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生物工程学报 2004年第1期20卷 34-38页

作者：李明春孙颖张琦邢来君南开大学微生物系国家微生物学重点学科天津300071

γ 亚麻酸 (GLA)作为人体必需的不饱和脂肪酸 ,具有重要的营养和药用价值。Δ6 脂肪酸脱氢酶是γ 亚麻酸合成途径中的关键酶。为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ 亚麻酸的表达体系 ,将高山被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因与胞内表达载体... 详细信息

γ 亚麻酸 (GLA)作为人体必需的不饱和脂肪酸 ,具有重要的营养和药用价值。Δ6 脂肪酸脱氢酶是γ 亚麻酸合成途径中的关键酶。为了在毕赤酵母中建立一种新的合成γ 亚麻酸的表达体系 ,将高山被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因与胞内表达载体pPIC3 5K连接 ,SacⅠ线性化后电击法转化毕赤酵母SMD116 8,获得的转化子经PCR鉴定目的基因已整合到毕赤酵母的基因组中。用甲醇诱导表达 ,通过脂肪酸气相色谱和气相色谱质谱 (GC MS)联用分析表明高山被孢霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中获得表达 ,γ 亚麻酸含量占总脂肪酸的 16 2 6 %。

关键词：高山被孢霉毕赤酵母 Δ^6-脂肪酸脱氢酶基因胞内表达

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一种通过过表达毕赤酵母翻译相关因子提高重组蛋白胞内表达的策略

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现代食品科技 2021年第7期37卷 66-73页

作者：林雯炀廖锡豪陈南柱黄大富陈亮钟炳旭梁书利林影华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006

本研究为筛选对毕赤酵母重组蛋白表达有促进作用的翻译相关因子,扩增了毕赤酵母中包括核糖体蛋白翻译起始因子、翻译延伸因子、氨酰-tRNA合成酶、核糖体生物合成因子、核糖体分子伴侣五类翻译相关因子(共28个)的基因片段,并将上述基因... 详细信息

本研究为筛选对毕赤酵母重组蛋白表达有促进作用的翻译相关因子,扩增了毕赤酵母中包括核糖体蛋白翻译起始因子、翻译延伸因子、氨酰-tRNA合成酶、核糖体生物合成因子、核糖体分子伴侣五类翻译相关因子(共28个)的基因片段,并将上述基因片段与质粒pPICZA进行同源重组,进一步获得重组载体后分别转化至以增强型绿色荧光蛋白eGFP为报告蛋白的毕赤酵母中。之后通过测量计算120 h内28个过表达翻译相关因子菌株的荧光蛋白表达量,筛选对毕赤酵母重组蛋白表达有潜在促进作用的因子,进一步以红色荧光蛋白mRFP为报告蛋白进行验证。结果表明:本研究共筛选到了6个对毕赤酵母重组蛋白胞内表达有促进作用的翻译相关因子eIF4A、eEF1A、eEF3、Ded81、Bcy1、Ssb。其中eIF4A、eEF1A、eEF3、Ded81、Bcy1、Ssb的eGFP单位菌体表达量分别增加了18.40%、18.80%、29.50%、28.45%、21.60%,mRFP单位菌体表达量分别增加了20.00%、8.00%、19.00%、5.40%、15.40%。Bcy1使得eGFP表达菌株生物量增加20.00%,mRFP表达菌株生物量增加30.90%。为从翻译层面提高毕赤酵母重组蛋白表达提供了思路。

关键词：毕赤酵母翻译相关因子重组蛋白胞内表达

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鲈鱼生长激素在甲醇酵母中的胞内表达

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生物化学与生物物理进展 1998年第2期25卷 140-143页

作者：陈丹杨丰王玮徐洵国家海洋局第三海洋研究所

甲醇酵母ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ是一种理想的真核蛋白高水平表达系统．将鲈鱼（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓ）生长激素基因克隆到酵母整合型质粒载体ｐＨＩＬＤ２，经转化ｈｉｓ４缺陷型酵母ＧＳ１１５，用Ｐ... 详细信息

甲醇酵母ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ是一种理想的真核蛋白高水平表达系统．将鲈鱼（Ｌａｔｅｏｌａｂｒａｘｊａｐｏｎｉｃｕｓ）生长激素基因克隆到酵母整合型质粒载体ｐＨＩＬＤ２，经转化ｈｉｓ４缺陷型酵母ＧＳ１１５，用ＰＣＲ方法筛选阳性转化子，并用斑点印迹法筛选多拷贝转化子，经甲醇诱导表达，ＳＤＳＰＡＧＥ和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的鲈鱼生长激素．

关键词：鲈鱼生长激素胞内表达甲醇酵母

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戊型肝炎病毒结构区ORF2蛋白在巴氏毕赤酵母中的胞内表达与纯化的初步研究

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病毒学报 2001年第1期17卷 34-37页

作者：佟玉品毕胜利江永珍詹美云中国预防医学科学院病毒学研究所北京100052

为寻求新型表达系统来研制戊型肝炎基因工程疫苗 ,利用甲醇营养型酵母 pichiapastoris表达系统表达戊型肝炎病毒 (HEV)结构区ORF2蛋白。采用PCR方法从HEVcDNA中扩增得到的ORF2基因克隆到酵母表达载体pPIC3.5K上 ,构建成重组质粒 pPIC3.5... 详细信息

为寻求新型表达系统来研制戊型肝炎基因工程疫苗 ,利用甲醇营养型酵母 pichiapastoris表达系统表达戊型肝炎病毒 (HEV)结构区ORF2蛋白。采用PCR方法从HEVcDNA中扩增得到的ORF2基因克隆到酵母表达载体pPIC3.5K上 ,构建成重组质粒 pPIC3.5KORF2。该质粒转化酵母菌GS115 ,经G418筛选得到高拷贝转化子。转化菌株经Mut表型鉴定后 ,用含甲醇的培养基诱导表达 ,SDS PAGE及ELISA筛选高表达活性菌株 ,放大培养后进行亲合层析纯化。在该系统中成功地表达了高生物活性的HEVORF2蛋白 ,经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为 5 9kD ,纯度可达 96 %。Westernblotting证实 ,它与HEVORF2单克隆抗体有特异性反应。HEV结构区ORF2蛋白在甲醇营养型酵母中的成功表达 ,以及初步纯化得到的具有强免疫学活性的重组蛋白。

关键词：戊型肝炎病毒开放读码框架异源基因表达蛋白纯化巴氏毕赤酵母胞内表达

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芽孢杆菌植酸酶基因在毕赤酵母中的胞内表达

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吉首大学学报（自然科学版） 2004年第1期25卷 36-41页

作者：吴琦王红宁邹立扣赵海霞刘世贵四川大学生命科学学院四川成都610064 四川农业大学动物科技学院四川雅安625014

根据已知的枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物,采用PCR法从含有该基因的pUC18-phyC质粒上获得了长约1.1kb不含有信号肽序列的植酸酶phyC基因表达片段.经T载体克隆及序列测定后,构建毕赤巴斯德表达载体pPIC3.5K-phyC,... 详细信息

根据已知的枯草芽孢杆菌WHNB02植酸酶phyC基因全序列设计一对引物,采用PCR法从含有该基因的pUC18-phyC质粒上获得了长约1.1kb不含有信号肽序列的植酸酶phyC基因表达片段.经T载体克隆及序列测定后,构建毕赤巴斯德表达载体pPIC3.5K-phyC,并电转化毕赤巴斯德酵母宿主菌GS115.经MD和MM平板筛选、酶活性测定,获得了阳性转化子,并进行了诱导表达.SDS-PAGE分析表明:表达产物分子量为42.01KD,表达量占细胞可溶性总蛋白的24%,并具有植酸酶的生物学活性.酶学性质分析结果显示:胞内表达的植酸酶酶促反应最适pH值为7.5;最适反应温度为70℃;经90℃处理10min,残留酶活性42% 均优于出发菌株天然植酸酶的相应性质.

关键词：枯草芽孢杆菌植酸酶基因 phyC基因 pPIC3.K表达栽体毕赤巴斯德酵母胞内表达

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重组人细胞色素P450 2C9在毕赤酵母中的胞内表达

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中南民族大学学报（自然科学版） 2013年第2期32卷 41-45页

作者：吴云华孙鹏宇中南民族大学生命科学学院国家民委生物技术重点实验室武汉430074

以含有CYP2C9基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板,并在人细胞色素P4502C9的5'端插入kozak序列及3'端6×His标签进行PCR扩增,克隆至真核表达载体pPIC3.5K,利用电激法将经Sal I线性化的重组质粒pPIC3.5K-2C9转化至毕赤酵... 详细信息

以含有CYP2C9基因完全编码框的克隆载体质粒DNA为模板,并在人细胞色素P4502C9的5'端插入kozak序列及3'端6×His标签进行PCR扩增,克隆至真核表达载体pPIC3.5K,利用电激法将经Sal I线性化的重组质粒pPIC3.5K-2C9转化至毕赤酵母GS115中,通过抗性、表型和PCR筛选多拷贝整合株,甲醇诱导毕赤酵母GS115/pPIC3.5K-2C9的表达,SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定表达产物.结果表明:含有重组质粒的重组pPIC3.5K-2C9表达了大小为55KD的目的蛋白,与预期大小相符,说明人细胞色素CYP2C9可在毕赤酵母的胞内表达.

关键词：人细胞色素P4502C9 毕赤酵母胞内表达

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猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段在昆虫细胞中的胞内表达

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烟台大学学报（自然科学与工程版） 2012年第4期25卷 277-280页

作者：于天飞邵淑丽黎明吕建伟徐兴军齐齐哈尔大学生命科学与农林学院黑龙江齐齐哈尔161006 齐齐哈尔大学计算机与控制工程学院黑龙江齐齐哈尔161006

通过基因重组的方法,在昆虫细胞胞内表达了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B和C抗原位点片段.表达蛋白经Dot-ELISA检测具有良好的抗原性.本研究为TGEV的血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础.

关键词： TGEV 抗原位点昆虫细胞胞内表达

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人肺表面活性相关蛋白A1在甲醇酵母的胞内表达

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中国当代儿科杂志 2002年第6期4卷 466-469页

作者：王霞封志纯兰和魁任大明杜江第一军医大学附属珠江医院儿科广东广州510282 复旦大学遗传所上海200433

目的　研究人肺表面活性相关蛋白A1(SP A1)在甲醇酵母中的胞内表达。方法　将编码正常人肺表面活性相关蛋白A1基因的cDNA克隆至甲醇酵母的胞内 ,表达载体pPIC3.5K ,构建了重组质粒 pPIC3.5K/SPA1,电穿孔方法转化至酵母宿主菌GS115和KM ... 详细信息

目的　研究人肺表面活性相关蛋白A1(SP A1)在甲醇酵母中的胞内表达。方法　将编码正常人肺表面活性相关蛋白A1基因的cDNA克隆至甲醇酵母的胞内 ,表达载体pPIC3.5K ,构建了重组质粒 pPIC3.5K/SPA1,电穿孔方法转化至酵母宿主菌GS115和KM 71,用PCR方法筛选阳性转化子 ,并用斑点印迹法、G4 18方法筛选多拷贝转化子 ,经甲醇诱导表达 ,SDS PAGE和Western印迹法鉴定表达产物。结果　SP A1基因在甲醇酵母中成功的表达了蛋白质 ,SDS PAGE分析证实目的蛋白分子量为 32kD ,可被SP A多克隆抗体特异识别。结论　人组织特异SP A1蛋白可在甲醇酵母中高效表达 ,表达产物具有免疫源性。

关键词：人肺表面活性相关蛋白Al 甲醇酵母胞内表达生理功能

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人转化生长因子β1在大肠杆菌胞内表达的研究

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生物技术通讯 1997年第Z1期8卷 168-169页

作者：刘莉龙建银王会信王芳军事医学科学院基础医学研究所北京100850

转化生长因子β(transforming growth factor β,TGFβ)是细胞增殖、分化的重要调节蛋白之一,同时还参与了细胞外基质形成、胚胎发育、骨重建等多项病理和生理过程,并在创伤愈合、免疫抑制。

关键词：人转化生长因子β1 胞内表达肠杆菌重组蛋白基础医学研究细胞外基质医学科学院胚胎发育免疫抑制包含体

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来源于Geobacillus thermoglucosidasius的淀粉分支酶在大肠杆菌中的胞内表达及其理化性质研究

来源于Geobacillus thermoglucosidasius的淀粉分支酶在大肠杆菌...

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科技与产业对接——中国食品科学技术学会第十届年会暨第七届中美食品业高层论坛

作者：鲍春辉李才明顾正彪李兆丰江南大学食品学院江南大学食品科学与技术国家重点实验室

目的实现Geobacillus thermoglucosidasius来源的淀粉分支酶在大肠杆菌中的胞内表达,并研究其理化性质。方法本研究首先将来源于G thermoglucosidasius STB02的淀粉分支酶基因插入质粒pET-20b(+)的T7启动子序列下游,构建了表达载体pET-2... 详细信息

目的实现Geobacillus thermoglucosidasius来源的淀粉分支酶在大肠杆菌中的胞内表达,并研究其理化性质。方法本研究首先将来源于G thermoglucosidasius STB02的淀粉分支酶基因插入质粒pET-20b(+)的T7启动子序列下游,构建了表达载体pET-20b(+)/sbe,并将其转化宿主大肠杆菌BL21(DE3);通过发酵条件优化,实现了淀粉分支酶在***中的胞内过量表达。其次,将带有组氨酸标签的重组分支酶通过镍柱亲和层析一步纯化,得到了电泳纯酶蛋白。结果通过对重组淀粉分支酶进行理化性质分析后发现,淀粉分支酶最适反应温度为50℃;在45℃、50℃下保温2h,其酶活基本不变,55℃、60℃下保温2 h,其酶活分别降低为初始的90%、60%,在65℃、70℃下的半衰期分别为0.35 h、1.10h;其最适pH为7.5,在pH 5.5-9.0范围内具有较高的稳定性;M92+、Ba2+、K+和Na+在较低浓度下对重组酶具有一定的激活作用,而Ni2+、C02+则显著的抑制其活力;其动力学性质可以用米氏方程进行描述,以支链淀粉标准品为底物时的Km值为1.14μg/mL。讨论本重组分支酶能在大肠杆菌中胞内过量表达,属于耐热酶,稳定性较好。

关键词：淀粉分支酶大肠杆菌胞内表达理化性质

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