检索结果-内蒙古大学图书馆

中国病理生理杂志 2022年第3期38卷 535-542页

作者：袁建玲邵钟铭邹园伍彩霞郑阿秀邢敬慈白建荣揭伟申志华广东医科大学基础医学院病理生理学教研室广东湛江524023 海南医学院急救与创伤研究教育部重点实验室海南海口571199 北京大学深圳医院病理科广东深圳518036

目的:探讨血清反应因子n端剪切片段(SRF-n)对鼻咽癌(nPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制。方法:应用SRF全长(SRF-Full,1~508 aa)、SRF-n(1~254 aa)及阴性对照(nC)慢病毒颗粒感染人nPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检... 详细信息

目的:探讨血清反应因子n端剪切片段(SRF-n)对鼻咽癌(nPC)细胞增殖和迁移能力的影响与机制。方法:应用SRF全长(SRF-Full,1~508 aa)、SRF-n(1~254 aa)及阴性对照(nC)慢病毒颗粒感染人nPC细胞系6-10B,经嘌呤霉素抗性筛选结合Western blot检测Flag标签化融合蛋白的表达获得单克隆细胞株,CCK-8实验分析细胞活力的改变,划痕损伤修复实验和Transwell实验分析细胞迁移能力,细胞-基质黏附实验分析细胞黏附能力,Western blot检测细胞增殖相关蛋白增殖细胞核抗原(PCnA)和上皮-间充质转化(EMT)相关指标的表达,双萤光素酶报告基因实验检测SRF-Full和SRF-n对Snail1启动子的调节效应。结果:成功用SRF-Full、SRF-n及nC慢病毒感染6-10B细胞,经嘌呤霉素抗性筛选结合Flag标签蛋白的表达获得相应的单克隆细胞株,分别标记为6-10B^(SRF-Full)、6-10B^(SRF-n)和6-10B^(nC)。与6-10B^(nC)细胞相比,6-10B^(SRF-Full)细胞活力、迁移能力和与基质的黏附能力均显著增强(P<0.01),而6-10B^(SRF-n)细胞较6-10B^(SRF-Full)细胞活力、迁移能力及黏附能力均显著下降(P<0.01)。6-10B^(SRF-Full)细胞中波形蛋白(vimentin)、神经钙黏素(n-cadherin)和Snail1的表达水平较6-10B^(nC)细胞显著升高(P<0.01),上皮钙黏素(Ecadherin)表达水平显著下降(P<0.01);而6-10B^(SRF-n)细胞中vimentin、n-cadherin和Snail1的表达水平较6-10B^(SRF-Full)细胞显著下降(P<0.05),E-cadherin表达水平显著上升(P<0.05)。双萤光素酶活性实验结果表明,与nC相比,SRFFull显著激活Snail1启动子(P<0.001);与SRF-Full相比,SRF-n显著抑制Snail1启动子活性(P<0.01)。结论:SRF-Full促进而SRF-n抑制nPC细胞的增殖和迁移;SRF-n抑制Snail1启动子活性而介导nPC的EMT;SRF-n具有潜在的抗nPC作用。

关键词：鼻咽癌血清反应因子n端片段细胞增殖细胞迁移上皮-间充质转化

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血清反应因子全长及n端片段过表达慢病毒载体的构建及其对心脏干细胞分化的影响

引用

临床与实验病理学杂志 2017年第10期33卷 1109-1115页

作者：雷洪王可可哈艳平贾亚楠李汝佳申志华郭峻莉揭伟广东医科大学基础医学院病理学系湛江524023 广东医科大学基础医学院病理生理学教研室湛江524023 海南医学院第一附属医院心血管研究所海口570102

目的探讨血清反应因子全长(SRF-Full)及n端片段(SRF-n,1-254aa)对TGF-β1诱导c-Kit+心脏干细胞(cardiac stem cell,CSC)分化的影响。方法从c DnA文库扩增大鼠SRF-Full及SRF-n表达序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV358(Ubi-MCS-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin),转化感受态细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将SRF-Full及SRF-n过表达质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装慢病毒。磁激活细胞分选法分离乳SD大鼠c-Kit+CSC,将SRF-Full及SRF-n过表达慢病毒感染CSC并经TGF-β1诱导,定量PCR分析下游分化基因mRnA水平的变化。结果成功扩增出SRF-Full及SRF-n编码序列并正确连接入线性化载体,获得的阳性转化子经测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为2×108TU/m L的慢病毒颗粒,Western blot检测到预期Flag融合蛋白。重组慢病毒感染CSC后细胞核中见e GFP信号。TGF-β1诱导CSC出现心肌细胞分化基因(nkx2.5、Gata4、c Tn I)及平滑肌细胞分化基因(SM22α)的表达,内皮细胞分化(v WF)无影响,SRF-Full促进CSC的心肌细胞分化,而SRF-n则抑制这种分化。结论成功构建SRFFull及SRF-n过表达重组慢病毒质粒。SRF-Full促进而SRF-n减弱TGF-β1诱导CSC的心肌细胞分化。

关键词：血清反应因子血清反应因子n端片段质粒构建心脏干细胞细胞分化

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