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河北农业大学学报 2013年第6期36卷 76-82页

作者：钱荷英徐安英张月华孙平江高坤郭锡杰江苏科技大学江苏镇江212003 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018

Gp64是杆状病毒CRV(Cell-released virus)的主要嚢膜蛋白,在CRV借吸附和内吞作用侵入细胞过程中起关键作用,能促进CRV嚢膜与胞饮体膜之间的融合从而促进杆状病毒对宿主细胞的吸附。本试验克隆了蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamia cynthia... 详细信息

Gp64是杆状病毒CRV(Cell-released virus)的主要嚢膜蛋白,在CRV借吸附和内吞作用侵入细胞过程中起关键作用,能促进CRV嚢膜与胞饮体膜之间的融合从而促进杆状病毒对宿主细胞的吸附。本试验克隆了蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamia cynthia ricini nuclear polyhedrosis virus,PcrNPV)的gp64基因,序列分析表明该基因ORF全长1 530bp,编码509个氨基酸残基,其相应的GP64蛋白质分子量为58.46kD,等电点为5.59;同源性分析表明,PcrNPV的GP64蛋白与柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyi nuclear polyhedrosis virus,ApNPV)的GP64同源性高达99%,而与家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhydrosis virus,BmNPV)的GP64仅为76%;荧光定量分析表明,PcrNPV的gp64基因在不同蓖麻蚕品种的中肠、血液及其脂肪体中均有相同的增殖趋势,但在不同品种的各组织中的增殖量不同,增殖量多的品种与感染试验中相对易感的品种一致。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒 gp64 基因克隆荧光定量PCR

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蓖麻蚕核型多角体病毒解旋酶基因的克隆和序列分析

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蚕业科学 2008年第1期34卷 65-71页

作者：陈言张月华李兵朱姗颖徐安英王文兵沈卫德江苏大学生命科学研究院江苏镇江212013 中国农业科学院蚕业研究所江苏镇江212018 苏州大学生命科学学院江苏苏州215123

为了解柞蚕核型多角体病毒(Antheraea pernyinucleopolyhedrovirus,ApNPV)和蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamia cynthia riciniNPV,PcrNPV)在感染性及基因水平上的差别,克隆了PcrNPV解旋酶基因helicase,对该基因进行了测序及同源性分析。感染性试验表明,ApNPV对柞蚕和蓖麻蚕的感染率分别为78%和57%;而PcrNPV对蓖麻蚕的感染率为79%,但几乎不感染柞蚕。对PcrNPVhelicase分析的结果表明,该基因长度为3 639 bp,编码1 212个氨基酸(登录号:EU143371)。基因的同源性分析表明,PcrNPVhelicase与ApNPVhelicase的同源性最高,达98.6%,与苜蓿银纹夜蛾NPV(Autographa califorlicaNPV,AcNPV)helicase和家蚕NPV(BombyxmoriNPV,BmNPV)helicase的同源性最低,分别为58%和58.8%。PcrNPV和ApNPV的helicase基因7个保守功能域上的氨基酸序列均相同,仅在靠近DNA结合区螺旋-转角-螺旋结构处的第974位上有1个氨基酸不同,推测该位点可能与宿主域范围有关。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒柞蚕核型多角体病毒解旋酶基因序列分析

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蓖麻蚕核型多角体病毒和柞蚕核型多角体病毒的密码子使用模式分析

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蚕业科学 2017年第1期43卷 77-83页

作者：石生林张莹王国宝王勇刘彦群杨瑞生秦利沈阳农业大学生物科学技术学院辽宁省昆虫资源工程技术研究中心沈阳110866

蓖麻蚕核型多角体病毒(Phcy NPV)是柞蚕核型多角体病毒(Anpe NPV)的变种,不能感染柞蚕。通过病毒基因组GC含量、GC3s含量、有效密码子数、相对同义密码子使用度、密码子偏好参数的计算及ENc-plot分析、中性绘图分析、对应分析等,比较Phc... 详细信息

蓖麻蚕核型多角体病毒(Phcy NPV)是柞蚕核型多角体病毒(Anpe NPV)的变种,不能感染柞蚕。通过病毒基因组GC含量、GC3s含量、有效密码子数、相对同义密码子使用度、密码子偏好参数的计算及ENc-plot分析、中性绘图分析、对应分析等,比较Phcy NPV和Anpe NPV的密码子使用模式。Phcy NPV、Anpe NPV分别只有1个和4个ORF的密码子偏好性较强。与Anpe NPV比较,Phcy NPV少数ORF的GC含量、GC3s含量、有效密码子数量和密码子偏好参数变化较大,但2种病毒ORF组间的GC含量、GC3s含量、有效密码子数和密码子偏好参数均无统计学差异(P=0.135、P=0.189、P=0.192、P=0.200)。2种病毒ORF组间,由同义密码子编码的18种氨基酸的密码子使用均无统计学差异(P>0.05),鉴定的17种偏好性密码子也均相同。GC碱基组成是影响2种病毒ORF组密码子使用模式的主要因素,而自然选择对GC碱基组成的影响大于突变压力,但2种病毒间自然选择的影响程度无统计学差异(P=0.770)。Phcy NPV在适应新宿主蓖麻蚕的进化过程中密码子使用模式变化较小,尚不能通过密码子使用模式分析解释杆状病毒在不同宿主间的交叉感染机制。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒柞蚕核型多角体病毒密码子偏好性密码子使用模式适应性

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蓖麻蚕核型多角体病毒p6.9基因的克隆及序列分析

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蚕业科学 2007年第4期33卷 610-613页

作者：费建明李兵沈卫德浙江省湖州市农业科学研究院湖州313000 苏州大学生命科学学院苏州215123

基于丰富蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamia cynthia ricininucleopolyhedrovirus,PcrNPV)分子信息的目的,对PcrNPV DNA部分片段进行了测序分析,获得1个DNA结合蛋白基因p6.9的完整序列。该基因的读码框由240个核苷酸组成,编码79个氨基酸... 详细信息

基于丰富蓖麻蚕核型多角体病毒(Philosamia cynthia ricininucleopolyhedrovirus,PcrNPV)分子信息的目的,对PcrNPV DNA部分片段进行了测序分析,获得1个DNA结合蛋白基因p6.9的完整序列。该基因的读码框由240个核苷酸组成,编码79个氨基酸,分子质量约为9.8 kD,转录起始位点ATG侧翼序列符合Kozak规则,其上游34bp处具有晚期基因转录的保守起始序列taag,表明该基因为晚期表达基因。将PcrNPV与12种昆虫核型多角体病毒P6.9蛋白氨基酸序列作同源性比较的结果显示:PcrNPV P6.9蛋白氨基酸序列与家蚕(Bombyx mori)NPV P6.9的同源性为59%,与柞蚕(Antheraea pernyi)NPV的同源性为100%,表明PcrNPV与ApNPV的亲缘关系很近。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒 p6.9基因序列分析

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蓖麻蚕核型多角体病毒包涵体蛋白的提纯及SDS-PAGE分析

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南昌大学学报（理科版） 2001年第4期25卷 344-347页

作者：吴敏徐旭士王晓芳南京师范大学生命科学学院南京210097

对蓖麻蚕核型多角体病毒 (PhilosamiacynthiariciniNuclearPolyhedrosisViruses)的多角体蛋白 polyhedrin的碱解性质以及分子量等进行了分析。结果发现 :多角体加热灭活和碱解后 ,经等电点沉淀的 polyhedrin通过凝胶电泳仍存在较多的小... 详细信息

对蓖麻蚕核型多角体病毒 (PhilosamiacynthiariciniNuclearPolyhedrosisViruses)的多角体蛋白 polyhedrin的碱解性质以及分子量等进行了分析。结果发现 :多角体加热灭活和碱解后 ,经等电点沉淀的 polyhedrin通过凝胶电泳仍存在较多的小分子量蛋白带 ,表明通常的 70℃加热不能完全灭活碱性蛋白酶 ;在电泳图谱的主带polyhedrin一侧尚有一伴随的的卫星带 ,可能提示包涵体的外膜蛋白。Sephadex -G2 0 0柱层析纯化的 polyhedrin经SDS -PAGE分析 ,多角体蛋白有 4条带 ,其中主带分子量约为 30KD ,另有一带处于 6 1KD位置 ,推测为 polyhedrin的二聚体 ,说明polyhedrin多聚体在杆状病毒包涵体中的普遍性。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒多角体蛋白 SDS-PAGE分析包涵体杆状病毒体腔型脓病蚕疾病

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蓖麻蚕核型多角体病毒（Attacus ricini nuclear polyhedrosis virus）的研究

蓖麻蚕核型多角体病毒（Attacus ricini nuclear polyhedrosis vi...

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作者：吴敏南京师范大学

学位级别：硕士

本文较为系统的研究了蓖麻蚕核型多角体病毒(Attacus ricini nuclear polyhedrosis virus，简称ArNPV)形态特征和生化特性，并预测了多角体蛋白的二级结构，为开发利用蓖麻蚕核型多角体病毒这一生物资源提供了理论参考。采用不连续系统... 详细信息

本文较为系统的研究了蓖麻蚕核型多角体病毒(Attacus ricini nuclear polyhedrosis virus，简称ArNPV)形态特征和生化特性，并预测了多角体蛋白的二级结构，为开发利用蓖麻蚕核型多角体病毒这一生物资源提供了理论参考。采用不连续系统垂直板SDS-PAGE分析了ArNPV的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽的组成及分子量。用薄层等电聚焦的方法测定了蛋白质的等电点。应用5种限制性内切酶对ArNPV基因组DNA进行了酶切分析。对蓖麻蚕核型多角体病毒的超微结构进行电镜观察和描述。对多角体蛋白进行紫外、荧光、红外光谱分析，并通过去卷积的方法分析了该蛋白的酰胺Ⅰ带。用Antheprot软件预测其二级结构。结果表明：ArNPV多角体蛋白仅有一条带，分子量为29kD；病毒粒子包含16种结构多肽，分子量范围在15.2～97.5kD之间。多角体蛋白的等电点为pH5.8，病毒粒子结构多肽的等电点分布于pH4.8～6.4之间。ArNPV基因组DNA经BamHⅠ、EcoRⅠ、Hind Ⅲ、PstⅠ及BglⅡ酶切分别产生12、14、10、9和8条片段，分子量为76.9×10～6D。病毒多角体为12面体和多面体结构，大小不一，平均直径为2.4μm；多角体碱解后释放出杆状的病毒束，大小为320～417nm×83～227nm，核衣壳大小比较均一，约为320nm×83nm。通过多角体超薄切片的横切面观察，囊膜内包被的核衣壳数变动于1～10之间，只包被1个核衣壳的数目最多，约占总数的80.04％，病毒束在排列图式上存在差异。光谱分析的结果表明，多角体蛋白在溶液中以α-螺旋为主，在固态时α-螺旋和β-折叠共同存在。通过软件分析，预测多角体蛋白分子中α-螺旋、β-折叠、β-转角、无规卷曲的百分含量分别为29％、22％、22％、27％。整个分子中有2个亲水区与2个疏水区，无跨膜区。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒多角体蛋白病毒粒子结构多肽超微结构二级结构

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蓖麻蚕核型多角体病毒的基因组分析及其miRNA预测与验证

蓖麻蚕核型多角体病毒的基因组分析及其miRNA预测与验证

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作者：钱荷英江苏科技大学

学位级别：硕士

杆状病毒是有嚢膜的dsDNA病毒，专一性地感染节肢动物，在感染周期产生2种表型不同但是遗传物质完全一样的病毒形态，即包涵体衍生病毒（Occlusion-derived virus，ODV）和出芽型病毒（Budded virus，BV）。蓖麻蚕核型多角体病毒（Phito... 详细信息

杆状病毒是有嚢膜的dsDNA病毒，专一性地感染节肢动物，在感染周期产生2种表型不同但是遗传物质完全一样的病毒形态，即包涵体衍生病毒（Occlusion-derived virus，ODV）和出芽型病毒（Budded virus，BV）。蓖麻蚕核型多角体病毒（Phitosamia cynthiaricini nuclear polyhedrosis virus，PhcyNPV）是引起蓖麻蚕病毒病的主要病原，在形态上和柞蚕核型多角体病毒（Antheraea pernyi NPV，AnpeNPV)大小相仿，而与家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori NPV，BmNPV)差别较大。对蓖麻蚕核型多角体病毒的研究将丰富杆状病毒家族的成员,为探明该病原的感染机制、蓖麻蚕核型多角体病的流行规律以及稳定蓖麻蚕产业都具有重要的理论意义和实用价值。本研究测定了1株蓖麻蚕核型多角体病毒（PhcyNPV）的全基因组序列，并进行了解析；克隆了蓖麻蚕核型多角体病毒的gp64基因，并初步建立了用荧光定量PCR检测蓖麻蚕品种资源抗病毒能力的技术体系；用生物信息学方法预测了蓖麻蚕核型多角体病毒的miRNA及其在病毒基因组上的靶基因，对于蓖麻蚕核型多角体病毒感染机制的研究具有一定的理论意义。主要研究结果如下：\n 1．对蓖麻蚕核型多角体病毒基因组进行测序（6.6×），经过拼接，得到基因组全长125376 bp，其中G+C含量占53.65%；PhcyNPV全基因组中有138个ORF、6个同源重复区（hr）以及2个bro，其中63个ORF的转录方向与多角体蛋白基因的转录方向一致，其它74个ORF转录方向相反，在所有的ORF中约有94.9%的ORF在其他杆状病毒的功能已经解析或者有同源基因。预测了PhcyNPV ORF表达产物的细胞学定位，有23个基因产物定位在内质网上，19个基因产物定位在线粒体上。通过对pif-2和lef-8基因序列分析得到的杆状病毒分子进化树中，PhcyNPV与AnpeNPV亲缘关系最近，而与BmNPV亲缘关系较远，PhcyNPV属于GroupⅠNPV。\n 2．将PhcyNPV基因组与已经公布的2株AnpeNPV基因组比较，这3个病毒基因组中有126个共同的保守基因，其中包括29个杆状病毒的核心基因。另外每个病毒又有自身独特的一些ORF，PhcyNPV有7个，AnpeNPV-L2有6个，AnpeNPV-Z有7个。PhcyNPV与AnpeNPV基因组的主要变化有：在PhcyNPV基因组的30622～32874之间缺失cath和v-chi2个基因；38639～39754bp之间3个ORF的长度和功能与AnpeNPV中均不相同；PhcyNPV的p94、egt、pif-3发生了基因突变；与晚期基因转录有关的lef-10和lef-11在PhcyNPV基因组中也缺失。\n 3．根据蓖麻蚕核型多角体病毒基因组信息，克隆了PhcyNPV的gp64基因，该基因全长1530bp，编码509个氨基酸，生物信息学分析表明该基因与AnpeNPV的gp64基因同源性高达99%,而与BmNPV的同源性仅为76%。对PhcyNPV的gp64和p49两个基因进行实时荧光定量PCR(Real-time PCR)测定，结果显示这2个基因在不同品种的同一组织中都有相似的表达增殖趋势，但是在不同感受性的品种中，这2个基因的拷贝数不同，即在易感品种中拷贝数急剧增加，尤其是在感染后期易感品种（B21）脂肪体组织中的拷贝数远远高于非易感品种。因此认为，可以通过实时荧光定量PCR检测蓖麻蚕感染PhcyNPV后相关基因的表达水平来判断不同蓖麻蚕品种对PchyNPV感受性强弱，藉此初步筛选不同蓖麻蚕品种抗PhcyNPV性能，为从分子水平检测蓖麻蚕种质资源的抗病性提供相应的技术方法。\n 4．通过生物信息学的方法预测了PhcyNPV基因组中142条可能编码的miRNA成熟体分子，再用miRanda、RNAhybird两个软件预测miRNA在病毒基因组上的靶基因，提取靶基因有共同交集的miRNA33条，其共同的靶基因61个。对这33条可能编码的miRNA序列进行RT-PCR验证，确定其中的6条为miRNA成熟体序列。这6条miRNA的靶基因涉及病毒的融合蛋白、多角体蛋白等结构蛋白以及一些蛋白激酶包括激活解旋酶表达的极早期基因等，可见 miRNA通过调控潜在的靶基因，参与了PhcyNPV病毒的复制及侵染等重要过程。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒基因组序列非编码单链核糖核酸感染机制

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蓖麻蚕核型多角体病毒在细胞培养中的形态发生

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Virologica Sinica 1986年第4期 73-79页

作者：梁布锋谢天恩中国科学院武汉病毒研究所武汉中国科学院武汉病毒研究所

本文通过被感染的细胞培养物切片,观察了蓖麻蚕核型多角体病毒的装配过程。描述了病毒核衣壳的形成和发育,以及多角体的形成。蓖麻蚕核型多角体病毒在细胞培养中的形态发生,表明它是杆状病毒复制的一种典型事例。

关键词：核衣壳细胞核核(细胞学) 蓖麻蚕核型多角体病毒多角体囊膜病毒束培养(生物) 细胞培养形态建成形态发生

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蓖麻蚕核型多角体病毒与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白基因同源性的研究

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Virologica Sinica 1988年第3期 293-299页

作者：陈蔚梅林栖凤金红卢文筠武汉大学病毒研究所武汉大学病毒系 83级毕业生武汉大学病毒研究所武汉

本文报道以苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白基因mRNA的cDNA的重组质粒PMA-Ⅵ DNA转化*** RR。采用了多种筛选方法,包括抗菌素抗性筛选,菌落杂交及电泳等方法。快速地筛选出含有PMA-Ⅵ质粒的菌株。并以蓖麻蚕NPV-DNA作探针,通过Sou... 详细信息

本文报道以苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒多角体蛋白基因mRNA的cDNA的重组质粒PMA-Ⅵ DNA转化*** RR。采用了多种筛选方法,包括抗菌素抗性筛选,菌落杂交及电泳等方法。快速地筛选出含有PMA-Ⅵ质粒的菌株。并以蓖麻蚕NPV-DNA作探针,通过Southern杂交,表明蓖麻蚕NPV基因组中具有与苜蓿银纹夜蛾NPV多角体蛋白基因同源性的核苷酸序列。

关键词：菌落杂交核苷酸序列抗性筛选格伦斯坦—霍格内斯法同源性 DNA 多角体蛋白基因 NPV PMA 氯霉素氯胺苯醇抗菌素蓖麻蚕核型多角体病毒蓖麻蚕鹤木蚕重组质粒苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒

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蓖麻蚕核型多角体病毒病研究初报

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蚕业科学 1981年第3期 190-193页

作者：黄可威吴冬秀陆有华中国农业科学院蚕业研究所

核型多角体病毒病是蓖麻蚕主要病害之一。但国内外研究不多,报道很少。本试验初步探讨了蓖麻蚕感染核型多角体(NPV)后,在幼虫期的病征及其潜伏期。

关键词：蓖麻蚕核型多角体病毒蚕体血细胞细胞核核(细胞学) 病蚕 NPV 多角体起蚕普通叶

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