 详细信息

目的:探寻Toll样受体4(TLR4)与可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞HK-2自噬的关系。方法:用可溶性尿酸或/和氯喹(CQ)刺激HK-2细胞,采用Western blot检测LC3-Ⅱ和P62的表达水平,通过透射电子显微镜观察细胞内自噬小体及自噬溶酶体形成。在可溶性尿酸刺激HK-2细胞的基础上加上TLR4抑制剂TAK242后采用RT-qPCR检测TLR4的mRNA表达水平,Western blot检测TLR4、LC3-Ⅱ和P62的蛋白水平,并通过自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)标记观察细胞内自噬流的变化。结果:可溶性尿酸可诱导HK-2细胞LC3-Ⅱ和P62的表达上调,其与CQ共同处理后LC3-Ⅱ及P62的表达进一步增加,透射电子显微镜下观察到自噬小体增多,自噬溶酶体少见,提示自噬流受阻。Western blot结果显示,与正常对照组相比,可溶性尿酸组TLR4、LC3-Ⅱ和P62的蛋白水平增高,而TAK242则抑制可溶性尿酸诱导HK-2细胞的TLR4、LC3-Ⅱ和P62的表达水平。自噬双标腺病毒实验结果显示,可溶性尿酸组与对照组相比,自噬小体显著增多,且自噬溶酶体较少;而与可溶性尿酸组相比,TAK242+可溶性尿酸组自噬小体减少,自噬溶酶体相对增多,表明自噬小体与溶酶体融合现象增多,形成自噬溶酶体的进程更顺畅。结论:可溶性尿酸导致肾小管上皮细胞自噬流受阻;同时,可溶性尿酸可通过TLR4介导肾小管上皮细胞自噬流异常。

关键词： Toll样受体4 可溶性尿酸肾小管上皮细胞自噬

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马兜铃酸对人肾小管上皮细胞转分化和凋亡作用的体外实验研究

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中华预防医学杂志 2002年第5期36卷 301-304,F003,F004页

作者：苏震徐少伟郑法雷李艳中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院肾内科 100730

目的　探讨马兜铃酸 (AA)对人类肾小管上皮细胞 (HKC)转分化和凋亡的影响。方法将不同浓度的AA(5、10、2 0和 4 0mg/L)分别加入HKC细胞培养液中培养 4 8h ,应用下列方法观察HKC细胞转分化 :间接免疫荧光法检测HKC细胞角蛋白和波形蛋白... 详细信息

目的　探讨马兜铃酸 (AA)对人类肾小管上皮细胞 (HKC)转分化和凋亡的影响。方法将不同浓度的AA(5、10、2 0和 4 0mg/L)分别加入HKC细胞培养液中培养 4 8h ,应用下列方法观察HKC细胞转分化 :间接免疫荧光法检测HKC细胞角蛋白和波形蛋白的表达 ,免疫组化双染色技术测定HKC细胞E 钙黏连蛋白和α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的表达 ,流式细胞技术测定HKC细胞表达α SMA阳性百分率 ;应用Giemsa染色、TUNEL反应和琼脂糖凝胶电泳观察HKC细胞凋亡 ,流式细胞技术测定HKC细胞凋亡的百分率。结果　 10mg/L的AA作用于HKC细胞 4 8h后角蛋白、E 钙黏连蛋白表达减弱 ,波形蛋白表达增强 ,HKC细胞表达α SMA阳性率 (14 .17± 0 .6 1) %比无血清对照组的 (3.5 7± 0 .5 2 ) %显著增高。 4 0mg/L的AA作用HKC细胞 4 8h后细胞凋亡 (5 3.4 % )比无血清对照组 (2 % )显著增高。 5和 2 0mg/L的AA未能引起HKC明显凋亡或转分化。结论　较低浓度 (10mg/L)的AA对HKC细胞有轻度的促转分化作用 ,较高浓度 (4 0mg/L)的AA作用 4 8h后引起多数HKC细胞凋亡 ,AA的上述作用可能与马兜铃酸肾病的发病机制有关。

关键词：马兜铃酸肾小管上皮细胞实验研究细胞分化细胞凋亡马兜铃酸肾病发病机制

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miR-10b通过下调KLF10促进高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT

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中国病理生理杂志 2019年第7期35卷 1254-1260页

作者：张黎黎吕军杨荟付莎李劲高黄蓉宛霞徐安平中山大学孙逸仙纪念医院肾内科

目的:探讨微小RNA-10b(miR-10b)在高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用及相关机制。方法:通过RT-qPCR法分析2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达量;利用高糖刺激人肾小管上皮细胞HK-2建立EMT模型,RT-qPC... 详细信息

目的:探讨微小RNA-10b(miR-10b)在高糖诱导的肾小管上皮细胞上皮-间充质转化(EMT)中的作用及相关机制。方法:通过RT-qPCR法分析2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达量;利用高糖刺激人肾小管上皮细胞HK-2建立EMT模型,RT-qPCR法检测miR-10b在EMT不同阶段的表达水平。在HK2细胞中分别转染miR-10b模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor) 24 h后,再给予高糖刺激,相差显微镜观察细胞形态学改变,Western blot法检测纤连蛋白(fibronectin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)等EMT标志蛋白的表达。通过在线数据库miRBase对miR-10b的作用靶点进行预测,并利用双萤光素酶报告基因实验进行验证。结果:与癌旁正常肾组织相比,2型糖尿病合并肾纤维化患者肾组织中miR-10b的表达明显增加(P<0.01)。在高糖刺激诱导的HK-2细胞EMT中,miR-10b的表达呈现时间依赖性上调(P<0.01)。转染miR-10b inhibitor可抑制高糖诱导的HK-2细胞形态学改变以及EMT标志蛋白fibronectin、SLUG、N-cadherin和SNAI1表达的上调。在线数据库预测KLF10的3’-UTR可以与miR-10b结合,该结果被双萤光素酶报告基因实验证实。同时,KLF10过表达可以逆转高糖诱导的肾小管上皮细胞的形态学改变以及fibronectin和N-cadherin等EMT标志蛋白。进一步研究显示,miR-10b是通过抑制KLF10表达,从而激活TGF-β/Smad3通路发挥作用。结论:miR-10b可通过下调KLF10表达促进高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT。

关键词：微小RNA-10b 上皮-间充质转化 KLF10 肾小管上皮细胞 TGF-β/Smad3信号通路

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