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电针对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑内血管内皮生长因子受体-2 mRNA和脑源性神经营养因子蛋白表达的影响

中国康复理论与实践 2013年第2期19卷 114-118页

作者：马璟曦罗勇蔡敏重庆市中山医院重庆市400013 重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆市神经病学重点实验室重庆市400016

目的观测电针大鼠双侧合谷穴(LI 4)对局灶性脑缺血再灌注后脑内血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)mRNA和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响,探讨神经发生和血管生成间可能的相互联系和作用。方法线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注... 详细信息

目的观测电针大鼠双侧合谷穴(LI 4)对局灶性脑缺血再灌注后脑内血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)mRNA和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达的影响,探讨神经发生和血管生成间可能的相互联系和作用。方法线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。90只大鼠随机分为对照组(n=6)、模型组(n=42)和电针组(n=42)。观察局灶性脑缺血1 h后再灌注2 h、12 h、24h、3 d、7 d、14 d、21 d共7个时相点,每个时相点6只大鼠。采用反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)法检测VEGFR-2 mRNA的表达,免疫组化法检测BDNF蛋白的表达。结果再灌注后12 h、24 h,电针组VEGFR-2 mRNA明显高于模型组(P<0.01),3 d也高于模型组(P<0.05)。与模型组比较,电针组海马区BDNF蛋白在再灌注后2 h开始增加(P<0.05),24 h达高峰(P<0.01),3 d后仍有显著性差异(P<0.05),但呈现增加幅度降低的趋势。结论电针能促进脑缺血再灌注后VEGFR-2 mRNA、BDNF蛋白的表达;神经血管因子可能是神经发生与血管生成联系与作用的分子学基础。

关键词：缺血再灌注神经血管因子血管内皮生长因子受体-2 脑源性神经营养因子电针大鼠

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4-吡啶苯基醚类、邻氨基苯甲酰胺类血管内皮生长因子受体-2抑制剂的设计合成及活性评价

4-吡啶苯基醚类、邻氨基苯甲酰胺类血管内皮生长因子受体-2抑制剂...

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作者：王远游山东大学

学位级别：硕士

恶性肿瘤已其发病率高、致死率高、治愈率低等特点对人类的健康和生存构成严重的威胁，成为人类最重要的致死因素。人们对肿瘤发生与发展机制的深入研究使得靶向治疗肿瘤成为可能。1971年，福克曼首次提出了肿瘤的持续生长、转移依赖于... 详细信息

恶性肿瘤已其发病率高、致死率高、治愈率低等特点对人类的健康和生存构成严重的威胁，成为人类最重要的致死因素。人们对肿瘤发生与发展机制的深入研究使得靶向治疗肿瘤成为可能。1971年，福克曼首次提出了肿瘤的持续生长、转移依赖于新生血管的支持的观点。肿瘤细胞基因及肿瘤组织微环境的改变使得肿瘤具有促血管生成的能力来满足其持续生长时养分与氧气的供给。　　血管的生成过程是众多配体按次序与其受体结合后活化下游信号通路后而产生的极其复杂的过程的集合。在这其中，VEGF信号通路被认为是诱导肿瘤血管生成的限速步骤，且发挥着最为重要的作用。VEGF与其相应的受体VEGFR结合后，导致受体本身发生二聚化，自磷酸化等过程，激活下游信号通路，产生血管通透性增加等生理效应最终导致肿瘤的血管生成过程。在VEGFR的所有亚型中，VEGFR-2与肿瘤的血管生成过程关系最为密切，发挥着最为关键的作用。　　鉴于VEGFR-2在肿瘤血管生成中发挥的重要作用，对以VEGFR-2为靶点的小分子抑制剂的研究成为近二十年来研究的热点，同时也取得了巨大的成功。目前已经有索拉非尼、舒尼替尼等7个药物上市，20余个进入临床试验阶段。　　索拉非尼是2005年FDA批准上市的多靶点抗肿瘤药物用于治疗早期肾癌、肝癌，它作用的靶点包括Ras/Raf激酶，受体酪氨酸激酶VEGFR-2/3、PDGFRFLT3、Ret、c-Kit等。AAL-993是邻氨基苯甲酸类VEGFR-2激酶抑制剂，是基于valatanib衍生而来的。通过利用计算机辅助药物设计的手段进行基于结构的药物设计，我们设计合成了20个4-吡啶苯基醚类化合物和8个邻氨基苯甲酰胺类化合物。　　 4-吡啶苯基醚类衍生物的合成以皮考林酸作为起始原料，通过亲电取代、亲核加成-消除、亲电加成及成环反应等制备。邻氨基苯甲酰胺类衍生物是通过邻硝基苯甲酸作为起始原料，利用亲核加成-消除、氢化还原、亲核取代反应等制备。本论文合成的20个4-吡啶苯基醚类化合物以及8个邻氨基苯甲酰胺类化合物均通过了1H-NMR、HRMS光谱分析确证，并用HPLC测定了所合成化合物的纯度。　　本论文中涉及的目标化合物均用时间分辨荧光共振能力转移(TR-FRET)的方法测定了所有目标化合物对VEGFR-2酶的抑制活性，活性结果显示所有合成化合物对VEGFR-2的抑制活性较弱，其IC50均大于3μM。用MTT法测定了对人结肠癌HCT-116细胞以及人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长抑制活性，结果显示大部分4-吡啶苯基醚类化合物对HCT-116显示出较好的生长抑制活性，对MDA-MB-231的生长抑制作用不明显;邻氨基苯甲酰胺类化合物中具有芳基硫脲结构的化合物Ⅶ-1～Ⅶ-4对两种细胞系均表现出较好的生长抑制活性，而具有咪唑磺酰胺结构的化合物Ⅷ-1～Ⅷ-4对上述两种细胞系均未表现出明显的活性。另外，选择细胞活性较好的化合物10a研究了它们对HCT-116细胞周期的影响以及能否诱导细胞凋亡，结果显示化合物10a主要作用于HCT-116细胞周期的G2期通过诱导HCT-116，细胞凋亡而产生对其生长抑制作用的。

关键词：血管内皮生长因子受体-2 4-吡啶苯基醚邻氨基苯甲酰胺小分子抑制剂化合物纯度抗肿瘤活性

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靶向血管内皮生长因子/血管内皮生长因子受体-2的血管生成抑制剂

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药学进展 2013年第1期37卷 8-16页

作者：王秀云王锦政张娟冯亚宁王旻中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 华东医药公司江苏南京210016

血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)是调节血管生成、内皮细胞增殖和迁移等的关键调控因子。通过阻断VEGF与VEGFR-2的结合可抑制新生血管形成,而新生血管的形成是肿瘤生长和转移的基础。介绍VEGF/VEGFR-2在血管... 详细信息

血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)是调节血管生成、内皮细胞增殖和迁移等的关键调控因子。通过阻断VEGF与VEGFR-2的结合可抑制新生血管形成,而新生血管的形成是肿瘤生长和转移的基础。介绍VEGF/VEGFR-2在血管形成中的作用,以及具有抗肿瘤作用的靶向VEGF/VEGFR-2的血管生成抑制剂的研究近况。

关键词：血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体-2 血管生成抑制剂抗肿瘤

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血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量筛选模型的建立和应用

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中国药学杂志 2012年第11期47卷 894-898页

作者：严明王静宜胡洁苗靖姗何玲张陆勇中国药科大学国家新药筛选实验室南京210009 中国药科大学药学院药理教研室南京211198

目的利用均相时间分辨荧光(HTRF)技术建立血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量药物筛选模型,从化合物样品库中寻找小分子抑制剂。方法使用20μL检测体系,384低容量白板,采用均相时间分辨荧光技术对反应体系中的酶活性进行荧光检测,进而... 详细信息

目的利用均相时间分辨荧光(HTRF)技术建立血管内皮生长因子受体-2抑制剂高通量药物筛选模型,从化合物样品库中寻找小分子抑制剂。方法使用20μL检测体系,384低容量白板,采用均相时间分辨荧光技术对反应体系中的酶活性进行荧光检测,进而评价待测样品的抑制活性。模型建立的体系优化包括如下实验步骤:酶浓度及反应时间优化,ATP和底物米氏常数测定,质控实验包括反应体系信噪比实验、抑制剂SU5416的IC50测定,Z'因子的测定。在建立稳定模型检测体系之后,对本中心化合物库提供的10 560个样品进行活性筛选,并对部分活性化合物进行IC50的测定。结果在血管内皮生长因子受体-2活性体系优化实验中求得血管内皮生长因子受体-2激酶最适反应酶浓度为0.10 ng.μL-1,最适反应时间为15min,ATP Km=0.75μmol.L-1,底物Km=94.90 nmol.L-1,信噪比底物:SA=2∶1,Z'值为0.85,阳性药IC50=1.03μmol.L-1。通过部分初筛活性样品进行复筛研究,得到3个活性化合物S2-14,S2-16、S2-38 IC50分别为1.01×10-4,6.04×10-5,7.23×10-6mol.L-1。结论利用均相时间分辨荧光技术成功建立了血管内皮生长因子受体-2激酶高通量筛选模型,并进行了一定量的定向筛选研究,发现了若干先导化合物。本实验体系方法可靠,结果稳定,可作为抗血管新生天然产物筛选体系进行应用推广。

关键词：均相时间分辨荧光血管内皮生长因子受体-2 血管新生高通量筛选

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运动预处理对脑缺血再灌注大鼠脑缺血区VEGF/VEGFR2/Dock6信号通路的影响

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中国康复医学杂志 2024年第2期39卷 170-177页

作者：孙晓莹周璐唐丽亚刘锦灿蒋心如瞿启睿艾坤湖南中医药大学针灸推拿与康复学院湖南省长沙市410208 郴州市第一人民医院康复医学科

目的:从VEGF/VEGFR2/Dock6信号途径探索运动预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧脑组织血管新生的影响。方法:采用随机数字表法将SD雄性大鼠分为假手术组、模型组和运动预处理组,每组18只。造模前,假手术组与模型组不给予任何处理,运动... 详细信息

目的:从VEGF/VEGFR2/Dock6信号途径探索运动预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血侧脑组织血管新生的影响。方法:采用随机数字表法将SD雄性大鼠分为假手术组、模型组和运动预处理组,每组18只。造模前,假手术组与模型组不给予任何处理,运动预处理组大鼠给予适应性跑步训练3d,电动跑台坡度为0°,速度10m/min,每天1次,每次20min。适应性训练结束后,运动预处理组给予为期3周的正式跑步训练,每周连续训练6d,休息1d,电动跑台坡度为0°,速度15m/min,30min/d。模型组和运动预处理组采用Koizumi栓线法加以改良制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,假手术组仅切开皮肤,不插栓线。采用Zea-Longa评分和改良神经严重程度评分(mNSS)法进行神经功能缺损评估;TTC染色法检测脑梗死体积百分比,HE染色观察缺血侧大脑皮质组织形态学改变;免疫组化法观察缺血侧大脑皮质CD31表达水平;蛋白质免疫印迹测定VEGFA、VEGFR2、Dock6蛋白表达水平。结果:①Zea-Longa评分:再灌注麻醉清醒后,与假手术组相比,其余2组大鼠Zea-Longa评分均增高(P<0.01),且2组间Zea-Longa评分无显著性意义;再灌注72h后,与假手术组相比,模型组大鼠Zea-Longa评分显著增高(P<0.01);与模型组相比,运动预处理组大鼠Zea-Longa评分显著降低(P<0.05)。②mNSS评分:再灌注72h后,与假手术组相比,模型组大鼠mNSS评分显著增高(P<0.01);与模型组相比,运动预处理组大鼠mNSS评分显著降低。③TTC染色:与假手术相比,模型组脑梗死体积百分比增大(P<0.01);与模型组相比,运动预处理组脑梗死体积百分比相对减小(P<0.05)。④HE染色:与假手术组相比,模型组大鼠缺血侧大脑皮质出现显著病理学改变;与模型组相比,运动预处理组大鼠缺血侧大脑皮质病理学改变减轻。⑤CD31免疫组化:与假手术组相比,模型组大鼠缺血侧大脑皮质中CD31(P<0.01)显著升高;与模型组相比,运动预处理组大鼠缺血侧大脑皮质中CD31(P<0.01)进一步升高。⑥VEGF、VEGFR2、Dock6蛋白质免疫印迹:与假手术组相比,模型组大鼠缺血侧大脑皮质VEGF(P<0.05)、VEGFR2(P<0.05)、Dock6(P<0.01)蛋白表达含量升高;与模型组相比,运动预处理组大鼠缺血侧大脑皮质中VEGF(P<0.05)、VEGFR2(P<0.05)、Dock6(P<0.01)蛋白表达含量进一步升高。结论:运动预处理可有效促进脑缺血后血管新生,减轻脑缺血再灌注以后的神经功能缺损表现,这一作用可能与其激活VEGF/VEGFR2/Dock6信号途径有关。

关键词：缺血再灌注运动预处理血管新生血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体-2 细胞分裂蛋白6

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香草扶正合剂对Lewis肺癌小鼠肿瘤血管生成及糖酵解相关酶HK2、LDH-A基因表达的影响

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中华中医药杂志 2024年第7期39卷 3717-3723页

作者：程权王硕傅华洲西湖大学医学院附属杭州市第一人民医院杭州310006 浙江萧山医院杭州311202

目的:探讨香草扶正合剂(XCFZ)对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤效应机制。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,顺铂组,XCFZ低、中、高剂量组,联合组,每组10只;造模第2天开始,XCFZ低、中、高剂量组分别给予X... 详细信息

目的:探讨香草扶正合剂(XCFZ)对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤效应机制。方法:采用Lewis肺癌细胞株培养移植法建立肺癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,顺铂组,XCFZ低、中、高剂量组,联合组,每组10只;造模第2天开始,XCFZ低、中、高剂量组分别给予XCFZ 0.93、1.86、3.72 g/mL灌胃;顺铂组以0.64 mg/mL顺铂溶液0.1 mL/2 d腹腔注射,同时以双蒸水0.2 mL/d灌胃,联合组以XCFZ中剂量灌胃和顺铂腹腔注射联合给药,模型组按照等量0.9%氯化钠溶液给药,每天1次,连续给药14d;称取小鼠体质量、瘤重、脾脏及胸腺重量,并计算抑瘤率、脾指数、胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织形态学变化,qRT-PCR检测肿瘤组织中HK2、LDH-A mRNA表达,免疫组化及Western Blot检测瘤组织VEGFR-2、VEGF、PI3K、Akt蛋白的表达。结果:联合组抑瘤率最高,其次为顺铂组和XCFZ中剂量组。与模型组比较,XCFZ高、中剂量组及联合组脾指数显著升高(P<0.01,P<0.05),XCFZ高、中剂量组胸腺指数显著升高(P<0.01,P<0.05),顺铂组胸腺指数及脾指数显著降低(P<0.01,P<0.05);与顺铂组比较,XCFZ各剂量组及联合组胸腺指数显著升高(P<0.05,P<0.01),XCFZ中、高剂量组和联合组脾指数显著升高(P<0.01)。XCFZ各用药组肿瘤细胞核仁固缩,细胞坏死和核碎裂现象亦较多;顺铂组肿瘤细胞较小,核分裂现象和异型细胞少见,坏死碎裂细胞较多。与模型组比较,XCFZ各剂量组、顺铂组和联合组LDH-A和HK2 mRNA表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01);与顺铂组比较,联合组LDH-A mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与模型组比较,XCFZ中、高剂量组及顺铂组、联合组小鼠肿瘤组织中VEGFR-2、VEGF、PI3K、Akt蛋白表达均显著降低(P<0.01,P<0.05);与顺铂组比较,联合组VEGFR-2、VEGF、PI3K、Akt蛋白表达均显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:XCFZ联合顺铂对Lewis肺癌小鼠有改善免疫功能及增效减毒作用,其机制是通过PI3K/Akt通路干预VEGF/VEGFR-2抗肿瘤血管生成,以及下调糖酵解LDH-A基因表达来抑制肺癌增殖转移。

关键词：香草扶正合剂肺癌血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体-2 PI3K/Akt信号通路己糖激酶2 乳酸脱氢酶机制

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制萎扶胃丸对胃癌前病变模型大鼠的干预作用研究

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中国临床药理学杂志 2024年第23期40卷 3429-3433页

作者：豆鹏程袁学玲宋瑞平封壮壮姚柳伊陈心怡王晓龙左娇娇舒劲甘肃中医药大学中医临床学院甘肃省中医院脾胃病诊疗中心甘肃省中医药研究院中心实验室

目的基于缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子（VEGF）信号通路探究制萎扶胃丸对胃癌前病变（PLGC）模型大鼠的干预作用，及其作用机制。方法通过N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍联合氨水自由饮用、饥饱失常、乙醇灌胃、雷尼替... 详细信息

目的基于缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）/血管内皮生长因子（VEGF）信号通路探究制萎扶胃丸对胃癌前病变（PLGC）模型大鼠的干预作用，及其作用机制。方法通过N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍联合氨水自由饮用、饥饱失常、乙醇灌胃、雷尼替丁饲料喂养的复合造模法构建PLGC模型大鼠，并随机分为模型组、对照组及高、中、低剂量实验组，每组8只；另取8只健康大鼠设为空白组。高、中、低剂量实验组分别灌胃给予1.67、0.84、0.42 g·kg-1制萎扶胃丸溶液，对照组灌胃给予2.00×10-3g·kg-1叶酸溶液，空白组和模型组均灌胃给予等量0.9%NaCl,每日1次，共4周。用透射电子显微镜检测胃组织微血管结构变化，用蛋白质印迹法检测HIF-1α、VEGF、血管内皮生长因子受体-2（VEGFR-2）和血管生成素-2（Ang-2）蛋白的表达水平。结果相较于模型组，低、中、高剂量实验组大鼠胃组织微血管结构异常现象出现一定程度的改善，其中以高剂量实验组效果最为明显。高、中剂量实验组和对照组、模型组、空白组的HIF-1α蛋白相对表达水平分别为0.43±0.03、0.66±0.04、0.77±0.01、0.80±0.02和0.37±0.02,VEGF蛋白相对表达水平分别为0.97±0.06、1.21±0.06、1.51±0.07、1.54±0.05和0.88±0.02,VEGFR-2蛋白相对表达水平分别为1.03±0.06、1.18±0.04、1.37±0.05、1.45±0.02和0.70±0.02,Ang-2蛋白相对表达水平分别为0.51±0.03、0.61±0.02、0.71±0.01、0.78±0.03和0.34±0.01。高、中剂量实验组的上述指标与模型组相比，在统计学上差异均有统计学意义（均P<0.01）。结论制萎扶胃丸可能通过抑制HIF-1α/VEGF信号通路异常激活，改善缺氧微环境，减少血管生成，从而有效干预PLGC进展。

关键词：制萎扶胃丸胃癌前病变缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子血管生成素-2 血管内皮生长因子受体-2

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葛根芩连消渴方联合加味桃核承气汤治疗糖尿病微血管病变的疗效

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辽宁中医杂志 2025年第2期52卷 107-110页

作者：王馨禾张凌睿徐云生山东中医药大学第二附属医院山东济南250001

目的探讨葛根芩连消渴方联合加味桃核承气汤治疗糖尿病微血管病变的疗效。方法选取2022年4月-2024年4月山东中医药大学第二附属医院内分泌科收治的128例糖尿病微血管病变患者,随机分为单一组(采用葛根芩连消渴方治疗,64例)和联合组(采... 详细信息

目的探讨葛根芩连消渴方联合加味桃核承气汤治疗糖尿病微血管病变的疗效。方法选取2022年4月-2024年4月山东中医药大学第二附属医院内分泌科收治的128例糖尿病微血管病变患者,随机分为单一组(采用葛根芩连消渴方治疗,64例)和联合组(采用葛根芩连消渴方联合加味桃核承气汤治疗,64例)。比较两组临床疗效、血糖血脂水平、血管内皮功能指标、不良反应发生率并检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor 2,VEGFR-2)的表达水平变化。结果治疗后,联合组临床疗效高于单一组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,HbA1c)、总胆固醇(total Cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)均降低,且联合组低于单一组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)水平均升高,联合组高于单一组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者HIF-1α、VEGF、VEGFR-2表达水平均下降,且联合组低于单一组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论葛根芩连消渴方联合加味桃核承气汤治疗糖尿病微血管病变的疗效显著,具有一定的安全性,且有效下调HIF-1α、VEGF、VEGFR-2的表达水平,具有重要的临床应用价值。

关键词：葛根芩连消渴方加味桃核承气汤糖尿病微血管病变缺氧诱导因子-1α 血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体-2

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新型超声造影剂BR55在实体肿瘤诊断和治疗中的研究进展

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中国医学影像学杂志 2022年第12期30卷 1301-1303,1308页

作者：李静波朱嘉宁张颖李秋洋罗渝昆解放军医学院北京100853 解放军总医院第一医学中心超声诊断科北京100853

恶性肿瘤的早期诊断和治疗可以显著改善患者预后,早期监测抗肿瘤药物效能对评估治疗效果具有重要作用。随着超声分子影像学和超声造影技术的不断发展,靶向超声造影技术的应用为肿瘤性病变的早期检测及监测提供新的思路和方法。与正常组... 详细信息

恶性肿瘤的早期诊断和治疗可以显著改善患者预后,早期监测抗肿瘤药物效能对评估治疗效果具有重要作用。随着超声分子影像学和超声造影技术的不断发展,靶向超声造影技术的应用为肿瘤性病变的早期检测及监测提供新的思路和方法。与正常组织相比,血管内皮生长因子受体-2在恶性肿瘤中的表达明显提高,作为特异性靶向血管内皮生长因子受体-2的超声造影剂BR55可以提高肿瘤的检测和抗肿瘤药物的监测能力。本文拟对靶向造影剂BR55在诊断和治疗肿瘤中的应用进行综述。

关键词：超声分子影像超声造影 BR55 血管内皮生长因子受体-2 肿瘤综述

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KDR Q472H突变在多发性骨髓瘤肿瘤细胞中的意义及其机制的研究

KDR Q472H突变在多发性骨髓瘤肿瘤细胞中的意义及其机制的研究

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作者：张凌怡吉林大学

学位级别：博士

多发性骨髓瘤(MM)是一种终末分化浆细胞恶性肿瘤,是常见的成人血液系统恶性肿瘤。随着社会老龄化,其发病率一直在增加,而且有明显的年轻化趋势。尽管目前有效的联合化疗可使MM初治反应率达95%,但随后几乎100%复发并获得耐药。随着对MM... 详细信息

多发性骨髓瘤(MM)是一种终末分化浆细胞恶性肿瘤,是常见的成人血液系统恶性肿瘤。随着社会老龄化,其发病率一直在增加,而且有明显的年轻化趋势。尽管目前有效的联合化疗可使MM初治反应率达95%,但随后几乎100%复发并获得耐药。随着对MM研究的深入,MM驱动基因突变的识别为个体化治疗带来了巨大的希望,通过了解特定突变所导致的生物学行为改变及其机制,有助于针对此类患者制定个体化治疗方案。研究显示虽然MM的突变频率高,但缺乏普遍的驱动突变,这表明可能是关键途径的去调控而不是单个基因突变在MM中发挥了重要作用。此外,多个研究表明MM中这些突变的关键是MAPK途径的去调控。通过基于全外显子测序的前期研究,我们发现多个初治或复发MM患者的肿瘤细胞中存在KDR Q472H突变,KDR编码的VEGFR2蛋白是MAPK通路的上游蛋白之一;而且,多个研究发现KDR Q472H种系突变可增强肿瘤组织的微血管密度且与不良预后相关。由此我们推测KDR Q472H突变可能对MM的生物学行为产生影响。为了探究多发性骨髓瘤肿瘤细胞中KDR Q472H突变可能产生的意义及其机制,我们进行了以下2部分的研究:第一部分多发性骨髓瘤肿瘤细胞中KDR Q472H突变的意义目的:明确多发性骨髓瘤肿瘤细胞中KDR Q472H突变的意义方法:1.构建KDR野生型及KDR Q472H真核表达质粒;2.通过慢病毒转染的方式构建VEGFR2野生型及VEGFR2 Q472H稳转细胞系;3.通过Western blot检测两种细胞中相关蛋白的表达情况;4.通过流式细胞仪检测不同药物处理后两种细胞的凋亡情况;5.通过动物实验验证体外实验的结果。结果:1.成功构建KDR野生型及KDR Q472H真核表达质粒,经测序验证基因序列正确;2.通过荧光显微镜及流式细胞仪检测细胞转染效率达90%以上,通过Western blot检测两种质粒均可在OPM2细胞中稳定表达VEGFR2蛋白;*** Q472H突变骨髓瘤细胞中磷酸化VEGFR2及磷酸化p44/42 MAPK蛋白水平增高;4.在体外实验中KDR Q472H突变增强了MM细胞对蛋白酶体抑制剂的耐药;卡非佐米或伊沙佐米联合MEK1/2抑制剂可以在一定程度上逆转KDR Q472H突变导致的MM细胞耐药;5.在动物实验中证明携带KDR Q472H突变的肿瘤对蛋白酶体抑制剂治疗的反应较差;结论:KDR Q472H突变可导致骨髓瘤细胞对蛋白酶体抑制剂耐药,且不能被VEGFR2抑制剂克服;卡非佐米或伊沙佐米联合MEK1/2抑制剂可以在一定程度上逆转耐药。第二部分KDR Q472H突变导致多发性骨髓瘤耐药的机制研究目的:对KDR Q472H突变导致多发性骨髓瘤耐药机制的探究方法:1.在转录组水平对构建的KDR野生型及KDR Q472H稳转细胞进行测序比较,通过Western blot检测在蛋白水平验证;2.通过sh RNA敲低KDR Q472H突变骨髓瘤细胞中AIM2的表达,通过流式细胞仪检测骨髓瘤细胞对蛋白酶体抑制剂及MEK1/2抑制剂处理后的凋亡变化;3.通过Western blot检测敲低AIM2后骨髓瘤细胞中相关蛋白表达的变化;4.通过RT-q PCR检测MEK1/2抑制剂处理后AIM2 m RNA水平的变化;5.通过流式细胞仪检测VX-765处理后骨髓瘤细胞的凋亡变化.6.通过Western blot检测在小鼠皮下移植瘤组织中验证相关蛋白表达情况。结果:1.骨髓瘤细胞中KDR Q472H突变可在转录水平上调AIM2的表达;2.在KDR Q472H突变骨髓瘤细胞中敲低AIM2可逆转对蛋白酶体抑制剂及MEK1/2抑制剂的耐药;3.在KDR Q472H突变骨髓瘤细胞中敲低AIM2可导致磷酸化p44/42 MAPK水平降低;KDR Q472H突变骨髓瘤细胞耐药是AIM2-MAPK通路依赖的;***1/2与AIM2之间可能存在相互调节关系;*** Q472H突变上调AIM2导致骨髓瘤细胞耐药与炎症小体通路无关;6.小鼠皮下移植瘤组织中AIM2,磷酸化p44/42 MAPK的表达变化与体外实验一致。结论:KDR Q472H突变通过上调AIM2-MAPK通路介导骨髓瘤细胞耐药,且与炎症小体通路无关;AIM2的表达在转录水平受到调控。

关键词：多发性骨髓瘤血管内皮生长因子受体-2 基因突变耐药 AIM2

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