检索结果-内蒙古大学图书馆

中国循证儿科杂志 2016年第1期11卷 61-64页

作者：陈芳何春卉邓力黎晓丹广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心呼吸科广州510623

目的探讨2周龄BALB/c小鼠在EV71感染后,不同分期肺和脑组织中血清淀粉样p物质(SAp)表达水平。方法 2周龄BALB/c小鼠按笼号分组,实验组35只,对照组29只。实验组予1×10~7TCID50·m L^(-1)的EV71病毒液0.1 mL腹腔注射,对照组腹腔... 详细信息

目的探讨2周龄BALB/c小鼠在EV71感染后,不同分期肺和脑组织中血清淀粉样p物质(SAp)表达水平。方法 2周龄BALB/c小鼠按笼号分组,实验组35只,对照组29只。实验组予1×10~7TCID50·m L^(-1)的EV71病毒液0.1 mL腹腔注射,对照组腹腔注射等容量pBS液。观察小鼠的活动状态、皮疹、反应性、毛色、肢体活动及瘫痪情况等,依据实验组感染症状分为5期:精神反应期(建模后第2天)、部分瘫痪期(第3天)、全身瘫痪期(第3天)、死亡(第3~4天)和恢复期(第10天仍存活)。分别于5个分期称重实验组和对照组小鼠后处死,采集肺和脑组织以ELISA法测定SAp水平,分析不同分期SAp水平变化趋势。结果 1实验组建模后第2天均出现精神萎靡、活动减少,第3天部分小鼠出现肢体运动不协调、部分肢体瘫痪,甚至全身瘫痪至死亡,提示EV71感染小鼠模型建立成功。2建模后实验组精神反应期和对照组的体重差值差异无统计学意义,在部分瘫痪期、全身瘫痪期、死亡期和恢复期,两组体重差值的差异均有统计学意义。3实验组肺和脑组织中SAp水平在5个分期表达量均与对照组差异有统计学意义(p<0.05),实验组脑组织SAp水平是对照组的2~9倍,肺组织SAp水平是对照组的1.5~8倍。实验组部分瘫痪期、全身瘫痪期和死亡期脑组织SAp水平均显著高于精神反应期(p<0.05),肺组织SAp水平与精神反应期差异无统计学意义;脑和肺组织恢复期SAp水平均较精神反应期显著下降,但高于对照组水平。结论 SAp在EV71感染后小鼠的脑和肺组织中高表达,可能作为EV71感染后病情严重程度及预后判断的指标。

关键词：肠道病毒71型血清淀粉样p物质脑组织肺组织

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血清淀粉样p物质对细胞炎症反应以及氧化应激的影响及机制

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中国动脉硬化杂志 2016年第5期24卷 447-451页

作者：刘季晨习丹赵金珍胡晶赖文岩郭志刚南方医科大学南方医院惠侨医疗中心心血管病区广东省广州市510515

目的观察不同浓度的血清淀粉样p物质(SAp)对炎症免疫及氧化应激的影响,并探讨其可能的机制。方法将RAW264.7细胞分成对照组、SAp(1.25 mg/L、2.5 mg/L、5 mg/L)组,不同浓度刺激24 h后,流式细胞术测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、Fcγ受体表... 详细信息

目的观察不同浓度的血清淀粉样p物质(SAp)对炎症免疫及氧化应激的影响,并探讨其可能的机制。方法将RAW264.7细胞分成对照组、SAp(1.25 mg/L、2.5 mg/L、5 mg/L)组,不同浓度刺激24 h后,流式细胞术测细胞间黏附分子1(ICAM-1)、Fcγ受体表达量,RT-pCR或ELISA检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)及ICAM-1的表达。Western blot检测炎症相关脾酪氨酸蛋白激酶(Syk)、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p ERK1/2)的表达。结果 SAp与RAW264.7细胞共同孵育24 h后,SAp作用无论在基因表达水平还是在蛋白表达水平,均可促进炎症因子IL-1β、TNF-α、ICAM-1和活性氮NO的分泌(p<0.05),且随浓度的增加而增加;机制研究发现SAp对细胞Fcγ受体、p ERK1/2的表达无明显影响,但SAp可剂量依赖增加Fcγ受体下游通路蛋白Syk的表达量(p<0.001)。结论 SAp与Fcγ受体结合后,可增加Syk的表达,增加炎症免疫和氧化应激反应。

关键词：血清淀粉样p物质巨噬细胞炎症免疫反应氧化应激

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血清淀粉样p物质对巨噬细胞炎症反应以及氧化应激的影响及机制

血清淀粉样P物质对巨噬细胞炎症反应以及氧化应激的影响及机制

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作者：刘季晨南方医科大学

学位级别：硕士

第一部分血清淀粉样p物质对巨噬细胞炎症反应以及氧化应激的影响及机制研究背景动脉粥样硬化性心血管疾病(Atherosclerotic cardiovascular disease, ASCVD)是当今世界发病率乃至死亡率最高的疾病之一。动脉粥样硬化(atherosclerosis, ... 详细信息

第一部分血清淀粉样p物质对巨噬细胞炎症反应以及氧化应激的影响及机制研究背景动脉粥样硬化性心血管疾病(Atherosclerotic cardiovascular disease, ASCVD)是当今世界发病率乃至死亡率最高的疾病之一。动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)则是ASCVD最基本的的病理生理学基础,动脉粥样硬化的具体发生机制,现仍未完全明确,目前最公认的主要是血栓形成学说、脂质浸润学说、损伤反应学说和炎症学说等,无论是脂质沉积、炎症反应、氧化应激等都是AS形成的主要的病理特征,也是促进AS发生发展的重要因素。血脂代谢异常是其重要的危险因素之一,体内氧化应激反应的增加,产生大量的活性氧、活性氮离子,促进低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)的氧化修饰,形成的氧化低密度脂蛋白(oxdized low-density lipoprotein, Ox-LDL)极易损伤内皮功能、促进胆固醇的内皮下沉积和激活巨噬细胞迁移与吞噬,最终形成泡沫细胞并激活进一步的炎症反应,加速AS的演变。多项研究证明,炎症、免疫反应参与了动脉粥样硬化的形成与发展的各个阶段,白介素(interleukins, IL)、干扰素(interferons, IFN)、肿瘤坏死因子(tumornecrosis factor, TNF)等炎症因子在粥样斑块中有表达,而且几乎所有与动脉粥样硬化发生发展相关的细胞均可以分泌细胞因子,并且对相应的细胞因子产生免疫应答,这也是炎症、免疫反应成为影响AS进程的重要因素之一,也是防治AS的重要靶点之一。血清淀粉样p (Serum amyloid p, SAp)物质与C反应蛋白(C reactive protein,CRp)和正五聚蛋白3(pentraxin 3, pTX3)同属正五聚体家族,它们与炎症免疫反应有着不可分割的联系。最初SAp是作为一种淀粉样沉积蛋白为人们所认识,认为其在系统性淀粉样变性疾病的发生发展中有着重要作用,后来,研究逐渐发现SAp参着与体内的固有免疫、炎症反应、淀粉样变等多种活动,近年来SAp在心血管方面的作用也渐渐为人们所认识。研究发现,冠心病患者血液中SAp的浓度要明显高于正常人,在不稳定性心绞痛的患者中尤为显著,但是其在心血管疾病中的具体病理生理作用却并不十分明确。研究目的通过不同浓度的SAp作用RAW264.7细胞,观察SAp对RAW264.7分泌炎症因子、产生氧化应激产物等的影响,并且观察其对炎症相关的机制蛋白的影响,探寻SAp对炎症免疫反应作用的可能机制。研究方法1.细胞培养与实验分组：细胞接种于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的DMEM完全培养基,在每次实验前将巨噬细胞密度调整为1×10+个／孔,加入6孔板中,无血清培养基饥饿24h后,对照组不予以处理,SAp组加入不同浓度SAp刺激24h后,收取样本检测。实验分为4组：1)空白对照组,2)SAp 1.25ug/ml组,3)SAp 2.5ug/ml组,4)SAp 5ug/ml组2.不同浓度的SAp对RAW264.7细胞炎症反应和氧化应激的影响用不同浓度的SAp作用RAW264.7细胞24h后,收集细胞上清,用ELISA检测细胞上清炎症因子白介素1-β(interleukin-1β)、肿瘤坏死因子-a(Tumor Necrosis Factor-a, TNF-a)以及氧化应激指标一氧化氮(Nitric Oxide, NO)的分泌,用流式细胞术检测细胞表面细胞间黏附分子-1 (intercellular adhesion molecule 1, ICAM-1)及炎症相关Fcy受体的表达,并用RT-pCR复测IL-1β、 TNF-a及ICAM-1 mRNA的表达。3.不同浓度的SAp对炎症相关机制蛋白的影响用不同浓度的SAp作用RAW264.7细胞24h后,RIpA裂解液裂解细胞提取蛋白,用蛋白质印迹法(Western Blot)检测Fcγ受体通路下游蛋白脾酪氨酸蛋白激酶(spleen tyrosine kinase, Syk)的表达,以及炎症相关的MApK家族蛋白细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase, ERK 1/2)、磷酸化ERK1/2 (pERK)的表达。4.统计学处理所有计量资料均以均数±标准差(x±s)表示,并采用SpSS20.0统计软件进行两样本均数比较的独立样本t检验分析,多组间总体均数比较,在方差齐时采用单向方差分析(one-way ANO VA),方差不齐时采用Welch校正检验。多个样本均数间的多重比较方差齐时采用LSD法检验,方差不齐时采用Dunnett'

关键词：动脉粥样硬化血清淀粉样p物质炎症免疫反应普罗布考术后再狭窄

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血清淀粉样p物质在牙周炎中的作用研究

血清淀粉样P物质在牙周炎中的作用研究

引用

作者：梁栋梁广州医科大学

学位级别：硕士

背景牙周炎是指发生在牙周支持组织(牙槽骨、牙周膜、牙龈和牙骨质)的慢性炎症性反应,临床表现为牙龈出血、牙周袋形成、牙槽骨吸收、牙齿松动和移位,最终导致牙齿脱落,严重影响患者美观和咀嚼功能,降低患者生存质量。牙周炎的始动因子... 详细信息

背景牙周炎是指发生在牙周支持组织(牙槽骨、牙周膜、牙龈和牙骨质)的慢性炎症性反应,临床表现为牙龈出血、牙周袋形成、牙槽骨吸收、牙齿松动和移位,最终导致牙齿脱落,严重影响患者美观和咀嚼功能,降低患者生存质量。牙周炎的始动因子是细菌,细菌侵入牙周组织后引发宿主一系列的免疫反应是导致牙周炎发展的决定因素。血清淀粉样p物质(Serum Amyloid p Component,SAp)是正五聚体家族中的一员,属于钙依赖性的糖蛋白。SAp主要在肝脏中合成,是小鼠的急性期蛋白,其表达主要由IL-6诱导,在急性炎症中急剧上升,并进入血液循环到达全身。SAp作为循环中的模式识别受体,在先天免疫和炎症性疾病中发挥作用。现已有研究报道SAp与肺纤维化、动脉粥样硬化、系统性红斑狼疮和口腔黏膜炎等自身免疫性疾病和炎症性疾病相关,但目前SAp对牙周炎的作用尚无报导。目的利用SAp基因敲除(SAp-KO)小鼠建立牙周炎模型,探索SAp在牙周炎病理进程中的作用及可能的分子机制,为SAp作为诊断牙周炎的新型生物标记物或免疫治疗药物提供理论基础。材料与方法 1、收集临床上正常人和重度牙周炎患者牙龈组织样本,通过ELISA检测牙龈局部的SAp表达水平,探索SAp的表达与牙周炎的相关性。 2、利用C57小鼠建立牙周炎模型,通过ELISA检测正常组与牙周炎组牙龈、血清和肝脏中SAp的表达水平。 3、利用SAp-KO小鼠和C57小鼠建立牙周炎模型,通过Micro-CT、H&E染色、免疫组化、TRAp染色和RT-qpCR研究SAp对牙周炎表征的作用。 4、利用免疫组化和流式细胞术检测SAp-KO小鼠和C57小鼠牙周炎时牙龈局部巨噬细胞的变化。 5、利用转录组测序技术检测SAp-KO小鼠和C57小鼠牙周炎时牙龈局部差异基因的表达,并进一步通过RT-qpCR验证。结果 1、ELISA结果显示,相比正常人,重度牙周炎患者牙龈局部SAp表达水平明显升高(p<0.001)。 2、相比正常组,C57小鼠牙周炎组牙龈局部SAp表达上调(p<0.01),而血清和肝脏中的表达没有统计学差异。 3、Micro-CT结果显示,与C57小鼠相比,SAp-KO小鼠牙周炎时釉牙骨质界至牙槽嵴顶的距离显著增加(p<0.001)。 4、H&E染色和TRAp染色结果显示,与C57小鼠相比,SAp-KO小鼠牙周炎时牙槽骨破坏更严重,破骨细胞数量增多(p<0.05)。 5、免疫组化结果显示,与C57小鼠相比,SAp-KO小鼠牙周炎时牙龈局部炎性新生微血管数量显著增加(p<0.01),白细胞的数量也增多,但没有统计学差异。 6、RT-qpCR和ELISA结果显示,与C57小鼠相比,SAp-KO小鼠牙周炎时牙龈局部炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α升高(p<0.01)。 7、免疫组化结果显示SAp-KO小鼠牙周炎时牙龈局部巨噬细胞总数比C57小鼠升高(p<0.05),流式细胞术的结果显示SAp-KO小鼠牙龈局部巨噬细胞总数增多,且向M1表型极化(p<0.05)。 8、转录组测序结果显示,与C57牙周炎小鼠相比,SAp-KO牙周炎小鼠牙周组织中Wnt/β-catenin信号通路的抑制因子Sost和Dkk1显著上调,RT-qpCR结果显示了同样的结果(p<0.01)。结论 1、牙周炎时,牙龈局部SAp表达上调。 2、SAp基因敲除后促进了牙周炎的发展。 3、牙周炎时,敲除SAp基因促进局部巨噬细胞的聚集和向M1表型极化。 4、牙周炎时,敲除SAp基因上调了Wnt/β-catenin信号通路抑制因子Sost和Dkk1的表达。

关键词：牙周炎血清淀粉样p物质巨噬细胞 Wnt信号通路

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广西巴马小型猪血清淀粉样p物质基因真核载体构建及细胞转染

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生物技术通报 2011年第11期27卷 101-106页

作者：杨柳潘斌蒋钦杨覃庆飞梁家充兰干球蒋和生郭亚芬广西大学动物科学技术学院南宁530004

血清淀粉样p物质(Serum Amyloid pcomponent,SAp)是一种在进化上高度保守的血清糖蛋白,它可与各种类型的原纤维结合,在免疫应答和炎症反应等多种免疫疾病中发挥作用。以广西巴马小型猪肝组织总RNA为模板,利用RT-pCR技术扩增出相应cDNA片... 详细信息

血清淀粉样p物质(Serum Amyloid pcomponent,SAp)是一种在进化上高度保守的血清糖蛋白,它可与各种类型的原纤维结合,在免疫应答和炎症反应等多种免疫疾病中发挥作用。以广西巴马小型猪肝组织总RNA为模板,利用RT-pCR技术扩增出相应cDNA片段,连接到克隆载体pMD18-T上进行检测,测序结果为675 bp,与GenBank所提供相关序列同源性为100%,并成功构建pEGFp-N1-SAp重组真核表达载体,利用脂质体(Lipofectamine 2000)介导法将重组质粒导入到NIH-3T3细胞中培养,经转染24 h后,置于倒置荧光显微镜下观察,发现含有重组质粒的NIH-3T3细胞中表达出绿色荧光,为进一步研究SAp基因的功能特点及在试验动物相关疾病模型的应用提供条件。

关键词：巴马小型猪血清淀粉样p物质 pEGFp-N1 细胞转染

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血清淀粉样p物质的结构、表达调控及功能

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生命的化学 2001年第4期21卷 283-285页

作者：吴瑾熊思东吴厚生上海基因免疫与疫苗研究中心、复旦大学医学院免疫学教研室

血清淀粉样p物质(serum amyloid p component,SAp),作为一种古老的蛋白质,与C反应蛋白(CRp)构成血清正五聚蛋白家族,其系统发生学非常保守,表明具有重要生理功能.虽然它广泛存在于脊椎动物,并且证明与机体淀粉样病变有关,但它的主要正... 详细信息

血清淀粉样p物质(serum amyloid p component,SAp),作为一种古老的蛋白质,与C反应蛋白(CRp)构成血清正五聚蛋白家族,其系统发生学非常保守,表明具有重要生理功能.虽然它广泛存在于脊椎动物,并且证明与机体淀粉样病变有关,但它的主要正常功能尚不清楚.近年来,随着分子生物学技术的发展,对其三维结构、结合配体及与疾病的关系等方面展开了较为深入细致的研究.本文就这一领域的研究进展作一综述.

关键词：血清淀粉样p物质急性时相蛋白自身免疫淀粉样变

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孕妇血清淀粉样p物质作为神经管缺陷产前标志物的研究

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中国医科大学学报 2019年第10期48卷 883-886页

作者：董乃萱顾卉刘丹魏晓伟马巍马玲袁正伟中国医科大学附属盛京医院卫生部小儿先天畸形重点实验室

目的验证血清淀粉样p物质(SAp)在正常孕妇和有神经管缺陷患儿的孕妇血清中的表达情况,探讨其作为神经管缺陷产前诊断标志物的可能。方法于清晨空腹抽取病例组(12例胎儿患神经管缺陷的孕妇)和对照组(12例胎儿正常的孕妇)外周静脉血5 mL... 详细信息

目的验证血清淀粉样p物质(SAp)在正常孕妇和有神经管缺陷患儿的孕妇血清中的表达情况,探讨其作为神经管缺陷产前诊断标志物的可能。方法于清晨空腹抽取病例组(12例胎儿患神经管缺陷的孕妇)和对照组(12例胎儿正常的孕妇)外周静脉血5 mL后静置离心,抽取上层血清,用Western blotting方法检测SAp表达水平,并计算受试者操作特征(ROC)曲线,评估SAp诊断神经管缺陷的价值。结果在妊娠12~19周、21~28周时,病例组孕妇血清中SAp表达明显下调,差异有统计学意义(p<0.05)。ROC曲线下面积(AUC)=0.770 8(95%CI:0.573 9~0.967 8,p<0.05)。当敏感度为83.33%时,其特异度为66.67%。结论胎儿神经管缺陷的孕妇血清中SAp表达显著降低,提示SAp有作为神经管缺陷的产前诊断标志物的潜在可能。

关键词：血清淀粉样p物质神经管缺陷产前诊断生物标志物

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主动脉夹层患者主动脉壁中血清淀粉样p物质的表达变化及其潜在临床意义

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中国心血管病研究 2024年第7期22卷 594-599页

作者：谭凤娇汪馨蒋丁胜方泽民武汉科技大学附属天佑医院心胸外科湖北省武汉市430081 华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科

目的探讨血清淀粉样p物质(SAp)在主动脉夹层患者主动脉壁组织中的表达变化及其潜在的临床意义。方法收集2020年1月至2021年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科明确诊断为Stanford A型主动脉夹层(TAAD)患者主动脉... 详细信息

目的探讨血清淀粉样p物质(SAp)在主动脉夹层患者主动脉壁组织中的表达变化及其潜在的临床意义。方法收集2020年1月至2021年12月在华中科技大学同济医学院附属同济医院心脏大血管外科明确诊断为Stanford A型主动脉夹层(TAAD)患者主动脉壁标本60例(夹层组),以及心脏移植供体的主动脉壁标本30例(对照组)。用苏木素-伊红(HE)染色和弹性纤维(EVG)染色的方法分析两组主动脉壁组织结构的差异。进一步通过蛋白质免疫印迹(WB),免疫荧光(IF)和免疫组化(IHC)检测SAp在主动脉壁组织中的表达水平及亚细胞定位。结果HE和EVG染色结果显示,与对照组相比,夹层组主动脉平滑肌细胞排列紊乱、弹性纤维断裂且减少。蛋白质免疫印迹、免疫荧光及免疫组化实验显示,与对照组对比,SAp蛋白表达水平在夹层组主动脉壁组织中显著降低(p<0.05),且免疫荧光染色显示SAp蛋白主要定位于细胞质和细胞外基质中。结论与对照组相比,主动脉夹层患者的主动脉壁组织中SAp蛋白水平降低,提示SAp蛋白可能与主动脉夹层的发生发展相关。

关键词：主动脉夹层血清淀粉样p物质血管平滑肌细胞

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SAp水平对脑白质高信号患者认知功能的影响

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中国老年学杂志 2019年第16期39卷 3991-3994页

作者：廉会娟杨伟李岩松孙正启西藏民族大学医学部陕西咸阳712082 西藏民族大学中央与地方共建高校重点实验室生命科学基础研究实验室

目的探讨血清淀粉样p物质(SAp)水平对脑白质高信号(WMH)患者认知功能的影响。方法根据纳入及排除标准,通过CT或磁共振成像诊断为脑白质变性的患者297例为观察组。同时设立健康人群做对照组60例。通过Fazekas评分将脑白质变性患者分为轻... 详细信息

目的探讨血清淀粉样p物质(SAp)水平对脑白质高信号(WMH)患者认知功能的影响。方法根据纳入及排除标准,通过CT或磁共振成像诊断为脑白质变性的患者297例为观察组。同时设立健康人群做对照组60例。通过Fazekas评分将脑白质变性患者分为轻度(0~2分)、中度(3~4分)及重度(5~6分),再比较三组间同型半胱氨酸(Hcy)、SAp水平、基质金属蛋白酶(MMp)-9、超敏C反应蛋白(hs-CRp)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)等水平。再根据脑白质变性评分将血清SAp分为轻度(50~70μg/ml,59例)、中度(70~90μg/ml,163例)及重度(90~110μg/ml,75例),将三组间利用蒙特利尔评估量表(MoCA)评估认知功能,词语流畅性测验(VFT)评价患者语言流畅度,画钟测验(CDT)、p300及MMSE检测患者认知功能障碍,日常生活活动能力(ADL)测试评价患者ADL。结果与对照组比较,观察组血清SAp水平明显升高(p<0.001);根据Fazekas评分,随着脑白质变性严重程度的增加,SAp、Hcy、hs-CRp及MMp-9水平逐级增高,其中SAp中度组较轻度组更高(t=16.235,p<0.001),重度组比中度组更高(t=17.301,p<0.001);Hcy中度组较轻度组更高(t=7.351,p<0.001),重度组比中度组更高(t=8.296,p<0.001);MMp-9中度组较轻度组更高(t=22.375,p<0.001),重度组比中度组更高(t=27.569,p<0.001)。根据MoCA评估认知功能及VFT、CDT、p300、MMSE评分也随着SAp水平的增加而减少,组间差异具有统计学意义(p<0.001);ADL评分也随SAp水平的增加而减少,但SAp中度与轻度组间差异无统计学意义(t=14.241,p=0.493),重度与轻度差异有统计学意义(t=17.336,p<0.001)。结论SAp水平与脑白质变性程度存在一定关系,随着脑白质变性严重程度的增加血清SAp水平也增加;关于患者认知功能评分,随着SAp水平的增加,认知功能随之下降。

关键词：脑白质变性 MoCA评分血清淀粉样p物质 Fazekas评分预后评估

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mSAp转基因小鼠模型的建立

mSAP转基因小鼠模型的建立

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作者：郭云云西北农林科技大学

学位级别：硕士

转基因动物技术是一项新兴的生物技术,是常规分子生物学技术和基因工程技术在研究层次上的拓展和延伸。转基因动物的出现,使人类可以通过基因重组的各种方法人为的改造动物基因组,在动物活体水平上研究有关基因的结构与功能,是一个四维... 详细信息

转基因动物技术是一项新兴的生物技术,是常规分子生物学技术和基因工程技术在研究层次上的拓展和延伸。转基因动物的出现,使人类可以通过基因重组的各种方法人为的改造动物基因组,在动物活体水平上研究有关基因的结构与功能,是一个四维时空的研究体系,为从分子到个体的各个层次,多维的研究基因提供了新的方法和思路。转基因动物研究揭开了生命科学研究的新篇章,其多样性和重复性差也反映了客观世界的复杂性和多样性,为人类提供了更多展示自然规律的途径,显示出美好的应用前景。血清淀粉样p物质（serum amyloid p component, SAp）作为一种古老的蛋白质,与C反应蛋白（CRp）构成血清正五聚体蛋白家族,其系统发生学非常保守,具有重要的生理功能,与炎症、凝血及多种淀粉样病变有关。小鼠与人基因同源性较高,小鼠的许多疾病模型与人类同种疾病有着较高的可比性,这为人类研究疾病及某个基因的功能提供了一条新的途径。因此我们设计本实验,通过受精卵原核显微注射法将外源基因导入动物体内,该方法首先由英国的Clark为首的研究小组提出,旨在研究外源基因协同作用以提高其表达水平。本研究以C57BL/6J小鼠为研究对象,RT-pCR获得小鼠SAp基因,将其正向插入pCMV-Tag5A真核表达载体上,转化宿主菌,挑选克隆,抽提质粒,用BamHI和XHoI双酶切鉴定出阳性克隆后,经测序正确。然后借助受精卵原核显微注射法将经BciVI限制性核酸内切酶酶切后回收的2.7kb线性片断导入C57×CBA F1代小鼠受精卵雄原核,移植入代孕母鼠,所生127只小鼠,其中pCR鉴定获得10只转基因阳性小鼠,整合率为7.87%。然后遵循孟德尔遗传规律pCR鉴定F1、F2、F3代所生小鼠,建立三个转基因纯合子founder,最终借助免疫沉淀法（immunoprecipitation, Ip）和免疫印迹法（Western blotting,WB）在蛋白水平上确定了两个纯合子founder小鼠。成功建立了小鼠血清淀粉样p物质转基因小鼠纯合子模型,为今后研究该基因的功能提供了良好的实验素材,也为转基因阳性动物组群繁育提供了科学资料。

关键词：血清淀粉样p物质显微注射转基因动物模型

来源：评论

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