检索结果-内蒙古大学图书馆

浙江医学 2014年第17期36卷 1434-1437,1442页

作者：邵驾宇章慧娣潘嘉林尤小寒薛向阳黄朝兴温州医科大学附属第一医院肾内科 325000 温州医科大学附属第二医院心血管内科温州医科大学微生物免疫学教研室

目的观察miRNA在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)发生上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)过程中的变化,筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的miRNA。方法体外培养NRK-52E,用5 ng/ml转化生长因子-13 1(TGF-13 1)分别作用0、3、6、12、24、48 h,以0 ... 详细信息

目的观察miRNA在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)发生上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)过程中的变化,筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的miRNA。方法体外培养NRK-52E,用5 ng/ml转化生长因子-13 1(TGF-13 1)分别作用0、3、6、12、24、48 h,以0 h为空白组(BC组),余为TGF-β1组。倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;real-time PCR法检测细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙蛋白(E-cad)、1型胶原(Col 1)和纤连蛋白(FN)的mRNA表达水平;Western blot法检测细胞内α-SMA的表达水平;ELISA法检测上清液中FN的含量;茎环实时荧光定量PCR法检测6条miRNA在细胞内的表达水平。结果与BC组比较,TGF-β1组部分细胞失去原有的鹅卵石形态,转变成成纤维细胞特有的梭形;细胞内α-SMA、Col I和FN的mRNA表达上调,E-cad的mRNA表达下调,细胞内α-SMA表达量增多,细胞上清液中FN含量升高(均P<0.05);miR-30d、miR-132和miR-21的表达上调,miR-200b、miR-192和miR-10b的表达下调(均P<0.05)。结论 TGF-β1可诱导NRK-52E发生EMT。miR-30d、miR-132、miR-21、miR-200b、miR-192和miR-10b可能参与大鼠肾小管上皮细胞EMT,值得进一步研究。

关键词：大鼠肾小管上皮细胞肾小管上皮转分化转化生长因子- β1 microRNA

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ET-1在糖尿病肾病大鼠肾小管上皮转分化中的作用及冬虫夏草对其干预的影响

ET-1在糖尿病肾病大鼠肾小管上皮转分化中的作用及冬虫夏草对其干...

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中国中西医结合学会肾脏疾病专业委员会2011年学术年会暨2011年国际中西医结合肾脏病学术会议

作者：周巧玲肖舟刘抗寒袁明霞包瑞南中南大学湘雅医院肾内科中南大学肾脏病与血液净化研究所

目的:观察冬虫夏草对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制探讨。方法:采用链脲佐菌素（STZ,60mg/kg）腹腔注射复制糖尿病肾病（DN）大鼠模型,实验分为对照组、模型组、虫草组,每组5只大鼠。虫草组予冬虫夏草粉混悬液1.0g/... 详细信息

目的:观察冬虫夏草对糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制探讨。方法:采用链脲佐菌素（STZ,60mg/kg）腹腔注射复制糖尿病肾病（DN）大鼠模型,实验分为对照组、模型组、虫草组,每组5只大鼠。虫草组予冬虫夏草粉混悬液1.0g/（kgd）灌胃。干预实验后第4周处死大鼠,处死前测24小时尿蛋白定量,处死后留血标本测血肌酐;采用HE及MASSON染色方法观察各组肾组织形态学变化;免疫组化方法检测各组大鼠肾组织中ET-1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达情况;RT-PCR的方法检测各组大鼠肾组织中ET-1、α-SMA和E-Cadherin mRNA表达。结果:（1）糖尿病肾病大鼠肾组织中ET-1、α-SMA表达上调,E-Cadherin表达减少（p<0.05或p<0.01）。ET-1与α-SMA呈正相关,与E-Cadherin呈负相关（p<0.01）,提示ET-1可能参与诱导肾小管上皮转分化发生（p<0.01）。（2）冬虫夏草能明显减少糖尿病肾病大鼠尿蛋白排泄量,延缓血清肌酐升高,改善糖尿病肾病肾组织病理形态学（p<0.05或p<0.01）;同时,冬虫夏草能明显抑制肾组织中ET-1和α-SMA表达、促进E-Cadherin表达上调（P<0.05及P<0.01）。结论:冬虫夏草能够抑制糖尿病肾病大鼠肾小管上皮细胞转分化,其机制可能与ET-1表达下调有关。

关键词：糖尿病肾病肾小管上皮转分化内皮素冬虫夏草

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miR302a-3p在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用及分子机制

miR302a-3p在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用及分子机制

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作者：郑林峰中南大学

学位级别：硕士

背景：糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy, DN)既是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的主要微血管病变之一,也是终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)的主要病因之一。糖尿病肾病强调早期诊断与治疗,如果不及时干预,将导致肾小球硬... 详细信息

背景：糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy, DN)既是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的主要微血管病变之一,也是终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)的主要病因之一。糖尿病肾病强调早期诊断与治疗,如果不及时干预,将导致肾小球硬化及肾间质纤维化(Tubulointerstitial fibrosis, TIF),最终发展为肾衰竭直至终末期肾病(End-stage renal disease, ESRD)。肾小管上皮细胞转分化(Epithelial to mesenchymal transition, EMT)不仅是TIF的始动环节,而且也是其可逆阶段,所以有关肾小管上皮细胞转分化的研究一直是肾纤维化防治的一个热点。最近发现有多种microRNA参与EMT过程,但机制尚不明确。miR-302a-3p是miR-302家族中的一员,我们经过miRNA基因芯片筛查发现miR-302a-3p在高糖刺激的HK-2细胞中表达上调,说明它可能参与高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化过程,但具体作用及其机制如何是我们需要探讨的问题。目的：探讨miR-302a-3p在高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的作用及其分子机制。方法：(1)HK-2细胞分为两组,高糖刺激48h组与低糖组,用miRNA芯片筛查两组之间有差异性表达的miRNA;(2)将HK-2细胞进行高糖刺激,用Realtime PCR来验证miR-302a-3p的表达差异,用Realtime PCR及Wenstern blot来检测高糖刺激0h、6h、12h、24h、48h、72h各个时间点的ZEB1、VIM、E-ca的表达;(3)向HK-2细胞内转染miR-302a-3p的Mimic及Inhibitor,分为空白组、Mimic组、Mimic阴性对照组、Inhibitor组、Inhibitor阴性对照组,转染后高糖培养48小时,用Realtime PCR及Wensternblot来检测ZEB1、VIM、E-ca的表达。结果:(1)microRNA芯片分析提示高糖刺激肾小管上皮细胞48小时后,miR302a-3p、513a-5p、1291等17个miRNA表达明显上调,而miRNA490-3p、638、3203等19个miRNA表达明显下调(p<0.01) (2)在HK-2细胞中,①miR-302a-3p在高糖刺激12h表达上调达高峰(P<0.01), ZEB1mRNA表达先下降后升高,12h下降最明显(P<0.01),高糖诱导VIMmRNA表达呈时间依赖性增加,48h最明显(P<0.05),而E-ca mRNA表达呈时间依赖性降低,72h最明显(P<0.01);②高糖刺激后,ZEB1蛋白表达先下降后升高,在24小时表达量最低(P<0.01),VIM蛋白的表达上调,72h上调最明显(P<0.01);而E-ca蛋白表达下调,72h下调最明显(P<0.01);(3) Mimic组与Inhibitor组中,与空白组相比,ZEB1mRNA差异无统计学意义(P>0.05),在Mimic组中,ZEB1蛋白表达下降(P<0.01), VIMmRNA及蛋白表达下降(P<0.01),而E-ca mRNA及蛋白表达上调(P<0.05);在Inhibitor组中,ZEB1、VIM蛋白表达明显上调(P<0.01), VIM mRNA表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05),而E-ca mRNA及蛋白表达下调(P<0.05)。结论：(1)在高糖状态下,过表达miR-302a-3p可逆转HK-2细胞转分化,而抑制miR-302a-3p表达可促进其转分化,且这一过程可能与ZEB1相关;(2) miR-302a-3p可能通过ZEB1对高糖诱导的HK-2细胞转分化起保护作用。

关键词： miR-302a-3p 糖尿病肾病 ZEB1 肾小管上皮转分化

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ET-1在糖尿病肾病大鼠肾小管上皮转分化中的作用及冬虫夏草对其干预的影响

ET-1在糖尿病肾病大鼠肾小管上皮转分化中的作用及冬虫夏草对其干...

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作者：肖舟中南大学

学位级别：硕士

目的观察高糖刺激下肾组织中ET-1表达水平及肾小管上皮转分化相关蛋白α-SMA及E-cadherin的表达状况,并用冬虫夏草原液进行干预实验,观察上述蛋白表达的变化,进一步探讨糖尿病肾病肾纤维化的发病机制,以及冬虫夏草对这一病理过程的保护... 详细信息

目的观察高糖刺激下肾组织中ET-1表达水平及肾小管上皮转分化相关蛋白α-SMA及E-cadherin的表达状况,并用冬虫夏草原液进行干预实验,观察上述蛋白表达的变化,进一步探讨糖尿病肾病肾纤维化的发病机制,以及冬虫夏草对这一病理过程的保护作用机理。方法对10只Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60mg/kg),诱导成DM模型,DM模型成功4周后测24小时尿蛋白定量,如24小时尿蛋白大于30mg即认为DN模型成功,随机分为模型组、虫草组,每组各5只。另将5只鼠龄、体重相匹配的大鼠作为正常组。虫草组予冬虫夏草粉混悬液1.0g/(kg*d),对照组等量生理盐水灌胃。于干预实验后第4周处死大鼠每组5只。处死前测24小时尿蛋白定量,处死后留血标本测血肌酐；取肾组织进行HE及MASSON染色,观察肾脏组织形态学变化；用免疫组化方法检测肾组织中ET-1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达；用RT-PCR的方法检测ET-1、α-SMA和E-Cadherin的mRNA表达。结果 1.糖尿病肾病大鼠肾组织中,ET-1产生增加、α-SMA的表达上调,E-Cadherin表达减少(p<0.05或p<0.01)。ET-1与α-SMA呈正相关,与E-Cadherin呈负相关(p<0.01),提示ET-1可诱导肾小管上皮转分化,促进肾间质纤维化发生(p<0.01). 2.模型组大鼠24小时尿蛋白、血肌酐水平升高,肾组织出现肾小球肥大、炎症细胞浸润、细胞外基质增多,肾间质纤维化等病理变化。(p<0.05或p<0.01) 3.冬虫夏草干预糖尿病肾病大鼠,能明显减少大鼠的尿蛋白排泄量,延缓血清肌酐升高,减轻糖尿病肾病的肾脏病理改变(p<0.05或p<0.01)；同时,肾组织中ET-1分泌减少、α-SMA表达下调、E-Cadherin表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论 ***-1在糖尿病肾病中具有诱导肾小管上皮转分化和促进肾纤维化的作用。 2.冬虫夏草对糖尿病肾病具有一定肾脏保护作用及抗肾小球纤维化的作用,其作用机制可能是通过抑制ET-1分泌而使α-SMA表达下调、E-cadherin表达上调而实现。

关键词：糖尿病肾病肾小管上皮转分化内皮素冬虫夏草

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与肾小管上皮细胞转分化相关的microRNA的初步筛选实验

与肾小管上皮细胞转分化相关的microRNA的初步筛选实验

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作者：邵驾宇温州医科大学

学位级别：硕士

目的：通过观察microRNA(miR)在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)发生上皮-肌成纤维细胞转分化(epithelial myofibroblast transdifferentiation，EMT)过程中的变化，初步筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的特异性miR。\n 方法：体外培养... 详细信息

目的：通过观察microRNA(miR)在大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)发生上皮-肌成纤维细胞转分化(epithelial myofibroblast transdifferentiation，EMT)过程中的变化，初步筛选与肾小管上皮细胞转分化相关的特异性miR。\n 方法：体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)，用5ng/ml转化生长因子-B1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)刺激不同时间，用倒置显微镜观察细胞形态学的变化；用实时荧光定量PCR法检测细胞内肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)以及上皮细胞标志物E钙蛋白(E-cadherin)mRNA的表达，以及细胞内1型胶原(collagenⅠ，ColⅠ)和纤连蛋白(Fibronectin，FN)的mRNA表达；用western blot法检测细胞内α-SMA蛋白的表达；用ELISA法检测细胞外液中FN蛋白；同时，用茎环实时荧光定量PCR检测miR-10b、miR-200b、miR-21、miR-132、miR-192、miR-194、miR-30d和miR-200a等8条miR在细胞内的表达变化，以U6为内参照，2-△△Ct表示TGF-β1刺激不同时间点细胞内miR相对于阴性对照组的倍数差异。\n 结果：\n ***-β1作用24小时后，部分细胞失去原有的鹅卵石形态，转变成成纤维细胞特有的梭形；TGF-β1作用48小时后，转变成梭形的细胞数量增多，且部分细胞发生凋亡。\n 2.与阴性对照组比较，TGF-β1分别作用3h、6h、12h和24h后，细胞内α-SMA的mRNA表达增高(P值<0.05)。\n 3.与阴性对照组比较，TGF-β1作用3h、6h、12h和24h后，细胞内E-cadherin的mRNA表达降低(P值<0.01)。\n 4.与阴性对照组比较，TGF-β1作用3h、6h、12h和24h后，细胞内ColⅠ与FN的mRNA表达均逐渐增高(P值<0.05)。\n 5.与阴性对照组比较，TGF-β1作用12h、24h和48h后，细胞内α-SMA蛋白表达增高(P值<0.01)。\n 6.与阴性对照组比较，TGF-β1作用12h、24h和48h后，细胞上清液中FN含量逐渐升高(P值<0.05)。\n ***：与阴性对照组相比，TGF-β1作用3h、6h、12h、24h细胞内miR-132、miR-21、miR-200b、miR-10b、miR-192和miR-30d均存在差异性表达。其中，miR-132、miR-21和miR-30d的表达均上调(P值<0.05)；miR-200b、miR-10b和miR-192的表达均下调(P值<0.05)。\n 结论：\n ***-β1(5ng/m1)可以诱导大鼠肾小管上皮细胞发生EMT。\n ***-132、miR-21、miR-200b，miR-10b、miR-192、miR-30d可能与大鼠肾小管上皮细胞EMT的关系比较密切，值得进一步研究。

关键词：肾小管上皮转分化转化生长因子-β1 microRNA基因筛选实验形态学变化

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六味地黄丸对慢性肾脏病研究的新进展

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湖南中医药大学学报 2013年第8期33卷 104-107页

作者：陈丽周忠志何泽云唐群徐文峰湖南中医药大学病理教研室湖南长沙410208 中国人民武装警察部队湖南省消防总队医院烧伤整形科湖南长沙410008 湖南中医药大学第一附属医院肾内科湖南长沙410007

慢性肾脏病是影响人民健康的重大疾病之一。六味地黄丸是目前临床运用治疗慢性肾脏病的有效方剂,有一定的临床研究基础,六味地黄丸减轻肾间质纤维化也有广泛的实验研究,作者前期对六味地黄丸和慢性肾衰竭致肾间质纤维化做了大量的研究,... 详细信息

慢性肾脏病是影响人民健康的重大疾病之一。六味地黄丸是目前临床运用治疗慢性肾脏病的有效方剂,有一定的临床研究基础,六味地黄丸减轻肾间质纤维化也有广泛的实验研究,作者前期对六味地黄丸和慢性肾衰竭致肾间质纤维化做了大量的研究,但以往的研究大多局限于肾间质纤维化机制过程中的后三个阶段中细胞外基质和细胞因子的研究,很少涉及第一阶段细胞活化层次的研究,从肾小管上皮细胞转分化角度,对六味地黄丸治疗5/6肾切除大鼠慢性肾衰、减缓肾间质纤维化机理的深层次研究较少,该文综述六味地黄丸对慢性肾脏病临床和实验研究的新进展。

关键词：六味地黄丸慢性肾脏病肾小管上皮转分化

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通络益肾汤对DN模型大鼠肾组织CK-18影响的实验研究

通络益肾汤对DN模型大鼠肾组织CK-18影响的实验研究

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作者：宋春光陕西中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察“通络益肾汤”对糖尿病肾病(DN)模型大鼠一般情况，证候积分、空腹血糖，尿蛋白定性，血清BUN、CREA，肾脏肥大指数，肾脏组织角蛋白18(CK-18)表达的影响，以验证通络益肾汤对DN模型大鼠的治疗效果，并从肾小管上皮转分化角... 详细信息

目的:观察“通络益肾汤”对糖尿病肾病(DN)模型大鼠一般情况，证候积分、空腹血糖，尿蛋白定性，血清BUN、CREA，肾脏肥大指数，肾脏组织角蛋白18(CK-18)表达的影响，以验证通络益肾汤对DN模型大鼠的治疗效果，并从肾小管上皮转分化角度探讨“通络益肾汤”对DN的干预作用及其机理。　　方法:60只健康雄性SD大鼠，随机抽取9只作为正常对照组(简称A组);其余大鼠行左侧肾脏切除术+STZ腹腔注射诱导复制DN模型。将43只成模大鼠随机分为3组，即病理模型对照组(简称病理对照组、B组)，通络益肾汤治疗组(简称中药组、C组)，洛汀新+糖适平治疗组(简称西药组、D组)，分别灌胃给药10周。观察大鼠一般情况，进行中医证候评分;10周末检测尿蛋白定性、空腹血糖、血清BUN、CREA，免疫组化法检测肾小管角蛋白18表达;并称重计算肾脏肥大指数(肾重/体重)，光镜观察肾脏病理变化。　　结果:经10周治疗后，中、西药治疗组大鼠一般状况、证候改善好于病理对照组大鼠(P＜0.01)，中药治疗组优于西药治疗组(P＜0.05);空腹血糖、尿蛋白;血清BUN、CREA、肾脏肥大指数等指标，中、西药治疗组均优于病理对照组(P＜0.05);中药组与西药组间无显著差异(P＞0.05);中、西药治疗组肾组织病理损伤较病理对照组明显减轻;肾小管上皮角蛋白18表达上调，中药组优于西药组(P＜0.05)。　　结论:通络益肾汤对DN模型大鼠具有确切的治疗作用。能显著改善DN模型大鼠的证候积分;降低空腹血糖，减少尿蛋白，降低血清BUN、CREA;促进肾小管上皮角蛋白18的表达，减轻肾组织的病理损伤。分析本方对肾脏的保护作用，可能与阻止肾小管上皮细胞转分化的进程，抑制细胞外基质的积聚，延缓肾组织纤维化有关。

关键词：通络益肾汤糖尿病肾病肾小管上皮转分化角蛋白18 干预作用中医治疗

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阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护作用的实验研究

阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏保护作用的实验研究

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作者：鲁华河北医科大学

学位级别：硕士

目的:阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)即3-甲氧基-4-羟基-苯丙烯酸钠,是阿魏酸的合成钠盐,已被证明是一种非肽类内皮素受体拮抗剂,可清除自由基,防治脂质过氧化损伤;拮抗内皮素引起的血管收缩、升压、血管平滑肌细胞增值;减轻血管内皮损... 详细信息

目的:阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)即3-甲氧基-4-羟基-苯丙烯酸钠,是阿魏酸的合成钠盐,已被证明是一种非肽类内皮素受体拮抗剂,可清除自由基,防治脂质过氧化损伤;拮抗内皮素引起的血管收缩、升压、血管平滑肌细胞增值;减轻血管内皮损伤、增加一氧化氮(NO)合成、松弛血管平滑肌。SF与肾间质纤维化之间的关系如何,目前尚无定论。通过观察肾小管上皮细胞磷酸化p38MAPK、TGF-β1、α平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscular actinα-SMA)的表达情况,研究阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用,探讨其肾脏保护作用的可能机制。方法:选择健康雄性SD大鼠36只(购自河北医科大学试验动物中心),体重180-220g,随机分为假手术组(A组)12只,UUO模型组(B组)12只,阿魏酸钠治疗组(C组)12只。大鼠经2%戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉,仰卧位于手术台上,经侧腹部切口,暴露左侧肾脏,分离左侧输尿管于中上1/3处结扎并剪断,关闭腹腔,逐层缝合,A组开腹后不结扎输尿管,随即缝合腹腔作为对照。C组在术前3天给予阿魏酸钠(阿魏酸钠片溶于0.9%生理盐水中,以110mg/kg/d给药)灌胃, A、B两组仅以生理盐水灌胃(2mL/d)作为对照,实验期间大鼠自由进食。分别至大鼠术后3、7、14天将其断头处死,迅速开腹,切取左

关键词：肾间质纤维化肾小管上皮转分化 p38MAPK α-SMA TGF-β1

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