检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：廖丰蕴广州中医药大学

学位级别：硕士

目的:运用脑微血管内皮细胞膜固相色谱法筛选补阳还五汤中与脑微血管内皮细胞膜具有较高亲和性的活性成分,经化学结构鉴定、药理验证,探讨其“生新”作用机制。方法:1.补阳还五汤提取液指纹图谱及含量测定方法的建立运用反相高效液相色... 详细信息

目的:运用脑微血管内皮细胞膜固相色谱法筛选补阳还五汤中与脑微血管内皮细胞膜具有较高亲和性的活性成分,经化学结构鉴定、药理验证,探讨其“生新”作用机制。方法:1.补阳还五汤提取液指纹图谱及含量测定方法的建立运用反相高效液相色谱法建立补阳还五汤提取液指纹图谱,同时测定补阳还五汤提取液中毛蕊异黄酮苷、阿魏酸、芒柄花苷和羟基红花黄色素A的含量,以控制补阳还五汤提取液的质量。2.原代脑微血管内皮细胞的分离鉴定参考文献方法,从10日龄大鼠脑组织中分离获得原代脑微血管内皮细胞,培养传代,观察细胞形态,免疫荧光染色法检查细胞纯度。3.脑微血管内皮细胞膜固相色谱法的建立采用固相萃取技术对样品进行前处理,分别考察了不同填料SPE柱、不同洗脱程序对补阳还五汤提取液中各共有峰回收率的影响,并确定细胞最适宜的给药浓度非特异性结合成分的洗涤次数,以建立脑微血管内皮细胞固相色谱方法。采用LC-MS技术对细胞膜固相色谱法获得的解离液中成分进行鉴定,对获取的二级谱图信息与文献匹配,确定筛选的结合成分分子式。运用CCK-8实验验证其亲和性成分对氧糖剥夺再灌注模型脑微血管内皮细胞的保护作用。4.活性成分对氧糖剥夺模型细胞VEGF和bFGF分泌的影响采用ELISA法考察活性成分对氧糖剥夺模型细胞VEGF和bFGF表达的影响,探讨活性成分促进血管新生的作用机制。结果:1.补阳还五汤指纹图谱及含量测定结果建立的指纹图谱方法具有较好的专属性、精密度和稳定性,通过相似度评价系统对制备的10批提取液样品进行相似度拟合,确定了 1 8个共有峰,且相似度结果表明10批样品的相似度均高于0.9,可用于提取液样品的质量控制。建立的方法具有专属性、精密度、稳定性及准确性符合含量测定的要求,10批提取液中各成分含量结果如下:毛蕊异黄酮苷含量分别为90.180～114.799 μg/mL;阿魏酸含量为:25.637～42.973μg/mL;芒柄花苷含量分别为12.193～19.845 μg/mL;羟基红花黄色素A的含量为132.097～181.284 μg/mL。2.原代脑微血管内皮细胞的分离鉴定分离的原代脑微血管内皮细胞细胞在倒置显微镜下呈长梭型,细胞融合后呈现明显的“漩涡”状及内皮细胞典型的“铺路石”特征。免疫荧光染色鉴定纯度为95%。3.脑微血管内皮细胞膜固相色谱法的建立确定以STRATA-X型固相柱,洗脱方法为:甲醇平衡后超纯水活化,上样后超纯水清洗,50%乙腈水溶液洗脱。所建立的方法操作简便,且对各共有峰均具有较高的回收率,可用于细胞膜固相色谱法中细胞洗涤液及细胞解离液样品的纯化和富集。以细胞给药浓度为55mg/mL,洗涤次数为5次,建立脑微血管内皮细胞膜固相色谱方法根据解离液液相分析结果,明确补阳还五汤中有六个成分特异性与脑微血管内皮细胞膜发生结合。进一步的质谱分析,结果表明六个结合成分分别为毛蕊异黄酮苷、芍药苷、芒柄花苷、没食子酰芍药苷、7-2’-二羟基-3’,4’-二甲氧基异黄烷、6-羟基山奈酚-3,6-二-O-葡萄糖苷。CCK-8实验结果表明,氧糖剥夺再灌注模型组细胞活性较正常组细胞显著性降低(P<0.01);VEGF组较模型组细胞存活率显著提高(P<0.01);毛蕊异黄酮苷在1～20μg/mL浓度范围内能显著增强氧糖剥夺再灌注模型脑微血管内皮细胞存活率(P<0.01);芍药苷在1～40μg/mL浓度范围内能显著增强氧糖剥夺再灌注模型脑微血管内皮细胞存活率(P<0.01);芒柄花苷在0.1～20μg/mL浓度范围内能显著增强氧糖剥夺再灌注模型脑微血管内皮细胞存活率(P<0.01);没食子酰芍药苷在1～20μg/mL浓度范围内能显著增强氧糖剥夺再灌注模型脑微血管内皮细胞存活率(P<0.01);7-2’-二羟基-3’,4’-二甲氧基异黄烷在0.5～40μg/mL浓度范围内能显著增强氧糖剥夺再灌注模型脑微血管内皮细胞存活率(P<0.05,P<0.01);6-羟基山奈酚-3,6-二-O-葡萄糖苷在0.5～40μg/mL浓度范围内对缺氧复氧损伤脑微血管内皮细胞活性无明显的增强作用(P>0.05)。4.活性成分对氧糖剥夺模型细胞VEGF和bFGF分泌的影响模型组VEGF表达较正常组显著增强(P<0.01);与模型组比较,不同浓度的毛蕊异黄酮苷,芍药苷,芒柄花苷和没食子酰芍药苷处理后,VEGF的表达显着增加(P<0.05,P<0.01)。对于7,2'-羟基-3',4'-二甲氧基异黄酮,低、中浓度组中VEGF的表达无显著性差异(P>0.05),但高浓度组较模型组显著升高(P<0.05)。与模型组比较,不同浓度的毛蕊异黄酮苷,芍药苷,芒柄花苷和没食子酰芍药苷处理后,bFGF的表达显着增加(P<0.05,P<0.01)。对于7,2’-羟基-3’,4'-二甲氧基异黄酮,低浓度组中bFGF的表达

关键词：补阳还五汤指纹图谱脑微血管内皮细胞细胞膜固相色谱血管新生

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脑微血管内皮细胞与脑卒中关系的研究进展

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实用医学杂志 2015年第19期31卷 3259-3261页

作者：余奇劲陶红武汉大学人民医院麻醉科 430060

血脑屏障（bloodbrainbarrier，BBB）是脑的毛细血管与神经组织之间存在的一个调节界面，其结构主要有3层：脑微血管内皮细胞（brainmicrovascularendothelialceils，BMECs）、基膜和胶质细胞足突，其中BMECs发挥主要作用。近几年逐步... 详细信息

血脑屏障（bloodbrainbarrier，BBB）是脑的毛细血管与神经组织之间存在的一个调节界面，其结构主要有3层：脑微血管内皮细胞（brainmicrovascularendothelialceils，BMECs）、基膜和胶质细胞足突，其中BMECs发挥主要作用。近几年逐步认识到BMECs不仅是生物学上的结构与功能屏障，还能合成多种物质，调节血管舒缩和营养神经，当其功能发生障碍时，一系列脑血管疾病随之发生。

关键词：脑微血管内皮细胞脑卒中 BMECs 血脑屏障脑血管疾病神经组织毛细血管胶质细胞

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脑微血管内皮细胞的分离和原代培养及大肠杆菌E44侵袭脑微血管内皮细胞的研究

脑微血管内皮细胞的分离和原代培养及大肠杆菌E44侵袭脑微血管内...

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作者：李珺南方医科大学

学位级别：硕士

细菌性脑膜炎是新生儿时期最常见也最严重的中枢神经系统（Central Nervous System，CNS）感染，尽管抗生素广泛使用，但是世界各地仍有发病，尤其是发展中国家，细菌性脑膜炎仍然是新生儿最常见的死亡原因之一，且幸存者中枢神经系统... 详细信息

细菌性脑膜炎是新生儿时期最常见也最严重的中枢神经系统（Central Nervous System，CNS）感染，尽管抗生素广泛使用，但是世界各地仍有发病，尤其是发展中国家，细菌性脑膜炎仍然是新生儿最常见的死亡原因之一，且幸存者中枢神经系统后遗症的发生率为30%。现已证明，大肠杆菌Kl株是引起新生儿脑膜炎最常见的革兰氏阴性杆菌。临床上绝大部分新生儿脑膜炎病例是由细菌入血传播至中枢神经后导致的结果。细菌进入中枢神经系统是细菌性脑膜炎发生的必要条件。但是脑部的血管结构，尤其是微血管内皮的结构和身体其他部位的血管内皮有很大的不同，具备其独有的通透特征，对于血液中的物质具有非常强的透过选择性，因此，致病菌如何侵入CNS成为人们认识细菌性脑膜炎发病机制以及预防此类疾病的关键。脑血管的通透性与非神经系统中的血管不同，具有屏障作用，被称为血，脑屏障（Blood-brain barrier，BBB）。血脑屏障是以脑微血管内皮细胞（Brain microvascular endothelial cell，BMEC）、星形胶质细胞（Astrocyte）和周细胞（Pericyte）共同构成的结构和功能屏障，其主要结构和功能基础是BMEC以及细胞间的紧密连接（Tight junction，TJ），它们可以保护大脑免受血循环中的微生物和毒素损害。很多脑内的疾病包括中枢神经感染都与BBB的防御功能被破坏有关。因此，建立体外血脑屏障模型，一方面可以为研究致病微生物侵入血脑屏障的机制提供模型，另一方面，又避免了大规模、长期的动物实验所带来的工作量大、试验成本高、并且可能受体内其他因素影响等问题。前期研究发现，引起新生儿脑膜炎的*** K1的致病力与其基因岛GimA上的ibeA基因有关，ibeA编码的IbeA蛋白是GimA上唯一能介导细菌侵入BMEC的侵袭素，是细菌的毒力因子。新近研究表明IbeA可以通过与BMEC表面的受体Vimentin （Vim）结合，从而介导*** K1侵入BBB。由此可见Vim可以作为阻断Ecoli K1侵袭的靶点而用于细菌性脑膜炎的防治。为了研究Vim对于侵袭的影响，本研究使用一种能改变Vim蛋白结构的抗生素：格尔德霉素（Geldanamycin，GA），初步观察其对*** K1侵袭BMEC的抑制效果。因此，本文的目的是建立体外BBB模型，并以*** K1株的临床分离株E44的野生型和敲除ibeA的突变株（△ibeA E44）初步研究***脑膜炎发病和防治机理。一、大鼠脑微血管内皮细胞原代培养的建立。选择3周龄的大鼠，以酒精消毒后取出大脑。将大脑放置于冰上，仔细剥离脑膜，然后分离皮质。用金属筛网轻轻研磨，使大块的灰质分离为碎末状，之后将浸泡了灰质碎末的培养悬液转入匀浆器匀浆，再经葡聚糖梯度离心以及胶原酶/组织分散酶消化的过程后，即可得到纯度较高的脑微血管段，并种植于胶原蛋白包被过的25c㎡塑料培养瓶中行进培养。显微镜下观察，培养24小时的BMEC呈长梭形，或呈现椭圆形；随后细胞岛逐渐增大，至第7天左右细胞岛融合成单层排列的细胞。单层细胞经过消化、稀释后，种植于玻璃盖玻片上，待细胞长满50%至80%时，经Ⅷ因子相关抗体及羊抗兔IgG-FITC依次孵育后，用荧光显微镜观察。镜下计数细胞，可见阳性细胞达90%以上。证明该方法能成功分离大鼠BMEC，建立原代BMEC体外培养模型。上述方法分离培养的BMEC较免疫磁珠法分离获得的高纯度的BMEC更接近在体状态，因后者可丧失在体状态下的一些重要特性，如紧密连接的通透性增高，特异性抗原表达减少，并且这些改变随着细胞传代而加重，最终丧失血脑屏障的特性。二、大肠杆菌E44株侵袭脑微血管内皮细胞的研究。 1、*** E44野生型和突变型生长曲线的观察。依据细菌生长曲线检测的常规方法，将E44、10A-23和ZD1株种植于LB中过夜培养的菌液作为备用菌液，每个菌种准备12支试管，每支试管各加入5ml LB培养液以及20μl备用菌液，然后将试管标记，放入细菌培养箱培养。在0至第20个小时内选择12个时间点，每到一个选定的培养时间取出一支试管放入4℃冰箱待测，最后一支试管培养时间为20小时。待全部试管取出后，以OD600为光波密度检测细菌悬液的OD值，并且绘制其生长曲线。三种细菌取等量的平台期细菌悬液，梯度稀释后涂板培养、计数。计数结果进行单因素方差分析。结果显示，三种菌株均在培养14小时后进入平台期，且三条生长曲线几乎重合，平台期细菌悬液涂板计数结果十分接近，提示三种菌株的生长能力和生长特点十分相似。比较它们的生长能力及特点，可以帮助我们排除突变株可能存在的生长能力缺陷所导致的侵袭率改变。

关键词：细菌性脑膜炎脑微血管内皮细胞原代培养大肠杆菌E44 格尔德霉素

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脑微血管内皮细胞分泌sAPPα的分子机制及意义

脑微血管内皮细胞分泌sAPPα的分子机制及意义

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作者：赵文慧中国医科大学

学位级别：硕士

我们的前期研究发现，脑微血管内皮细胞中表达APP，即0-淀粉样蛋白前体蛋白，以及与APP剪切加工相关的α-，β-和γ-分泌酶。而且在应激状态下，脑微血管内皮细胞的APP可以经过非Aβ代谢途径，加工形成可溶性sAPPα。因此，本研究拟以... 详细信息

我们的前期研究发现，脑微血管内皮细胞中表达APP，即0-淀粉样蛋白前体蛋白，以及与APP剪切加工相关的α-，β-和γ-分泌酶。而且在应激状态下，脑微血管内皮细胞的APP可以经过非Aβ代谢途径，加工形成可溶性sAPPα。因此，本研究拟以此为线索，首先探讨脑微血管内皮细胞分泌sAPPα的分子机制，并在此基础上，研究其生物学意义。\n 在脑内的神经血管单元中，神经元以及脑微血管和胶质细胞的相互作用对于维持脑的正常功能以及脑微环境稳定有着重要的作用。研究表明脑微血管的功能不仅仅局限于为脑组织供血，当脑内微环境失衡时，脑微血管可能对神经元的损伤具有一定的调节作用，而且其涉及的分子机制并不清楚。由于有研究显示神经来源的可溶性sAPPα具有一定的神经保护作用，因此，本研究拟在体外建立脑微血管内皮细胞-神经元的共培养体系，在体外模拟脑内微环境失衡状态，研究脑微血管内皮细胞分泌sAPPα对神经元凋亡的调节作用。\n 方法\n 1.血清饥饿处理脑微血管内皮细胞后，Western blot和ELISA方法检测人脑微血管内皮细胞中的sAPPα的表达和分泌情况;\n 2.利用siRNA，对脑微血管内皮细胞的α分泌酶ADAM10进行RNA干扰;\n ***方法检测RNA干扰脑微血管内皮细胞的ADAM10后对sAPPα分泌的影响。\n 4.原代分离培养新生大鼠海马神经元;\n 5.免疫荧光技术检测新生大鼠海马神经元中神经元标志蛋白MAP2的表达;\n 6.利用血清饥饿方法对原代海马神经元进行处理，Western blot检测新生大鼠海马神经元凋亡晚期标志蛋白即剪切形式的Caspase3的表达情况;\n 7.利用血清饥饿方法对原代海马神经元进行处理，流式细胞术检测新生大鼠海马神经元凋亡早期标志蛋白Annexin5的表达情况;\n 8.收集血清饥饿后的脑微血管内皮细胞的培养上清，与神经元共培养，分析其对血清饥饿诱导的神经元凋亡的影响，即分析对血清饥饿所诱导的神经元中Caspase3和Annexin5表达的影响。\n 结果\n 1.血清饥饿处理脑微血管内皮细胞后，可溶性sAPPα的分泌增加;\n 2.鉴定得到了能够有效干扰脑微血管内皮细胞中α分泌酶ADAM10的siRNA;\n ***干扰脑微血管内皮细胞的ADAM10后，对细胞内sAPPα表达的影响不大（统计学分析显示无显著性差异），但明显减少了sAPPα的分泌;\n 4.获得原代培养的新生大鼠海马神经元，并在其中检测到了神经元标志蛋白MAP2的表达;\n 5.血清饥饿可以诱导神经元发生凋亡，流式细胞术发现血清饥饿3h后，神经元中的凋亡早期标志蛋白Annexin5的表达明显升高;而凋亡晚期标志蛋白—剪切形式的Caspase3的表达则呈时间依赖性升高，在血清饥饿后24h达到高峰;\n 6.收集血清饥饿后的脑微血管内皮细胞的培养上清，与血清饥饿后的神经元共培养后，可以明显减少神经元中剪切形式Caspase3的表达，即保护血清饥饿后的神经元，使之免于发生凋亡;\n 结论\n 1.血清饥饿通过激活脑微血管内皮细胞的α分泌酶ADAM10，促进APP剪切为sAPPα并向细胞外分泌;\n 2.血清饥饿可以明显诱导神经元的早期凋亡以及caspase3依赖性凋亡;\n 3.脑微血管内皮细胞可能通过分泌sAPPα来发挥神经保护作用。

关键词：脑微血管内皮细胞神经保护作用神经元凋亡分子机制共培养体系动物模型

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脑微血管内皮细胞通过分泌血管内皮生长因子促进神经干细胞增殖的研究

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实用医学杂志 2013年第20期29卷 3295-3298页

作者：黄惠鸿张素平凌莉刘博会何锐王慕真邓婉青暨南大学医学院第四附属医院、广州市红十字会医院神经内科广州市510220

目的:观察脑微血管内皮细胞通过分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对神经干细胞增殖的影响并探讨可能的机制。方法:取新生SD大鼠,进行脑微血管内皮细胞与神经干细胞的原代培养、分离及传代,然后通过形态... 详细信息

目的:观察脑微血管内皮细胞通过分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对神经干细胞增殖的影响并探讨可能的机制。方法:取新生SD大鼠,进行脑微血管内皮细胞与神经干细胞的原代培养、分离及传代,然后通过形态学和免疫荧光法鉴定。使用transwell小室建立脑微血管内皮细胞与神经干细胞非接触性的共培养系统。实验分为共培养组、单纯神经干细胞培养组和VEGF拮抗剂组。通过MTS方法检测不同组神经干细胞的增殖;通过酶联免疫法检测各组细胞上清液中VEGF的表达。结果:与单纯神经干细胞培养组及VEGF拮抗剂组相比,共培养组的神经干细胞显示出增殖增加,且共培养组的细胞上清液中VEGF表达升高。结论:脑微血管内皮细胞和神经干细胞共培养可促进神经干细胞的增殖,其中脑微血管内皮细胞分泌的VEGF可能起关键的调控作用。

关键词：血管内皮生长因子脑微血管内皮细胞神经干细胞共培养

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脑微血管内皮细胞中淀粉样前体蛋白(APP)的表达及其加工研究

脑微血管内皮细胞中淀粉样前体蛋白(APP)的表达及其加工研究

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作者：邢黎莉中国医科大学

学位级别：硕士

目的:　　阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)是以渐进性记忆力和智能减退为特征的弥漫性中枢神经系统(centralnervoussystem,CNS)退行性疾病。它是引起老年人群痴呆的最常见原因,并随着人类寿命的延长,发病率呈明显增高趋势,患... 详细信息

目的:　　阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)是以渐进性记忆力和智能减退为特征的弥漫性中枢神经系统(centralnervoussystem,CNS)退行性疾病。它是引起老年人群痴呆的最常见原因,并随着人类寿命的延长,发病率呈明显增高趋势,患者通常在发病后数年内死亡。　　 AD主要的组织病理特征为:大脑皮质和海马神经细胞外β-淀粉样蛋白(β-amyloidprotein,Ap)沉积形成的老年斑和脑神经细胞内tau蛋白异常聚集形成神经纤维缠结。研究表明,AD中85%-95%的病人合并有脑血管淀粉样血管病(cerebral amyloid angiopathy,CAA);在AD转基因小鼠模型中也发现有不同程度的脑微血管病变,可能参与了AD的病理进程。然而,目前对脑微血管参与AD进展的机制知之甚少。　　 β淀粉样蛋白是阿尔茨默海病脑内沉积的主要病理性蛋白,Aβ的形成、聚集和清除贯穿了AD的整个病理过程。Aβ是由淀粉样蛋白前体(APP)经蛋白水解酶作用后的产物。在体内,APP有两条主要代谢途径。其一是Ap代谢途径:即APP首先经经β分泌酶切割产生一较长的N端片段(sAPPβ)和一个较短的跨膜片段C99,然后再经γ分泌酶切割,产生含有39-42个氨基酸的Aβ和一胞内片段AICD(APPintracellulerdomain,AICD)。其二是非Aβ代谢途径:即APP先由α分泌酶切割,产生较大的可溶的氨基端片段(sAPPα)和一跨膜片段C83,后者同样经γ分泌酶作用产生较小的片段p3和AICD。目前国内外的研究大多关注表达于神经元中的APP,尤其是神经元中的APP加工产生Aβ的机制和意义。然而,作为神经.血管单元中的重要组分,脑微血管中是否存在APP及其代谢过程,进而参与AD的病理进程,值得探讨。　　在本研究中,我们首先检测了体外正常培养条件下,人脑微血管内皮细胞中APP及其相关分泌酶的表达情况。我们在发现人脑微血管内皮细胞中能够表达APP及其相关分泌酶的基础上,通过血清饥饿处理人脑微血管内皮细胞,进一步分析了应激状态下人脑微血管内皮细胞中APP代谢过程的变化。　　方法:　　 1、RealtimePCR、Westernblot和免疫荧光技术鉴定APP及其相关分泌酶在人脑微血管内皮细胞中的表达。　　 2、以血清饥饿处理人脑微血管内皮细胞,RealtimePCR和Westernblot方法初步分析.APP,α-分泌、β分泌酶及γ分泌酶的表达变化。　　 3、ELISA方法检测血清饥饿的人脑微血管内皮细胞中AB及sAPP的分泌情况。　　 4、Westernblot方法分析sAPP在血清饥饿的人脑微血管内皮细胞中的表达。　　 5、RealtimePCR和Westernblot方法分析血清饥饿后仅.分泌酶(ADAM9,ADAM10以及ADAM17)的表达变化。　　结果:　　 1、在人脑微血管内皮细胞中存在APP及其代谢相关分泌酶　　 (1)在人脑微血管内皮细胞中,检测到了APP的mRNA,以及α分泌酶(ADAM17)、β分泌酶(BACEl)及γ分泌酶(PS1,PS2,Nicastrin,APH-1及PEN-2)的mRNA。　　 (2)在人脑微血管内皮细胞中,检测到了APP,BACE-1和PS2的蛋白表达。　　 2、血清饥饿可以上调人脑微血管内皮细胞中APP的表达　　 (1)血清饥饿人脑微血管内皮细胞后,APP的mRNA表达升高,且呈时间依赖性。　　 (2)血清饥饿人脑微血管内皮细胞后,APP的蛋白表达升高,且呈时间依赖性。　　 3、血清饥饿对人脑微血管内皮细胞Aβ的产生没有影响　　 4、血清饥饿可以促使人脑微血管内皮细胞分泌可溶性APP　　 (1)血清饥饿处理后,人脑微血管内皮细胞向培养液上清中分泌的可溶性APP增多,且呈时间依赖性;(2)血清饥饿处理后,人脑微血管内皮细胞中表达的可溶性APP增加,且呈时间依赖性;5、血清饥饿导致人脑微血管内皮细胞中α分泌酶ADAM10、ADAM17表达升高　　 (1)血清饥饿可以促使人脑微血管内皮细胞中ADAM10和ADAM17的mRNA表达升高,而对ADAM9的表达没有影响;(2)血清饥饿可以促使人脑微血管内皮细胞中ADAM10和ADAM17的蛋白质表达升高。　　结论:　　 1、在人脑微血管内皮细胞中存在APP及其代谢加工过程;2、血清饥饿处理人脑微血管内皮细胞后,可以选择性增强APP的非Ap代谢途径,促使可溶性的APP(sAPP)分泌增加。

关键词：脑微血管内皮细胞 β-淀粉样蛋白阿尔茨海默病组织病理特征

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脑络欣通促进氧糖剥夺/再灌注损伤大鼠的脑微血管内皮细胞血管新生:基于激活caspase-1/Gasdermin D/通路

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南方医科大学学报 2023年第7期43卷 1093-1101页

作者：李佩佩胡音琦刘佳王丽娜吴元洁胡建鹏安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室安徽合肥230038 安徽中医药大学中医学院安徽合肥230012

目的探讨脑络欣通(NLXTD)含药血清对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)焦亡及血管新生的影响和可能作用机制。方法BMECs体外培养,分别经OGD/R诱导、NLXTD含药血清处理及siRNA转染caspase-1,设置Control组:BMECs+10%空... 详细信息

目的探讨脑络欣通(NLXTD)含药血清对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)焦亡及血管新生的影响和可能作用机制。方法BMECs体外培养,分别经OGD/R诱导、NLXTD含药血清处理及siRNA转染caspase-1,设置Control组:BMECs+10%空白血清;OGD/R组:BMECs+OGD/R+10%空白血清;NLXTD组:BMECs+OGD/R+10%NLXTD含药血清;siRNA-NC组:BMECs转染siRNA-NC+OGD/R+10%空白血清;si-caspase-1组:BMECs转染si-caspase-1+OGD/R+10%空白血清;si-caspase-1+NLXTD组:BMECs转染si-caspase-1+OGD/R+10%NLXTD含药血清。采用CCK-8法、Transwell小室实验、管腔形成实验分别检测细胞增殖、迁移、成管能力;试剂盒测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;ELISA法检测培养液中炎性因子IL-1β、IL-18的含量;Western blot检测细胞焦亡相关蛋白pro-caspase-1、caspase-1、NLRP3、Gasdermin D及血管生成关键蛋白VEGF,VEGFR2的表达。结果BMECs经OGD/R诱导后出现明显的损伤;与OGD/R组比较,10%的NLXTD含药血清能显著提高OGD/R损伤BMECs的存活率、迁移能力及成管能力(P<0.01),降低IL-1β、IL-18的含量以及LDH的释放(P<0.01);Western blot实验结果显示,NLXTD含药血清可上调OGD/R损伤BMECs的VEGF和VEGFR2蛋白表达(P<0.01),并降低pro-caspase-1、caspase-1、NLRP3、Gasdermin D的蛋白表达(P<0.01),加入caspase-1 siRNA后,能进一步促进VEGFR2蛋白表达(P<0.01)。结论NLXTD可以提高OGD/R损伤后的BMECs增殖、迁移、成管能力,促进血管新生,其机制可能与抑制细胞焦亡caspase-1/Gasdermin D通路,减轻BMECs损伤,上调VEGF、VEGFR2水平有关。

关键词：脑络欣通脑微血管内皮细胞氧糖剥夺/再灌注血管新生细胞焦亡血管内皮生长因子

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谷红注射液对缺糖缺氧致乳鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

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中国药学杂志 2014年第21期49卷 1897-1902页

作者：戴柳玲万海同周惠芬杨洁红赵涛付巍何昱浙江中医药大学心脑血管病研究所杭州310053 步长制药股份有限公司西安710075

目的探讨谷红注射液对乳鼠脑微血管内皮细胞因缺糖缺氧所致损伤的保护作用。方法建立乳鼠脑微血管内皮细胞缺糖缺氧损伤模型。利用四甲基偶氮唑蓝法和预实验确定加药浓度后,将培养的细胞随机分成6组:正常组、模型组、谷红注射液低、中... 详细信息

目的探讨谷红注射液对乳鼠脑微血管内皮细胞因缺糖缺氧所致损伤的保护作用。方法建立乳鼠脑微血管内皮细胞缺糖缺氧损伤模型。利用四甲基偶氮唑蓝法和预实验确定加药浓度后,将培养的细胞随机分成6组:正常组、模型组、谷红注射液低、中、高治疗组(20、60、100μL·m L-1)和阳性药物对照组(尼莫地平,200μg·m L-1)。观察谷红注射液对脑微血管内皮细胞一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)含量、超氧化歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性的影响;并采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率和细胞周期变化。结果与模型组相比,谷红注射液组特别是高剂量组能显著降低胞内一氧化氮、丙二醛含量,显著增强胞内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性(P<0.01);谷红注射液中、高剂量组可明显改善脑微血管内皮细胞形态,抑制细胞凋亡,有效抑制缺糖缺氧诱导的细胞发生G1/S期阻滞。结论谷红注射液对乳鼠脑微血管内皮细胞的缺糖缺氧损伤显示出良好的保护作用,其机制可能与抗氧化、抑制细胞凋亡的作用有关。

关键词：谷红注射液脑微血管内皮细胞缺糖缺氧损伤细胞凋亡

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补阳还五汤激活PI3K-AKT通路促进氧糖剥夺再灌注损伤的脑微血管内皮细胞血管生成

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浙江大学学报（医学版） 2022年第5期51卷 544-551页

作者：胡小伟李琳龚荧荧方燕杨琰许家栋储利胜浙江中医药大学基础医学院浙江杭州310053 浙江中医药大学第二临床医学院浙江杭州310053

目的:探讨补阳还五汤促进氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤的大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)血管生成的机制。方法:RBMEC经补阳还五汤含药血清孵育24 h后,构建OGD/R细胞损伤模型。将细胞随机分为正常对照组、模型对照组、补阳还五汤组(给予补阳... 详细信息

目的:探讨补阳还五汤促进氧糖剥夺再灌注(OGD/R)损伤的大鼠脑微血管内皮细胞(RBMEC)血管生成的机制。方法:RBMEC经补阳还五汤含药血清孵育24 h后,构建OGD/R细胞损伤模型。将细胞随机分为正常对照组、模型对照组、补阳还五汤组(给予补阳还五汤含药血清)和LY294002组[给予补阳还五汤含药血清前使用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002预处理1 h]。采用CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell迁移实验、管腔形成实验分别检测细胞增殖、迁移和形成管腔能力。蛋白质印迹法检测PI3K、蛋白激酶B(AKT)、低氧诱导因子(HIF)-1α及血管内皮生长因子(VEGF)等蛋白的表达。结果:与模型对照组比较,补阳还五汤组RBMEC存活率、迁移能力及管腔形成能力显著增强(均P<0.01),磷酸化PI3K、磷酸化AKT、HIF-1α和VEGF蛋白表达增加(均P<0.05),而LY294002可阻断上述效应。结论:补阳还五汤含药血清可促进OGD/R损伤的RBMEC血管生成,其机制可能与其激活PI3K-AKT信号通路上调HIF-1α和VEGF表达有关。

关键词：补阳还五汤脑微血管内皮细胞氧糖剥夺再灌注血管生成 PI3K-AKT通路低氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子

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脑微血管内皮细胞来源的外泌体在致脑膜炎大肠杆菌感染中的作用研究

脑微血管内皮细胞来源的外泌体在致脑膜炎大肠杆菌感染中的作用研...

引用

作者：覃陆英华中农业大学

学位级别：硕士

细菌性脑膜炎是一种重要的致死性传染性疾病,致脑膜炎大肠杆菌(Escherichia coli,***)是其主要病原,破坏血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)是***引起脑膜炎的关键步骤。BBB能够通过控制相关物质的进出使中枢神经系统(central nervous s... 详细信息

细菌性脑膜炎是一种重要的致死性传染性疾病,致脑膜炎大肠杆菌(Escherichia coli,***)是其主要病原,破坏血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)是***引起脑膜炎的关键步骤。BBB能够通过控制相关物质的进出使中枢神经系统(central nervous system,CNS)免受血液中的毒素和病原体的侵害。BBB主要由脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)、星形胶质细胞和周细胞组成,细胞间的物质交换与信息交流对维持BBB结构与功能的完整性至关重要。外泌体是一种由细胞二次胞吞形成的微小囊泡,通过携带蛋白质、核酸和脂质等物质在细胞间的信息传递中发挥着重要作用。***通过与BMECs相互作用能够引起BBB结构完整性的丧失和功能的改变,BMECs来源的外泌体在这一过程中发挥的作用尚不清楚。为此,本研究采用致脑膜炎大肠杆菌PCN033感染BMECs细胞,并对该细胞来源的外泌体进行分离鉴定。在此基础上,对感染前后BMECs来源的外泌体的功能进行了探究,并对外泌体中的miRNA进行了测序分析。在实验结果中发现,利用PCN033感染BMECs后,提取的外泌体与BMECs互作后,使BMECs的跨细胞电阻被显著降低,紧密连接蛋白的表达(ZO-1和Occludin)被显著下调,而BMECs活化标志基因ICAM-1的表达被显著上调;同样,外泌体和星形胶质细胞U251互作后,使U251活化标志基因GFAP的表达被显著下调;对外泌体的miRNA进行测序分析,经荧光定量PCR验证,发现mir-146a-5p、mir-497-5p、mir-5008-3p、mir-6854-5p、mir-4449、novel-183在感染后BMECs来源的外泌体中显著上调。根据靶基因预测/KEGG结果,上述差异表达的miRNA的候选靶基因主要参与细胞增殖、生长和存活,炎症反应和酶催化活动等,因此推测外泌体可能携带这些miRNA来影响BMECs的屏障功能和U251的炎症反应。

关键词：大肠杆菌性脑膜炎血脑屏障脑微血管内皮细胞外泌体 miRNA

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