目的基于数据挖掘技术分析含“巴沙嘎”类药材治疗肝病方剂的配伍规律,挖掘核心组药;通过动物实验验证核心组药的有效性;并运用网络药理学方法,分析核心组药治疗肝炎的作用机制,对指导“巴沙嘎”类药材方剂临床合理应用及蒙古族药（简称蒙药）研发提供参考。方法1.收集整理《甘露四部》、《蒙医金匮》、《中华人民共和国卫生部药品标准》·蒙药分册（1998年版）、《内蒙古蒙药制剂规范》（2007年版）、《内蒙古蒙药制剂规范》（2014年版）中含“巴沙嘎”类药材治疗肝病的方剂,构建方药数据库,对方药的配伍规律进行挖掘。运用Excel统计用药频次,同时运用R语言对高频药物（≥5次）进行聚类分析与关联规则分析,得到核心组药。2.实验将40只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组、给药组,每组10只小鼠。给药组给予瞿麦-红花粗浸膏,阳性药组给予联苯双酯滴丸,空白组、模型组给予等体积的水,连续灌胃给药4周。在小鼠末次给药后禁食不禁水,通过腹腔注射四氯化碳（CCl）建立小鼠急性肝损伤模型。16小时后摘眼球取血,检测血清中谷草转氨酶（AST）、谷丙转氨酶（ALT）的活性,苏木素-伊红（HE）法观察肝组织形态学变化,以及对肝细胞中巨噬细胞的影响。3.收集核心组药的活性成分及靶点信息,利用中药系统药理学分析平台数据库（TCMSP）、中药分子机制的生物信息学分析工具（BATMAN-TCM）、中医药综合数据库（TCMID）以及相关文献补充,通过在线人类孟德尔遗传数据库（OMIM）、人类基因数据库（Gene Cards）、疾病相关的基因与突变位点数据库（Dis Ge NET）获取并筛选与肝炎相关的靶点。借助蛋白相互作用数据库11.0（STRING）进行蛋白质相互作用分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络。采用Metascape3.5数据库进行基因本体（GO）富集分析及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析,应用Auto Dock Vina软件进行分子对接验证。结果1.严格按照纳入与排除标准进行方剂筛选后提取方剂数据,收集含“巴沙嘎”类药材治疗的肝病方剂共46首,涉及蒙药143味,用药总频次达585次,其中应用的“巴沙嘎”类药材全部都为瞿麦,与瞿麦配伍的高频药物（≥5次）为红花（41次;89.13%）、五灵脂（36次;78.26%）、牛黄（25次;54.34%）。高频药物功效主要为清热药（278次;72.58%）;性味以苦味（337次,53.58%）、寒（70次,16.79%）为主。通过聚类分析及关联规则分析,挖掘出核心组药“瞿麦-红花”。2.动物实验结果表明,核心组药“瞿麦-红花”可以降低CCl诱导急性肝损伤小鼠模型血清中ALT、AST的水平,能够减轻CCl急性肝损伤小鼠肝细胞中炎性因子浸润,改善肝组织的病理性损伤,能够明显抑制CCl引起的急性肝损伤小鼠肝细胞中巨噬细胞数量。3.网络药理学结果显示,筛选出“瞿麦-红花”潜在活性成分36种,作用靶点共204个,肝炎疾病靶点1910个,“瞿麦-红花”治疗肝炎作用靶点120个。其中蛋白激酶B1（AKT1）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤蛋白p53（TP53）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、肿瘤坏死因子（TNF）、丝裂原活化蛋白激酶8（MAPK8）、JUN原癌基因（JUN）、胱天蛋白酶3（CASP3）、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）、基质金属肽酶-9（MMP9）为“瞿麦-红花”治疗肝炎的关键靶点。KEGG通路分析则与肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）(PI3K/Akt)信号通路、缺氧诱导因子1（HIF-1）信号通路有关,其功能主要为调节体内氧化应激及凋亡,减轻炎症的发生等。结论1.本研究运用数据挖掘技术探讨含“巴沙嘎”类药材治疗肝病方剂的高频药物组方配伍规律,筛选出了核心组药“瞿麦-红花”;2.通过动物实验,验证了“瞿麦-红花”对CCl诱导的急性肝损伤小鼠肝脏的保护作用。3.借助网络药理学方法初步探讨了“瞿麦-红花”治疗肝炎的作用机制,发现“瞿麦-红花”治疗肝炎具有多成分、多靶点、多通路的作用特点。本研究为探索“巴沙嘎”类药材治疗肝病提供了新思路,为临床应用“巴沙嘎”类药材治疗肝病的新药研发与蒙医治疗肝病临床合理应用提供参考。
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