检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：高凤新疆农业大学

学位级别：硕士

本研究选取年龄、胎次、预产期相近,统一放牧饲养的伊犁马8匹为研究对象,采集其分娩后第0 d(初乳组)和第30 d(常乳组)的乳汁和血浆样本,旨在探究伊犁马初乳与常乳时期在乳成分、乳汁代谢组和血浆代谢组方面的差异。通过运用LC-MS代谢组... 详细信息

本研究选取年龄、胎次、预产期相近,统一放牧饲养的伊犁马8匹为研究对象,采集其分娩后第0 d(初乳组)和第30 d(常乳组)的乳汁和血浆样本,旨在探究伊犁马初乳与常乳时期在乳成分、乳汁代谢组和血浆代谢组方面的差异。通过运用LC-MS代谢组学方法,研究了伊犁马初乳与常乳时期在乳汁代谢物和血浆代谢物组分上的变化,并筛选出生理性的差异代谢物,以深入了解初乳与常乳之间乳成分差异的调节机制,从而为解析伊犁马产奶性状机制提供有价值的数据参考。研究结果如下: (1)在初乳中,除乳糖显著含量低于常乳外,乳脂、乳蛋白、总固形物、非脂固形物、α-乳清蛋白、α-酪蛋白、Ig A、Ig G、Ig M均显著高于常乳,且在初乳中Ig G的含量分别为Ig A、Ig M的9、17倍,为常乳中Ig G含量的8倍,表明马初乳中乳蛋白含量高主要的免疫球蛋白为Ig G。 (2)通过对初乳与常乳乳汁代谢组分析发现,根据VIP>1且P<0.05、FC>2或FC<0.5条件筛选鉴定出436种差异代谢物。对差异代谢物进行KEGG富集分析,共显著富集到12条功能通路(P<0.05)。对差异代谢物进行功能分析发现初乳中组氨酸-酪氨酸等氨基酸及二肽类似物、唾液酸乳糖、甘油磷脂酰等较常乳上调;3-磷酸甘油酸、谷氨酸等能量物质下调,表明伊犁马初乳为新生马驹早期存活、生长发育、抗菌抗炎、肠道菌群定植以及细胞增殖所需的原料等,而常乳则更多地提供机体生命活动的能量物质。 (3)通过对初乳与常乳乳汁代谢组分析发现,根据VIP>1且P<0.05、FC>2或FC<0.5条件筛选鉴定出363种差异代谢物。对差异代谢物进行KEGG富集分析,共显著富集到5条功能通路(P<0.05)。对差异代谢物进行功能分析发现初乳时期血浆中富集很多中长链脂肪酸、氨基酸、小肽等,例如:棕榈酸、亚麻酸、赖氨酸、生物素、泛酸,这些差异代谢物对乳腺合成乳脂、乳蛋白有积极作用,常乳时期血浆中主要富集了许多提高葡萄糖代谢水平的差异代谢物,例如:D-苏糖醇、D-葡萄糖醛酸、D-木糖、双半乳糖醛酸和甘油等,促进了常乳时期乳腺中乳糖的合成。 (4)乳汁与血浆共有代谢物中马尿酸、赖氨酸、苯丙氨酸在乳汁和血浆中皆为显著变化,说明这些代谢物共同促进了乳蛋白及其他乳成分的合成;2,6-二羟基苯甲酸、辛酰-L-肉碱的显著上调表明泌乳过程中提高了机体能量代谢。综上所述,本研究通过比较初乳和常乳时期的乳成分和乳汁与血浆的代谢物差异,发现初乳时期血浆中富集的代谢物促进乳腺乳脂、乳蛋白合成,其乳汁为马驹早期生长发育等提供必需原料;常乳时期血浆促进乳腺乳糖合成,更多地提供能量物质。

关键词：伊犁马初乳常乳乳代谢血浆代谢乳成分

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基于色谱质谱技术的脑卒中血浆代谢组学研究

基于色谱质谱技术的脑卒中血浆代谢组学研究

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作者：祁奥广东医科大学

学位级别：硕士

目的：　　1.利用气相色谱串联质谱（Gas Chromatography-tandem mass spectrometry,GC-MS/MS）结合多维统计学分析，非靶向分析研究健康志愿者（Health）和急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke,AIS）患者以及脑出血患者（intracer... 详细信息

目的：　　1.利用气相色谱串联质谱（Gas Chromatography-tandem mass spectrometry,GC-MS/MS）结合多维统计学分析，非靶向分析研究健康志愿者（Health）和急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke,AIS）患者以及脑出血患者（intracerebral hemorrhage，ICH）的血浆代谢谱，寻找出上述各组之间的血浆差异代谢物，评估潜在标志物的有效性，最后通过在线数据库KEGG(https://***/)，和MetaboAnalys（https://***/MetaboAnalyst/***）等对上述的差异代谢物进行通路分析，找出差异代谢物富集的代谢通路，期望能在分子水平上进一步的解释该疾病的发生和发展。　　2.将超高效液相色谱串联质谱（ultra-high-pressure liquid chromatography tandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS)）与统计筛选相结合，靶向分析研究Health和AIS以及ICH的158种类二十烷酸在血浆中的含量差异，鉴定患者的代谢生物标志物，再使用受试者工作曲线结合曲线下面积等参数进一步评估差异代谢物的诊断潜力，并结合脂肪酸代谢通路寻找脑卒中相关的脂肪酸代谢关键酶，期望能在蛋白水平上对类二十烷酸在脑卒中的发生机制研究提供新的依据。　　方法：　　1.样本收集及保存　　样品收集在广东医科大学附属医院神经内科进行。该研究得到广东医科大学附属医院伦理委员会的批准。本研究按照严格的纳入和排除标准收集了122例健康志愿者和197例缺血性脑卒中患者以及42例脑出血患者的血液作为实验研究对象。血液样本用含肝素的抗凝管收集，为避免反复冻融，分离血浆后被分装成200μl/管，置于-80℃冰箱保存。　　***-MS/MS分析　　随机挑选66位健康人，63位AIS患者和35位ICH患者的血浆样品进行衍生化处理，这些患者均未接受药物干预。衍生试剂选用的是BSTFA+TMCS（99：1）。内标选用的是十六烷酸，用于评价仪器稳定性的质控样品由内标的衍生物构成，衍生方法与样品一致。每进样十个血浆样品紧接着进样一个质控样品。通过查阅文献及优化梯度升温程序建立GC-MS/MS分析人血浆代谢物的方法，通过GC-MS/MS分析方法确定代谢物即化合物后，由***数据库鉴定（相似度在80%及以上）并结合在线数据库HMDB进行辅助定性。之后经过多维统计分析和t检验选择候选标志物，然后分析计算候选标志物的AUC，通过特异性和灵敏度评估候选标志物的有效性，以达到诊断和区分卒中分型，最后对这些候选生物标志物进行通路分析。　　结果：　　1.气相色谱串联质谱分析　　1.1用气相色谱串联质谱法分析Health组与AIS组，ICH组的血浆样品，分离出来的组份通过与标准谱库对比，以相似度大于等于80%为原则，从血浆中鉴定出54种化合物，通过多维统计分析和相关统计学检验，筛选出8种化合物可用于初步区分Health组和AIS组;13种化合物可用于初步区分Health组和ICH组以及9种化合物可用于初步区分AIS组和ICH组。　　1.2采用了OPLS-DA（正交偏最小二乘鉴别分析）模型成功建模（R2Y和Q2都大于0.5），R2Y表示Y变量的解释率，Q2（cum）表示模型的预测能力，从理论上讲，Q2（cum）和R2Y值越接近1，模型越好。该模型显示了Health组和AIS组以及Health组和ICH组之间明显的分离趋势，此模型中还计算了各个化合物的VIP（可变重要性投影）值。使用以下标准选择候选标记：（1）可变重要性投影的值gt;1;（2）p值（FDR）lt;0.05。结果表明在AIS组和Health组之间：丁酸，L-异亮氨酸，肌醇，谷氨酰胺，苯丙氨酸和半胱氨酸在AIS组显著增加;甘氨酸和缬氨酸在Health组显著增加。在Health组和ICH组两者之间：鸟苷酸，戊二酸，甘氨酸，磷酸，丝氨酸，半胱氨酸，肌醇，亮氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，9,12-十八碳二烯酸以及D-果糖在ICH组是减少的，异亮氨酸在ICH组增加。因此，确定了区分Health组和AIS组以及Health组和ICH组的主要候选标记。　　1.3针对以上的候选生物标志物的通路富集分析表明：用于区分Health组和AIS组的候选标记主要集中在四个代谢途径中，乙醛酸和二羧酸的代谢;谷胱甘肽代谢;甘氨酸，丝氨酸和苏氨酸的代谢;苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸的生物合成。用于区分Health组和ICH组的候选标记主要集中在四个代谢途径中：氨基酰基-tRNA生物合成;苯丙氨酸代谢;甘氨酸，丝氨酸和苏氨酸的代谢;苯丙氨酸，酪氨酸和色氨

关键词：脑卒中发病机制血浆代谢生物标志物

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基于TLR4、NF-κB蛋白表达探究血府逐瘀合剂对内皮损伤大鼠血管重构及血浆代谢作用机制

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辽宁中医药大学学报 2023年第4期25卷 25-29页

作者：肖遥周健华胡有志湖北省中医院湖北武汉430061

目的基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)蛋白表达探究血府逐瘀合剂对内皮损伤大鼠血管重构及血浆代谢的作用机制。方法选取60只健康清洁级大鼠,将其分为正常组、模型组、血府逐瘀... 详细信息

目的基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)蛋白表达探究血府逐瘀合剂对内皮损伤大鼠血管重构及血浆代谢的作用机制。方法选取60只健康清洁级大鼠,将其分为正常组、模型组、血府逐瘀合剂组、辛伐他丁组、TLR4抑制剂组和NF-κB抑制剂组,10只/组,除正常组外均建立血管内皮损伤大鼠模型,血府逐瘀合剂组采用血府逐瘀合剂水煎液进行3 mL/d灌胃,辛伐他丁组采用3 mL/d辛伐他丁进行腹腔注射,TLR4抑制剂组采用3 mg/kg腹腔注射TLR4抑制剂(TAK-242)溶液,NF-κB抑制剂组采用腹腔注射NF-κB抑制剂(PDTF)溶液3 mg/d,模型组与正常组每日采用蒸馏水3 mL灌胃处理,采用ELISA检测血清中白介素1(interleukin-1,IL-1β)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、内皮生长因子(vascular endothelial gowth factor,VEGF)水平,采用Image pro-Plus 8.0图像分析软件进行各组血管壁面积、管腔面积、血管总面积计算,采用Western blot检测TLR4、NF-κB蛋白,免疫组化检测单核细胞趋化因子-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)蛋白表达,免疫组化检测单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)水平。结果与正常组比较,模型组IL-1β、IL-6表达升高,VEGF表达降低(P<0.05);与模型组比较,血府逐瘀合剂组IL-1β、IL-6表达降低,VEGF表达升高(P<0.05);与血府逐瘀合剂组比较,辛伐他丁组IL-1β、IL-6表达升高,VEGF表达降低(P<0.05);血府逐瘀合剂组、TLR4抑制剂组、NF-κB抑制剂组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。正常组血管壁内膜完整,无脱落现象,中膜、外膜及血管周围组织均无明显变化,模型组血管外膜厚度明显增加,血管内膜增生严重且面积较大,血府逐瘀合剂组、TLR4抑制剂组、NF-κB抑制剂组内膜面积与外膜厚度明显减小,外膜增生程度降低,辛伐他丁组血管中膜厚度、面积均有轻度减小。与正常组比较,模型组大鼠血管壁面积、管腔面积、血管总面积升高(P<0.05);与模型组比较,血府逐瘀合剂组血管壁面积、管腔面积、血管总面积降低(P<0.05);与血府逐瘀合剂组比较,辛伐他丁组血管壁面积、管腔面积、血管总面积升高(P<0.05);血府逐瘀合剂组、TLR4抑制剂组、NF-κB抑制剂组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血管内TLR4、NF-κB蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,血府逐瘀合剂组血管内TLR4、NF-κB蛋白表达降低(P<0.05);与血府逐瘀合剂组比较,辛伐他丁组血管内TLR4、NF-κB蛋白表达升高(P<0.05);血府逐瘀合剂组、TLR4抑制剂组、NF-κB抑制剂组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血管内MCP-1吸光度表达升高(P<0.05);与模型组比较,血府逐瘀合剂组血管内MCP-1吸光度表达降低(P<0.05);与血府逐瘀合剂组比较,辛伐他丁组血管内MCP-1吸光度表达升高(P<0.05);血府逐瘀合剂组、TLR4抑制剂组、NF-κB抑制剂组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论血府逐瘀合剂对于降低大鼠血清中IL-1β、IL-6水平,提高VEGF因子水平,减轻内皮损伤大鼠的血管壁面积、管腔面积、血管总面积,降低血管内TLR4、NF-κB蛋白表达,降低大鼠血管内MCP-1吸光度等均具有一定积极影响。

关键词： TLR4 NF-κB 血府逐瘀合剂内皮损伤血管重构血浆代谢

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子宫肌瘤大鼠血浆的代谢组学研究

子宫肌瘤大鼠血浆的代谢组学研究

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第三届中药现代化新剂型新技术国际学术会议暨第二届医院中药药学学术研讨会

作者：靳冉李建荣颜贤忠吴子伦北京中研同仁堂医药研发有限公司北京 100075 中国中医科学院中药研究所北京 100700 国家生物医学分析中心北京 100850

目的:研究子宫肌瘤大鼠造模过程中血浆代谢表型的动态变化及其与组织病理和免疫组化指标的相关性，探讨代谢组学在动物模型筛选中的应用。方法:于造模过程中四个不同时间点收集大鼠血浆，采用基于核磁共振谱(Nuclear Magnetic Resonance... 详细信息

目的:研究子宫肌瘤大鼠造模过程中血浆代谢表型的动态变化及其与组织病理和免疫组化指标的相关性，探讨代谢组学在动物模型筛选中的应用。方法:于造模过程中四个不同时间点收集大鼠血浆，采用基于核磁共振谱(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)的代谢组学方法，测定其NMR，同时进行组织病理学检查和免疫组化相关指标的测定。结果：造模不同阶段模型组大鼠血浆的代谢谱与空白组比较均有显著差异，且随造模时间的延长，各模型组大鼠血浆的代谢谱各有不同，与子宮组织病理学和免疫组化指标改变相一致。结论:子宫肌瘤大鼠血浆代谢谱的谱峰变化能反映造模不同阶段动物的整体病生理状态，且其敏感性优于常规病理检测，代谢组学可作为一种具有良好发展前景的体内动物模型早期筛选的方法。

关键词：子宫肌瘤免疫组化血浆代谢组织病理动物模型

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补饲对放牧滩羊生长性能、血清生化及代谢组的影响

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草业学报 2025年第6期34卷 122-138页

作者：徐倩郭帅张亮亮王占军辛国省宁夏大学生命科学学院宁夏饲料工程技术研究中心宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室宁夏大学动物科技学院宁夏昊标检测服务研究院宁夏农林科学院林业与草地生态研究所

本试验旨在探究补饲水平对放牧滩羊生长性能、血液生化、抗氧化及血液代谢组的影响。选取体况一致、体重相近[（23.38±0.70） kg]的3月龄去势公滩羊24只，随机分为4组。NC组（对照组）只放牧，LE（低能量组）、ME（中能量组）、HE... 详细信息

本试验旨在探究补饲水平对放牧滩羊生长性能、血液生化、抗氧化及血液代谢组的影响。选取体况一致、体重相近[（23.38±0.70） kg]的3月龄去势公滩羊24只，随机分为4组。NC组（对照组）只放牧，LE（低能量组）、ME（中能量组）、HE（高能量组）组（试验组）先补饲精料再放牧，各组补饲精料消化能水平分别为15.91(LE)、17.63(ME)和18.17(HE) MJ·kg-1。预试期12 d，正试期90 d。结果显示：1）与NC和LE组相比，HE、ME组滩羊的末重、平均日增重均显著增加（P<0.05）。2)ME组的经济效益高于其他组。3）滩羊血液中空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯、肌酐含量，天门冬氨酸氨基转移酶活性和低密度脂蛋白胆固醇浓度随着饲粮能量水平的上升呈增加趋势，其中HE组的甘油三酯含量显著高于其他组（P<0.05）。4）能量水平可显著影响抗氧化能力，HE组丙二醛含量显著高于NC和LE组（P<0.05）,ME组总抗氧化能力显著高于NC组（P<0.05）,NC组谷胱甘肽过氧化物酶活性显著高于LE和ME组（P<0.05）。5）血浆代谢组学分析共鉴定出17种代谢物差异显著，富集的代谢通路主要有嘌呤代谢、核苷酸代谢、初级胆汁酸生物合成、花生四烯酸代谢、胆固醇代谢、酪氨酸代谢等。综上所述，提高能量水平可有效提升放牧滩羊的生长性能，这种改善可能是通过调节嘌呤代谢、花生四烯酸代谢等途径及其中间代谢产物来调控机体的抗氧化和免疫功能。在本试验条件下，精料补饲水平为0.45 kg·d-1时显示出较好的效果。

关键词：能量人工草地宁夏滩羊放牧抗氧化血浆代谢

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过瘤胃赖氨酸对采食刺梨果渣基础日粮山羊生长与血液生化指标的影响

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饲料工业 2025年第7期46卷 80-84页

作者：许潇易琼郭子義宋昕宇吴文旋贵州大学高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室动物科学学院动物营养与饲料科学研究所贵州贵阳550025 贵州省生化工程中心贵州贵阳550025 贵州大学乡村振兴研究院贵州省山地畜禽养殖污染控制与资源化技术工程实验室贵州贵阳550025

试验旨在研究添加过瘤胃赖氨酸(RP-Lys)对采食高水平(24%)刺梨果渣基础日粮山羊生长与血液生化指标的影响。以24只贵州本地山羊为试验动物,将其随机分为两组(对照组和处理组),每组6个重复,每个重复2只羊。对照组日粮中含24%的刺梨果渣,... 详细信息

试验旨在研究添加过瘤胃赖氨酸(RP-Lys)对采食高水平(24%)刺梨果渣基础日粮山羊生长与血液生化指标的影响。以24只贵州本地山羊为试验动物,将其随机分为两组(对照组和处理组),每组6个重复,每个重复2只羊。对照组日粮中含24%的刺梨果渣,不添加RP-Lys;处理组在对照组的日粮基础上按10 g/kg的比例添加RP-Lys。结果显示,两组肉羊干物质采食量、平均净增重、平均日增重、料重比差异均不显著(P>0.05);两组日粮能量、粗蛋白、有机物消化率差异不显著(P>0.05);两组肉羊血液白蛋白、谷草转氨酶、尿素、三酰甘油、低密度脂蛋白含量差异不显著(P>0.05),但处理组葡萄糖、总蛋白、高密度脂蛋白水平显著高于对照组(P<0.05)。由此可见,刺梨果渣日粮中添加RP-Lys有利于改善血浆代谢,但对提高肉羊生长性能的效果有限。

关键词：刺梨果渣生长性能养分消化率血浆代谢肉羊

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发酵玉米蛋白粉对犊牛生长、血液指标、瘤胃菌群和营养物质消化的影响

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东北农业大学学报 2019年第2期50卷 46-55页

作者：姜鑫崔梓琪刘鑫张立阳刘帅张永根东北农业大学动物科学技术学院哈尔滨150030

选取20头健康荷斯坦公犊,经两周适应期后,将犊牛按体重和日龄随机分为两组:①对照日粮组(未处理基础日粮);②FCGM日粮组(50 kg FCGM·kg^(-1)基础日粮;DM基础),试验期42 d。结果表明,日粮中添加FCGM显著(P<0.05)提高犊牛平均日... 详细信息

选取20头健康荷斯坦公犊,经两周适应期后,将犊牛按体重和日龄随机分为两组:①对照日粮组(未处理基础日粮);②FCGM日粮组(50 kg FCGM·kg^(-1)基础日粮;DM基础),试验期42 d。结果表明,日粮中添加FCGM显著(P<0.05)提高犊牛平均日增重和饲料效率;饲喂FCGM犊牛血浆TP、CAT、T-SOD、T-AOC、IgA和IgG含量显著(P<0.05)增加,UN和CHOL含量显著降低(P<0.05);试验组黄色瘤胃球菌、白色瘤胃球菌、栖瘤胃普雷沃氏菌、溶纤维丁酸弧菌和原虫相对丰度均显著(P<0.05)高于对照组;日粮中添加FCGM显著(P<0.05)增加CP和NDF表观消化率。日粮中添加FCGM可提高犊牛生长性能,改善血浆生化指标,提高犊牛抗氧化和免疫能力,调节瘤胃微生物菌群结构,促进营养物质消化。

关键词：发酵玉米蛋白粉犊牛生长性能血浆代谢瘤胃微生物菌群营养物质消化率

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荧光标记法测定大鼠血浆中海胆黄多糖研究

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药物生物技术 2012年第4期19卷 343-347页

作者：康迪滕再进柯梦云郁洁王慧沈卫阳奚涛周长林中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 南京圣和药业有限公司江苏南京210038 中国药科大学基础部江苏南京210009

通过FITC荧光标记海胆黄多糖SEP,研究大鼠尾静脉注射给药SEP的血浆代谢。结果表明,荧光标记的海胆黄多糖SEP-Tyr-FITC纯度可达99%。与空白对照组及SEP组相比,SEP-Tyr-FITC组小鼠脾细胞增殖无显著差异。其在大鼠体内的血浆清除半衰期为0.... 详细信息

通过FITC荧光标记海胆黄多糖SEP,研究大鼠尾静脉注射给药SEP的血浆代谢。结果表明,荧光标记的海胆黄多糖SEP-Tyr-FITC纯度可达99%。与空白对照组及SEP组相比,SEP-Tyr-FITC组小鼠脾细胞增殖无显著差异。其在大鼠体内的血浆清除半衰期为0.24 h,消除速率常数(Ke)为2.867,给药后的最大血药浓度(cmax)为860μg/mL,消除半衰期(t1/2)为0.24 h,药-时曲线下面积(AUCt)为366.4 h·μg/mL。所用方法的定量下限为0.02 mg/mL,标准曲线线性范围为0.02～1.0 mg/mL。最低定量限(LLOQ)、低、中、高4个浓度批内变异系数和批间变异系数均小于15%,相对回收率均在85%～115%之间。同时,各浓度SEP血浆样品处理前或处理后室温放置6 h、-20℃冷冻融解1次稳定性良好,相对标准偏差均小于10%。

关键词：海胆黄多糖荧光标记异硫氰酸荧光素大鼠血浆代谢

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DAF的原核表达，重折叠，ELISA检测系统的建立，及其在大鼠体内的代谢和生物学活性的测定

DAF的原核表达，重折叠，ELISA检测系统的建立，及其在大鼠体内的...

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作者：徐江第四军医大学

学位级别：博士

本研究的主要目的是表达足量的可溶性促衰变因子(DAF)蛋白用于动物试验,测定DAF在血清中的代谢规律和对补体系统的抑制效果。在本研究中,充分采用了如PCR、载体构建、转化、蛋白诱导表达和液相色谱等技术得到了高度纯化的蛋白质。进而... 详细信息

本研究的主要目的是表达足量的可溶性促衰变因子(DAF)蛋白用于动物试验,测定DAF在血清中的代谢规律和对补体系统的抑制效果。在本研究中,充分采用了如PCR、载体构建、转化、蛋白诱导表达和液相色谱等技术得到了高度纯化的蛋白质。进而采用单克隆抗体技术,制备了20株抗-大鼠DAF(rDAF)的单克隆抗体,建立了检测可溶性rDAF的ELISA系统(最低浓度下限可达10 ng/ml)和Western blot用单抗株(可检出40 ng rDAF蛋白)。通过大鼠的在体试验证明rDAF在大鼠体内代谢非常快且对大鼠血浆补体抑制程度很小,其本身并不适合作为一种补体抑制剂使用。除此以外,还完成了以下两个工作:建立了新的高效折叠复性DAF蛋白的方案;探索了可溶性表达DAF的可能性并揭示了NusA-DAF融合蛋白形成可溶性包涵体的原因。

关键词： DAF 包涵体可溶性表达 NusA 单克隆抗体蛋白复性血浆代谢

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纳米脂质体槲皮素对肝损伤大鼠保肝作用的研究

纳米脂质体槲皮素对肝损伤大鼠保肝作用的研究

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作者：张洋中南大学

学位级别：博士

目的肝脏易发生各种代谢性、感染性疾病以及原发性和继发性肿瘤。我国是肝病高发区,有十分之一多的人口感染肝炎,而乙型肝炎表面抗原阳性患者比阴性者显著增高。肝炎导致的原发性肝癌是在我国肿瘤死因中占第二位的常见病。因此研究肝靶... 详细信息

目的肝脏易发生各种代谢性、感染性疾病以及原发性和继发性肿瘤。我国是肝病高发区,有十分之一多的人口感染肝炎,而乙型肝炎表面抗原阳性患者比阴性者显著增高。肝炎导致的原发性肝癌是在我国肿瘤死因中占第二位的常见病。因此研究肝靶向性治疗药物具有重要意义。使用特殊的载体是目前实现肝靶向药物运输的主要方式,而纳米载体可以改变药物的体内分布,显示出体内分布的靶向性。载药纳米颗粒进入人体内迅速被网状内皮系统(RES)摄取,而RES主要分布于肝,因而可借此种被动靶向作用达到肝靶向给药的目的。脂质体(liposome)是磷脂依靠疏水缔合作用在水中自发形成的一种分子有序组合体,为多层囊泡结构,每层均为类脂双分子膜,层间和脂质体内核为水相,双分子膜为油相。载药脂质体纳米粒具有与细胞结构相似,有生物膜的特性和功能,进入体内被生物降解,免疫原性小、毒性极低;已广泛用于运载水溶性和脂溶性药物。槲皮素(Quercetin)及其衍生物是自然界分布最广的一种黄酮类化合物,其具有抗癌、抗炎症、抗纤维化、抗氧化和清除自由基、抗病毒、逆转某些肿瘤的耐药性、扩张血管、降低血压的药理活性,并对机体免疫有增强作用;它可对肝癌细胞显出较强的细胞毒作用,能有效抑制肝癌细胞的生长;对肝损伤具有良好的保护作用及一定的抗肝纤维化的作用,在治疗肝脏疾病中有着广阔的应用前景。但由于其普通制剂不溶于水,肝靶向性差,直接应用可影响凝血功能,限制了其在肝病治疗中的应用。根据上述思想,以纳米脂质体为药物载体包裹中药成分槲皮素制成纳米脂质体槲皮素,改善给药系统水溶性,实现肝靶向给药,使纳米药物在肝脏中更加聚集。本课题目的是首先制备出水溶性较好的纳米脂质体槲皮素,验证其肝脏靶向性及体内代谢的药效成分,然后应用于肝损伤模型动物考察其对肝脏的保护作用。方法采用高压均质-喷雾干燥法制备纳米脂质体槲皮素,使用透射电镜、粒度仪观察其形态及测量其粒径,HPLC法测量药物包封率。使用CCL4加猪血清配合乙醇饮食建立复合大鼠肝损伤模型,同时建立测定模型大鼠血浆及各组织中槲皮素的HPLC法,肝损伤大鼠分组后分别给予槲皮素和纳米脂质体槲皮素,观察各组模型大鼠体内槲皮素的时间空间分布,并验证其靶向性。给予正常大鼠纳米脂质体槲皮素,使用高效液相色谱-质谱法(LCMS)分析大鼠血浆中的药物代谢产物是否存在药效成分,为药效学研究提供依据。将肝损伤模型大鼠按体重随机分为正常对照组、损伤模型对照组、纳米脂质体槲皮素组、槲皮素药物组,空白纳米脂质体组后按不同剂量给药,比较各组大鼠血清ALT、AST、TBiLi、TBA、TP;各组大鼠肝脏系数;各组大鼠肝脏的病理改变;各组大鼠肝脏MDA、GSH-Px、SOD、LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-C。同时通过各组大鼠肝脏Bcl-2和Bax蛋白表达的比较,探讨纳米脂质体槲皮素保护肝脏的机制。结果采用本实验方法制得的纳米脂质体槲皮素粒径为123±31nm,纳米粒子呈类圆形,表面有厚度均匀的包衣包裹,且粒度分布均匀。为测定槲皮素纳米药物所建立的HPLC法色谱分离良好,精密度、重现性、方法回收率良好。纳米脂质体槲皮素的包封率为91.18±0.78%,载药量为0.61±0.08mg/mg。本实验所建立的复合肝损伤模型大鼠达到实验要求。用于测定血浆及各组织中槲皮素的HPLC法色谱分离及专属性良好,精密度、重现性、方法回收率良好。槲皮素在肝损伤大鼠体内的药物半衰期为10min,而纳米脂质体槲皮素在大鼠体内的药物半衰期达到2h,脂质体延长了槲皮素在大鼠体内的循环时间,纳米脂质体槲皮素具有一定的缓释性。模型大鼠体内槲皮素由注射纳米药物后5min起即可较浓集于肝,以10min后更为明显,且明显高于对照组(P<0.05),槲皮素被制成纳米药物后提高了其对肝脏、脾脏的趋向性,降低了其对心脏、肾脏的趋向性;纳米脂质体槲皮素较槲皮素有很好的肝靶向性。当纳米脂质体槲皮素药物剂量增加到100mg/kg时,大鼠出现死亡。大鼠血浆中槲皮素代谢产物测定的色谱及质谱条件可满足实验需要,使用液相色谱-质谱联用法可确认大鼠血浆代谢产物中含有槲皮素、柽柳素、异鼠李素等药效成分。纳米脂质体槲皮素组及槲皮素组大鼠的一般状况明显优于损伤模型对照组和空白纳米脂质体组,但较正常对照组稍差,同剂量纳米脂质体槲皮素组在血清AST、ALT、TBiLi、TBA、TP、ALB及肝脏MDA、GSH-Px、SOD、LN、HA、PCⅢ、Ⅳ-C等指标总体较损伤对照组、槲皮素组及空白脂质体纳米药物组有明显的提高。纳米脂质体槲皮素、槲皮素及空白脂质体纳米药物对肝损伤大鼠肝功能保护在AST、ALT、TBiLi、TBA上呈现出由高到低的剂量-效应依赖关系。各组大鼠肝组织光镜观察可见相同剂量的槲皮素纳米脂质体药物组的肝组织病变情况好于槲皮素组和空白脂质体纳米粒组及损伤模型组

关键词：纳米脂质体槲皮素制备体内分布血浆代谢肝脏保护作用

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