检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：白国立青岛大学

学位级别：硕士

目的探讨胰十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)在人脂肪间充质干细胞(h ADSC)分化为胰岛分泌细胞中的作用。方法将冻存的人脂肪间充质干细胞进行复苏,并随机分为实验组与对照组,实验组:将携带胰十二指肠同源盒基因-1的病毒液(MOI(感染复数)=50... 详细信息

目的探讨胰十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)在人脂肪间充质干细胞(h ADSC)分化为胰岛分泌细胞中的作用。方法将冻存的人脂肪间充质干细胞进行复苏,并随机分为实验组与对照组,实验组:将携带胰十二指肠同源盒基因-1的病毒液(MOI(感染复数)=50)加入细胞悬液中,混合培养4小时后,去除含有病毒的培养液,更换新鲜的完全培养液,继续培养至48小时,以保证转染效果;对照组:采用不含病毒液的培养液培养48小时。然后分别采用蛋白质印迹法(Western-blotting)和细胞免疫荧光染色方法对感染结果进行检测。对感染后15天细胞利用双硫腙(DTZ)染色观察胰岛素阳性反应细胞,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞胰岛素的分泌量,细胞免疫荧光染色法检测胰岛分泌相关基因insulin 1的表达。结果(1)实验组的人脂肪间充质干细胞进行病毒感染48h后,Western blot法和免疫荧光法均可检测到PDX-1的表达,对照组的细胞则无PDX-1的表达,并且感染的细胞在15d之后仍能检测到PDX-1的表达。(2)实验组出现胰岛素阳性细胞且被染成棕红色,对照组未出现胰岛素阳性细胞。(3)感染后15d,实验组和对照组细胞在低糖环境下分泌的胰岛素量分别为(6.98±0.72)、(6.78±0.54)ng/m L,两组比较,P>0.05,无统计学意义;高糖环境下分泌的胰岛素量分别为(13.38±0.66)、(6.50±0.64)ng/m L,两组比较,P<0.05,有统计学意义;实验组胰岛分泌相关基因insulin 1的表达量多于对照组。结论胰十二指肠同源盒基因-1在人脂肪间充质干细胞向胰岛分泌细胞分化过程中具有促进作用,对开展胰岛移植治疗I型糖尿病具有重要意义。

关键词：胰十二指肠同源盒基因-1 人脂肪间充质干细胞腺病毒基因转染胰岛分泌细胞

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胰十二指肠同源盒基因-1逆转录病毒表达载体的构建及其在肝干细胞中的稳定表达

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第二军医大学学报 2006年第8期27卷 834-836页

作者：金彩霞李文林朱吉田棣张南胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室

目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR方法克隆PDX-1基因全长,将其构建到pMSCVpuro逆转录病毒载体中获得pMSCV PDX-1 puro载体。将该载体导入Phoenix包装细胞系,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67细胞系。结果:成功构建了pMSCV PDX-1 puro载体,并转染PT67细胞。利用PT67细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝干细胞LEPCs,获得稳定表达PDX-1基因的LEPCs(LEPCs PDX-1)。结论:PDX-1逆转录病毒表达载体的成功构建和稳定表达PDX-1的肝干细胞系的获得为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化奠定了基础。

关键词：胰十二指肠同源盒基因-1 逆转录病毒科肝干细胞

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中国临床药理学与治疗学 2007年第6期12卷 614-619页

作者：李华李欣燕许瑞安大连医科大学药学院药理教研室上海交通大学药学院上海200030 福建华侨大学分子药物学研究所

目的:胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,pdx-1)是胰岛发育和分化过程中重要的转录因子。本实验旨在研究腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的pdx-1基因的表达是否可以诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生... 详细信息

目的:胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,pdx-1)是胰岛发育和分化过程中重要的转录因子。本实验旨在研究腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)介导的pdx-1基因的表达是否可以诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生胰岛素的细胞,以进一步为糖尿病的细胞替代疗法提供信息。方法:门静脉途径注射AAV-pdx-1或AAV对照载体到大鼠体内。6周后,用RT-PCR和免疫细胞化学法检测肝脏中胰岛素的基因表达及测定大鼠血糖、体重的变化。结果:AAV-pdx-1治疗组明显提高了糖尿病大鼠肝脏中胰岛素的基因表达和胰岛素阳性细胞数,改善了糖尿病大鼠的高血糖状态及增加了体重。结论:AAV-pdx-1可诱导糖尿病大鼠肝脏细胞分化成产生胰岛素的细胞,缓解了糖尿病状态。其分化的机制及分化的肝脏细胞亚群需进一步实验研究,以提高分化效率。

关键词：腺相关病毒胰十二指肠同源盒基因-1 胰岛素糖尿病高血糖

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构建EGFP-PDX-1融合表达载体电穿孔转染大鼠胎肝干细胞的研究

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南方医科大学学报 2006年第6期26卷 750-753页

作者：孙冰孙晓艳安靓南方医科大学组织胚胎学教研室广东广州510515 解放军总医院基础医学研究所北京100853

目的构建PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,电穿孔转染入大鼠胎肝干细胞以得到稳定表达。方法从SK900/BLSCRIPT质粒中扩增PDX-1,将其插入pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组质粒pEGFP-C1-PDX-1;分离培养大鼠胎肝干细胞,经鉴定后用电穿孔法转... 详细信息

目的构建PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,电穿孔转染入大鼠胎肝干细胞以得到稳定表达。方法从SK900/BLSCRIPT质粒中扩增PDX-1,将其插入pEGFP-C1的多克隆位点中,构建重组质粒pEGFP-C1-PDX-1;分离培养大鼠胎肝干细胞,经鉴定后用电穿孔法转染;分析转染前后细胞生长曲线,荧光显微镜下观察、RT-PCR鉴定转染结果。结果重组质粒经酶切鉴定正确无误,经电穿孔转染后GFP和PDX-1基因均能在胎肝干细胞中保持较长时间稳定表达,并对胎肝干细胞的生长增殖影响较小。结论成功构建了PDX-1绿色荧光蛋白融合表达载体,能在胎肝干细胞中较稳定表达,为研究PDX-1在干细胞定向分化为胰岛素分泌细胞中的调控作用提供了物质基础。

关键词：肝干细胞绿色荧光蛋白载体构建胰十二指肠同源盒基因-1 电穿孔

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胰高糖素样肽1对大鼠胰岛功能调控的研究

胰高糖素样肽1对大鼠胰岛功能调控的研究

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作者：崔岱南京医科大学

学位级别：硕士

目的:观察胰高糖素样肽1(GLP-1)对大鼠胰岛胰岛素分泌功能及胰岛β细胞分化和成熟相关转录因子表达的调控作用及其对大鼠胰岛的促增殖和抗凋亡功能。探讨GLP-1对胰岛功能调控的机制,进一步阐明GLP-1在糖尿病治疗中的地位和作用。方... 详细信息

目的:观察胰高糖素样肽1(GLP-1)对大鼠胰岛胰岛素分泌功能及胰岛β细胞分化和成熟相关转录因子表达的调控作用及其对大鼠胰岛的促增殖和抗凋亡功能。探讨GLP-1对胰岛功能调控的机制,进一步阐明GLP-1在糖尿病治疗中的地位和作用。方法:采用改良胶原酶消化法,分离胰岛,进行形态及功能鉴定后,(1)以10nmol/L的GLP-1与原代培养的大鼠胰岛细胞分别共育1、3、5天,共育结束后分别行葡萄糖刺激下的胰岛素分泌反应(GSIS),在葡萄糖刺激前及刺激后的10、20、60分钟分别收集细胞培养上清液,运用放射免疫法检测胰岛素含量的变化。(2)予10nmol/L的GLP-1与大鼠胰岛细胞分别共育1、3、5天后,提取细胞总RNA,运用RT-PCR技术分别检测胰岛素(INS)、葡萄糖转运体2(GLUT2)基因及胰岛细胞转录因子胰十二指肠同源盒基因-1(PDX-1)、PAX-6及NKx2.2基因mRNA表达的变化。(3)以不同浓度的GLP-1与大鼠胰岛细胞瘤细胞株RINm5f共育,以4-甲基偶氮四唑蓝(tetrazolium Salt,MTT)法观察其增殖情况。用流式细胞术检测GLP-1对白细胞介素1β(IL-1β)诱导的RINm5f细胞凋亡的保护作用及用RT-PCR方法检测GLP-1对原代培养大鼠胰岛BAX及BC1-2基因表达的调控作用。结果:(1)与GLP-1共育后,大鼠胰岛基础胰岛素分泌量增加,GSIS试验中各时间点胰岛素分泌量均升高,且INS基因及GLUT2基因的表达均随着与GLP-1共育时间的延长呈时间依赖性的增强。(2)与GLP-1共育1天后,大鼠胰岛PDX-1、PAX-6及NKx2.2基因的mRNA表达量显著增加,且随着

关键词：胰高糖素样肽1 胰岛胰岛素基因葡萄糖转运体2 胰十二指肠同源盒基因-1 PAX-6 NKx2.2 白细胞介素-1 BAX Bcl-2

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