检索结果-内蒙古大学图书馆

花生学报 2025年第1期54卷 105-116页

作者：李倬林岳玉兰孙畅吕呈蔚王政李铁柱黄威吉林省农业科学院农产品加工研究所吉林长春130033

花生营养丰富,口感香溢,但花生过敏发病率极高,是一种诱发致命过敏症状的过敏性食物。花生过敏严重威胁公众健康和生活,现已成为亟待面对和解决的重大公共食品安全问题。目前,花生过敏原的筛查、检测和致敏性的评估在花生行业及食品领... 详细信息

花生营养丰富,口感香溢,但花生过敏发病率极高,是一种诱发致命过敏症状的过敏性食物。花生过敏严重威胁公众健康和生活,现已成为亟待面对和解决的重大公共食品安全问题。目前,花生过敏原的筛查、检测和致敏性的评估在花生行业及食品领域已然成为研究热点。本文运用文献分析法,结合食品、化学、生物等多种学科研究方法及新兴技术综述了花生过敏原致敏性评价方法,如生物信息学测序、血清学检测、皮肤点刺筛查、消化稳定性分析、动物模型建立、细胞模型构造等。由于在实际应用中每种方法都有一定的优点和局限,因此采用单一方法对花生过敏原进行致敏性评价所得结论相对片面,故而提出参照过敏原判定树以及证据权重策略,采用多种方法结合,互补互验互证,旨在初步建立一种完善的致敏性评价模型,为今后花生致敏性综合评价体系的全面深化提供初步探索,也为其他交叉过敏原的综合评价提供参考,更为花生食品安全提供保障。

关键词：花生过敏筛查致敏性评价过敏原判定树证据权重

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BN大鼠与豚鼠用于药物致敏性评价的比较

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中国中药杂志 2009年第4期34卷 472-475页

作者：刘婷梁爱华易艳李春英赵雍郝然曹春雨中国中医科学院中药研究所北京100700

目的:比较豚鼠和BN大鼠过敏试验,以寻找用于致敏原检测的更为敏感的动物模型。方法:将白色豚鼠和BN大鼠(Brown Norwayrat)分别随机分为2组:1正常对照组,2牛血清白蛋白组。牛血清白蛋白组于试验的1,3,5d分别腹腔注射0.6%牛血清白蛋白以致... 详细信息

目的:比较豚鼠和BN大鼠过敏试验,以寻找用于致敏原检测的更为敏感的动物模型。方法:将白色豚鼠和BN大鼠(Brown Norwayrat)分别随机分为2组:1正常对照组,2牛血清白蛋白组。牛血清白蛋白组于试验的1,3,5d分别腹腔注射0.6%牛血清白蛋白以致敏,1mL/次,共3次。对照组腹腔注射给予相同体积的生理盐水注射液。于末次致敏后第7,14天,牛血清白蛋白组分别静脉注射2.4%牛血清白蛋白1mL/次以激发过敏;而对照组静脉注射相同体积生理盐水。分别于第1次及第2次静脉注射后,观察每只动物过敏反应情况,根据过敏反应症状评分,评价过敏反应强弱;并从眼眶静脉丛取血,分离血清,采用ELISA竞争试验法检测IgE含量;此外,采用激发后动物的血清,用SD大鼠进行被动皮肤过敏试验,计算蓝斑面积,测定并计算伊文思蓝染料的渗出量。结果:豚鼠第1次及第2次激发后,牛血清白蛋白组的过敏症状评分与对照组比较无明显差异;BN大鼠第1次及第2次激发后,牛血清白蛋白组出现明显的过敏反应,经非参数秩和检测与对照组比较均有显著性差异;被动皮肤过敏试验显示,BN大鼠牛血清白蛋白组血清在SD大鼠上可造成明显的蓝斑和伊文思蓝渗出量明显增加。而豚鼠牛血清白蛋白组的蓝斑不明显,伊文思蓝渗出量与对照组比较无明显差异。同种动物比较,牛血清白蛋白组和对照组血清IgE含量无明显差异。结论:BN在主动全身过敏反应和被动皮肤过敏反应中均显示牛血清白蛋白呈现阳性反应,而豚鼠反应不明显,因此BN大鼠用于致敏原检测比豚鼠更为敏感。同时,BN大鼠在技术操作上比豚鼠更方便和容易。

关键词：过敏试验致敏性评价动物模型

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转基因食品致敏性评价细胞模型研究进展

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卫生研究 2012年第6期41卷 1044-1049页

作者：陈晨贾旭东中国疾病预防控制中心营养与食品安全所北京100021

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性,尤其是引起食物过敏的可能性成为广大民众关心的主要问题之一。目前,国际上转基因作物致敏性评价的研究和开发的热点之一是使用细胞模型进行致敏性评价,本文简单介绍了转基因食品致敏性评... 详细信息

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性,尤其是引起食物过敏的可能性成为广大民众关心的主要问题之一。目前,国际上转基因作物致敏性评价的研究和开发的热点之一是使用细胞模型进行致敏性评价,本文简单介绍了转基因食品致敏性评价的现状,重点对细胞模型方面的研究进展进行了综述。

关键词：食品基因修饰致敏性评价细胞模型

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柑橘致敏性评价方法建立及其引起人体不良反应机理研究

柑橘致敏性评价方法建立及其引起人体不良反应机理研究

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作者：吴金龙华中农业大学

学位级别：博士

柑橘因其独特风味深受人们喜爱,是世界上最重要的水果之一。柑橘富含各种有益健康的功能性成分,消费者在享受这些功效的同时,也有部分人在食用柑橘时出现食物不良反应(上火、过敏等),症状表现为口舌生疮、喉咙红肿等,这种不适反应的感... 详细信息

柑橘因其独特风味深受人们喜爱,是世界上最重要的水果之一。柑橘富含各种有益健康的功能性成分,消费者在享受这些功效的同时,也有部分人在食用柑橘时出现食物不良反应(上火、过敏等),症状表现为口舌生疮、喉咙红肿等,这种不适反应的感官体验也逐渐成为人们评价果实品质的指标之一。然而,由于相关的研究基础弱、研究条件要求高、需要多学科交叉等原因,柑橘摄入导致人体不良反应的研究进展缓慢。随着果树学、分子生物学、分析化学和医学等学科快速发展,交叉融合,温州蜜柑摄入导致人体“上火”这个消费者关注的科学问题重新提到研究日程上。本研究建立了低致敏性柑橘种质资源筛选方法,筛选低致敏性柑橘品种,可为过敏体质的特殊人群提供可食用的柑橘;然后评价了不同柑橘种类品种致敏性,探明过敏原蛋白积累规律,从柑橘过敏的角度解释温州蜜柑摄入诱导人体不良反应的原因;最后通过已建立的流行病学研究平台,结合柑橘过敏原研究,解析温州蜜柑摄入诱导人体不良反应症状的发生机理。主要研究结果如下:1.果实不同组织、成熟期和遗传因素对柑橘过敏基因表达的影响知之甚少。本研究发现甜橙(Citrus sinenesis)中过敏原基因Cit s 1.01、Cit s 2.01和Cit s 3.01分别有15、2和6个序列高度相似的同源基因,克隆了这3个过敏原基因,并设计了特异性Taqman探针,建立多重荧光定量PCR(Multiplex real-time PCR assay)的方法,能对甜橙过敏原基因进行绝对定量分析,且发现在柑橘成熟过程中过敏原基因Cit s1.01、Cit s 2.01和Cit s 3.01的表达模式不同。此外,10个柑橘品种(红橘、本地早、温州蜜柑国庆一号、纽荷尔脐橙、华盛顿脐橙、红肉脐橙、路德红夏橙、鸡尾葡萄柚、星路比葡萄柚)的果皮和果肉中Cit s 3.01基因表达量均比Cit s 1.01和Cit s 2.01基因高。此外,以高班柚(Citrus maxima)为代表的柚类过敏原基因表达水平较低。2.柑橘含有的过敏原,如Cit s 1.01、Cit s 2.01、Cit s 3.01,都可能导致过敏反应。本研究建立了这三个柑橘过敏原蛋白原核表达体系,能快速、大量地获得重组的三个柑橘过敏原,并利用表达纯化的过敏原蛋白作为抗原制备了特异性、灵敏的兔多克隆抗体Anti-Cit s 1.01、Anti-Cit s 2.01和Anti-Cit s 3.01。并且,本研究使用免疫印迹的方法对21个柑橘品种(红橘、本地早、鄂柑一号、克里曼丁橘、温州蜜柑国庆一号、纽荷尔脐橙、华盛顿脐橙、红肉脐橙、路德红夏橙、高班柚、晚白柚、沙田柚、琯溪蜜柚、鸡尾葡萄柚、星路比葡萄柚、尤力克柠檬、墨西哥莱蒙、融安金弹、清见、不知火、秋晖)的果皮、果肉中三个柑橘过敏原含量进行检测,通过印迹强弱来评价柑橘果实的致敏性,证明了柚(高班柚、晚白柚、沙田柚、琯溪蜜柚)中过敏原Cit s 1.01、Cit s 2.01、Cit s 3.01含量相对最低。此外,利用甜橙过敏人群血清进行免疫印迹分析进一步验证了沙田柚和琯溪蜜柚是8个柑橘品种(克里曼丁橘、国庆一号温州蜜柑、红肉脐橙、沙田柚、琯溪蜜柚、鸡尾葡萄柚、金柑和尤力克柠檬)中致敏性最低的。因此,柚类可作为低致敏柑橘品种供给过敏体质的特殊人群食用。3.连续3年重复进行食用温州蜜柑志愿者实验,发现过量食用温州蜜柑能引起食物不良反应,其症状为喉咙痒或喉咙痛、牙龈肿胀和口腔溃疡,这种现象在传统中医上称为“上火”。通过利用已建立的流行病学研究平台(即双盲安慰剂对照食物激发试验),发现食物摄入3天后,温州蜜柑组中72.7%的参与者出现SIS症状,但安慰剂组(甜橙组)中只有30%的参与者出现SIS症状。且通过临床症状观察统计分析,温州蜜柑诱导综合症(SIS)是一种免疫介导的食物不良反应,其症状特征在于呼吸道,胃肠道和口腔的不适,同时血清中炎症因子TNF-α和血红蛋白含量,以及嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和血小板的数量呈现显著性变化。因此,过量摄入新鲜的温州蜜柑可诱发炎症反应。利用血清代谢组学研究发现SIS症状发生的分子机制可能是通过影响花生四烯酸代谢途径,进而导致炎症。脂质代谢物PC(20:5(5Z,8Z,11Z,14Z,17Z)/16:1(9Z))也被鉴定为SIS症状的潜在生物标志物。此外,比较温州蜜柑(Citrus unshiu)和甜橙中三种过敏原含量差异,我们发现柑橘过敏原不是引起SIS的关键原因。综上所述,本研究通过建立低致敏性柑橘种质资源筛选方法,鉴定了柚类是潜在的低致敏性柑橘品种;同时,发现柑橘过敏原不是温州蜜柑摄入诱导人体“上火”的原因;此外,通过对参与双盲安慰剂对照食物激发试验的人群血样进行代谢组学分析及数据挖掘,发现温州蜜柑是通过花生四烯酸代谢途径诱导人体的轻度

关键词：致敏性评价温州蜜柑诱导综合症上火柑橘过敏原多重荧光定量PCR 重组抗原代谢组学

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转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型研究进展

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中国食品卫生杂志 2009年第5期21卷 473-477页

作者：孙拿拿彭于发贾旭东李宁中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室北京100193 中国疾病预防控制中心营养与食品安全所北京100050

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为广大民众关心的问题,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型评价转基因作物的致敏性,是国际上研究和开发的热点领域,本文就转基因食品致敏性评价啮... 详细信息

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为广大民众关心的问题,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型评价转基因作物的致敏性,是国际上研究和开发的热点领域,本文就转基因食品致敏性评价啮齿类动物模型的研究进展进行了综述。

关键词：食品基因修饰致敏性评价啮齿类动物模型

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加工方式对花生致敏性的影响及其致敏性评价研究进展

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食品科学 2015年第23期36卷 283-287页

作者：饶欢田阳陶莎薛文通中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

花生蛋白是一种理想的食品加工原料,同时也是一种致死率较高的食物过敏原,严重危害人类健康。本文主要综述食品加工方式对花生过敏蛋白致敏性的影响,以及体内、体外致敏性评价方法,为低致敏或无致敏花生制品的开发提供参考和指导。

关键词：加工花生过敏源致敏性评价

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啮齿类动物模型在食品致敏性评价中作用的研究进展

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现代预防医学 2017年第9期44卷 1681-1684页

作者：胥可凌晓斐张振玲济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院山东省医学科学院山东省职业卫生与职业病防治研究院

食品安全问题受到世界各国的关注,随着新食物产品的不断开发研究,关于是否会增加人体致敏风险等问题成为众专家学者竞相争论的焦点,啮齿类动物模型以其特有的优势在食物致敏性评价中占有重要位置,本文例举了BN大鼠、Balb/c小鼠、C3H/He... 详细信息

食品安全问题受到世界各国的关注,随着新食物产品的不断开发研究,关于是否会增加人体致敏风险等问题成为众专家学者竞相争论的焦点,啮齿类动物模型以其特有的优势在食物致敏性评价中占有重要位置,本文例举了BN大鼠、Balb/c小鼠、C3H/HeJ小鼠此三类最具代表性的啮齿类动物模型,并对致敏过程中常见致敏原及其影响因素、致敏途径和体内检测指标作一综述,为食品致敏性评价提供参考。

关键词：食物过敏动物模型致敏性评价

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BALB/c小鼠致敏模型建立及Komagataella phaffii表达猪肌红蛋白的潜在致敏性评价

BALB/c小鼠致敏模型建立及Komagataella phaffii表达猪肌红蛋白的...

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作者：徐佳媛江南大学

学位级别：硕士

近年来,食物过敏在全球的发病率日益增高,已成为威胁人类健康的公共性食品安全问题之一,对食物过敏患者造成了沉重的生理和心理负担。另一方面,资源短缺、环境污染等可持续发展问题对清洁、高产能的新型蛋白资源提出需求,比如昆虫蛋白... 详细信息

近年来,食物过敏在全球的发病率日益增高,已成为威胁人类健康的公共性食品安全问题之一,对食物过敏患者造成了沉重的生理和心理负担。另一方面,资源短缺、环境污染等可持续发展问题对清洁、高产能的新型蛋白资源提出需求,比如昆虫蛋白、微生物来源蛋白、基因工程表达蛋白等新型蛋白资源或生产技术。然而这些蛋白存在致敏性风险,会对食物致敏风险管理带来新的挑战,致敏性评价将成为保证未来食品安全的基础。目前用于评价食物致敏性的金标准方法为以人为研究对象的双盲对照膳食挑战试验,但执行难度大、风险高。动物模型虽已广泛用于食物致敏性评价,但现有的评价指标体系无法反映食物过敏发生的机理变化,难以预测受试物的潜在致敏能力大小。改善致敏风险评价模型,完善致敏性评价指标体系,对于合理控制未来食品致敏是必要的。本论文以卵清白蛋白(OVA)作为食物过敏阳性物,成功构建了食物过敏BALB/c小鼠模型,引入肠道菌群与血清代谢组联合免疫生化指标分析以完善致敏性评价体系,并将所建立的致敏性评价模型应用于基因工程Komagataella phaffii所表达猪肌红蛋白致敏性的评价。基于评价结果,结合体外评价方法综合分析表达蛋白发酵液中的致敏性组分,为其生产纯化工艺的优化及安全风险的控制提供了方向,主要研究内容及结果如下:(1)通过多次灌胃及腹腔注射激发的方式成功构建食物过敏BALB/c小鼠模型。以OVA为过敏阳性物,通过灌胃给予5次OVA,每次间隔7天,末次灌胃后7天腹腔注射OVA处理BALB/c小鼠。小鼠在腹腔注射OVA后60 min内出现搔鼻、竖毛、活动减少等过敏症状,血清中的OVA特异性免疫球蛋白G(Ig G)、免疫球蛋白E(Ig E)、组胺(HIS)、单核细胞趋化蛋白-1(m MCP-1)各项免疫相关生化指标均显著上升。通过分离小鼠活性脾淋巴细胞,免疫荧光染色、流式细胞仪分选及体外过敏原再刺激验证,经OVA处理的小鼠脾淋巴细胞中辅助型T细胞1/辅助型T细胞2(Th1/Th2)平衡向Th2型分化,发生了由OVA特异性引起的Th2型免疫反应,表明OVA过敏小鼠模型构建成功。(2)经过血清代谢组学与肠道菌群检测与分析及多组学联合免疫生化指标数据挖掘,发现在BALB/c小鼠中,OVA过敏的发生与肠道菌群及血清代谢组的变化存在紧密联系。通过分析OVA处理组小鼠肠道菌群的α-多样性、群落组成特征及与对照组小鼠之间的β-多样性,发现OVA过敏小鼠肠道菌群物种丰度明显下降,群落组成特征改变,共发现12种显著差异的菌群(科水平)。OVA过敏小鼠血清代谢组发生显著改变,共发现18种差异代谢物(p<0.05,投影值的变量重要性(VIP)<1,变化倍率(FC)>1.5)。肠道差异菌群、差异代谢物及免疫生化指标之间的相关性分析,结合肠道功能预测及血清代谢物通路富集分析,发现肠道中的Muribaculaceae、Erysipelotrichaceae、理研菌科、乳杆菌、梭菌纲等物种,血清中的吲哚代谢衍生物及氨酰-t RNA生物合成通路丰度与食物过敏的发生存在关联。(3)将所建立的致敏性评价模型应用于Komagataella phaffii所表达猪肌红蛋白的致敏性评价,发现酵母表达产生的猪肌红蛋白提取液具有致敏性,致敏性可能由杂质组分产生。BALB/c小鼠分别多次灌胃给予及单次腹腔注射60%纯度与88%纯度的发酵猪肌红蛋白后,均出现搔鼻、活动减少或竖毛等过敏症状,血清及T细胞分析等免疫指标显著上升,但60%纯度发酵猪肌红蛋白处理的小鼠多项免疫生化指标改变程度高于88%纯度发酵猪肌红蛋白。60%纯度组肠道菌群发生了与OVA过敏小鼠相似的由过敏引起的变化,包括多种差异菌群丰度、肠道氨酰t RNA合成通路丰度改变,而88%纯度组仅表现出相似改变的趋势,改变程度低于60%纯度组。与猪肌红蛋白结构功能相似的天然猪血红蛋白纯品未表现出致敏性。(4)过敏原序列相似性检索与体外模拟消化实验分析显示猪肌红蛋白本身不具有致敏性,造成发酵蛋白提取液具有致敏性的组分为杂质物质。将猪肌红蛋白序列与Allergen Online(AOL)及美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库进行相似性检索,未发现猪肌红蛋白与现有过敏原或有毒蛋白存在交叉反应的可能性。60%纯度和88%纯度的发酵猪肌红蛋白提取液中的主要蛋白条带在体外消化后被降解,说明猪肌红蛋白不具有抗消化特性。结合小鼠模型评价结果,推断酵母表达产生的猪肌红蛋白本身不具有致敏性,产生致敏性的为杂质组分,为微生物表达猪肌红蛋白生产纯化工艺的优化及安全风险控制提供了方向。

关键词：食物过敏致敏性评价肠道菌群代谢组学微生物发酵猪肌红蛋白

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高压下酶法消减三种虾制品致敏性评价

高压下酶法消减三种虾制品致敏性评价

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作者：王星璇天津商业大学

学位级别：硕士

以南美白对虾虾仁、虾肉和虾蛋白为研究对象,采用高压结合酶法处理,通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测其致敏性变化,确定消减三种制品致敏性的条件。然后,采用豚鼠的全身性过敏反应及离体回肠平滑肌过敏性收缩实验评价处理后的三种制品... 详细信息

以南美白对虾虾仁、虾肉和虾蛋白为研究对象,采用高压结合酶法处理,通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测其致敏性变化,确定消减三种制品致敏性的条件。然后,采用豚鼠的全身性过敏反应及离体回肠平滑肌过敏性收缩实验评价处理后的三种制品致敏性的消减效果,并测定致敏动物血清中细胞因子的变化。从体内和分子水平评价致敏性的消减效果。采用高压结合胰蛋白酶处理虾仁、虾肉和虾蛋白,用ELISA检测处理后三种制品的致敏性变化,确定处理条件。结果显示,虾蛋白致敏性消减效果最佳的条件为:40℃、压力200MPa、保压时间40min、加酶量为2000U/g底物、底物浓度为3%。在此条件下虾蛋白致敏性消减率为97.043%(抗原与抗体反应OD492nm值为0.0233)。虾肉致敏性消减效果最佳的条件为:40℃、压力200MPa、保压时间40min、加酶量为3000U/g底物、底物浓度为150g/100m L。在此条件下虾肉致敏性消减率为94.035%(抗原与抗体反应OD492nm值为0.045)。虾仁致敏性消减效果最佳的条件为:40℃、压力200MPa、保压时间40min、加酶量为3000U/g底物、底物浓度为150g/100m L。在此条件下虾仁致敏性消减率为94.493%(抗原与抗体反应OD492nm值为0.041)。以PBS盐溶液作为阴性对照,未处理虾蛋白作为阳性对照,以豚鼠为受试动物,进行过敏性评价,观察豚鼠全身过敏反应,以及豚鼠离体回肠收缩力的变化。结果表明,高压结合酶法处理后的虾仁及其制品的致敏性显著降低（P<0.05）,但却没有完全消减。其中高压结合酶处理后的虾蛋白致敏性消减效果要优于虾仁及虾肉组。以PBS盐溶液作为阴性对照,未处理虾蛋白作为阳性对照,观察过敏豚鼠血清中细胞因子、免疫球蛋白以及组胺的变化。结果表明过敏豚鼠血清中IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-6、TNF-α、IgE、HIS的含量明显增加;且过敏豚鼠血清中IFN-γ与IL-4比值明显降低,过敏豚鼠的Th细胞的平衡向Th2偏移。高压结合酶处理后的虾仁及其制品的致敏性显著降低。因此,高压下酶法处理可以有效消减虾仁、虾肉和虾蛋白的致敏性;致敏豚鼠的血清中部分细胞因子发生显著变化,且释放更多组胺等炎症因子;过敏导致Th细胞的平衡向Th2偏移。

关键词：高压结合酶南美白对虾致敏性评价全身过敏反应 Schultz-Dale反应细胞因子 Th1/Th2细胞平衡

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转基因食品致敏性评价BALB/c小鼠动物模型和RBL-2H3细胞模型研究

转基因食品致敏性评价BALB/c小鼠动物模型和RBL-2H3细胞模型研究

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作者：陈晨中国疾病预防控制中心

学位级别：硕士

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为人民群众关心的问题,其中,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型和细胞模型评价转基因作物的致敏性是国际上研究和开发的热点领域,正确应用动物模... 详细信息

随着转基因作物的快速发展,转基因食品的安全性成为人民群众关心的问题,其中,转基因食品引起食物过敏的可能性是人们关注的焦点之一。目前,使用动物模型和细胞模型评价转基因作物的致敏性是国际上研究和开发的热点领域,正确应用动物模型和细胞模型,以及其他评价方法能够有效地对转基因食品致敏性进行评价。本研究应用已知致敏原卵清蛋白(OVA)建立腹腔注射致敏BALB/c小鼠模型,并使用不同致敏强度的蛋白(花生凝集素、p-乳球蛋白和马铃薯酸性磷酸酶)来验证该模型的可行性；此外,本研究还对RBL-2H3细胞作为转基因食品致敏细胞模型的可行性进行了初步探讨。 1. BALB/c小鼠致敏模型的建立目的：建立BALB/c、鼠致敏动物模型,探讨腹腔注射途径下BALB/c小鼠模型的最佳致敏剂量和致敏频次,研究最适致敏周期和动物性别。方法：(1)致敏剂量实验：64只BALB/c小鼠随机分成4组,每组16只,雌雄各半。分别腹腔注射给予0.25mL含0mg、0.05mg、0.5mg和5mg OVA的PBS溶液(浓度为Omg/mL、0.2mg/mL、2mg/mL和20mg/mL),注射时间为第0、3、6、9和12天,在第28天取血。(2)致敏频次实验：64只BALB/c小鼠随机分成4组,每组16只,雌雄各半。第1组在第0天和第7天腹腔注射给予0.25mLPBS;第2组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予0.25mLPBS;第3组在第0天和第7天腹腔注射给予0.25mL含0.05mgOVA的PBS溶液；第4组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予0.25mL含0.05mgOVA的PBS溶液。(3)致敏周期实验：64只BALB/c小鼠随机分成4组,每组16只,雌雄各半。第1组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予0.25mL PBS,在第14天取血；第2组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予0.25mL PBS,在第28天取血；第3组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予含0.05mg OVA的PBS溶液,在第14天取血；第4组在第0、3、6、9和12天腹腔注射给予含0.05mg OVA的PBS溶液,在第28天取血。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测OVA特异性IgE和IgG1含量。结果：(1)致敏剂量实验：与阴性对照组相比,雄鼠低、中剂量组OVA特异性IgE含量显著升高,低剂量组的OVA特异性IgE含量最高；雌鼠高、低剂量组的OVA特异性IgE含量显著升高,低剂量组的OVA特异性IgE含量最高。各剂量组OVA特异性IgGl含量显著高于对照组,并且低剂量组中OVA特异性IgG1含量最高。(2)致敏频次实验：与阴性对照组相比,BALB/c小鼠致敏两次(第0、7天)和致敏五次(第0、3、6、9、12天)的血清中OVA特异性IgE和IgG1含量显著升高(P<0.001)。而且致敏五次血清中OVA特异性IgE含量显著高于致敏两次。(3)致敏周期实验：与阴性对照组相比,BALB/c小鼠第14天和28天的血清中OVA特异性IgE和IgG1含量显著升高(P<0.001)。而且第28天实验组小鼠血清中抗体的含量显著高于第14天。(4)性别比较：与阴性对照组相比,雌雄小鼠血清中OVA特异性IgE和IgG1含量显著升高。雌性小鼠血清中OVA特异性IgE和IgG1含量与雄性小鼠相比没有显著性差异。结论：根据以上实验结果得出的比较理想的BALB/c小鼠致敏模型实验方案是：在第0、3、6、9、12天腹腔注射给予BALB/c小鼠0.05mg致敏蛋白,在第28天检测小鼠血清中蛋白特异性IgE和IgG1。当然,还需要使用不同致敏强度的蛋白进一步验证该BALB/c小鼠致敏动物模型,使其能够更好地应用于转基因食品致敏性评价体系中。 2. BALB/c小鼠致敏模型的验证目的：使用不同致敏强度的蛋白验证建立的BALB/c小鼠致敏模型,并对评价指标进行探讨,以期为转基因食品的致敏性评价提供更可靠的动物模型和评价指标。方法：210只BALB/c小鼠随机分为4个实验组—分别为OVA(阳性模式蛋白)组(30只)、PNA组(30只)、β-LG组(30只)和PAP组(30只),以及1个对照组(90只)。实验组在第0、3、6、9和12天分别腹腔注射给予0.2mg/mL的OVA、PNA、β-LG和PAP,0.25mL/只(即0.05mg/只)。对照组在第0、3、6、9和12天腹腔注射0.25mL溶剂PBS。第28天,每组10只小鼠内眦静脉取血,3000rpm离心15分钟分离血清。血清于-20℃冻存备用,用于致敏蛋白特异性抗体IgE、IgG1和IgG测定。取血后处死小鼠,无菌取脾,进行脾细胞培养和细胞因子分析。第30天,激发过敏反应,对比腹腔注射激发和灌胃激发两

关键词：转基因食品致敏性评价动物模型细胞模型

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