检索结果-内蒙古大学图书馆

南方医科大学学报 2009年第5期29卷 864-867页

作者：曹波季爱民南方医科大学珠江医院新药研发中心广东广州510282

目的设计并合成抗小鼠VEGFR2基因的siRNA分子(siVEGFR2),研究其血清稳定性和基因沉默效应,以便进一步研究经组织靶向性结构修饰后该siRNA分子的特性。方法设计并合成抗小鼠VEGFR2基因的siRNA分子,在37℃条件下与新鲜血清共孵育24h,不同... 详细信息

目的设计并合成抗小鼠VEGFR2基因的siRNA分子(siVEGFR2),研究其血清稳定性和基因沉默效应,以便进一步研究经组织靶向性结构修饰后该siRNA分子的特性。方法设计并合成抗小鼠VEGFR2基因的siRNA分子,在37℃条件下与新鲜血清共孵育24h,不同时间点后取样电泳观察其完整性;用脂质体介导转染体外培养的MS1细胞,通过半定量RT-PCR分析基因沉默效果。结果随着孵育时间延长,未经修饰的siVEGFR2分子在血清中逐渐降解;经siVEGFR2转染的MS1细胞中,VEGFR2mRNA的表达水平明显下降,与空白转染组和对照siRNA转染组相比有显著差异(P<0.001),而空白转染组和对照siRNA转染组间比较无显著性差异(P=0.157)。结论裸siVEGFR2分子在血清中容易降解,siVEGFR2能特异性沉默靶基因的表达,为下一步体内应用siVEGFR2分子时稳定性修饰的必要性提供了理论依据。

关键词： siRNA 血管内皮生长因子受体2 血清稳定性基因沉默

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提高PDMAEMA/DNA复合物基因转染效率和血清稳定性的研究

提高PDMAEMA/DNA复合物基因转染效率和血清稳定性的研究

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作者：代凤英天津大学

学位级别：博士

本文运用原子转移自由基聚合技术一锅法合成了以聚N, N'-双(丙烯酰)胱胺(PBAC)为交联核,以线性聚甲基丙烯酸-N, N'-二甲氨基乙酯(l-PDMAEMA)为臂的星形阳离子聚合物s-PDMAEMA。在二硫代苏糖醇(DTT)还原条件下,s-PDMAEMA显示了... 详细信息

本文运用原子转移自由基聚合技术一锅法合成了以聚N, N'-双(丙烯酰)胱胺(PBAC)为交联核,以线性聚甲基丙烯酸-N, N'-二甲氨基乙酯(l-PDMAEMA)为臂的星形阳离子聚合物s-PDMAEMA。在二硫代苏糖醇(DTT)还原条件下,s-PDMAEMA显示了可降解能力。s-PDMAEMA聚合物具有比l-PDMAEMA更强的压缩DNA能力。s-PDMAEMA具有优于其对应线性l-PDMAEMA的细胞转染效率,s-PDMAEMA200的转染效果高于PEI25kDa,且毒性更低。通过酸碱滴定实验考察了l-PDMAEMA、s-PDMAEMA载体的质子缓冲效应。采用AFM观察不同pH对l-PDMAEMA/DNA、s-PDMAEMA/DNA复合物形貌的影响。以时间相关荧光光谱技术考察了l-PDMAEMA/DNA、s-PDMAEMA/DNA的核酸降解酶稳定性。结果表明,交联结构聚合物分子内部渗透压提高,星形聚合物表现出了比线性聚合物更强的质子缓冲能力。当环境pH值从7.4降到5.0,l-PDMAEMA/DNA复合物变得更为紧密;相反,由于带正电的臂向外部伸展,s-PDMAEMA/DNA复合物呈现疏松形态。自由和结合溴化乙锭的相对含量变化证实s-PDMAEMA能够对DNA提供更有效的保护,s-PDMAEMA具有密集的叔胺基团,能够吸收更多质子,有利于复合物的高效内涵体逃逸。通过原子转移自由基聚合方法合成了DMAEMA与3-(甲基丙烯酰胺)丙基-二甲基(3-磺丙)胺(MPDSAH)的共聚物,并考察了这一聚合物作为新型基因载体的应用。MTT实验结果显示,引入磺酸类聚两性电解质PMPDSAH降低了PDMAEMA阳离子载体的细胞毒性。PDMAEMA200-PMPDSAH80共聚物具有高于PDMAEMA200均聚物载体的转基因效率。在复合比8/1 ,PDMAEMA200-PMPDSAH80载体的基因转运效果与PEI25kDa相当。体外细胞转染实验结果显示, PDMAEMA200-PMPDSAH80显示了明显高于同类物PDMAEMA200-PMPC80的转染效果。流式细胞实验表明高亲水性的PMPC嵌段削弱了PDMAEMA200/DNA纳米复合物的细胞内化效果;相反,引入PMPDSAH增加了PDMAEMA200/DNA复合物的细胞摄取能力。DSC测定结果揭示PDMAEMA200-PMPC80与PDMAEMA200对DPPC膜扰动能力相当,PDMAEMA200-PMPDASH80具有高于PDMAEMA200的DPPC膜扰动能力,推断PMPDSAH具有相对较强的细胞膜扰动能力,促进了复合物的细胞内吞。

关键词：聚甲基丙烯酸-N, N'-二甲氨基乙酯星形聚合物磺基甜菜碱血清稳定性基因递送原子转移自由基聚合

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具有高血清稳定性的高效蛋白质胞内递送系统的开发

具有高血清稳定性的高效蛋白质胞内递送系统的开发

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作者：张松华南理工大学

学位级别：博士

蛋白质疗法已经在药物市场上取得了巨大成功,但目前市场上所有的蛋白质药物都局限于细胞外靶点,而实际上胞内治疗性靶点要更为丰富。蛋白质自身分子量较大、表面电荷较少、亲水性较强,通常无法自行穿过细胞膜进入细胞,因此要实现针对这... 详细信息

蛋白质疗法已经在药物市场上取得了巨大成功,但目前市场上所有的蛋白质药物都局限于细胞外靶点,而实际上胞内治疗性靶点要更为丰富。蛋白质自身分子量较大、表面电荷较少、亲水性较强,通常无法自行穿过细胞膜进入细胞,因此要实现针对这些靶点的治疗需要高效蛋白胞内递送系统。目前蛋白质胞内递送系统的开发尚处于发展阶段,其中基于阳离子高分子开发的蛋白质载体近年来吸引了较多研究者的关注。阳离子高分子载体递送系统在体外展现出了高效的递送效率,但它们通常无法直接用于体内,阳离子高分子载体递送系统的低血清稳定性和内皮清除系统的高清除率使其难以发挥原有的治疗功能。针对以上问题,我们在第二章介绍了一种无痕可逆交联策略,用以提高阳离子高分子和蛋白质复合物的血清稳定性,实现在血清中高效的蛋白质胞内递送。在所提出的递送系统中,货物蛋白和阳离子高分子组装形成复合物,并通过谷胱甘肽响应性断裂的无痕交联剂进一步稳定。交联剂具有高反应活性和无痕脱落特性,能在生理条件下与蛋白质表面和阳离子高分子上的胺基高效地进行反应。在进入细胞后,可以对胞质中的谷胱甘肽响应,发生级联反应并完全从蛋白质表面脱落,从而保证了蛋白质入细胞后能正常发挥其生物活性。交联后的蛋白复合物粒径约为200 nm,交联剂的引入不会影响复合物的内吞通路和内涵体逃逸,交联复合物通过脂筏、网格蛋白和巨胞饮等多通路介导的细胞内吞进入细胞,在内涵体中通过酸化依赖的方式逃逸后,对胞质GSH响应并释放出货物蛋白质分子。在共价键的作用下交联复合物在不同的离子和血清溶液中具有良好的稳定性,能够在含血清环境下将多种蛋白递送到不同类型的细胞内并使其发挥正常的生物活性。这种无痕交联策略适用于不同类型的阳离子聚合物、功能蛋白以及细胞系,具有良好的普适性和通用性,可以被开发为一个通用平台,递送各种作用于细胞内靶点的功能蛋白,用于疾病治疗。在第三章中,我们首次将相变材料引入蛋白质胞内递送系统,设计并构建了一种具有高血清稳定性、结构简单的p H响应性相变载体系统。我们通过将疏水基团二乙氨基苯基硫代异氰酸酯和G5聚酰胺胺树形高分子结合,构建了一种具有p H响应性相变的蛋白质胞内递送系统。过量的疏水基团修饰的树形高分子在生理p H条件下因自身疏水性过强而发生相变不溶于水中。在弱酸条件下,树形高分子内部的叔胺质子化使分子亲水性增加而使其重新溶解于水中。在质子化的状态下,树形高分子与货物蛋白质通过静电和疏水相互作用形成的复合物。在生理p H环境下由于复合物中相变材料的强疏水性而具有高稳定性,能够在50%以上的高浓度血清溶液中将货物蛋白高效地递送到细胞中。在通过脂筏介导的内吞通路和网格蛋白介导的内吞通路进入内涵体或溶酶体后,复合物对弱酸性环境发生响应使其从内涵体或溶酶体中逃逸,最后将负载蛋白释放到细胞质。复合物能够在一小时内快速进入细胞并破坏内涵体膜,然后将货物蛋白质分子释放到细胞质中,并在三小时后达到高水平的分布。这种相变递送系统能够将10种不同分子量大小和带电性质的蛋白递送到8种不同类型的细胞中,并保持货物蛋白的生物活性。这一研究为高血清稳定性胞内蛋白质递送系统的设计和开发提供了一种方便、有效的策略和思路。除了血清稳定性,细胞毒性以及抗蛋白吸附性也是药物递送系统需要考虑的问题之一。在第四章中,我们结合p H响应相变递送系统的优点和两性离子优异的抗吸附特性,提出了苯磺酸化修饰相变高分子的方法,用以构建低细胞毒性、低血清吸附、高蛋白质胞内递送效率以及高血清稳定性的蛋白质胞内递送系统。在使用苯磺酸或苯甲酸等负电基团对相变材料进行改性后,材料自身相互作用增强,相变响应区间改变以及和蛋白形成的复合物稳定性增强,最终导致蛋白质的胞内递送显著效率提高。这种增强效应同样适用于其它由疏水基团和阳离子高分子形成的相变材料。苯磺酸化修饰的相变材料具有高血清稳定性,在50%的血清溶液中,其蛋白胞内递送效率维持有在无血清培养基中的200%以上。相变高分子与蛋白的复合物粒径大小可控,具有明显的囊泡结构。苯磺酸修饰降低了材料表面的正电荷,显著降低了材料本身以及和蛋白质复合物的细胞毒性,提高了递送复合物的抗蛋白吸附性。这一研究为提高蛋白质胞内递送效率、降低细胞毒性、提高蛋白递送系统的抗血清蛋白吸附性提供了一种新的思路和方法。综上所述,针对蛋白质胞内递送系统血清稳定性差的问题,我们提出了三种有效的解决方法,改善了蛋白质的生物利用度,降低了递送系统的毒性。这些研究为蛋白质胞内递送系统的设计提供了新的思路和策略,对推动新的蛋白质药物的研究与开发具有重要意义。

关键词：蛋白质胞内递送血清稳定性无痕交联相变材料高分子载体

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谷丙转氨酶质控血清稳定性观察研究

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天津医药 2004年第6期32卷 366-367页

作者：李慧张孝山天津市血液中心 300110

丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase，ALT)是很多国家献血者筛查指标。稳定性良好的质控血清可以客观、准确地反映检测结果，为判断该批次实验结果是否失控提供重要依据。保存质控血清时，保证酶活性的相对稳定是极为重要的。笔者... 详细信息

丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase，ALT)是很多国家献血者筛查指标。稳定性良好的质控血清可以客观、准确地反映检测结果，为判断该批次实验结果是否失控提供重要依据。保存质控血清时，保证酶活性的相对稳定是极为重要的。笔者把传统地冷藏于2～8℃条件的和冷冻在-20～-30℃反复冻融条件的质控血清稳定性进行比较，并将结果报告如下。

关键词：谷丙转氨酶血清稳定性观察研究质量控制

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具有较好血清稳定性的环状siRNA的构建及其在RNA干扰中的应用研究

具有较好血清稳定性的环状siRNA的构建及其在RNA干扰中的应用研究

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作者：赵晓辉南开大学

学位级别：硕士

RNA干扰是由双链RNA介导的序列专一性的转录后基因沉默现象。自从这一现象在秀丽隐杆线虫中被发现以来，对其机理的研究及其在医疗中的应用成为生物、化学、医学、药学等领域最为热门的研究课题之一。不同于传统的化学小分子和蛋白药物... 详细信息

RNA干扰是由双链RNA介导的序列专一性的转录后基因沉默现象。自从这一现象在秀丽隐杆线虫中被发现以来，对其机理的研究及其在医疗中的应用成为生物、化学、医学、药学等领域最为热门的研究课题之一。不同于传统的化学小分子和蛋白药物存在的专一性差、许多靶标无法针对等缺点，基于RNA干扰的药物疗法几乎可以专一并高效地治疗所有疾病。大量的动物和人类实验证明RNA干扰是一种具有巨大潜在价值的治疗方法。但是，小干扰RNA的临床应用还需要克服血清中稳定性差、脱靶效应、机体免疫反应和不易有效给药等困难。　　研究人员希望通过对小干扰RNA的磷酸骨架、糖环和碱基的化学修饰来提高其血清稳定性或增强其链选择性来降低脱靶效应。但是一些针对核苷酸的化学修饰会造成细胞毒性或者影响其基因沉默效率。因此，设计无需引入非天然核苷酸而有效的具有较好血清稳定性的小干扰RNA应用于RNA干扰技术是非常值得研究的课题。通过对双链RNA的结构修饰可以帮助解决小干扰RNA应用中所面临的难题并且避免核苷酸修饰造成的副作用。　　基于这一思想，本文首次使用连接小分子1，2-双(马来酰亚胺)乙烷和不同序列的末端巯基修饰寡核苷酸通过迈克尔加成反应成功得到了单链的环状RNA分子，并通过非变性丙烯酰胺凝胶电泳分析、纯化以及超高效液相色谱和质谱鉴定。然后将正、反义链的环状RNA分别与其相互补的寡核苷酸退火得到三种新型的环状小干扰RNA分子。本文研究了环状小干扰RNA的物理和生化性质及其RNA干扰活性。研究发现虽然环状修饰阻碍了双链完全互补配对使得环状小干扰RNA的热力学稳定性相比于天然的小干扰RNA有不同程度的降低，但这一修饰并没有影响其A型双螺旋结构。相比于天然的小干扰RNA，环状小干扰RNA在正常人血清中展现出了较好的稳定性。通过体外人重组Dicer酶切割研究发现环状小干扰RNA同天然长双链RNA一样能被Dicer识别切割。最后，通过双荧光素酶检测系统检测其RNA干扰活性证明环状小干扰RNA在人胚肾293A细胞中能够发挥较好的基因沉默效果，特别是反义链环状小干扰RNA具有与经典的小干扰RNA相当甚至更好的活性。

关键词： RNA干扰小干扰RNA 化学交联环状修饰血清稳定性细胞毒性

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靶向VEGFR2基因的siRNA分子血清稳定性及其基因沉默效应研究

靶向VEGFR2基因的siRNA分子血清稳定性及其基因沉默效应研究

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作者：曹波南方医科大学

学位级别：硕士

RNA干扰（RNA interference,RNAi）又称基因沉默,是生物体内的一种自然现象,其机理为:外源性或内源性的长双链RNA被核苷酶Dicer切割降解为21-23个核苷的小分子干扰RNA（siRNA）双链,该siRNA分子被嵌合进含有核苷酶的多蛋白复合体（RNA-i... 详细信息

RNA干扰（RNA interference,RNAi）又称基因沉默,是生物体内的一种自然现象,其机理为:外源性或内源性的长双链RNA被核苷酶Dicer切割降解为21-23个核苷的小分子干扰RNA（siRNA）双链,该siRNA分子被嵌合进含有核苷酶的多蛋白复合体（RNA-induced silencing complex,RISC）中,被其中的RNA解螺旋酶解开双链后的正义链随后降解,由此激活的RISC复合体由该siRNA的反义链介导,靶向与该反义链序列互补的mRNA,并形成新的长双链RNA,然后又被Dicer酶降解为新的siRNA片段,靶mRNA即被降解或沉默,得到的siRNA进入新一轮基因沉默循环。siRNA分子的基因沉默功能相对于同为核酸类分子的反义核酸和核酶（ribozymes）,特异性及沉默效应更强且无免疫原性。因此,国内外许多研究机构迅速采用了siRNA分子技术来进行疾病治疗的研究,任何与疾病有关的表达基因都是潜在的靶标。但是作为RNAi中效应分子的siRNA具有核酸和小分子化合物的双重特性,当其作为基因类药物在生物体内应用发挥疾病治疗作用时,容易被核酸酶降解,具有稳定性差、半衰期短、细胞内转染效率低和靶向性差等缺点,因此,应用siRNA分子的关键是如何有效的使其到达靶细胞并穿过细胞膜,进入细胞质中的RNAi通路。目前siRNA分子给药多借助载体,但存在靶向性差,安全性不明确和体内细胞转染效率低等问题:病毒载体基因转染率高,但具有潜在的致癌性和免疫原性;阳离子脂质体具有较大的细胞毒性和不稳定性;阳离子聚合物虽然具有较低的免疫原性和细胞毒性,但其转染效率没有病毒载体高且使临床试验设计更加复杂。近年来,有文献报道对siRNA分子核苷的稳定性化学修饰及其末端的组织靶向性标记不影响其基因沉默功能,因此有望克服载体给药的缺点而成为一种理想的siRNA给药方法。血管内皮细胞生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2）是一种酪氨酸激酶受体,由一个胞外结构域,一个跨膜结构域和一个胞内酪氨酸激酶结构域组成,其与VEGF的信号通路在血管的形成过程中起重要作用。因此设计针对VEGFR2基因的siRNA分子来沉默其表达以阻断VEGF/VEGFR2信号通路能够抑制肿瘤新生血管的形成,从而具有治疗肿痛的应用前景。为了探索siRNA分子经组织靶向性结构修饰后给药的可行性,本文设计合成了抗小鼠VEGFR2表达的siRNA分子（siVEGFR2）,研究了未经化学修饰的siVEGFR2分子的血清稳定性,及对VEGFR2基因的沉默效果,为后续体内应用siVEGFR2分子,必需进行稳定性和靶向性修饰提供了理论依据。目的: 1.设计出能有效沉默VEGFR2基因的siRNA分子并研究其血清稳定性。 2.研究未经修饰的抗VEGFR2基因的siRNA分子的基因沉默效应。方法: 1.根据小鼠cDNA文库中VEGFR2基因组序列,结合Ambion's siRNA TargetFinder提供的方法及参考文献设计出靶向小鼠VEGFR2基因的siRNA分子,该siVEGFR2分子用无RNA酶水稀释后加入等体积的新鲜血清,然后在37℃孵育24小时,不同时间点取样进行电泳观察其完整性。 2.该未修饰的siVEGFR2分子体外经脂质体介导转染MS1细胞,同时以脂质体转染不针对任何靶基因的对照siRNA和只加脂质体而不加任何siRNA的空白转染作为对照,分别通过半定量RT-PCR（semi-quantitative RT-PCR）和western blot方法检测MS1细胞中VEGFR2 mRNA和蛋白的表达水平来考察未修饰的siVEGFR2分子转染MS1细胞后对VEGFR2基因的RNAi效应。结果: 1.根据小鼠cDNA文库中VEGFR2基因组序列,结合Ambion's siRNA TargetFinder提供的方法及参考文献设计出VEGFR2基因中的沉默靶序列为:5'-AAGCTCAGCACACAGAAAGAC-3',（基因号:NM010612.2）;靶向小鼠VEGFR2基因的siRNA分子序列为:Sense:5'-GCUCAGCACACAGAAAGACdTdT-3',Antisense:5'-GUCUUUCUGUGUGCUGAGCdTdT-3'。 2.用无RNA酶水稀释siVEGFR2分子至5μM后,加入等体积的新鲜小鼠血清,然后在37℃孵育,不同时间点取样3μl进行电泳观察其完整性,结果表明裸siRNA随着时间的延长而逐渐降解,在24后浓度已经检测不到了。 3.脂

关键词： siRNA VEGFR2 血清稳定性

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非天然氨基酸取代对非洲爪蟾皮肤肽PGLa-H血清稳定性及生物活性的影响

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华西药学杂志 2023年第5期38卷 477-482页

作者：潘源峙喻凯西南交通大学生命科学与工程学院四川成都610031

目的改造非洲爪蟾分泌的抗菌肽PGLa-H的结构,增强其血清稳定性与生物活性。方法以天然抗菌肽PGLa-H为模板,将该多肽序列中的L-丙氨酸以非天然的氨基异丁酸(Aib)进行部分取代。利用固相多肽合成技术合成多肽;评价多肽在血清中的稳定性... 详细信息

目的改造非洲爪蟾分泌的抗菌肽PGLa-H的结构,增强其血清稳定性与生物活性。方法以天然抗菌肽PGLa-H为模板,将该多肽序列中的L-丙氨酸以非天然的氨基异丁酸(Aib)进行部分取代。利用固相多肽合成技术合成多肽;评价多肽在血清中的稳定性;测定多肽对4种不同细菌菌株的抗菌活性,通过肉汤稀释法判断最小抑菌浓度;评价不同盐离子存在对多肽抗菌活性的影响;评价多肽的溶血活性与细胞毒性。结果通过Aib取代,得到PGLa-H(Aib),减少了血清中蛋白酶对多肽的降解,并提高了多肽对4种不同细菌的抗菌活性,无明显的溶血活性与细胞毒性。结论 Aib取代能增强多肽的血清稳定性和生物活性,且具有良好的生物相容性。

关键词：非天然氨基酸抗菌肽结构修饰氨基异丁酸血清稳定性抗菌活性生物相容性固相多肽合成

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一种具有增强抗菌活性和血清稳定性的抗菌肽及其应用

一种具有增强抗菌活性和血清稳定性的抗菌肽及其应用

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作者：田原梁帅王红 610000 四川省成都市二环路北一段111号

本发明公开了一种具有增强抗菌活性和血清稳定性的抗菌肽及其应用，其氨基酸序列通式为：ZUX1X2UX3X4UZ0，其中，Z选自X5Z’‑、(Z”X6X7)nZ’‑、X8X9Z”’Z”X10X11Z”X12X13Z’‑中的任意一种，U为非天然氨基酸，Z0、Z’、Z”、Z”’独... 详细信息

标准号: CN115925802A

本发明公开了一种具有增强抗菌活性和血清稳定性的抗菌肽及其应用，其氨基酸序列通式为：ZUX₁X₂UX₃X₄UZ₀，其中，Z选自X₅Z’‑、(Z”X₆X₇)_nZ’‑、X₈X₉Z”’Z”X₁₀X₁₁Z”X₁₂X₁₃Z’‑中的任意一种，U为非天然氨基酸，Z₀、Z’、Z”、Z”’独立地选自任意疏水性氨基酸，X₁～X₁₃独立地选自精氨酸、赖氨酸、组氨酸中的任一种，n为1或2；本发明以天然抗菌肽PGLa‑H为基础，利用非天然氨基酸氨基异丁酸Aib替换其中的丙氨酸，构建在多肽i，i+3,i+6位置引入连续三个Aib可有效约束多肽构象，以降低血清中蛋白酶对含有非天然氨基酸的多肽序列的识别能力，增强其在血液中的循环时间，提高抗菌肽的血清稳定性，同时Aib的引入也可以增强抗菌肽的整体疏水性，促进抗菌肽与细菌磷脂膜之间的相互作用而提高其抗菌活性。

关键词：抗菌肽非天然氨基酸血清稳定性抗菌活性疏水性氨基酸蛋白酶氨基酸序列氨基异丁酸天然抗菌肽多肽序列有效约束丙氨酸精氨酸赖氨酸磷脂膜疏水性组氨酸血清引入多肽i 多肽构建构象替换细菌血液应用

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一种评价质控血清稳定性的方法

一种评价质控血清稳定性的方法

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作者：朱红刘建礼张绍福 100026 北京市朝阳区甜水园街6号

本发明公开了一种评价质控血清稳定性的方法，该方法包括以下步骤：（1）检测强阳性质控血清的OD值，当检测OD值＞2.0时，进行稀释，得到检测OD值<2.0的质控血清样品；（2）对于检测OD值<2.0的质控血清用ELISA试剂进行检... 详细信息

标准号: CN102207509A

本发明公开了一种评价质控血清稳定性的方法，该方法包括以下步骤：（1）检测强阳性质控血清的OD值，当检测OD值＞2.0时，进行稀释，得到检测OD值<2.0的质控血清样品；（2）对于检测OD值<2.0的质控血清用ELISA试剂进行检测；（3）检测完成后计算出其反应OD值；（4）以反应OD值作为测量值，利用t检验分析不同条件下质控血清测量值与原始值是否具有统计学差距，以统计学P<0.05差异显著性作为质控血清是否稳定的评判标准。本发明所述方法以反应OD值作为质控血清质量稳定性的评价测量值，该测量值能直接真实地反应血清中检测物的量的变化，在此基础上，采用统计学t检验分析样品中待检物在各种条件下的变化差异。统计学分析的基础更科学合理。

关键词：检测血清统计学检验分析阳性质控血清差异显著性统计学分析血清稳定性质量稳定性反应血清科学合理血清样品稀释评价评判差距

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一种对PLK1基因具有沉默活性且具有高血清稳定性的siRNA及其应用

一种对PLK1基因具有沉默活性且具有高血清稳定性的siRNA及其应用

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作者：黄震 610064 四川省成都市一环路南一段24号

本发明公开了一种对PLK1基因具有沉默活性且具有高血清稳定性的siRNA及其应用。该siRNA的正义链和反义链的长度均为21个核苷酸，正义链和反义链各自的3’端为两个连续的尿苷，两条链除去3’端的UU以外的19个碱基互补形成双链，正义链和... 详细信息

标准号: CN110564729A

本发明公开了一种对PLK1基因具有沉默活性且具有高血清稳定性的siRNA及其应用。该siRNA的正义链和反义链的长度均为21个核苷酸，正义链和反义链各自的3’端为两个连续的尿苷，两条链除去3’端的UU以外的19个碱基互补形成双链，正义链和反义链分别为如SEQ ID NO.1和2、或SEQ ID NO.3和4、或SEQ ID NO.5和6中的任一对所示；并对正义链和/或反义链进行化学修饰，使得正义链和/或反义链中所有的A、C、G和/或U碱基上的α磷酸位点的氧原子被修饰基团取代。本发明用硫原子取代siRNAs磷酸位点同一主族的氧原子，能在几乎不影响RNA干扰作用机制的情况下，显著提高siRNA的血清稳定性。

关键词：反义链正义链血清稳定性氧原子磷酸位点化学修饰碱基互补修饰基团作用机制核苷酸硫原子碱基双链条链主族应用

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