检索结果-内蒙古大学图书馆

环境科学学报 2019年第7期39卷 2125-2133页

作者：姜风英程荣周晓峰章晨璐王伍林虹吕建新温州医科大学检验医学院生命科学学院浙江省模式生物技术与应用重点实验室温州325000 温州医科大学公共卫生与管理学院温州325000

为构建一种能够高效、同时吸附水中多种重金属离子的大肠杆菌,利用融合蛋白表达技术,首先将大肠杆菌前脂蛋白信号肽Lpp、膜蛋白OmpA的N端部分氨基酸和铁硫簇组装蛋白IscA的编码基因序列进行融合,构建pET-Lpp-OmpA-IscA表达载体,将此载... 详细信息

为构建一种能够高效、同时吸附水中多种重金属离子的大肠杆菌,利用融合蛋白表达技术,首先将大肠杆菌前脂蛋白信号肽Lpp、膜蛋白OmpA的N端部分氨基酸和铁硫簇组装蛋白IscA的编码基因序列进行融合,构建pET-Lpp-OmpA-IscA表达载体,将此载体导入大肠杆菌BL21菌株.在IPTG诱导下,IscA蛋白可表达于细胞膜表面.然后对IscA膜表面表达菌株对重金属的吸附能力进行评估,包括测定最大吸附容量、绘制吸附浓度依赖曲线和时间依赖曲线,以及对菌株清除工业污水中重金属的性能进行初步探索.研究结果表明,与本底对照菌株相比,IscA蛋白在细胞膜表面表达能够使菌株对水中的Cu^2+、Ni^2+、Cd^2+、Pb^2+、As^3+、Co^2+、Hg^2+这7种重金属的吸附能力提高2~5倍不等,并且在pH为6~8范围内保持其吸附能力基本不变.此菌株能够在30 min内将各种重金属溶液中超标5倍的金属含量降低至最大允许排放浓度以下,并且对吸附的重金属具有不同程度的回收能力和菌株再生能力.此外,该菌株能够同时吸附工业污水中的多种重金属,有效降低各种重金属含量.因此,利用膜表面表达技术对大肠杆菌进行改造,成功提高了大肠杆菌对多种重金属的吸附能力,为利用微生物治理环境重金属污染提供了良好的应用前景.

关键词： IscA 大肠杆菌生物吸附重金属膜表面表达

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N-甲基-D-门冬氨酸受体与使君子酸受体在培养海马神经元树突上的膜表面表达与共定位

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解剖学报 2004年第1期35卷 30-34页

作者：邱爽王敏珍傅展燕黄曼罗建红浙江大学医学院神经生物教研室浙江大学医学院邵逸夫医院妇产科杭州310006

目的　研究含NR2B亚单位的N 甲基 D 门冬氨酸 (NMDA)受体 (NR2B NMDAR)与含GluR1亚单位的使君子酸 (AMPA)受体 (GluR1 AMPAR)在发育不同阶段的培养海马神经元树突上的膜表面表达与共定位。　方法　以FLAG NR2B和GFP GluR1表达载体共转... 详细信息

目的　研究含NR2B亚单位的N 甲基 D 门冬氨酸 (NMDA)受体 (NR2B NMDAR)与含GluR1亚单位的使君子酸 (AMPA)受体 (GluR1 AMPAR)在发育不同阶段的培养海马神经元树突上的膜表面表达与共定位。　方法　以FLAG NR2B和GFP GluR1表达载体共转染原代培养第 5d(DIV5 )的大鼠海马神经元 ,分别用相应特异性抗体和荧光标记二抗作活细胞染色 ,显示膜表面表达的受体簇。　结果　对DIV7和DIV14的培养海马神经元树突表面受体簇计数 (个数 10 0 μm) ,GluR1 AMPAR受体簇分别为 5 9 2± 5 6和 74 8± 3 1(P <0 0 5 ) ;NR2B NMDAR为 38 7±3 5和 80 8± 4 9(P <0 0 1) ;两者共定位为 16 3± 5 2和 4 0 1± 6 0 (P <0 0 1)。DIV14海马神经元 4 0 %的共定位受体簇分布在树突棘上。　结论　随着海马神经元的发育 ,树突膜表面NR2B NMDAR、GluR1 AMPAR及两者共定位受体簇密度均增加 ,提示 ,形成更多具有活性的兴奋性突触 ,且主要位于树突棘上。

关键词： N-甲基-D-门冬氨酸受体使君子酸受体培养海马神经元树突上膜表面表达共定位

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C末端缺失NR2B亚单位表达载体的构建及其在NMDA受体装配研究中的应用

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浙江大学学报（医学版） 2003年第6期32卷 480-485页

作者：杨巍罗建红高英黄曼郑婵颖浙江大学医学院神经生物学教研室浙江杭州310006

目的 :研究 NMDA受体 NR2 B亚单位细胞内 C末端 ,在 NR1- 1a/ NR2 B亚型 NMDA受体装配和表面表达中的作用。方法 :构建 C末端不同缺失和 GFP标记的 NR2 B亚单位表达载体 ,单独转染或与 NR1亚单位共转染到 HEK2 93细胞 ,用抗 GFP多克隆... 详细信息

目的 :研究 NMDA受体 NR2 B亚单位细胞内 C末端 ,在 NR1- 1a/ NR2 B亚型 NMDA受体装配和表面表达中的作用。方法 :构建 C末端不同缺失和 GFP标记的 NR2 B亚单位表达载体 ,单独转染或与 NR1亚单位共转染到 HEK2 93细胞 ,用抗 GFP多克隆抗体和 Cy3荧光素交联的二抗作活细胞表面受体染色。结果 :成功构建了 8个 C末端不同缺失的 GFP- NR2 B表达质粒 (GFP- NR2 BΔ1～Δ 8)。将 GFP- NR1- 1a,GFP- NR2 B及 GFP- NR2 BΔ 1～Δ 8分别单独转染 HEK2 93细胞 ,不能获得达细胞膜表面的表达。而将这些质粒分别与 NR1- 1a共转染 2 93细胞 ,发现 GFP - NR2 B及 C末端部分缺失的 GFP- NR2 BΔ1～Δ6 ,均能与 NR1- 1a一起表达于细胞膜表面 ,而仅留有 PDZ结合基序的 GFP- NR2 BΔ7和 C末端全长缺失的 GFP- NR2 BΔ8,则不能与 NR1- 1a一起表达于细胞膜表面。结论 :NR1- 1a与 NR2 B的共表达和装配 ,是形成 NR1- 1a/ NR2 B亚型 NMDA受体并表达于细胞表面的必要条件。NR2 B与 NR1- 1a装配时 ,NR2 B对 NR1- 1a C1盒中内质网滞留基序的遮蔽和阻滞作用 ,并不依赖于 NR2 B C末端某一特定的区域 ,相反可能仅要求有一定长度的 NR2 B C末端。

关键词：受体 N—甲基—D—天冬氨酸/分析 NR2B亚单位膜表面表达内质网滞留

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膜表达热休克蛋白70真核表达载体的构建及其对肿瘤细胞的转染

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浙江医学 2004年第10期26卷 735-738页

作者：黄常新余海杨关根王青青沈芬平李达杭州市第三人民医院 310009 浙江大学医学院

目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞。方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因。选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆... 详细信息

目的构建普遍适合性的膜表达热休克蛋白70(HSP70)的真核表达载体,修饰并建立HSP70表达并结合在细胞膜表面的肿瘤细胞。方法RT-PCR法从人胚肾中获取HSP70的cDNA,扩增成带酶切位点的目的基因。选择载体pDisplay,将目的基因插入载体多克隆酶位点中。DNA测序证实后,以脂质体转染的方法,将载体转染到黑色素瘤细胞。用G418抗性筛选获得阳性克隆。结果酶切电泳和DNA测序证实载体构建正确;目的基因的上游带信号肽序列,下游带跨膜序列。RT-PCR产物电泳、WesternBlotting、激光共聚焦显微镜和流式细胞术证实大量HSP70表达并结合在转染的黑色素瘤细胞膜表面。结论成功地构建了膜表达HSP70的真核表达载体;转染到黑色素瘤细胞后,细胞膜表面表达丰富的HSP70。转染细胞可以进一步制备新型瘤苗。

关键词： HSP70表达转染真核表达载体热休克蛋白70 黑色素瘤细胞肿瘤细胞 DNA测序目的基因酶切位点膜表面表达

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