检索结果-内蒙古大学图书馆

中国神经精神疾病杂志 2022年第9期48卷 519-524页

作者：杨慧李桂河谢颖璇陈海珠李世举何瑾福建中医药大学附属第二人民医院检验科福州350003 福建医科大学附属第一医院神经内科福建中医药大学附属第二人民医院神经内科

目的设计特异性扩增引物,建立荧光短片段多重pcr技术检测SMN1基因拷贝数变异的方法,验证方法的检测性能并初步应用于基因拷贝数检测。方法选取107例来自神经系统疾病生物样本库的人外周血DNA样品(包括SMN1基因0拷贝30例、1拷贝47例、2拷... 详细信息

目的设计特异性扩增引物,建立荧光短片段多重pcr技术检测SMN1基因拷贝数变异的方法,验证方法的检测性能并初步应用于基因拷贝数检测。方法选取107例来自神经系统疾病生物样本库的人外周血DNA样品(包括SMN1基因0拷贝30例、1拷贝47例、2拷贝30例),设计5’端带有FAM荧光基团的SMN1基因7号外显子引物以及三对内参基因引物,利用荧光短片段多重pcr技术,使用基因分析仪片段分析多重pcr的产物,并与相应的MLPA检测结果进行比较。结果特异性扩增SMN1基因7号外显子及内参基因的引物可实现目的片段的扩增,通过计算可得到0拷贝、1拷贝、2拷贝的样本结果。对107例DNA样本的SMN1基因拷贝数荧光短片段多重pcr的检测结果进行分析,实验结果均与MLPA检测结果相一致。结论使用荧光标记多重pcr反应检测SMN1拷贝数可重复性好,精确度高,与MLPA得到的结果高度一致,具有便捷、准确、成本低的优势,可满足临床高准确性的检测要求,可用于SMA新生儿携带者的大规模筛查。

关键词：荧光短片段多重pcr 脊髓性肌萎缩症 SMN1基因拷贝数检测多重连接依赖性探针扩增技术运动神经元生存基因1 运动神经元生存基因2 神经遗传病携带者筛查

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脊髓性肌萎缩症SMN基因缺失与拷贝数定量分析及睾酮介导IGF-1R影响FVB小鼠寿命的机制研究

脊髓性肌萎缩症SMN基因缺失与拷贝数定量分析及睾酮介导IGF-1R影...

引用

作者：洪净梅福建医科大学

学位级别：硕士

背景与目的脊髓性肌萎缩症（Spinal muscular atrophy,SMA）是一种常见的常染色体隐性遗传性神经肌肉疾病,可导致儿童肌肉萎缩、呼吸衰竭甚至死亡。致病基因运动神经元生存1（survival motor neuron,SMN1）基因位于染色体5q13.2上,其同... 详细信息

背景与目的脊髓性肌萎缩症（Spinal muscular atrophy,SMA）是一种常见的常染色体隐性遗传性神经肌肉疾病,可导致儿童肌肉萎缩、呼吸衰竭甚至死亡。致病基因运动神经元生存1（survival motor neuron,SMN1）基因位于染色体5q13.2上,其同源的SMN2基因由于第7号外显子第6位碱基改变（C6T）而仅表达有限的全长功能性SMN蛋白。SMA临床表型根据发病年龄和运动功能障碍分为SMA IIV型,SMN2作为SMA患者唯一的SMN蛋白来源基因,与疾病的临床表型严重程度相关。目前,已有可用于治疗SMA的反义寡核苷酸（ASO）药物——诺西那生,该药能有效延长SMA患者寿命,而早期诊断、早期治疗对于改善SMA患者生存质量尤为重要。因此快速诊断SMA及有效、准确分析SMN2拷贝数对早期治疗SMA起重要作用。本研究分为四部分,第一、二部分分别开发可快速、敏感、特异识别SMN纯合缺失及特异性检测SMN1拷贝数的试剂盒,使SMA诊断更便捷,有利于在基层医院的推广与普及。第三部分,我们应用数字pcr（droplet digital pcr,dd pcr）与多重连接探针扩增（multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA）技术,分析检测SMN拷贝数的可重复性。第四部分,为探讨ASO药物治疗的SMA小鼠雌雄寿命差异的影响因素,我们对SMA小鼠及FVB小鼠（SMA小鼠构建模型）的寿命做了初步探讨。方法1.随机选取1997年1月至2019年12就诊于福建医科大学附属第一医院的95个SMA样本、89个正常样本,结合聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphism,pcr-RFLP）、环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术分析SMN1和SMN2纯合缺失情况。2.随机选取77个样本,采用荧光短片段多重pcr（multiple quantitative fluorescent polymerase chain reaction,QF-pcr）技术检测SMN1基因拷贝数,并用MLPA技术验证。3.应用dd pcr和MLPA技术分析21个SMA患者的SMN拷贝数,并比较两种方法的可重复性。4.以野生型C57BL/6小鼠为对照,研究野生型FVB雌雄鼠不同年龄阶段（新生期、青春期前、青春期、老年期）的不同组织（肌肉、大脑、心脏）中寿命相关基因IGF-1R表达水平差异。结果***检测SMN1纯合缺失的敏感性为100%（95%CI 95～100）,特异性为100%（95%CI 95～100）,阳性似然比为∞（95%CI NA∞）,准确性和精确度均为100%,Kappa值为1（95%CI 1～1）;检测SMN2纯合缺失的敏感性为100%（95%CI 52～100）,特异性为99.42%（95%CI 96～100）,阳性似然比为173（95%CI 25～1221）,准确性为99.44%,精确度为85.71%,Kappa值为0.95（95%CI 0.76～1）。***-pcr技术检测SMN1拷贝数的敏感性为95.74%（95%CI 84～99）,特异性为100%（95%CI 86～100）,阴性似然比为0.04（95%CI 0.01～0.17）,准确性为97.40%,精确度为100%,Kappa值为0.95（95%CI 0.87～1）。3.对于MLPA,74.1%（20/27）样本的SMN1拷贝数及29.6%（8/27）样本的SMN2拷贝数检测结果具有可重复性,而dd pcr分析结果均具有可重复性100%（27/27）。4.存在SMN1c.844 C>T突变的样本中,dd pcr与MLPA分析SMN1拷贝数结果不一致,而MLPA结果为正确的SMN1拷贝数。5.未经ASO-11-27治疗的重型SMA鼠平均寿命仅为11天,经ASO-11-27治疗的雌鼠平均寿命延长至256天、雄鼠平均寿命延长至147天,寿命延长存在统计学差异。去势SMA雄鼠睾酮明显降低,存在统计学差异,去势SMA雌鼠雌二醇未发生明显改变。SMA小鼠模型经寿命监测,雌鼠手术组和假手术组寿命无明显统计学差异,雄鼠手术组和假手术组比寿命明显延长,存在统计学差异。SMA小鼠构建模型:FVB雌鼠组平均寿命721天,雄鼠假手术组平均寿命458天,雄鼠手术组平均寿命642天,雌鼠组、雄鼠假手术雄组、雄鼠手术组间寿命存在统计学差异;对照组C57BL/6雌鼠组、雄鼠假手术雄组、雄鼠手术组间寿命无明显统计学差异。***新生期（day3）雌雄鼠肌肉

关键词：脊髓性肌萎缩环介导等温扩增荧光短片段多重pcr 数字pcr 诊断寿命相关

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