检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 2015年第16期95卷 1253-1257页

作者：张猛张宏伟冯文磊王艳杰印双红陈雪玲吴向未石河子大学医学院 832000 石河子大学医学院第一附属医院肝胆外科铜仁学院材料与化学工程学院石河子大学医学院免疫学教研室

目的探讨血管内皮前体细胞（EPC）促进间充质细胞（MSC）成骨分化的机制.方法分离、培养与扩增6-8周龄C57 BL/6小鼠EPC、MSC,提取血管内皮前体细胞的条件培养基（EPC-CM）并检测血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGFβ1）... 详细信息

目的探讨血管内皮前体细胞（EPC）促进间充质细胞（MSC）成骨分化的机制.方法分离、培养与扩增6-8周龄C57 BL/6小鼠EPC、MSC,提取血管内皮前体细胞的条件培养基（EPC-CM）并检测血管内皮生长因子（VEGF）、转化生长因子β1（TGFβ1）、血小板源性生长因子（PDGF）、胰岛素样生长因子1（IGF-1）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的水平;为探讨EPC和EPC-CM对MSC成骨分化的影响,实验分为MSC/EPC组和MSC组,并根据加入的EPC-CM浓度不同分为0 EPC-CM组、25％ EPC-CM组及50％ EPC-CM组,诱导14d后茜素红染色检测各组钙盐沉积情况;在50％血管内皮前体细胞条件培养基下,分别加入上述6个细胞因子的中和抗体,检测血管内皮前体细胞条件培养基中参与促进间充质细胞成骨分化的细胞因子.结果血管内皮前体细胞表面抗原VEGFR2、CD34、CD133的阳性率分别为79.3％、79.5％和76.4％,并且能在基质胶上形成血管样结构;血管内皮前体细胞分泌VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、bFGF;MSC/EPC组矿化结节形成明显多于MSC组,钙盐半定量检测示MSC/EPC组吸光度（A）值大于MSC组A值（0.733±0.032与0.236±0.020,P＜0.001）;50％ EPC-CM组矿化结节形成多于25％EPC-CM组,25％ EPC-CM组多于0 EPC-CM组;半定量分析显示50％ EPC-CM组A值高于25％EPC-CM组（0.637±0.028与0.336±0.024,P＜0.001）,25％ EPC-CM组A值高于0 EPC-CM组（0.336±0.024与0.239±0.013,P=0.004）;在50％血管内皮前体细胞条件培养基下,加入VEGF、TGFβ1、IGF-1抗体的3组矿化结节相对于PBS组明显减少,差异均有统计学意义（均P＜0.01）.结论血管内皮前体细胞可能通过分泌VEGF、TGFβ1、IGF-1促进间充质细胞成骨分化.

关键词：血管内皮前体细胞骨髓间充质细胞血管内皮生长因子转化生长因子β1 胰岛素样生长因子1

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血管内皮前体细胞对骨髓间充质干细胞干性功能的影响

血管内皮前体细胞对骨髓间充质干细胞干性功能的影响

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作者：张宏伟华中科技大学

学位级别：博士

目的：通过体内及体外实验验证EPCs对MSCs自我更新能力的影响,进而说明EPCs可能是MSCs干细胞巢细胞。方法：体外C57BL/6J(野生型)小鼠骨髓腔分离及鉴定EPCs和MSCs,使用GFP标记MSC, PKH26标记EPCs。在6孔板内均匀的种植MSCs细胞和滋养细... 详细信息

目的：通过体内及体外实验验证EPCs对MSCs自我更新能力的影响,进而说明EPCs可能是MSCs干细胞巢细胞。方法：体外C57BL/6J(野生型)小鼠骨髓腔分离及鉴定EPCs和MSCs,使用GFP标记MSC, PKH26标记EPCs。在6孔板内均匀的种植MSCs细胞和滋养细胞,使用克隆形成实验,观察不同条件下观察克隆形成数量。细胞来源有：正常培养的MSCs和与EPCs共培养的MSCs两种情况；同时使用克隆柱法取取5个大小及形态相似的克隆体,分单纯克隆MSC细胞、与EPCs联合、使用PBS联合(对照组)三种情况,通过骨髓回植的方法,注射到Rag2-/-鼠的骨髓腔内,4周后,流式细胞分离技术提取鼠外周血中的GFP阳性的MSCs,再进行克隆形成实验(Secondary CFU-F),观察克隆体的数目；同时取鼠的肝脏和肺脏,冰冻切片,荧光显微镜下观察GFP标记的阳性MSCs的分布及表达情况,体内进,步验证EPCs对MSCs的自我更新能力的影响。结果：成功从C57BL/6J鼠骨髓腔分离了MSCs和EPCs, MSCs经成成脂分化、成软骨分化、成骨分化鉴定成功；EPCs经血管形成实验(Tube formation)鉴定成功。GFP成功标记了MSCs, PKH26成功标记了EPCs。体外培养发现,与EPCs共培养后的MSCs的克隆体数目CFU-Fs比单纯的MSCs的克隆体要多(P<0.05)。体内实验发现,骨髓注射了与EPCs和MSCs的鼠外周血MSCs的克隆体(Secondary CFU-Fs)比单纯注射了MSCs的鼠外周血MSCs的Secondary CFU-Fs要多。解剖小鼠,取鼠的肺脏及肝脏,行冰冻切片,荧光倒置显微镜观察发现,骨髓注射了MSCs和EPCs后的鼠肺脏和肝脏的GFP标记的阳性MSCs的数量要比单纯注射了MSCs的鼠的表达多(P<0.05)。结论：在体内及体外,EPCs均能调控MSCs的自我更新,很可能是MSCs干细胞巢细胞组成之一。目的：探讨纤维粘连蛋白(Fibronectin, FN)及其下游受体整合素α5β1在在干细胞巢内粘附过程中的作用。方法：通过第一部分中的方法,获得,使用ELISA方法检测二者的培养基中FN的表达情况,使用免疫荧光的方法观察FN在细胞内的表达情况；细胞粘附实验观察将MSCs与EPCs体外粘附显现：使用FN-siRNA干扰MSCs与EPCs中FN的表达,进一步观察粘附现象。使用MSCs和EPCs的无血清及无因子的空白培养基分别刺激对方细胞,使用Realtime-PCR和Westernbloting检测二者FN及其下游受体的表达情况。结果：MSCs与EPCs的培养基中均表达FN,后者比前者表达量要多(P<0.05)；免疫荧光观察FN在二者中均有表达,主要分布在细胞浆及细胞膜上,二者在体外共培养体系中发生粘附。成功使用FN-siRNA干扰MSCs与EPCs中FN的表达,使其表达下调,观察二者粘附显著下降,甚至不粘附。RT-PCR结果显示,EPCs的无血清及无因子的空白培养基可使MSCs细胞内的α5β1表达上调；MSCs的无血清及无因子的空白培养基可使EPCs细胞内的FN表达上调。结论：EPCs可通过旁分泌FN与其下游的整合素α5β1受体作用,介导MSCs与EPCs的巢内粘附,从而锚固MSCs。目的：初步探讨Wnt/β-catenin通路在EPCs促进MSCs自我更新中的作用研究。方法：在体外进行克隆形成实验(CFU-F),观察加入培养过EPCs细胞的培养基对克隆形成数量的影响：使用Wnt/β-catenin通路的抑制剂XAV939干预克隆形成的培养基,观察克隆形成数量：使用RT-PCR和Western-blot方法检测过EPCs细胞的培养基对MSCs的胞内β-catenin因子mRNA和蛋白的表达影响,以此浅探EPCs对MSCs自我更新的影响及其可能机制。结果：加入培养过EPCs细胞的培养基的形成克隆数量要多于正常克隆形成培养的克隆数(P<0.05)；使用Wnt/β-catenin通路的抑制剂XAV939的克隆形成数明显下降；RT-PCR结果提示EPCs可上调MSCs β-catenin因子mRNA的表达(P<0.05)；Western-blot结果提示EPCs可上调MSCs胞内β-catenin因子蛋白的表达。结论：Wnt/β-catenin通路参与了EPCs促进MSCs自我更新的过程。

关键词：间充质干细胞血管内皮前体细胞自我更新干细胞巢调控内皮前体细胞间充质干细胞粘附干细胞巢纤维粘连蛋白整合素间充质干细胞内皮前体细胞自我更新 Wnt/β-catenin通路 XAV939

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血管内皮前体细胞对间充质干细胞分化潜能的影响

血管内皮前体细胞对间充质干细胞分化潜能的影响

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作者：张猛石河子大学

学位级别：硕士

目的1.探讨血管内皮前体细胞(EPC)对间充质干细胞(MSC)成骨分化的影响以及机制。2.探讨EPC对MSC成软骨分化的影响。方法1.利用全骨髓贴壁法从C57BL/6小鼠骨髓内分离MSC,流式细胞术检测第三代细胞表面分子表达情况;成骨、成软骨诱导检测... 详细信息

目的1.探讨血管内皮前体细胞(EPC)对间充质干细胞(MSC)成骨分化的影响以及机制。2.探讨EPC对MSC成软骨分化的影响。方法1.利用全骨髓贴壁法从C57BL/6小鼠骨髓内分离MSC,流式细胞术检测第三代细胞表面分子表达情况;成骨、成软骨诱导检测其分化能力。2.利用差速贴壁法分离EPC,通过流式细胞术检测第三代细胞表面分子,进一步采用体外管腔结构形成实验对其功能进行鉴定。3.茜素红染色检测MSC/EPC共培养、不同浓度的血管内皮前体细胞条件培养基下(EPC-CM)对MSC成骨分化的影响。4.提取血管内皮前体细胞的条件培养基并用ELISA检测VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF的含量。5.在50%EPC-CM基础上,分别加入上述6个细胞因子的中和抗体,茜素红染色检测EPC-CM中参与促进间充质细胞成骨分化的细胞因子。6.阿利辛蓝染色检测MSC/EPC共培养、不同浓度的EPC-CM对MSC成软骨分化的影响。结果1.体外分离培养的MSC表达间充质细胞表面标记物,几乎不表达造血系细胞的标志物,具备成骨、成软骨分化能力。2.利用差速贴壁法所得的血管内皮前体细胞同时表达造血细胞和内皮细胞的标记物,并且能在基质胶上形成管腔样结构。***/EPC组矿化结节形成明显多于MSC组,钙盐半定量检测示MSC/EPC组OD值大于MSC组OD值,统计学分析P<0.001;50%EPC-CM组矿化结节形成多于25%EPC-CM组,25%EPC-CM组多于0%EPC-CM组;半定量分析50%EPC-CM组OD值大于25%EPC-CM组OD值(P<0.01),25%EPC-CM组OD值大于0%EPC-CM组OD值(P<0.01)。***分泌VEGF、TGFβ1、PDGF、IGF-1、SDF-1、b FGF。5.在50%EPC-CM下,加入VEGF、TGFβ1、IGF-1抗体的三组矿化钙结节数量相对于对照组明显减少,有统计学意义(P<0.01)。***/EPC组的糖胺聚糖沉积量明显多于MSC组(P<0.001);糖胺聚糖沉积量在50%EPC-CM组、25%EPC-CM组、0%EPC-CM组无差异(P>0.05)。结论1.血管内皮前体细胞或许是通过其分泌的VEGF、TGFβ1、IGF-1促进间充质干细胞成骨分化。2.在体外血管内皮前体细胞通过直接接触促进间充质干细胞成软骨分化。

关键词：间充质干细胞血管内皮前体细胞共培养血管内皮生长因子胰岛素样生长因子1 转化生长因子1

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黄芪、三七促进骨髓干细胞体外转化并扩增血管内皮前体细胞(EPC)作用的研究

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中国中药杂志 2005年第22期30卷 1761-1763页

作者：杨博华朱陵群张娟子牛福玲崔巍北京中医药大学附属东直门医院北京100700

目的:探讨黄芪、三七对骨髓干细胞体外转化并扩增EPC的促进作用及其可能的机制。方法:常规采集下肢缺血患者骨髓血,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,不同条件下贴壁扩增细胞。镜下细胞的形态学观察,流式细胞仪检测CD3+4细胞的百分比... 详细信息

目的:探讨黄芪、三七对骨髓干细胞体外转化并扩增EPC的促进作用及其可能的机制。方法:常规采集下肢缺血患者骨髓血,密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,不同条件下贴壁扩增细胞。镜下细胞的形态学观察,流式细胞仪检测CD3+4细胞的百分比。结果:细胞呈梭形,束状排列,间杂有少量圆形细胞。与对照组相比,黄芪中、低剂量组,三七中、高剂量组CD3+4细胞的百分比均显著增加。结论:黄芪、三七能促进EPC的转化和增殖。

关键词：黄芪三七骨髓干细胞 CD34^+细胞血管内皮前体细胞

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外周血中血管内皮前体细胞的分离和鉴定

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中华病理学杂志 2005年第2期34卷 115-117页

作者：马丽萍李伟李玉林张丽红邵明玉吉林大学病理生物学重点实验室长春130021 吉林大学免疫学教研室长春130021

新血管的形成主要有两种方式,一是血管形成(vasculogenesis),即造血血管母细胞(hemangioblast)原位分化成内皮细胞并形成原始毛细血管丛的过程[1,2];二是血管新生(angiogenesis),指由已存在的血管以出芽的方式形成新血管的过程[3,4].一... 详细信息

新血管的形成主要有两种方式,一是血管形成(vasculogenesis),即造血血管母细胞(hemangioblast)原位分化成内皮细胞并形成原始毛细血管丛的过程[1,2];二是血管新生(angiogenesis),指由已存在的血管以出芽的方式形成新血管的过程[3,4].一直以来,人们认为血管形成只发生于胚胎发育时期,在出生后并不存在.1997年,Asahara等[5]发现在人的外周血中存在血管内皮前体细胞(endothelial progenitor cells, EPC),该种细胞可参与出生后的多种病理和生理过程中的新血管形成[6],此现象同胚胎时期的血管形成相类似,故称作出生后血管形成(postnatal vasculogenesis).我们采用外周血作为材料来源,建立了一种稳定可重复的分离、鉴定末梢血液EPC的方法,为进一步研究EPC在生理和病理过程中的作用提供重要的实验基础。

关键词：血管内皮前体细胞外周血血管形成出生后血管新生毛细血管造血过程方式时期

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外周血中循环血管内皮细胞及血管内皮前体细胞的扩增与鉴定

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肿瘤 2004年第2期24卷 142-145页

作者：李慧任秀宝张澎安秀梅郝希山天津医科大学附属肿瘤医院免疫室天津300060

目的　证实外周血中循环血管内皮细胞 (circulatingendothelialcells,CECs)及血管内皮前体细胞 (circulatingendothelialprecursors,CEPs)的存在 ,以及内皮前体细胞的增殖分化能力。方法　应用流式细胞法检测 5 7例肿瘤患者及 15例正常... 详细信息

目的　证实外周血中循环血管内皮细胞 (circulatingendothelialcells,CECs)及血管内皮前体细胞 (circulatingendothelialprecursors,CEPs)的存在 ,以及内皮前体细胞的增殖分化能力。方法　应用流式细胞法检测 5 7例肿瘤患者及 15例正常人外周血中的CECs/CEPs。选择经造血干细胞动员的肿瘤患者 ,分离单个核细胞 (mononuclearcells,MNCs) ,在VEGF、IGF及bFGF条件下培养血管内皮细胞 ,并应用透射电镜法对培养细胞进行鉴定。结果　肿瘤患者外周血中CECs/CEPs含量分别为0 .378± 0 .0 4 7%、0 .0 5 9± 0 .0 13% ,高于正常对照组。培养细胞透射电镜下可见Weibel Palade小体 ,为血管内皮细胞的特异性标志。结论　外周血中存在CECs/CEPs ,在肿瘤患者体内存在血管内皮及其前体细胞的动员 ,循环血管内皮干 /祖细胞可进一步分化成熟。

关键词：外周血血管内皮细胞血管内皮前体细胞鉴定透射电镜法血管生成细胞培养恶性肿瘤

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人胚胎主动脉血管内皮前体细胞移植修复血管内皮损伤的初步研究

人胚胎主动脉血管内皮前体细胞移植修复血管内皮损伤的初步研究

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作者：徐荣伟北京协和医学院

学位级别：博士

研究背景及目的：目前,经皮腔内血管成形术(percutaneous transluminal angioplasty, PTA)已经被普遍应用于临床,成为心血管疾病诊治的重要手段。与传统意义上的外科手术相比,PTA减少了手术创伤,降低了手术风险,具有简捷和微创的优点,... 详细信息

研究背景及目的：目前,经皮腔内血管成形术(percutaneous transluminal angioplasty, PTA)已经被普遍应用于临床,成为心血管疾病诊治的重要手段。与传统意义上的外科手术相比,PTA减少了手术创伤,降低了手术风险,具有简捷和微创的优点,获得了令人满意的疗效。然而,在进行PTA时,不可避免地会损伤血管内皮,术后必然会引起一系列的修复反应。PTA术后管壁新生内膜的过度增生将会导致原手术段发生再狭窄。再狭窄是PTA术后最大的并发症,将再次危及患者的健康和生命。因此,PTA术后如何防治再狭窄成为当前外科领域亟待解决的难题之一。血管内皮细胞损伤是导致再狭窄发生的始动因素。手术损伤及血流动力学改变导致内皮细胞变性和剥脱,内膜下的基质暴露于血液,引起血小板聚集于该处。血小板释放有丝分裂原,可以趋化血小板和粒细胞聚集,还可以刺激血管中膜的平滑肌细胞增殖、迁移、分泌以及血管壁结构的重塑。与此同时,血管内膜完整性的破坏会导致其自身分泌的血管保护性介质减少,而血管收缩性介质及促生长物质的分泌会增多。各种因素相互作用共同促进了再狭窄的发生。因此,血管内皮细胞成为PTA术后防治再狭窄的靶点之一。保护血管内皮细胞,修复血管内皮损伤,恢复血管内皮功能成为关键策略之一。血管内皮前体细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)属于干细胞群体,来源于骨髓,动员后可进入外周血循环,募集到血管损伤部位,增殖并分化成为血管内皮细胞,进而替代受损伤的血管内皮。大量研究表明,在修复血管内皮损伤和血管新生中EPCs都扮演着极其重要的角色。在本研究中,我们应用球囊导管损伤大鼠颈总动脉来建立急性血管内皮损伤模型,然后将人胚胎主动脉来源的EPCs局部注入实验动物损伤的颈动脉管腔内,观察EPCs是否可以介导损伤血管内皮的修复,抑制新生内膜的增生。我们的研究旨在为人胚胎来源EPCs的临床应用提供一些实验依据。研究方法：1、建立大鼠颈动脉球囊损伤模型。通过苏木素-伊红染色(hematoxylin-eosin,HE)明确颈动脉球囊损伤模型构建成功,利用伊文氏蓝(Evans blue)染色观察颈动脉内皮损伤情况。2、球囊损伤颈动脉后,将BCECF-AM荧光染料标记的EPCs局部注入损伤的颈动脉段管腔内,24小时后处死大鼠,获取损伤部位的颈动脉,体视荧光显微镜下观察标记有绿色荧光的EPCs在颈动脉内膜表面的分布情况。3、将大鼠随机分为两组：实验组和对照组,每组各10只。行球囊损伤颈动脉后,实验组局部注入40μl含1×106EPCs的细胞悬液,对照组则局部注入等量生理盐水,30分钟后恢复颈动脉血流,关闭颈部切口。4、术后2周、4周各处死实验组及对照组5只大鼠,获取损伤侧颈总动脉近分叉部分,约1cm长度,HE染色评估EPCs移植对颈动脉损伤后新生内膜增生的影响,人vWF、CD31及线粒体免疫组织化学染色分析人源性EPCs移植后的存活及分化情况。研究结果：1、HE染色证实大鼠颈动脉球囊损伤模型成功建立。显微镜下观察可见：健侧颈总动脉内膜覆盖着一层完整的血管内皮,可见内膜表面存在蓝染的细胞核,而损伤侧的颈总动脉可见内膜层缺失,无单层内皮细胞覆盖。通过Evans blue染色观察大鼠颈动脉内皮损伤情况,可见：健侧颈总动脉由于血管内皮细胞单层存在未被染色,而损伤侧的颈总动脉基本上被染成蓝色,提示血管内皮剥脱。2、BCECF-AM荧光染料标记的EPCs移植后24小时,体视荧光显微镜下观察到血管内膜损伤处有散在的绿色荧光表达,表明EPCs移植后可以粘附到血管损伤内膜表面并存活下来。3、在球囊损伤颈动脉后2周和4周,HE染色可见：无论实验组还是对照组的颈动脉均表现为内膜增生、紊乱,管腔缩小。然而,实验组的血管内膜面积(1A)和内膜/中膜面积比值(I/M)均明显低于对照组(P<0.05),表明EPCs移植抑制了大鼠颈动脉损伤后血管新生内膜的增生。而免疫组织化学染色发现人vWF在实验组血管内膜表面呈阳性表达,进一步提示EPCs移植介导了损伤血管的再内皮化。4、免疫组织化学染色可见实验组颈动脉内膜表面人CD31及线粒体呈阳性表达,而对照组的血管内膜表面无阳性表达,这表明人胚胎主动脉EPCs移植后能够粘附于损伤的血管内膜,存活并能分化为成熟血管内皮细胞,形成完整的血管内皮。结论：人胚胎主动脉来源的EPCs移植至血管损伤部位后,可以分化为血管内皮细胞,有效抑制血管新生内膜增生,修复血管内皮损伤,可以用作治疗PTA术后再狭窄的细胞材料。

关键词：血管损伤细胞移植血管内皮前体细胞人胚胎主动脉新生内膜

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骨髓间充质干细胞促进血管内皮前体细胞增殖的机制研究

骨髓间充质干细胞促进血管内皮前体细胞增殖的机制研究

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作者：侯吉学华中科技大学

学位级别：博士

第一部分：间充质干细胞与血管内皮前体细胞相互影响的现象研究　　目的:探讨如何从C57BL/6小鼠骨髓中分离、培养间充质干细胞(MSCs)与内皮前体细胞(EPCs)，并研究对其进行鉴定的方法，同时探讨EPCs与MSCs在非接触共培养体系里，MSCs对E... 详细信息

第一部分：间充质干细胞与血管内皮前体细胞相互影响的现象研究　　目的:探讨如何从C57BL/6小鼠骨髓中分离、培养间充质干细胞(MSCs)与内皮前体细胞(EPCs)，并研究对其进行鉴定的方法，同时探讨EPCs与MSCs在非接触共培养体系里，MSCs对EPCs增殖的影响。　　方法：1.利用骨髓差速贴壁法从C57BL/6小鼠骨髓中分离出MSC，流式细胞术检测第三代MSCs表面分子表达情况;诱导并检测其成骨、成软骨的分化能力。　　2.同样利用骨髓差速贴壁法从C57BL/6小鼠骨髓中分离出EPC，流式细胞术检测第三代EPCs表面分子，并对其体外管腔结构形成实验进行功能的鉴定。　　3.取第三代的MSCs和EPCs，按1:1的比例接种入Transwell小室共培养体系中，实验组为：以下室接种EPCs，上室接种MSCs;对照组为下室接种EPCs，上室接种不含MSCs的空培养基。采用MTT比色法和BrdU荧光标记法检测MSCs对EPCs增殖能力的影响。　　结果:1.从C57BL/6J鼠骨髓腔中成功的分离了MSCs和EPCs，并对两者表面分子标志物进行检测。在分化潜能方面进行鉴定：MSCs经成脂分化、成软骨分化、成骨分化鉴定成功;EPCs经血管形成实验（Tube formation）鉴定成功。　　2. MTT比色法结果显示，在24、48、72、96小时实验组OD值都明显高于对照组，差异均有统计学意义( P＜0.05)　　3. BrdU荧光标记法结果显示与对照组相比较，实验组BrdU阳性细胞数比例显著增多( P＜0.05)。　　结论:利用骨髓差速贴壁法，可分离、纯化及扩增到MSCs和EPCs，MSCs与EPCs在非接触共培养条件下能促进EPCs的增殖。　　第二部分:间充质干细胞促进血管内皮前体细胞增殖的机制研究　　目的：探讨胰岛素样生长因子1（Insulin-like growth factor-1, IGF-1）及其下游胰岛素样生长因子1受体（Insulin-like growth factor1 receptor，IGF-1R）在间充质干细胞促进血管内皮前体细胞增殖过程中的作用。　　方法：　　1.使用ELISA方法检测MSCs与EPCs中IGF-1的表达情况;2.使用不同浓度的IGF-1分别刺激EPCs，检测EPCs的增殖情况。　　3.使用IGF-1-siRNA干扰MSCs中IGF-1的表达，使用IGF-1R-siRNA干扰EPCs中IGF-1R的表达，RT-PCR分别验证IGF-1mRNA和IGF-1RmRNA的表达量;4. MTT法分别检测各组EPC增殖情况。　　结果：　　1. MSCs培养液中的IGF-1的表达为远远高于EPCs培养液，差异具有统计学意义（P<0.01）。　　2.不同浓度的IGF-1分别刺激EPCs，结果显示：20、50、100和200 ng/mL浓度的IGF-1均能使 EPCs的数量及吸光度值较对照组都明显增加(P<0.05)。100 ng/mL的IGF-1能明显促进EPCs的增殖(P<0.05)。　　3.使用IGF-1-siRNA干扰MSCs中IGF-1的表达，使用IGF-1R-siRNA干扰EPCs中 IGF-1R的表达，RT-PCR检测 IGF-1mRNA和 IGF-1RmRNA的表达量明显下降(P<0.05)。　　4. MTT法分别检测各组EPC增殖，结果显示：IGF-1-siRNA干扰MSCs后，EPCs的增殖明显受到抑制，与对照组比较具有统计学意义(P<0.05);IGF-1R-siRNA干扰EPCs后，EPCs的增殖也明显受到抑制，与对照组比较仍具有统计学意义(P<0.05)。IGF1的中和抗体也能在MSCs促进EPCs增殖的过程中，起抑制EPCs增殖的作用(P<0.05)。　　结论：IGF-1可促进EPCs的增殖，可能通与其下游的IGF-1受体作用结合起作用。　　第三部分：PI3K/Akt信号通路在MSCs促进EPCs增殖中的作用研究　　目的：初步探讨PI3K/Akt通路在MSCs促进EPCs增殖中的作用研究。　　方法：我们设计三组实验：***组***+IGF-1组***+IGF-1+LY294002组。使用合成的小分子 LY294002，它是一种蛋白激酶抑制剂，能够特异性的阻断三磷酸酰肌醇蛋白激酶（Phosphotidylinsitol-3-Kinase，PI3K）细胞信号传导通路;使用 MTT方法检测三组EPCs增殖情况;使用RT-PCR方法检测三组IGF-1受体因子mRNA的表达影响，用Western-blot方法检测三组磷酸化Akt蛋白的表达量。将转染GFP荧光的两组细胞：EPCs组和EPCs+ IGF-1R siRNA组，分别移植进C57BL/6小鼠体内，利用荧光显微镜检测小鼠股动脉

关键词：间充质干细胞细胞增殖血管内皮前体细胞胰岛素样生长因子1 IGF-1表达 PI3K/Akt通路

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血管内皮前体细胞在糖尿病足治疗中的应用

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中国医药生物技术 2011年第5期6卷 374-377页

作者：丁浩张文健温见燕叶志东庄乾淑李建中娄晋宁刘鹏卫生部中日友好医院血管外科北京100029 卫生部中日友好医院临床医学研究所北京100029 苏州大学附属第一医院老年病科 215006

糖尿病是严重损害我国人口健康的主要疾病之一，糖代谢紊乱所引发的血管病变是导致糖尿病患者致残和致死的丰要原因。如何防治糖尿病血管病变所产生的并发症是糖尿病研究的热点课题。糖尿病足是糖尿病患者由于神经或血管病变导致足部缺... 详细信息

糖尿病是严重损害我国人口健康的主要疾病之一，糖代谢紊乱所引发的血管病变是导致糖尿病患者致残和致死的丰要原因。如何防治糖尿病血管病变所产生的并发症是糖尿病研究的热点课题。糖尿病足是糖尿病患者由于神经或血管病变导致足部缺血性坏死并合并感染的一种严重并发症。由于对其发生机制不完全明了，目前临床缺乏特异有效的治疗手段。

关键词：糖尿病足血管内皮前体细胞治疗糖尿病血管病变严重并发症应用糖代谢紊乱缺血性坏死

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血管内皮前体细胞的研究进展

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医学信息 2015年第37期 398-399页

作者：郭彬黄星门秀丽华北理工大学基础医学院河北唐山063000

最近许多实验表明：成年骨髓是参与出生后血管发生的一个细胞来源。内皮前体细胞（EPC）在这一过程中发挥重要作用，因为它能够循环、增殖并且通过分化成成熟内皮细胞参与血管网络的发育。Asahara等[1]发现成体CD34+造血前体细胞能在体... 详细信息

最近许多实验表明：成年骨髓是参与出生后血管发生的一个细胞来源。内皮前体细胞（EPC）在这一过程中发挥重要作用，因为它能够循环、增殖并且通过分化成成熟内皮细胞参与血管网络的发育。Asahara等[1]发现成体CD34+造血前体细胞能在体外分化成内皮表型，这些细胞被命名为内皮前体细胞（EPCs），表达各种内皮标志并能掺入到缺血部位新形成的血管。另有研究表明成年个体循环血中也存在血管内皮前体细胞，这种细胞有促进血管新生的作用，而血管新生是组织修复所必须的。但是，从另一方面讲，促进血管生成也就促进了肿瘤的生长和转移。本文仅就内皮前体细胞的来源、特性、分离培养及与临床的关系作一简要综述。

关键词：血管内皮前体细胞血管新生出生后血管发生造血前体细胞组织修复循环血血管网络血管生成细胞来源体外分化内皮细胞分离培养综述转移肿瘤增殖特性实验缺血命名

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