检索结果-内蒙古大学图书馆

食品科学 2014年第15期35卷 232-237页

作者：张召锋顾娇娇鲍雷蔡夏夏李勇北京大学公共卫生学院营养与食品卫生学系食品安全毒理学研究与评价北京市重点实验室北京100191

目的:探讨α-硫辛酸(α-lipoic acid,LA)和乙酰左旋肉碱(acetyl-L-carnitine,ALC)改善炎症细胞因子介导胰岛细胞功能障碍的效果并探讨机制。方法:大鼠胰岛素瘤RIN-m5f细胞用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介... 详细信息

目的:探讨α-硫辛酸(α-lipoic acid,LA)和乙酰左旋肉碱(acetyl-L-carnitine,ALC)改善炎症细胞因子介导胰岛细胞功能障碍的效果并探讨机制。方法:大鼠胰岛素瘤RIN-m5f细胞用肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)联合作用(TII)48 h造成损伤模型。LA和ALC干预48 h后噻唑蓝法检测胰岛细胞的活力情况,荧光细胞技术法检测细胞的形态学,流式细胞仪检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)表达水平,放射免疫法检测胰岛素分泌情况,Western blotting检测细胞凋亡相关和胰岛素分泌相关蛋白表达情况。结果:TII作用48 h可使RIN-m5f细胞活力明显下降,凋亡增加;并降低基础状态下和高糖刺激状态下胰岛素分泌水平;增加ROS水平,增加一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性,增加一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)水平,促进NF-κB向细胞核转位;TII还可增加RIN-m5f细胞内促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达,抑制抗凋亡蛋白I-κB、Bcl-2表达,增加线粒体细胞色素c释放。而LA、ALC可改善TII诱导的RIN-m5f细胞凋亡,提高基础状态和高糖刺激状态下胰岛素分泌水平;抑制NF-κB向细胞核转位、降低细胞NO水平;降低Bax、Caspase-3表达,增加抗凋亡蛋白I-κB、Bcl-2表达,抑制线粒体细胞色素c释放;LA与ALC联合作用效果强于单独作用。结论:炎症细胞因子作用48 h可通过ROS-cytochrome c-NF-κB-NOS-NO通路最终引起胰岛β细胞的凋亡,进而影响胰岛素分泌;LA和ALC联用可抑制炎症细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡,促进胰岛素分泌。

关键词：炎症细胞因子胰岛细胞功能障碍 α-硫辛酸乙酰左旋肉碱

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TXNIP通过介导自噬紊乱促进胰岛β细胞功能障碍的机制研究

TXNIP通过介导自噬紊乱促进胰岛β细胞功能障碍的机制研究

引用

作者：邓文珍重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分TXNIP通过影响自噬介导高脂高糖导致的胰岛功能障碍目的:探讨TXNIP与胰岛细胞分泌功能障碍及胰岛自噬功能紊乱的关系方法:选择1月龄C57BL/6J雄性小鼠、TXNIP基因敲除雄性小鼠(TXNIP-/-)各12只,每种小鼠分成SD组（普通饮食）、HF... 详细信息

第一部分TXNIP通过影响自噬介导高脂高糖导致的胰岛功能障碍目的:探讨TXNIP与胰岛细胞分泌功能障碍及胰岛自噬功能紊乱的关系方法:选择1月龄C57BL/6J雄性小鼠、TXNIP基因敲除雄性小鼠(TXNIP-/-)各12只,每种小鼠分成SD组（普通饮食）、HFD组（高脂高糖饮食）喂养16周。行葡萄糖耐受性实验（GTT）和胰岛素耐量实验（ITT）检测。分离胰岛细胞,冻存胰腺组织检测TXNIP、P62、LC3B蛋白表达水平。结果:高脂高糖饲养后,C57BL/6J小鼠胰腺组织中TXNIP表达升高（p<0.01）。与对应普食组相比,高脂高糖各组小鼠空腹血糖升高,GTT、ITT血糖曲线下面积增大（p<0.01）。TXNIP-/-小鼠与同种喂养方式的C57BL/6J小鼠相比,其空腹血糖较低,GTT、ITT血糖曲线下面积较小（p<0.05）。与普食组相比,高脂高糖各组小鼠胰腺中自噬相关蛋白P62、LC3B、LC3Ⅱ/Ⅰ比值上升（P<0.01）,而它们在TXNIP-/-小鼠HFD组的表达较C57BL/6J小鼠HFD组减少（p<0.05）。结论:高脂高糖饲养促进胰腺组织TXNIP表达增加、胰岛素分泌水平下降、胰岛素抵抗增加,同时导致胰岛细胞自噬底物蛋白累积;TXNIP缺失能够有效抵抗高脂高糖诱导的胰岛自噬功能紊乱及胰岛细胞功能障碍。第二部分TXNIP介导胰岛细胞自噬和功能障碍的机制研究目的:探讨TXNIP对胰岛细胞自噬的影响及其相关机制方法:常规培养MIN6小鼠胰岛细胞,用慢病毒感染构建稳定阴性对照病毒（LV-GFP）、TXNIP过表达（LV-TXNIP）、TXNIP抑制（LV-TXNIP-si RNA）三组细胞,荧光显微镜及Western Blot法检测感染效率。使用游离脂肪酸（FFA）、自噬激动剂雷帕霉素、抑制剂巴佛洛霉素A1分别处理上述各组细胞。使用电镜观察自噬小体;用Western blot法检测TXNIP、P62、LC3B、Atg3、Atg5、Atg12、Atg16蛋白表达水平及mTOR通路激活水平。结果:与LV-GFP组相比,LV-TXNIP组TXNIP、P62、Atg12、Atg16蛋白表达明显增加（P<0.01）,Atg3、Atg5及LC3Ⅱ/Ⅰ、m TOR磷酸化水平升高（p<0.05）;LV-TXNIP-si RNA组TXNIP、P62、Atg3、Atg5表达明显降低（p<0.01）,Atg16表达减少（p<0.05）,LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加（p<0.01）,而m TOR磷酸化水平、Atg12无明显差异。MIN6细胞用雷帕霉素处理后,P62表达下降（P<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加（p<0.01）;LV-TXNIP组较LV-GFP组相比,P62升高（p<0.01）,LC3Ⅱ/Ⅰ比值增加（p<0.05）。FFA处理各组细胞后,P62、LC3B及LC3Ⅱ/Ⅰ比值均增加（p<0.05）;与LV-GFP组相比,LV-TXNIP组的P62、LC3B表达增加（p<0.05）,自噬小体增多,LC3Ⅱ/Ⅰ比值无明显变化;LV-TXNIP-si RNA组与LV-GFP组相比,自噬小体减少,P62表达下降、LC3Ⅱ/Ⅰ比值增大（p<0.05）。自噬抑制剂巴佛洛霉素A1作用后,LV-TXNIP组P62、LC3Ⅱ/Ⅰ较LV-GFP组表达上调（p<0.05）。结论:TXNIP过表达能够促进MIN6细胞自噬体形成相关蛋白表达上调、自噬底物蛋白及自噬小体累积;沉默TXNIP后,自噬小体及自噬相关蛋白表达均减少。说明TXNIP上调能导致胰岛细胞自噬转换流通功能障碍。这可能与TXNIP激活mTOR信号通路,或抑制溶酶体降解途径相关。

关键词： TXNIP 胰岛细胞功能障碍细胞自噬 TXNIP 自噬相关蛋白自噬小体

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