检索结果-内蒙古大学图书馆

2013年中国畜牧兽医学会兽医病理学分会暨中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会学术研讨会

作者：张殿卿姚娜赵庆亮黄林盛金良孟庆龄陈创夫新疆石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

本文探索了人源无形体不同分离株AnkA蛋白免疫原性存在的差异，并进一步揭示这些蛋白质间可能存在结构及免疫表位差异以及可能相关的与宿主细胞作用蛋白谱差异。本研究成功原核表达并纯化了三株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白，重组蛋白与中... 详细信息

本文探索了人源无形体不同分离株AnkA蛋白免疫原性存在的差异，并进一步揭示这些蛋白质间可能存在结构及免疫表位差异以及可能相关的与宿主细胞作用蛋白谱差异。本研究成功原核表达并纯化了三株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白，重组蛋白与中国无形体病人阳性血清存在免疫反应。三株嗜吞噬细胞无形体AnkA重组蛋白与免疫小鼠多克隆抗体之间存在交叉反应，通过Western blot和ELISA方法得到人源无形体不同分离株AnkA蛋白质之间的免疫原性差异不显著，表明它们之间的空间结构及其相似，抗原表位差异较小。

关键词：人粒细胞无形体病嗜吞噬细胞蛋白原核表达免疫原性

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重组鼠Tet3蛋白原核表达及其稳定性研究

重组鼠Tet3蛋白原核表达及其稳定性研究

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作者：黄娟李学斌 430075 湖北省武汉市430075

发明名称重组鼠Tet3蛋白原核表达及其稳定性研究摘要本发明公开了重组鼠Tet3蛋白原核表达及其稳定性研究的研究成果，探讨了重组蛋白在液体保存状态下温度对其稳定性影响的问题。通过分子克隆技术，将鼠Tet3基因克隆至原核表达载体pET28... 详细信息

标准号: CN112575017A

发明名称重组鼠Tet3蛋白原核表达及其稳定性研究摘要本发明公开了重组鼠Tet3蛋白原核表达及其稳定性研究的研究成果，探讨了重组蛋白在液体保存状态下温度对其稳定性影响的问题。通过分子克隆技术，将鼠Tet3基因克隆至原核表达载体pET28a(+)上，成功构建重组质粒pET28a‑Tet3；再对重组蛋白表达条件进行优化，分离纯化出目的蛋白Tet3；对纯化出的目的蛋白Tet3稳定性进行分析，主要选取3个温度条件即常温、4℃和37℃，分别保存60天来分析Tet3蛋白在液体保存状态下的稳定性。本发明能表达纯化出高纯度高品质的重组鼠Tet3蛋白，并验证出重组鼠Tet3蛋白在液体状态保存条件下最优的保存温度，为公司产品在运输过程中的最佳保存条件提供一个好的理论依据。

关键词：重组鼠蛋白原核表达稳定性研究蛋白保存条件目的蛋白液体保存分子克隆技术构建重组质粒原核表达载体重组蛋白表达稳定性影响分离纯化公司产品基因克隆温度条件液体状态运输过程重组蛋白高纯度高品质保存分析验证优化成功研究

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一种斑点叉尾鮰Zbtb38蛋白原核表达基因序列、多克隆抗体及其应用

一种斑点叉尾鮰Zbtb38蛋白原核表达基因序列、多克隆抗体及其应用

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作者：张世勇段永强刘洪岩钟立强王明华陈校辉 210017 江苏省南京市建邺区南湖东路90号

本发明提供一种斑点叉尾鮰Zbtb38蛋白原核表达基因序列、多克隆抗体及其应用，基于原核表达密码子偏好性将斑点叉尾鮰zbtb38基因开放阅读框(ORF)前1239bp调整为适合原核表达的基因序列，将调整后的zbtb38基因序列插入到原核表达载体中... 详细信息

标准号: CN117904119A

本发明提供一种斑点叉尾鮰Zbtb38蛋白原核表达基因序列、多克隆抗体及其应用，基于原核表达密码子偏好性将斑点叉尾鮰zbtb38基因开放阅读框(ORF)前1239bp调整为适合原核表达的基因序列，将调整后的zbtb38基因序列插入到原核表达载体中得到重组表达载体，成功在原核系统中表达了斑点叉尾鮰zbtb38基因，获得了纯度较高的重组蛋白，通过免疫新西兰白兔获得了兔源多克隆抗体，并使用该抗体利用Western blot技术检测了Zbtb38蛋白在斑点叉尾鮰性腺组织中的表达水平，为进一步研究斑点叉尾鮰zbtb38基因的功能奠定了基础。

关键词：斑点叉尾鮰多克隆抗体基因序列原核表达免疫新西兰白兔蛋白原核表达密码子偏好性原核表达载体重组表达载体开放阅读框表达水平技术检测性腺组织原核系统重组蛋白抗体兔源蛋白应用成功研究

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一种蛋白原核表达低温诱导装置

一种蛋白原核表达低温诱导装置

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作者：付玉洁任加奇孙龙申淑清高新凯王逸楠朱盈霖李碧野郭安华 113122 辽宁省抚顺市李石开发区滨河路东段1号沈阳工学院

本实用新型公开了一种蛋白原核表达低温诱导装置，包括设备主体，所述设备主体的正面外壁上安装有安装框与控制面板，所述安装框上活动连接有密封柜门，所述设备主体的两侧与顶部内壁上均设有冷冻层，且冷冻层的两侧内壁上设有隔板，所... 详细信息

标准号: CN215050320U

本实用新型公开了一种蛋白原核表达低温诱导装置，包括设备主体，所述设备主体的正面外壁上安装有安装框与控制面板，所述安装框上活动连接有密封柜门，所述设备主体的两侧与顶部内壁上均设有冷冻层，且冷冻层的两侧内壁上设有隔板，所述隔板的顶部焊接有U型板，且U型板的两侧壳壁上焊接有竖板，每个所述竖板上均活动连接有活动杆，且活动杆的下方设有齿轮，每个所述齿轮上均通过螺栓连接有转轴，且转轴上套接有绕绳轮。本实用新型通过各种结构的组合使得本装置在进行低温诱导时能够将放置于设备内部的盛放器皿进行夹持固定，避免器皿在设备内部进行操作时随设备的搬运而产生晃动，提高产品生产的合格率。

关键词：设备主体隔板本实用新型活动连接有低温诱导设备内部安装框活动杆冷冻层齿轮竖板转轴焊接蛋白原核表达产品生产顶部内壁夹持固定控制面板两侧内壁螺栓连接密封柜门盛放器皿绕绳轮器皿壳壁上套外壁晃动搬运合格率

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一种三叶斑潜蝇热休克转录因子蛋白原核表达的方法

一种三叶斑潜蝇热休克转录因子蛋白原核表达的方法

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作者：杜予州王禹程常亚文 225009 江苏省扬州市大学南路88号

本发明公开了一种三叶斑潜蝇热休克转录因子蛋白原核表达的方法，包括蛋白表达载体构建和原核表达载体的诱导表达两个部分，具体为：设计带有特定酶切位点(BamHI和XhoI)的特异性引物并进行目的片段的扩增。将PCR产物回收、克隆并在测序... 详细信息

标准号: CN113234133B

本发明公开了一种三叶斑潜蝇热休克转录因子蛋白原核表达的方法，包括蛋白表达载体构建和原核表达载体的诱导表达两个部分，具体为：设计带有特定酶切位点(BamHI和XhoI)的特异性引物并进行目的片段的扩增。将PCR产物回收、克隆并在测序正确之后进行提取质粒。原核表达载体的构建酶切。表达菌的制备。诱导表达最佳条件摸索。目的蛋白表达形式及Western blot鉴定。本实验不仅摸索出了提高三叶斑潜蝇热休克转录因子蛋白原核表达水平的最佳IPTG浓度，提高了实验效率和效果，而且对我们系统全面研究整个Hsp家族基因转录调控机制，及其在斑潜蝇温度耐受性和入侵传播中的功能具有重要的意义。

关键词：热休克转录因子蛋白原核表达原核表达载体三叶斑潜蝇诱导表达构建蛋白表达载体基因转录调控特异性引物温度耐受性酶切位点目的蛋白目的片段实验效率最佳条件斑潜蝇测序扩增酶切质粒制备克隆入侵回收传播研究

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溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏杆菌的试剂盒

溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏...

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作者：张月梅赵世华宋越戴伶俐王娜刘威张帆杨斌达来宝力格陈伟 010000 内蒙古自治区呼和浩特市玉泉区昭君路22号

本发明提供了溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏杆菌的试剂盒，属于基因工程领域。本发明首次将溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白构建入原核表达载体中，得到溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白的原核表达载体，通过重组表达得... 详细信息

标准号: CN109517832A

本发明提供了溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏杆菌的试剂盒，属于基因工程领域。本发明首次将溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白构建入原核表达载体中，得到溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白的原核表达载体，通过重组表达得到检测溶血性曼氏杆菌的抗原标志物‑PlpE蛋白，且表达的PlpE蛋白经Western Blot分析得到47KDa的目的条带。实验表明，以PlpE蛋白为抗原与大肠杆菌、链球菌、肺炎支原体三种细菌阳性血清进行免疫反应，结果发现均表现为阴性。这说明本发明提供的溶血性曼氏杆菌PlpE蛋白具有良好的特异性，能够用来作为抗原标志物检测溶血性曼氏杆菌。

关键词：溶血性曼氏杆菌蛋白原核表达载体抗原标志检测链球菌蛋白原核表达基因工程领域肺炎支原体大肠杆菌蛋白构建阳性血清重组表达试剂盒抗原构建条带阴性细菌表现发现分析

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一种三叶斑潜蝇热休克转录因子蛋白原核表达的方法

一种三叶斑潜蝇热休克转录因子蛋白原核表达的方法

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作者：杜予州王禹程常亚文 225009 江苏省扬州市大学南路88号

标准号: CN113234133A

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溶血性曼氏杆菌LKTA蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏杆菌的试剂盒

溶血性曼氏杆菌LKTA蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏...

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作者：张月梅赵世华宋越戴伶俐王娜张帆刘威杨斌达来宝力格陈伟 010000 内蒙古自治区呼和浩特市玉泉区昭君路22号

本发明提供了溶血性曼氏杆菌LKTA蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏杆菌的试剂盒，属于基因工程技术领域，包括以下步骤：1)以lkta‑F、lkta‑R为引物，以溶血性曼氏杆菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增；2)将PCR扩增产物和质粒... 详细信息

标准号: CN111004812A

本发明提供了溶血性曼氏杆菌LKTA蛋白原核表达载体的构建方法及检测溶血性曼氏杆菌的试剂盒，属于基因工程技术领域，包括以下步骤：1)以lkta‑F、lkta‑R为引物，以溶血性曼氏杆菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增；2)将PCR扩增产物和质粒载体分别进行酶切，得到LKTA蛋白编码基因酶切片段和质粒载体酶切片段；3)将所述LKTA蛋白编码基因酶切片段和载体酶切片段连接，得到重组质粒；4)将所述重组质粒转化至大肠杆菌的感受态中，得到溶血性曼氏杆菌LKTA蛋白原核表达载体。本发明提供的溶血性曼氏杆菌LKTA蛋白具有良好的特异性，能够用来作为抗原标志物检测溶血性曼氏杆菌。

关键词：溶血性曼氏杆菌酶切片段蛋白编码基因蛋白原核表达质粒载体基因工程技术重组质粒转化大肠杆菌基因组DNA 抗原标志重组质粒感受态试剂盒检测构建酶切引物蛋白

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2型猪链球菌细胞分裂蛋白DivIVA的原核表达及纯化

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中国病原生物学杂志 2016年第6期11卷 500-504,508页

作者：倪华过雨晴杜世仁张剑范伟伟孙卫平王长军曹祥荣潘秀珍南京军区军事医学研究所江苏南京210000 南京师范大学江苏南京210046

目的利用原核表达系统制备2型猪链球菌细胞分裂起始因子DivIVA重组蛋白并进行纯化,为研究其在调控细胞分裂中的作用奠定基础。方法以2型猪链球菌05ZYH33全基因组为模板,PCR扩增divIVA基因片段,经BamHⅠ和XholⅠ双酶切后将目的片段连接... 详细信息

目的利用原核表达系统制备2型猪链球菌细胞分裂起始因子DivIVA重组蛋白并进行纯化,为研究其在调控细胞分裂中的作用奠定基础。方法以2型猪链球菌05ZYH33全基因组为模板,PCR扩增divIVA基因片段,经BamHⅠ和XholⅠ双酶切后将目的片段连接至表达载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a-divIVA,经测序鉴定后将重组质粒转化进入表达菌*** BL21,以终浓度为0.1mmol/L的IPTG于37℃培养4h,诱导DivIVA蛋白表达。用Ni离子亲和层析柱分离纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行检测和验证。结果成功构建重组表达质粒pET28a-divIVA,并在*** BL21中表达主要以包涵体形式存在的DivIVA蛋白。包涵体蛋白经8mol/L脲变性溶解后经Ni离子亲和层析柱纯化,获得的目的蛋白经SDS-PAGE检测分子质量为36ku,与预期大小相符;经Western blot检测,该蛋白能被相应抗体特异性识别。结论在*** BL21中成功表达并纯化了DivIVA蛋白,为研究该蛋白在2型猪链球菌的细胞分裂机制奠定了基础。

关键词： 2型猪链球菌 DivIVA蛋白蛋白原核表达

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弓形虫致密颗粒蛋白GRA15Ⅱ原核表达及对巨噬细胞偏移的影响

弓形虫致密颗粒蛋白GRA15Ⅱ原核表达及对巨噬细胞偏移的影响

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中国动物学会寄生虫学专业委员会第十届全国寄生虫学青年工作者学术研讨会

作者：胡晓东李源玲王聪徐元宏沈继龙安徽病原生物学省级实验室人兽共患病安徽省重点实验室(安徽医科大学)安徽医科大学病原生物学教研室安徽医科大学第一附属医院检验科

目的:构建能够表达弓形虫致密颗粒蛋白 GRA15 的工程菌,获得纯化的目的蛋白刺激巨噬细胞,借以观察弓形虫基因型相关的效应分子对巨噬细胞偏移的影响。方法:从Ⅱ型弓形虫 PRU 株中提取总 RNA,扩增该基因型弓形虫的 GRA15 编码基因,连接 T... 详细信息

目的:构建能够表达弓形虫致密颗粒蛋白 GRA15 的工程菌,获得纯化的目的蛋白刺激巨噬细胞,借以观察弓形虫基因型相关的效应分子对巨噬细胞偏移的影响。方法:从Ⅱ型弓形虫 PRU 株中提取总 RNA,扩增该基因型弓形虫的 GRA15 编码基因,连接 T 载体,构建重组质粒;将重组质粒转化至 XL-Blue（Top10）感受态大肠杆菌,扩增培养,提取菌种质粒测序;重组质粒与表达载体经双酶切、连接得到 pet28a-gra15Ⅱ;将 pet28a-gra15 Ⅱ转化至 DH5α感受态大肠杆菌中扩增培养,提取质粒测序。将测序正确的 pet28a-gra15 Ⅱ转化至 BL21 感受态大肠杆菌中,挑取单克隆扩增培养,得到目的工程菌;加 IPTG 诱导工程菌进行蛋白表达。经 Western Blot鉴定、纯化后得到目的蛋白 GRA15。体外分别用 GRA15（A 组）、LPS（B 组）、PBS（C 组）、小牛血清白蛋白（D 组）分别刺激小鼠巨噬细胞 RAW264.7,观察细胞形态的变化;分别收集各组细胞上清与贴壁巨噬细胞。ELISA 检测细胞上清中IL-10、IL-12、Arg-1 和 iN OS 的表达;qR T-PCR 检测巨噬细胞 IL-10、IL-12、Arg-1和 iN OS 的 mRNA 表达。结果:1.通过原核表达及分离纯化成功得到目的蛋白 GRA15。经 Western blotting鉴定,确认 GRA15。2.体外细胞刺激实验显示,GRA15（A 组）与 LPS（B 组）中 RAW264.7 发生了显著变化,具体表现为细胞外形由圆形变为多边形、有伪足伸出。3. A 组与 B 组结果见到,GRA15 和 LPS 可驱动巨噬细胞向经典途径活化为M1;C 组与 D 组对巨噬细胞偏移方向未见显著影响。ELISA 显示,A 组与 B 组的细胞上清中 iN OS 与 IL-12 含量均显著高于 C 组与 D 组,而四组细胞上清中 IL-10与 Arg-1 含量无显著差别;qRT-PCR 结果显示,A 组与 B 组细胞中 iN OS 与 IL-12的 mRNA 明显上调、C 组与 D 组无明显变化,而四组细胞中 IL-10 与 Arg-1 的 mRNA较低且均无显著变化。结论:通过体外原核表达获得了弓形虫致密颗粒蛋白 GRA15。 GRA15 可驱使RAW264.7 向 M1 方向发生偏移。

关键词：弓形虫致密颗粒蛋白GRA15 蛋白原核表达小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7

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