检索结果-内蒙古大学图书馆

中国修复重建外科杂志 2016年第8期30卷 998-1005页

作者：马骏张晨张二洋班文瑞吕雷锋党晓谦王坤正西安交通大学第二附属医院骨一科西安710004

目的通过检测体外缺氧/激素作用下内皮细胞(endothelial cells,ECs)增殖、迁徙以及巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)和VEGF的表达变化,探讨激素性股骨头缺血性坏死(steroid-induced avascular necrosis of femoral head,SANFH)血管修复障碍发生机制。方法取第3代人脐静脉ECs(human umbilical vein ECs,HUVECs)进行分组干预。正常对照组(A组)细胞不作任何干预;地塞米松组(B组):用含1.0×10^(-6) mol/L地塞米松的完全培养液干预;缺氧培养组(C组):细胞在低氧细胞培养罐内培养;地塞米松+缺氧培养组(D组):细胞在低氧细胞培养罐内培养,同时用含1.0×10^(-6) mol/L地塞米松的完全培养液干预。干预培养后24 h,行Alamar Blue细胞活性检测及活/死细胞染色观测细胞增殖情况,细胞骨架染色观察细胞骨架形态;采用划痕实验比较各组细胞迁徙能力,ELISA法检测各组细胞MIF及VEGF表达水平。结果干预培养后24 h,Alamar Blue细胞活性检测及活/死细胞染色示C组细胞活性最好且活细胞数多,D组细胞活性最差、活细胞数最少,组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞骨架染色见,A、B组细胞形态正常;C组细胞大量增殖,细胞内见大量分泌颗粒;D组细胞骨架形态异常。划痕实验示C组细胞迁移能力最强,D组最弱。各组MIF和VEGF累积浓度随时间延长均显著增高。各时间点,C组MIF累积浓度显著高于其他各组(P<0.05)。干预培养24 h内,各组组内1~8 h时MIF阶段浓度显著低于0~1 h及8~24 h时(P<0.05);且C组0~1 h和8~24 h时MIF阶段浓度显著高于其他组(P<0.05)。干预培养2 h内,各组组内0.5~1 h MIF阶段浓度显著高于其他各时间段(P<0.05)。8、24 h时C组VEGF累积浓度显著高于其他各组(P<0.05)。干预24 h内,C、D组8~24 h时VEGF阶段浓度显著高于其他各时间段(P<0.05);干预培养2 h内,各组组内各时间段及组间VEGF阶段浓度比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论缺氧条件下ECs增殖及迁徙能力增强,MIF及VEGF分泌增加;而高浓度地塞米松会抑制上述过程,引发血管修复障碍,导致SANFH发生、发展。

关键词：激素性股骨头缺血性坏死巨噬细胞移动抑制因子血管修复体外实验

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应用邻指血管修复拇指旋转撕脱性离断伤

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中华显微外科杂志 1998年第4期21卷 298-299页

作者：吴伟炽黄东江奕恒张惠茹刘志军广州市赤岗中国人民解放军第一七七医院三外科

应用邻指血管修复拇指旋转撕脱性离断伤吴伟炽，黄东，江奕恒，张惠茹，刘志军断指再植至今已在国内普遍开展，随着显微外科技术的发展，再植技术不断提高，再植适应证不断扩大，成活率越来越高［１－４］。我院１９９６年４月至１９９... 详细信息

应用邻指血管修复拇指旋转撕脱性离断伤吴伟炽，黄东，江奕恒，张惠茹，刘志军断指再植至今已在国内普遍开展，随着显微外科技术的发展，再植技术不断提高，再植适应证不断扩大，成活率越来越高［１－４］。我院１９９６年４月至１９９８年５月应用邻指血管移位修复拇指旋...

关键词：拇指离断伤撕脱性血管修复

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循环血管内皮祖细胞对血管修复作用的研究进展

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基础医学与临床 2011年第9期31卷 1057-1059页

作者：刘力康熙雄首都医科大学附属北京天坛医院实验诊断中心北京100050

循环内皮祖细胞在血管损伤的情况下,可归巢到受损区域,增殖分化为成熟内皮细胞,并分泌营养因子,促进内皮新生。但是,由于其干细胞特性,在微环境改变的情况下,可能无法分化为功能细胞,甚至表达纤维化、成骨分化等表型,加速血管损伤。因此... 详细信息

循环内皮祖细胞在血管损伤的情况下,可归巢到受损区域,增殖分化为成熟内皮细胞,并分泌营养因子,促进内皮新生。但是,由于其干细胞特性,在微环境改变的情况下,可能无法分化为功能细胞,甚至表达纤维化、成骨分化等表型,加速血管损伤。因此,纯化单一细胞群,稳定微环境,明确病程是决定循环内皮祖细胞发挥积极作用的关键。

关键词：内皮祖细胞动脉粥样硬化血管修复

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脐带间充质干细胞对血管性痴呆模型的认知改善和血管修复作用研究

脐带间充质干细胞对血管性痴呆模型的认知改善和血管修复作用研究

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作者：陈蕾第二军医大学中国人民解放军海军军医大学

学位级别：博士

血管性痴呆（vascular dementia，VD）是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成记忆、认知和行为等脑区低灌注的脑血管疾病所致的严重认知功能障碍综合征。血管性痴呆患者随着病情加重，最终会丧失正常工作生活的能力，随着我国人口老龄化... 详细信息

血管性痴呆（vascular dementia，VD）是指由缺血性卒中、出血性卒中和造成记忆、认知和行为等脑区低灌注的脑血管疾病所致的严重认知功能障碍综合征。血管性痴呆患者随着病情加重，最终会丧失正常工作生活的能力，随着我国人口老龄化，缺血性脑卒中的发生率逐年上升，血管性痴呆带来的社会及家庭危害也逐年增大。　　尽管预防卒中目前已经有充分的手段，控制行为和精神症状也有相应的药物，但在已经发生认知功能障碍的患者人群中，现有药物改善认知功能效果不佳，我们急需探讨新的血管性痴呆治疗新方法。　　近年来一些相关研究发现，人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)分泌营养因子的独特作用能更好的诱导微血管形成，提高神经及血管内皮修复功能。hUC-MSCs移植到缺血性卒中模型体内改善了神经功能缺损并减少了梗死面积。hUC-MSCs的内皮细胞分化潜能也得到证实，它可分化为血管内皮细胞并增加VEGF的表达。hUC-MSCs经侧脑室移植后可迁移到缺血处脉管系统，部分可分化为内皮细胞，移植治疗后增加了缺血半球血管密度,促进血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）的表达，hUC-MSCs移植促进缺血性卒中功能恢复，可能与其促进血管新生有关。hUC-MSCs通过提高血管密度调节血管系统的重建，通过促进血管生长，可以增加脑血流，改善缺血组织损伤。　　本课题设计采用双侧颈内动脉永久结扎法制作大鼠脑缺血低灌注性血管性痴呆模型，分离纯化并培养人脐带间充质干细胞，侧脑室注射荧光标记的人脐带间充质干细胞，观察移植后间充质干细胞存活及迁移。Morris水迷宫法检测大鼠的学习能力，行为学评价观察大鼠脑血管性痴呆模型认知功能改善的效果。组织免疫化学观察神经元的变化，血管新生的情况，星形胶质细胞的变化。磁共振观察大鼠的脑组织结构的变化，以及血流灌注的变化，并利用核磁共振血流灌注分析细胞移植治疗后的血管性痴呆模型是否能够形成血管重建，并从功能上改善缺血脑组织的灌注。　　第一部分血管性痴呆大鼠模型的制作与鉴定　　方法：（1）脑缺血低灌注性血管性痴呆模型：参照Wakita等的方法制备慢性脑缺血的血管性痴呆大鼠改良2VO模型。2%戊巴比妥（45mg/kg）腹腔注射麻醉，大鼠仰卧位固定，常规消毒，颈部正中切开皮肤，暴露病分离双侧颈总动脉，丝线结扎。假手术组只进行麻醉和血管分离术，不结扎颈总动脉。（2）水迷宫筛选造模成功的大鼠：a、定位航行训练实验：模型组大鼠29只与假手术组大鼠8只，术后第21天开始训练，每天上午9-10时和下午3-4时各训练1次，连续4天，记录大鼠从入水到找到平台的时间。b、空间探索实验：第5天撤去平台，记录大鼠从入水到第一次到达平台位置的时间（潜伏期）及60秒内有效停留时间和穿越平台次数，作为衡量其空间学习记忆能力的检测指标。对大鼠进行筛选，计算每只大鼠在5天内找到平台的平均时间。以假手术组大鼠潜伏期的均值作为参考值，计算各模型大鼠的平均潜伏期与参考值之差占该鼠的平均潜伏期时间的比例，作为筛选指标对模型大鼠进行筛选。2VO模型制作后2天行3D T1WI,轴位T2Flair，DWI序列观察脑组织形态，模型术后4周行颈部3D TOF MRA扫描观察血流状态。　　结果：造模成功大鼠和假手术组大鼠，术中没有因为麻醉或手术而死亡，1只大鼠出现颈部大血肿，影响进食和活动，剔除该大鼠，3周后模型大鼠及假手术组大鼠行为学实验结果：定位航行实验中，随着训练次数增加，模型组到达平台时间与假手术组相比明显延长（P＜0.05）。空间探索实验中，与假手术组相比，模型组第一次到达平台时间显著延长（P＜0.05），且在目穿越平台次数和目标象限的停留时间也明显减少（P＜0.05）。行为学实验筛选出造模成功大鼠23只。2VO模型制作后2天行3D T1WI,轴位T2Flair，DWI序列未发现明显脑梗死病灶，4周后进行颈部MRA检查发现造模成功大鼠双侧颈动脉血流阻断，远端血流减少。　　结论：大鼠2VO模型,4周后影像学证实大鼠双侧颈总动脉血流被永久性阻断。经影像学和行为学鉴定，该方法制作的大鼠模型，没有急性脑梗死病灶，4周后仍存在确定的血流减少，并且存在认知功能的减退，可以获得稳定的低灌注性血管性痴呆大鼠模型。　　第二部分人脐带间充质干细胞培养鉴定及移植大鼠模型　　方法：（1）无菌条件下取得脐带，采用组织贴壁培养方法，分离脐带间充质干细胞，以贴壁培养法进行原代培养，传代接种并纯化，倒置显微镜下观察生长状态和形态学变化，并进行细胞表面标志物鉴定。将提纯的细胞制备成细胞

关键词：血管性痴呆细胞移植脐带间充质干细胞认知功能血管修复

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力学炎性信号通过Kir2.1蛋白介导EPCs血管修复及新生作用和机制的研究

力学炎性信号通过Kir2.1蛋白介导EPCs血管修复及新生作用和机制的...

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作者：崔晓栋青岛大学

学位级别：博士

目的内皮细胞（Endothelial cells,ECs）功能障碍是心血管疾病的起始环节。但ECs是成熟终末分化细胞,仅依赖其自身功能无法完成损伤血管的早期修复。内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）从骨髓或干细胞龛动员后,归巢到受... 详细信息

目的内皮细胞（Endothelial cells,ECs）功能障碍是心血管疾病的起始环节。但ECs是成熟终末分化细胞,仅依赖其自身功能无法完成损伤血管的早期修复。内皮祖细胞（Endothelial progenitor cells,EPCs）从骨髓或干细胞龛动员后,归巢到受损血管,定向分化为成熟ECs,参与损伤血管修复。故EPCs是出生后血管修复和血管新生的关键细胞,维系着血管稳态。鉴于EPCs所处的流体环境,必然受力学因素作用而影响其生物学功能。我们前期研究显示,生理环境下层流剪切应力（Laminar shear stress,LSS）可促EPCs向ECs分化,利于其发挥生物学功能。但在动脉粥样硬化、血管支架以及动脉分叉等部位,流体动力学环境会发生剧烈改变,表现为振荡剪切应力（Oscillatory shear stress,OSS）为主,这必然会对趋化至此的EPCs产生深远且重要的影响。我们近期研究发现,OSS会引发EPCs明显的炎性反应及产物增加。但迄今为止,OSS力学炎性对EPCs的具体影响、相应靶点及分子机制均不清晰。因此,本研究主旨在于:1.通过体内外实验,探究OSS力学炎性信号对EPCs功能及血管重塑的影响;2.确定OSS力学炎性下决定EPCs功能及其生存的靶点分子,并阐明力学信号调控机制;3.通过多组学手段挖掘潜在的小分子物质并对其进行初步应用探究,以提高炎性下EPCs生存能力及生物学作用,力图为干/祖细胞移植和血管损伤性心血管疾病的防治奠定理论基础和提供应用参考。方法（1）体外实验方法:利用Flexcell力学加载系统对EPCs施加OSS力学炎性干预;通过全转录组学测序、荧光定量RT-PCR、Western Blot（WB）、免疫荧光技术等手段,分析、筛选并检测相关基因和蛋白表达;利用荧光技术和/或FACS手段,检测ROS、自噬、凋亡、膜电位等改变;通过双荧光自噬LC3慢病毒检测细胞自噬流变化;通过透射电镜、SA-β-gal、胶原凝胶和基于LC-MS非靶向代谢组学的方法分别检测细胞自噬和焦亡、衰老、收缩和代谢产物的差异;通过双荧光素酶报告基因验证mi RNA与靶基因作用关系; （2）体内实验方法:借助Fogarty微血管球囊复制颈总动脉局部内皮损伤,同时利用结扎颈总动脉不同分支的方法复制LSS或OSS动物模型;通过显微动脉插管技术局部移植EPCs,并利用组织免疫荧光确定移植细胞定位及在体焦亡程度;通过HE染色计算血管内膜/中膜比值（Intima/media membrane ratio,I/M）,确定血管重塑指数;使用Matrigel plug检测EPCs体内血管新生程度。结果 ***力学炎性致EPCs功能下降、血管重塑加重及靶分子Kir2.1的确定（1）与静止对照组相比,在OSS力学炎性作用下,EPCs胞体增大,即横纵轴比值明显降低（P<0.01）;细胞间距明显增加（P<0.01）;经OSS处理后的EPCs,体外管型形成能力降低（P<0.05）; （2）经小动物血流超声成像分析,成功构建了颈总动脉损伤的LSS和OSS在体动物模型;相同状态EPCs移植到局部受损动脉血管,LSS与OSS组之间的EPCs定位荧光强度无统计学差异（P=0.2681）;与LSS细胞移植组相比,OSS组I/M比值明显增高（P<0.001）; （3）与静止组相比,经全转录组测序发现,OSS组上调基因418个,下调基因596个（P<0.05）;经KEGG富集分析及FACS验证,OSS处理组Kir2.1表达增高（P<0.05）。 2.生理环境下阻断Kir2.1功能或敲低其表达可通过Ca2+/ROS/细胞自噬途径促EPCs向ECs分化（1）与P2代相比,P5代EPCs Kir2.1表达显著下降（P<0.01）;而ECs标志分子CD31和v WF表达逐渐增高（P<0.01）; （2）Kir2.1特异性阻断剂ML133（20μM）处理EPCs 3-5天后,v WF和CD31表达增高（P<0.05）,体外管状结构长度增加（P<0.001）;腺病毒p AV-sh RNA敲低Kir2.1表达后的检测结果与ML133阻断效应趋势一致;慢病毒敲低EPCs Kir2.1表达（LV-sh RNA-Kir2.1）后对LSS在体模型行细胞移植,与LV-scramble-EPCs组相比,LV-sh RNA-Kir2.1促进EPCs局部定位,降低I/M比值（P<0.05）; （3）透射电镜结果显示,ML133处理组胞内存在大量多层膜状结构;经CYTO ID自噬染色、LC3慢病毒双荧光自噬流分析显示,ML133处理组EPCs自噬斑点明显高于DMSO对照组（P<0.01）;p AV-sh RNA-Kir2.1可降低EPCs p62蛋白表达,增高Atg1

关键词：内皮祖细胞内皮细胞力学炎性振荡剪切应力血管修复

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降钙素基因相关肽调节间充质干细胞存活对大鼠颈动脉损伤后血管修复的作用

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上海医学 2014年第9期37卷 774-778,I0003页

作者：赵然尊朱江兰王冬梅刘志江盛瑾石蓓遵义医学院附属医院心血管内科贵州遵义563003

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)调节间充质干细胞(MSC)存活和对大鼠颈动脉损伤后血管修复的作用及其可能机制。方法分离培养获得大鼠MSC,分为CGRP组和对照组,均给予过氧化氢(H2O2)处理,前者再同时加入CGRP处理,以流式细胞仪检测MSC的... 详细信息

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)调节间充质干细胞(MSC)存活和对大鼠颈动脉损伤后血管修复的作用及其可能机制。方法分离培养获得大鼠MSC,分为CGRP组和对照组,均给予过氧化氢(H2O2)处理,前者再同时加入CGRP处理,以流式细胞仪检测MSC的存活和凋亡情况,并采用Western印迹法检测磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK3β)和β-链蛋白(β-catenin)的表达情况。构建大鼠颈动脉球囊损伤模型,分为MSC-CGRP组、MSC组和对照组,前两组分别给予MSC-CGRP(以携带CGRP的重组慢病毒载体pLen-CGRP-EGFP转染细胞)和MSC(未携带CGRP的重组慢病毒载体pLen-EGFP转染细胞)移植治疗,采用Western印迹法检测血管局部CGRP、pGSK3β和β-catenin的表达情况,免疫荧光染色检测损伤血管CD31的表达,苏木精-伊红(H-E)染色检测损伤血管新生内膜、中膜面积。结果 H2O2处理8、24h时,CGRP组MSC的早期凋亡率、晚期凋亡/死亡细胞比例均显著低于对照组同时间点(P值均<0.05),细胞存活率均显著高于对照组同时间点(P值均<0.05)。H2O2处理后8h,CGRP组的pGSK3β和β-catenin蛋白表达水平均显著高于对照组(P值均<0.05);应用CGRP阻断剂CGRP8-37后(CGRP+CGRP8-37组)均显著低于CGRP组(P值均<0.05),而与对照组的差异无统计学意义(P值均>0.05)。大鼠颈动脉损伤模型中,细胞移植后28d,对照组、MSC组的新生内膜与中膜面积比均显著高于MSC-CGRP组(P值均<0.05),MSC组与对照间的差异无统计学意义(P>0.05)。细胞移植后3d,MSC组血管局部pGSK3β、β-catenin表达水平均显著高于对照组(P值均<0.05);MSC-CGRP组均显著低于MSC组(P值均<0.05),与对照组间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论 CGRP可能通过激活GSK3β/β-catenin信号通路,促进移植的MSC存活,并增强MSC对损伤血管的修复作用,为防治血管增殖性疾病提供治疗思路。

关键词：降钙素基因相关肽间充质干细胞血管修复细胞存活

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髓芯减压联合胶原基骨修复材料和血管内皮生长因子对兔股骨头坏死血管修复和微循环的影响

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实用医学杂志 2022年第23期38卷 2927-2932页

作者：吕亚军任立中李军张海静张志坤河北医科大学第一医院骨二科石家庄050031

目的探讨髓芯减压+胶原基骨修复材料和血管内皮生长因子(VEGF)治疗兔股骨头坏死(ONFH)的效果。方法对30只家兔股骨头内注射无水乙醇建立兔ONFH模型。然后将家兔随机分为健康对照组(A组)、模型组(B组)、髓芯减压+自体松质骨组(C组)、髓... 详细信息

目的探讨髓芯减压+胶原基骨修复材料和血管内皮生长因子(VEGF)治疗兔股骨头坏死(ONFH)的效果。方法对30只家兔股骨头内注射无水乙醇建立兔ONFH模型。然后将家兔随机分为健康对照组(A组)、模型组(B组)、髓芯减压+自体松质骨组(C组)、髓芯减压+胶原基骨修复材料组(D组)和髓芯减压+胶原基骨修复材料+VEGF组(E组),每组6只。治疗8周,通过苏木精伊红(HE)染色观察组织切片形态。分别测定家兔的全血黏度(高切150 s^(-1)和低切10 s^(-1))、血浆黏度和红细胞压积、血清总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)。通过q RT-PCR检测股骨头组织中von Hippel-Lindau(VHL)、缺氧诱导因子α(HIF-1α)、VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)的m RNA水平。结果与C、D组比较,E组的全血黏度(高切150 s^(-1)和低切10 s^(-1))、血浆黏度和红细胞压积均显著降低(P<0.05)。与C、D组比较,E组的血清TC和TG均显著降低(P<0.05)。与C、D组比较,E组股骨头组织中VHL m RNA水平显著降低,而HIF-1α、VEGF和b FGF均显著升高(P<0.05)。结论髓芯减压+胶原基骨修复材料+VEGF可有效促进ONFH家兔损伤区域的成骨和血管修复,并且可减轻微循环障碍,其机制与改善脂质代谢、调节VHL/HIF-1α/VEGF信号及bFGF表达有关。

关键词：股骨头坏死髓芯减压胶原基骨修复材料血管内皮生长因子微循环血管修复

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CircSCMH1调控缺血性卒中后血管修复及其机制研究

CircSCMH1调控缺血性卒中后血管修复及其机制研究

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作者：李斌东南大学

学位级别：博士

目的:脑卒中是一种神经系统疾病,严重影响患者生活质量。本课题组先前研究表明环状RNA SCMH1（circular RNA SCMH1,circSCMH1）促进啮齿与非人灵长类动物缺血性卒中后运动功能修复,证实circSCMH1是缺血性卒中疾病过程中的一种关键环状RN... 详细信息

目的:脑卒中是一种神经系统疾病,严重影响患者生活质量。本课题组先前研究表明环状RNA SCMH1（circular RNA SCMH1,circSCMH1）促进啮齿与非人灵长类动物缺血性卒中后运动功能修复,证实circSCMH1是缺血性卒中疾病过程中的一种关键环状RNA分子。此外,相关研究表明缺血周围区血管修复是改善缺血性卒中长期预后的关键措施;并且,N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine,m6A）修饰（真核信使RNA中最常见修饰方式）具有调控血管修复的功能。因此,本研究在前期研究基础上继续探索circSCMH1在缺血性卒中后血管修复中功能,并深入研究m6A修饰在circSCMH1调控缺血性卒中后血管修复的机制,旨在探寻可以促进缺血性卒中后期修复的有效策略。方法:本研究应用脑靶向性细胞外囊泡（extracellular vesicle,EV）,将circSCMH1递送至脑组织,首先评估circSCMH1在缺血性脑卒中后血管修复中潜在作用。具体试验如下,通过血小板-内皮细胞粘附分子（platelet endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31）免疫荧光染色检测光敏性血栓（photothrombotic,PT）卒中恒河猴或小鼠模型中血管修复情况。随后,通过长时程光学成像平台分析小鼠缺血性卒中后同一视野血管内血红蛋白（hemoglobin,HBT）含量变化。此外,本研究进一步通过m6A定量检测试剂盒与蛋白质免疫印迹（western blot,WB）等方法,检测PT模型小鼠与急性缺血性脑卒中（acute ischemic stroke,AIS）患者皮层中m6A修饰变化与m6A主要甲基化及去甲基化酶表达变化,以及circSCMH1对疾病后m6A修饰的影响。在机制研究中,本研究应用RNA结合免疫沉淀（RNA binding immunoprecipitation,RIP）检测circSCMH1与脂肪量与肥胖相关蛋白（fat mass and obesity-associated protein,FTO）之间相互作用,并通过m6A甲基化RNA免疫沉淀测序（methylated RNA immunoprecipitation sequence,Me RIP）,进一步探索PT卒中模型中circSCMH1调控m6A修饰的分子机制,并分析其调控血管修复的功能靶点。最后,为进一步探索FTO在缺血性卒中后功能,本研究应用腺相关病毒BR1血清型（adeno-associated virus serotype BR1,AAV-BR1）,通过尾静脉注射,在野生型或Ftoflox/flox条件敲入（conditional knock-in,c KI）小鼠脑内皮细胞（endothelial cell,EC）中过表达FTO,通过免疫荧光染色与行为测试（网格行走测试、圆柱体测试和粘合-移除测试）分别评估缺血性卒中后血管修复与运动功能修复。结果:在小鼠和猕猴PT卒中模型中,circSCMH1增加缺血性卒中后梗死周围区血管面积、血管总长度与分支数量,表明circSCMH1促进卒中后血管修复。此外,circSCMH1促进小鼠卒中后皮层中同一视野内HBT的恢复。在AIS患者感觉运动皮层与PT模型小鼠梗死周围皮层中,m6A甲基化水平显著升高,FTO含量降低。随后研究发现,在PT小鼠模型中,circSCMH1显著抑制PT后m6A修饰,但不影响FTO的表达。调控机制研究结果显示,在ECs中,circSCMH1促进FTO发生泛素化修饰,增加FTO向核内转移,导致血管发育相关基因—脂质磷酸磷酸酶3（lipid phosphate phosphatase 3,Plpp3）的m6A修饰降低。CircSCMH1通过m6A修饰抑制Plpp3 m RNA降解,导致Plpp3/LPP3在ECs中的表达增加。最终内皮细胞中Plpp3/LPP3发挥促进血管修复的功能。因为FTO位于circSCMH1下游,所以本研究继续探索FTO在缺血性卒中修复中的作用。结果发现,脑内皮细胞特异性过表达FTO显著小鼠梗死周围区促进血管修复,并改善小鼠运动功能。结论:在缺血性卒中后,CircSCMH1通过FTO依赖方式调控Plpp3的m6A修饰,进一步增加Plpp3/LPP3表达,最终促进血管修复和运动功能修复。在前期研究基础上,本课题在血管修复层面进一步完善circSCMH1在缺血性卒中中功能,并且首次证实FTO调控m6A促进缺血性卒中后血管修复的分子机制,为m6A修饰成为缺血性脑卒中潜在治疗靶点提供理论基础。

关键词： circSCMH1 FTO m6A修饰血管修复缺血性脑卒中

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间充质干细胞对糖尿病足大鼠后肢血管修复的研究

间充质干细胞对糖尿病足大鼠后肢血管修复的研究

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作者：赵楠哈尔滨医科大学

学位级别：硕士

目的：研究股动脉输注人脐带间充质干细胞对糖尿病足大鼠股动脉及后肢微循环的修复作用。<br>　　方法：120只雄性SD大鼠，体重(200±15)g，随机分成两组:正常对照组(n=30)、模型组(n=90)，模型组给予STZ腹腔注... 详细信息

目的：研究股动脉输注人脐带间充质干细胞对糖尿病足大鼠股动脉及后肢微循环的修复作用。<br>　　方法：120只雄性SD大鼠，体重(200±15)g，随机分成两组:正常对照组(n=30)、模型组(n=90)，模型组给予STZ腹腔注射制备糖尿病大鼠模型，并给予高脂饲料喂养，30w后建立足烫伤模型，继续高脂喂养4w后随机分为模型实验组及模型对照组，对模型实验组给予人脐带间充质干细胞注射，剔除未成模及死亡大鼠，将大鼠分为模型实验组(n=29)，模型对照组(n=29)，正常对照组(n=28)，于注射后第3，7，14天处死大鼠。腓肠肌组织检测毛细血管/肌纤维比率计算毛细血管密度，动脉血管病变采用HE染色法检测，电镜观察血管微结构变化，股动脉血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)，腓肠肌VEGF，VEGFR-2，CD105的表达采用免疫组织化学法检测，VEGF在血浆中表达采用ELISA检测。<br>　　结果：电镜及HE染色观察动脉血管治疗后较治疗前内皮细胞有所增加;毛细血管/肌纤维比率在模型实验组较模型对照组高，但仍低于正常对照组;血浆VEGF测定显示其表达在模型实验组及模型对照组均明显高于正常对照组，模型实验组高于模型对照组;股动脉VEGF在模型对照组高于干细胞组及正常对照组;后肢骨骼肌中VEGF、VEGFR-2在模型实验组表达高于模型对照组。CD105在模型实验组表达高于正常对照组，正常对照组高于模型对照组。<br>　　结论：经股动脉输注人脐带间充质干细胞可修复血管内皮损伤，并通过对VEGF、VEGFR-2的作用参与并促进新生血管生成，改善糖尿病足大鼠后肢微循环。

关键词：糖尿病足血管修复免疫疗法干细胞输注

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斑马鱼模型在血管内皮细胞损伤与血管修复过程研究及MC4R特异性激动剂筛选中的应用

斑马鱼模型在血管内皮细胞损伤与血管修复过程研究及MC4R特异性激...

引用

作者：陈洁同济大学

学位级别：硕士

斑马鱼基因组与人类基因组相比同源性很高，已成为一种重要的研究人类疾病相关基因及高通量药物筛选的模型。血管内皮细胞为覆盖血管内层的细胞，与血液直接接触，其损伤或功能异常会导致多种疾病的发生。构建斑马鱼内皮细胞损伤模型，... 详细信息

斑马鱼基因组与人类基因组相比同源性很高，已成为一种重要的研究人类疾病相关基因及高通量药物筛选的模型。血管内皮细胞为覆盖血管内层的细胞，与血液直接接触，其损伤或功能异常会导致多种疾病的发生。构建斑马鱼内皮细胞损伤模型，在细胞层面上研究内皮细胞损伤和修复的生物学过程，有助于了解血管疾病的发生和发展。黑色素皮质激素第四受体Melanocortin4receptor（MC4R）基因突变与人遗传性肥胖相关，其通路中关键基因的失活突变导致了肥胖的早期发生，可以作为治疗遗传性肥胖靶标。目前临床上仍然缺乏针对MC4R的特异性小分子激动剂。本研究利用三种转基因斑马鱼模型，通过建立血管内皮细胞损伤模型，初步探究血管修复过程中内皮细胞的生物学行为。另一方面，利用MC4R突变斑马鱼，在动物水平上筛选针对MC4R的特异性激动药物，取得的成果如下。　　第一，构建了Tg(kdrl:GFP)、Tg(kdrl:ras-mCherry)和Tg(fli1a:nEGFP)转基因斑马鱼模型，标记血管内皮细胞。通过血管内皮细胞生长因子受体（VEGFR1-3）抑制剂lenvatinib处理30hpf斑马鱼幼体建立斑马鱼血管内皮细胞损伤模型，同时利用基于共聚焦显微镜的Timelapse技术研究了转基因斑马鱼幼体血管发育、损伤及修复的动态过程。我们发现30hpf斑马鱼胚胎经过lenvatinib处理24小时后，血管新生被显著抑制，节间血管会逐渐碎片化并消失，提示lenvatinib抑制了血管内皮细胞的增殖和存活。撤药后斑马鱼血管新生被激活，血管网络逐渐修复。我们进一步研究了血管修复过程中血管内皮细胞的生物学行为，发现血管内皮细胞和丝状伪足数量在血管修复过程中逐渐增加，表明血管内皮细胞的增殖和迁移参与了血管修复的过程。　　第二，构建了MC4R基因敲除斑马鱼模型。通过已建立的斑马鱼高通量药物筛选平台，对53个已知的MC4R协调激动剂的药物毒性进行筛选，从中筛选出19个对斑马鱼胚胎发育无明显影响的化合物。进一步通过基于Alamar-Blue的斑马鱼代谢活力检测平台比较了19个化合物对野生型和MC4R-/-斑马鱼代谢能力的影响。联合两组筛选结果发现#15化合物可以显著提高野生型和MC4R-/-斑马鱼代谢能力，抑制斑马鱼早期躯干生长并增强斑马鱼的进食量。提示该化合物可以作为MC4R潜在的特异性激动剂，激活代谢率，抑制肥胖的产生。　　综上所述，我们应用血管内皮细胞标记的转基因斑马鱼模型，通过建立基于lenvatinib的血管内皮细胞损伤斑马鱼模型，结合Timelapse显微拍摄技术研究了血管内皮细胞损伤及血管修复过程中血管内皮细胞的生物学行为。通过MC4R基因敲除斑马鱼模型筛选出了对斑马鱼无明显毒性的MC4R特异性激动剂。以上研究，为针对血管疾病和MC4R的临床药物研发提供了理论依据。

关键词：血管修复血管内皮细胞生物学行为遗传性肥胖 MC4R激动剂药物筛选

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