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桂枝汤有效成分苯丙烯类化合物干预IL-1β刺激小鼠脑微血管内皮细胞释放PGE_2的构效关系

药学学报 2007年第7期42卷 798-802页

作者：马悦颖尚明英李沧海霍海如蔡少青姜廷良中国中医科学院中药研究所唐氏中药研究中心北京100700 北京大学药学院北京100083 中国中医科学院医学实验中心北京100700

To observe the effects of phenylallyl compounds on prostaglandin E2（PGE2）release in mouse cerebral microvascular endothelial cells （bEnd.3） stimulated by IL-1β, and to analyze their structure-activity relationship. Different concentrations of phenylallyl compounds were added separately, and the content of PGE2 induced by IL-1β in the culture media was measured by ELISA assay. The 50% inhibitory concentration （IC 50 ） of PGE2 was calculated. Studies showed that phenylallyl compounds could affect the PGE2 release differently in bEnd.3 cells induced by IL-1β. Close relationships were shown between the inhibitory activities and the location and number of the substituent groups. In conclusion, phenylallyl compounds exhibited inhibitory activities at different extent on PGE2 release in bEnd.3 cells stimulated by IL-1β and presented certain structure-activity relationship.

关键词：苯丙烯类化合物前列腺素E2 构效关系脑微血管内皮细胞白介素1 桂枝汤

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灯盏花素对大鼠脑微血管内皮细胞OGD损伤的保护作用及机制研究

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中国药理学通报 2017年第2期33卷 295-296页

作者：李钊飞曹小雨陈琼芳王钢杨秀芬广西中医药大学药学院药理学教研室广西南宁530001 陕西省第二人民医院药剂科陕西西安710005

灯盏花素（breviscapine,Bre）是从短亭飞蓬中提取的黄酮类化合物,具有保护缺血性脑血管疾病、调节血管内皮功能、减轻炎性反应等作用本实验通过分离培养大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）,建立氧糖剥夺（OGD）BMECs模型,研究Bre对BMECs损... 详细信息

灯盏花素（breviscapine,Bre）是从短亭飞蓬中提取的黄酮类化合物,具有保护缺血性脑血管疾病、调节血管内皮功能、减轻炎性反应等作用本实验通过分离培养大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）,建立氧糖剥夺（OGD）BMECs模型,研究Bre对BMECs损伤是否具有保护作用,并探讨其可能的机制。相关研究尚未见报道。

关键词：灯盏花素大鼠脑微血管内皮细胞 OGD 保护作用机制

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白藜芦醇对体外高糖刺激下小鼠脑微血管内皮细胞解偶联蛋白基因表达的影响

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第二军医大学学报 2010年第9期31卷 952-954页

作者：陈峰刘志民赵瑛第二军医大学长征医院神经内科上海200003 第二军医大学长征医院内分泌科上海200003

目的观察高糖对小鼠脑微血管内皮细胞解偶联蛋白(uncoupling protein,UCP)基因表达的影响,并探讨白藜芦醇的调节作用。方法通过体外培养小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd.3,采用RT-PCR方法观察不同浓度葡萄糖(5.5,25mmol/L)刺激及白藜芦醇(25... 详细信息

目的观察高糖对小鼠脑微血管内皮细胞解偶联蛋白(uncoupling protein,UCP)基因表达的影响,并探讨白藜芦醇的调节作用。方法通过体外培养小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd.3,采用RT-PCR方法观察不同浓度葡萄糖(5.5,25mmol/L)刺激及白藜芦醇(25μmol/L)干预时UCP基因表达的变化。结果 25mmol/L葡萄糖糖刺激24h能上调UCP4、UCP5 mRNA表达(P<0.05),而对UCP1、UCP2基因表达无明显影响;白藜芦醇能上调基础状态及高糖状态下的UCP5基因表达(P<0.05),能抑制高糖引起的氧自由基增加(P<0.05)。结论高糖刺激可特异性上调小鼠脑微血管内皮细胞UCP4、UCP5基因表达;白藜芦醇能降低高糖诱导的氧自由基生成,同时上调细胞UCP5基因的表达。

关键词：糖尿病脑微血管内皮细胞解偶联蛋白白藜芦醇氧化性应激

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脑肾素-血管紧张素系统通过脑微血管内皮细胞调控神经血管单元介导阿尔茨海默病机制研究进展

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中国药理学与毒理学杂志 2023年第10期37卷 781-791页

作者：张评奥宋成寰施霁耘黄婉莹张瑞张永芳王昊上海交通大学医学院药理学与化学生物学系上海200025 上海交通大学医学院、上海高校转化医学协同创新中心上海200025

脑血管功能异常是阿尔茨海默病(AD)重要的病理特征之一,而脑肾素-血管紧张素系统(BRAS)病理改变则是AD患者脑血管损伤的重要指标。BRAS相对独立于外周肾素-血管紧张素系统(RAS),并可通过调节神经元和胶质细胞影响神经血管单元(NVU)稳态... 详细信息

脑血管功能异常是阿尔茨海默病(AD)重要的病理特征之一,而脑肾素-血管紧张素系统(BRAS)病理改变则是AD患者脑血管损伤的重要指标。BRAS相对独立于外周肾素-血管紧张素系统(RAS),并可通过调节神经元和胶质细胞影响神经血管单元(NVU)稳态。脑微血管内皮细胞是NVU的重要成员,由其构成的血脑屏障可能是实现外周RAS与BRAS调控的重要桥梁。本文围绕AD分别介绍BRAS对神经元功能、血管内皮细胞发育及星形胶质细胞和小胶质细胞稳态的影响,从细胞的能量代谢、氧化应激和炎症反应等角度综述BRAS在NVU调节互作网络及在AD病理中的作用。综述RAS药物的临床研究和RAS在AD中的研究进展,以期阐明BRAS对NVU的调控机制及其对AD病理的贡献,为AD的预防和治疗提供新思路。

关键词：肾素-血管紧张素系统神经血管单元阿尔茨海默病脑微血管内皮细胞

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LPS诱导小鼠脑微血管内皮细胞通透性增高的分子机制(英文)

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中南大学学报（医学版） 2010年第11期35卷 1129-1137页

作者：何芳尹飞彭镜邓小鹿吴丽文张慈柳中南大学湘雅医院儿科长沙410008

目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠脑微血管内皮细胞通透性的影响及其可能的分子机制。方法:以培养至融合的小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3为实验对象,利用跨内皮细胞电阻抗(transendothelial electrical resistance,TEER)... 详细信息

目的:探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对小鼠脑微血管内皮细胞通透性的影响及其可能的分子机制。方法:以培养至融合的小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3为实验对象,利用跨内皮细胞电阻抗(transendothelial electrical resistance,TEER)检测LPS对bEnd.3细胞屏障功能的改变及C3转移酶预处理后对其的影响。Pull down法和报告基因法分别测定RhoA和NF-κB活性。直接荧光染色法观察bEnd.3细胞F-actin的分布变化。结果:LPS作用3h后,bEnd.3细胞TEER值明显下降[(53.67±2.01)Ω·cm2],作用12h后达最低[(37.67±3.05)Ω·cm2],3,6,12h组与正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。C3转移酶预处理后,LPS作用3,12h时细胞TEER值分别为(60.67±4.05)Ω·cm2和(40.60±2.33)Ω·cm2,均比相应时间点未预处理细胞的TEER值高,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS作用bEnd.3细胞0.5h后RhoA明显活化,NF-κB活性增加,C3转移酶预处理后其NF-κB活性明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。直接荧光染色发现在LPS作用3h后细胞出现明显的F-actin重构,其程度随LPS作用时间的延长而加重,而C3转移酶预处理细胞F-actin重构发生较晚且程度较轻。结论:LPS通过使F-actin重组增加脑微血管内皮细胞的通透性,RhoA和NF-κB均参与此过程,且NF-κB信号分子受RhoA调控。

关键词：脂多糖 RhoA NF-κB F-actin 脑微血管内皮细胞

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脑心通胶囊对缺糖缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用及其机制

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中草药 2018年第14期49卷 3318-3325页

作者：王海燕周惠芬何昱杨洁红虞立李畅万海同浙江中医药大学浙江杭州310053

目的探讨脑心通胶囊(NXT)对乳鼠缺糖缺氧损伤脑微血管内皮细胞(rBMECs)的体外保护作用及其机制。方法原代培养rBMECs,进行兔抗鼠VⅢ因子鉴定,MTT筛选出NXT肠吸收液体外保护rBMECs的质量浓度范围,优选出3个质量浓度进行实验。实验设对照... 详细信息

目的探讨脑心通胶囊(NXT)对乳鼠缺糖缺氧损伤脑微血管内皮细胞(rBMECs)的体外保护作用及其机制。方法原代培养rBMECs,进行兔抗鼠VⅢ因子鉴定,MTT筛选出NXT肠吸收液体外保护rBMECs的质量浓度范围,优选出3个质量浓度进行实验。实验设对照组、模型组、尼莫地平(200μg/mL)组、不同质量浓度(62.50、125.00、250.00 mg/L)NXT肠吸收液组、NXT肠吸收液(250.00 mg/L)和LY294002(20μmol/L,PI3K/Akt通路抑制剂)共作用组。倒置显微镜下观察rBMECs形态,按照ELISA试剂盒方法检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平,Hoechst33342染色荧光显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测各组rBMECs的早期凋亡率,Western blotting法检测PI3K/Akt信号通路关键蛋白的表达情况。结果与模型组相比,NXT不同质量浓度给药组均能显著改善rBMECs的形态,降低细胞上清液中LDH、MMP-9的量,显著降低rBMECs的凋亡数和早期凋亡率,可显著抑制PI3K/Akt通路中p-Akt、Bcl-2的表达上调及Bax的表达下降,抑制Caspase-3活性。PI3K/Akt信号通路的特异性抑制剂LY294002的加入,阻断了该通路信号的传导,显著降低了NXT的保护作用。结论 NXT对缺糖缺氧致rBMECs损伤具有抗凋亡保护作用,其作用机制与PI3K/Akt信号通路有关。

关键词：脑心通胶囊脑微血管内皮细胞缺糖缺氧损伤凋亡 PI3K/Akt

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川芎、黄芪有效成分配伍对缺氧脑微血管内皮细胞的影响

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中草药 2015年第9期46卷 1326-1332页

作者：杨珍周惠芬周鹏杨洁红万海同管敏国张宇燕浙江中医药大学浙江杭州310053

目的观察黄芪、川芎中的有效成分黄芪甲苷、川芎嗪、阿魏酸、毛蕊异黄酮、藁本内酯的正交组合配伍对SD乳鼠脑微血管内皮细胞（rBMVECs）缺氧损伤的保护作用,并找出较优组合。方法 rBMVECs原代传代培养,并建立缺氧模型,4h后观察细胞形态,... 详细信息

目的观察黄芪、川芎中的有效成分黄芪甲苷、川芎嗪、阿魏酸、毛蕊异黄酮、藁本内酯的正交组合配伍对SD乳鼠脑微血管内皮细胞（rBMVECs）缺氧损伤的保护作用,并找出较优组合。方法 rBMVECs原代传代培养,并建立缺氧模型,4h后观察细胞形态,MTT法测定各成分的最大耐药质量浓度,以L_（18）（3~5）正交表设计安排成分配伍给药,采用黄嘌呤氧化酶显色法检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期,RT-PCR法测定caspase-3与caspase-8基因在细胞中的表达。采用极差分析法分析正交试验结果。结果药物正交配伍组合可显著改善缺氧rBMVECs的形态,有效增强SOD活性,有效抑制缺氧诱导的rBMVECs发生Gl/S期阻滞,明显减少了细胞的凋亡,减弱细胞中caspase-3和caspase-8基因表达。正交试验结果分析显示其较优组合为藁本内酯5μg/mL、川芎嗪10μg/mL、阿魏酸20μg/mL、毛蕊异黄酮10μg/mL、黄芪甲苷10μg/mL。结论黄芪、川芎有效成分组合配伍对内皮细胞缺氧损伤有明显的保护作用。

关键词：黄芪川芎脑微血管内皮细胞缺氧超氧化物歧化酶细胞凋亡

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改良原代大鼠脑微血管内皮细胞的培养方法及鉴定

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解剖学报 2020年第1期51卷 135-138页

作者：唐元瑜马华根刘昭德福建中医药大学中医学院中医基础理论教研室福建中医药大学中医学院福建中医药大学中西医结合学院福州350122

目的改良原代大鼠脑微血管内皮细胞分离培养方法。方法选取4~6周龄SD大鼠6只,经开颅取脑、漂洗剪碎、过筛、牛血清白蛋白密度梯度离心、Ⅱ型胶原酶及胶原酶-分散酶两次连续酶消化后进行原代培养。通过细胞形态学观察和第Ⅷ因子免疫细胞... 详细信息

目的改良原代大鼠脑微血管内皮细胞分离培养方法。方法选取4~6周龄SD大鼠6只,经开颅取脑、漂洗剪碎、过筛、牛血清白蛋白密度梯度离心、Ⅱ型胶原酶及胶原酶-分散酶两次连续酶消化后进行原代培养。通过细胞形态学观察和第Ⅷ因子免疫细胞化学染色鉴定所培养的目的细胞。结果体外培养12~24 h后,细胞以贴壁的脑微血管段为中心,放射状向外周移行,并逐渐扩大成团簇状;细胞融合后则呈典型的单层、扁平、"铺路石样"镶嵌式排列。第Ⅷ因子免疫细胞化学染色检测,胞质呈棕红色,表达为阳性,阳性细胞率达99%以上。结论改良方法能够成功高效分离培养出原代大鼠脑微血管内皮细胞。

关键词：脑微血管内皮细胞第Ⅷ因子原代培养连续酶消化法大鼠

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无血清培养对小鼠脑微血管内皮细胞凋亡的影响及其机制

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复旦学报（医学版） 2005年第3期32卷 263-265,283,F002页

作者：史连国张国平金惠铭复旦大学上海医学院生理与病理生理学系上海200032

目的　研究无血清培养诱导小鼠脑微血管内皮细胞凋亡及其可能机制。方法　培养用小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd .3。用流式细胞术检测凋亡细胞的百分比;用免疫细胞化学法检测Bax及Bcl- 2蛋白表达;用WesternBlot检测caspase 3蛋白表达。结... 详细信息

目的　研究无血清培养诱导小鼠脑微血管内皮细胞凋亡及其可能机制。方法　培养用小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd .3。用流式细胞术检测凋亡细胞的百分比;用免疫细胞化学法检测Bax及Bcl- 2蛋白表达;用WesternBlot检测caspase 3蛋白表达。结果　bEnd .3细胞经无血清饥饿体外培养12 ,2 4 ,36h后细胞凋亡率明显增加,分别为(13.79±0 .99) % ,(17.80±1.39) % ,(2 0 .5 1±0 .5 5 ) % ,与各自正常血清培养的对照组凋亡率相比,P <0 .0 1。Bax表达明显增强,Bcl -2表达明显减弱,caspase 3明显增强。结论　无血清饥饿培养可诱导bEnd .3细胞发生凋亡,其发生机制与Bax/Bcl 2的变化及caspase 3的激活有关。

关键词：无血清培养脑微血管内皮细胞细胞凋亡

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差异过筛法体外分离培养原代大鼠脑微血管内皮细胞及其鉴定

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中国病理生理杂志 2023年第9期39卷 1724-1728页

作者：刘海琴张帆李柏霖唐元瑜海军军医大学第二附属医院上海长征医院呼吸与危重症医学科上海200003 福建中医药大学针灸学院福建福州350122 福建中医药大学中医学院福建福州350122

目的:采用差异过筛法培养纯度高、活性好的原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)。方法:取4周龄SD大鼠脑皮质,经剪碎、细胞筛网过滤、收集网下滤过物、Ⅱ型胶原酶消化后,置于CO_(2)培养箱中进行原代培养。通过细胞形态学观察、血管性血友病... 详细信息

目的:采用差异过筛法培养纯度高、活性好的原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)。方法:取4周龄SD大鼠脑皮质,经剪碎、细胞筛网过滤、收集网下滤过物、Ⅱ型胶原酶消化后,置于CO_(2)培养箱中进行原代培养。通过细胞形态学观察、血管性血友病因子(vWF)免疫细胞化学染色鉴定所培养的目的细胞。结果:培养24 h后血管段周围爬出短梭形的细胞;48 h后岛屿状的细胞集落形成;72 h后细胞铺满瓶底,呈典型的单层、铺路石样、镶嵌式贴壁生长;免疫细胞化学染色显示,所培养细胞的细胞质呈现棕红色,vWF表达为阳性。结论:差异过筛法能够成功分离培养出原代大鼠BMECs。

关键词：脑微血管内皮细胞原代培养差异过筛法血管性血友病因子大鼠

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