检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：祖雄兵中南大学

学位级别：博士

第一章:VEGF-C在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义;目的:探讨淋巴管生长因子VEGF-C在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及与临床相关因素、癌细胞淋巴管浸润、淋巴道转移和预后的关系.结论:检测膀胱移行细胞癌VEGF-C的表达情况能够预测... 详细信息

第一章:VEGF-C在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义;目的:探讨淋巴管生长因子VEGF-C在膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及与临床相关因素、癌细胞淋巴管浸润、淋巴道转移和预后的关系.结论:检测膀胱移行细胞癌VEGF-C的表达情况能够预测盆腔淋巴结是否转移;VEGF-C可能成为一项新的BTCC预后判断指标和治疗新靶点.第二章:VEGF-C对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡影响的研究;目的:探讨VEGF-C对膀胱癌T 24细胞的增殖及抑制丝裂霉素诱导的凋亡.结论:VEGF-C促进膀Ⅰ胱移行细胞癌的增殖和抑制丝裂霉素诱导的凋亡;抑制VEGF-C/VEGFR-3的自分泌途径将成为防治膀胱移行细胞癌复发的新途径.第三章:VEGF-C/VEGFR-3与膀胱移行细胞癌淋巴结转移的关系研究;目的:探讨膀胱移行细胞癌瘤内和瘤周淋巴管密度及其与肿瘤VEGF-C表达情况、临床病理指标的关系;从而评价肿瘤VEGF-C与VEGFR-3表达在膀胱移行细胞癌淋巴结转移机制中的作用.结论:膀胱移行细胞癌VEGF-C/VEGFR-3途径促进淋巴管新生、肿瘤淋巴管浸润、淋巴结转移.阻断VEGF-C/VEGFR-3通路将成为膀胱移行细胞癌治疗的新途径.

关键词：膀胱移行细胞癌血管内皮生长因子C 血管内皮生长因子受体3 淋巴管密度淋巴结转移增殖凋亡

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高级别胶质瘤抗血管生成治疗的标记物的研究

高级别胶质瘤抗血管生成治疗的标记物的研究

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作者：姜军山东大学

学位级别：博士

研究背景高级别胶质瘤是最常见、具有高度增殖和侵袭性的颅内肿瘤,具有难治性、易局部播散和易复发等特点,预后极差,生存期短,如胶质母细胞瘤,中位生存期14.6-16个月,5年生存率仅为3.4%。胶质瘤的治疗需要结合手术切除、化疗、放疗和基... 详细信息

研究背景高级别胶质瘤是最常见、具有高度增殖和侵袭性的颅内肿瘤,具有难治性、易局部播散和易复发等特点,预后极差,生存期短,如胶质母细胞瘤,中位生存期14.6-16个月,5年生存率仅为3.4%。胶质瘤的治疗需要结合手术切除、化疗、放疗和基于肿瘤的组织学和分子特征的靶向治疗。胶质瘤的分子靶向药物是根据脑胶质瘤发生及生长的分子遗传学信号系统所设计,可以靶向特异靶点,阻断肿瘤的生长,可以明显提高患者无瘤生存期。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)系统是高级别胶质细胞瘤靶向治疗的一个最有吸引力的靶点,高级别脑胶质瘤肿瘤微环境中特别是低氧、炎症因子以及炎症相关细胞聚集,使得VEGF表达量上调,周围存在高水平VEGF-A,通过旁分泌机制促进内皮细胞的增殖、存活和迁移。这导致了脉管系统的紊乱与血脑屏障损伤,VEGF过表达与血管密度、肿瘤分级和总体预后成正比。贝伐单抗具备高亲和力且特异性地结合VEGF-A,是目前神经系统高级别肿瘤最常用的分子靶向药物,可有效的抑制新生血管生成,对肿瘤的生长起到明显的治疗效果。自2009美国食品和药物管理局批准贝伐单抗进入临床起,大量临床研究表明贝伐单抗对高级别胶质瘤症状有显著改善,6个月无进展生存率提高。尤其是紧急的情况下,贝伐单抗治疗对于在标准治疗期间进展迅速的胶质瘤患者是一种挽救性治疗选择。贝伐单抗已越来越多地用于复发性胶质母细胞瘤的治疗。然而,贝伐单抗的作用是短暂的,大部分高级别胶质瘤在6个月以后复发甚至进展了,复发时远处或弥漫性疾病的发病率增加,向更具攻击性的表型转变。贝伐单抗治疗失败的机制是复杂的,包括:胶质母细胞瘤是一种高度浸润性肿瘤,不可能全部切除;肿瘤异质性导致药物的敏感性不同;抗VEGF导致的肿瘤转移性增强等。肿瘤可能会选择性上调某些血管生成途径。当VEGF信号途径被阻断时,其他信号转导途径也可以刺激血管生长。因此,明确胶质瘤患者VEGF信号途径中其他蛋白的表达情况,多靶点的联合免疫疗法或许会让贝伐单抗治疗的患者更受益。microRNA参与血管生成途径,在控制血管生成中的作用被公认为是癌症和心血管疾病的一个有前途的治疗靶点。外泌体(exosomes)是细胞分泌的有双层脂质膜的囊泡,是细胞之间生命活动物质交换的一种重要工具,其内含有蛋白质和核酸(主要为miRNA)等物质,具有特异性、稳定性、易获取性和能穿过血脑屏障等特点,基于高通量测序技术的及生物信息学分析可筛选血清外泌体中与颅内肿瘤发生、发展相关循环核酸分子,并预测血管生成相关的mmiRNA,有望成为颅内肿瘤的治疗的作用靶点。另外,术前胶质瘤的鉴别诊断(例如与颅内原发淋巴瘤的鉴别)也是困扰临床的难题。准确的诊断有利于制定治疗方案,对患者生存期的延长有决定性作用。目前,其诊断的“金标准”依然是组织学病理活检,但病理学标本的获取存在很大障碍。基于高通量测序技术筛选的差异miRNA有望成为胶质瘤诊断的高敏感度和特异度的生物标志物。第一部分 VEGF信号通路中胶质瘤的抗血管生成和抗淋巴管生成治疗新靶点的研究目的:贝伐单抗是主要针对VEGF-A起作用的,而评估有效的生物标记物联合治疗可能会让贝伐单抗治疗的患者更受益。本研究拟评估VEGF信号系统的VEGF-C和VEGF-D与VEGFR-3在胶质瘤中的表达,为胶质瘤的抗血管生成和抗淋巴管生成治疗提供新靶点。方法:本研究选择121例在2011年6月至2015年2月期间在山东大学第二医院和齐鲁医院神经外科住院诊断为胶质瘤并手术治疗的患者。通过对胶质瘤病人的肿瘤组织及正常对照进行组织化学染色,研究血管生成和淋巴管生成相关标志物VEGF-C,VEGF-D,VEGFR-3和D2-40的表达情况,统计病人基本临床资料和P53,Ki67等病理结果。采用非参数Spearman相关分析病理分级与D2-40、VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、p53和Ki67表达水平的关系。非参数Spearman相关分析评估第一次术后无病生存时间与不同标记物表达之间的关系。用Wilcoxon matched pairs signed rank对初诊和复发的标志物表达水平进行分析。采用Cox比例风险回归模型对胶质瘤进行多因素预后分析。结果:1.101例胶质瘤病人的结果病人的年龄的中位数是40.5岁,最常见的临床症状是头痛,呕吐,肢体瘫痪,癫痫和昏迷。肿瘤的平均大小为4.1±1.6cm。101例病人中,WHO分级Ⅰ级18例,Ⅱ级25例,Ⅲ级24例,Ⅳ级34例。胶质瘤病人的P53和Ki67的表达与肿瘤的分级相关(P<0.001,P

关键词：血管内皮生长因子受体3 微小RNA 外泌体胶质瘤颅内原发淋巴瘤

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HGF和VEGFR-3在大肠癌中的表达及其在淋巴管生成和转移中的作用

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肿瘤防治研究 2009年第10期36卷 838-843页

作者：熊枝繁于欢曹仕琼曾劲熊亮华中科技大学同济医学院附属梨园医院消化内科武汉430077

目的观察肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)在大肠癌组织中的表达,检测大肠癌组织中的微淋巴管密度(LMVD),探讨HGF和VEGFR-3在大肠癌淋巴管生成及转移中的作用。方法应用免疫组织化学(SABC)法检测52例大肠癌、20例... 详细信息

目的观察肝细胞生长因子(HGF)和血管内皮生长因子受体3(VEGFR-3)在大肠癌组织中的表达,检测大肠癌组织中的微淋巴管密度(LMVD),探讨HGF和VEGFR-3在大肠癌淋巴管生成及转移中的作用。方法应用免疫组织化学(SABC)法检测52例大肠癌、20例大肠息肉组织和20例健康对照组织中HGF和VEGFR-3的表达,并应用podoplanin标记淋巴管,检测各组组织中的淋巴管密度,结合大肠癌患者的临床病理资料,分析其相关性。结果(1)大肠癌组织中HGF和VEGFR-3均被染成棕褐色或棕黄色,阳性表达率分别为75%、67.3%,相对表达量分别为(0.36±0.07)、(0.41±0.10),均明显高于大肠息肉组[25%、30%;(0.24±0.06)、(0.28±0.03)]和正常大肠组织[15%、10%;(0.23±0.06)、(0.21±0.03)]的表达(P<0.01)。且微淋巴管密度(LMVD)也明显增多[(4.13±1.99)vs.(2.59±1.46)vs.(2.40±1.44),P<0.01]。(2)大肠癌组织中HGF、VEGFR-3的相对表达量,LMVD三者间呈两两正相关。39例HGF表达阳性的大肠癌,其LMVD明显大于HGF表达阴性者[(4.25±2.13)vs.(2.73±1.54),t=3.051,P=0.003];35例VEGFR-3表达阳性的大肠癌,其LMVD也明显大于VEGFR-3表达阴性者[(3.79±1.26)vs.(2.64±1.32),t=3.235,P=0.002]。(3)HGF、VEGFR-3和LMVD的表达与大肠癌患者年龄、性别以及肿瘤分化程度无关(P>0.05),但与Dukes分期(P=0.034,P=0.021,P=0.006)、淋巴管有无转移明显相关(P=0.015,P=0.012,P=0.001)。结论HGF与大肠癌的淋巴管生成及转移有一定的相关性,并可能通过VEGF-C、D/VEGFR-3信号途径间接促进淋巴管增生,从而促进肿瘤细胞的淋巴转移。

关键词：大肠癌肝细胞生长因子血管内皮生长因子受体3 微淋巴管密度

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右旋柠烯抗胃癌转移机制实验研究

右旋柠烯抗胃癌转移机制实验研究

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作者：邢光明大连医科大学

学位级别：博士

胃癌是常见的严重威胁人类生命健康的恶性疾病之一,据统计占我国消化道恶性肿瘤的第一位,全身肿瘤的第三位,并有继续上升的趋势。手术切除为其主要治疗手段,但术后复发及转移率较高。根治性手术治疗进展期胃癌5年生存率为40%,患者主要... 详细信息

胃癌是常见的严重威胁人类生命健康的恶性疾病之一,据统计占我国消化道恶性肿瘤的第一位,全身肿瘤的第三位,并有继续上升的趋势。手术切除为其主要治疗手段,但术后复发及转移率较高。根治性手术治疗进展期胃癌5年生存率为40%,患者主要死于复发和转移,而淋巴转移是其最主要的转移方式。侵袭和转移是恶性肿瘤重要的生物学特征,是导致临床上绝大多数肿瘤患者死亡的主要因素。侵袭和转移是肿瘤生长发展过程中密不可分的相关过程,侵袭行为是肿瘤转移的内在因素。如何穿越生物学屏障是肿瘤细胞侵袭和转移动态过程的关键步骤。在此过程中,癌细胞与基底膜或细胞外基质粘附,然后释放和激活多种蛋白水解酶降解基底膜和细胞外基质,在趋化因子、自分泌以及旁分泌生长因子等作用下迁移到达靶组织,克隆增殖从而形成转移灶。肿瘤细胞可以直接侵入淋巴管,原有及新生的淋巴管均将成为肿瘤细胞淋巴转移的通道。肿瘤由原发部位脱落而发生转移,也可以通过血液循环到达淋巴结门并在淋巴结中被捕获,侵入血管中细胞多,淋巴结受累机率则高。但是后者发生的机率远较前者小。由此可见,对于胃癌来说,其表达粘附、侵袭相关因子如基质金属蛋白酶(matrix metal proteinases, MMPs)的水平、微血管、微淋巴管密度将直接影响其淋巴转移的发生。右旋柠烯(d-limonene)是中药桔皮中提纯的单体成份,属于天然单萜烯类化合物。其学名为1-甲基-4-异丙基环己烯,分子式C10H16,分子量136.23。右旋柠烯在桔皮精油中的含量超过90%,纯度高达97%。它具有防治化学诱导的啮齿类动物乳腺癌、皮肤癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌和胰腺癌等作用,其低毒、广谱和食用性特征使其受到国内外研究者的广泛关注。右旋柠烯防治癌症的机制理论上有如下观点:初期的预防作用是诱导致癌物代谢的酶类表达,使致癌物解毒;初期后的预防作用是由于诱导了癌症细胞凋亡、细胞再分化和/或抑制了细胞生长调节蛋白转移酶的异丙基化等多种机制发挥预防及治疗作用。但是对其在肿瘤转移方面尤其是对淋巴转移的作用和机制的相关研究未见报道。近来,对肿瘤淋巴转移的研究倍受重视,多种淋巴管内皮细胞特异性标记物如血管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor 3, VRGFR-3)、LYVE-1和Podoplanin等的发现使淋巴管与血管的区分成为可能。但是迄今人们对肿瘤淋巴结转移的机制了解甚少。目前认为,血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C, VEGF-C)是较特异的淋巴管内皮生长因子,属于血管内皮生长因子家族,它主要通过激活其特异性表达于淋巴管内皮细胞的受体VEGFR-3,继而经由MEK/ERK和PI3-激酶/Akt途径引起淋巴管内皮细胞增生和淋巴管发生。由于淋巴管缺乏紧密连接和连续的基底膜,肿瘤细胞容易从淋巴管内皮细胞间隙进入淋巴管。肿瘤细胞由于产生较高水平的VEGF-C,通过与其受体的作用,促进肿瘤淋巴管形成,淋巴管数目的增多增加了肿瘤细胞接触和进入淋巴管的机会,从而促进淋巴结的转移。本实验将检测多种人胃癌细胞和手术切除胃癌标本中VEGF-C表达水平,分析其与肿瘤生物学行为和临床病理特征的关系,并在此基础上,通过体内裸小鼠原位移植模型和体外粘附、侵袭实验评价右旋柠烯对胃癌转移能力的抑制作用,在细胞和分子水平探讨其作用机理,并为该药的临床应用提供理论依据。第一部分胃癌细胞VEGF-C表达水平与粘附、侵袭能力的关系目的:观察不同胃癌细胞株VEGF-C蛋白表达与胃癌细胞体外粘附、侵袭能力的关系,探讨VEGF-C对胃癌细胞转移潜能的作用。方法:三种人胃腺癌细胞BGC-823、SGC-7901、MKN-45,常规RPMI-1640培养液于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养,取处于对数生长期的细胞备用。Western-blot法检测肿瘤细胞裂解液中VEGF-C蛋白表达水平;以纤维粘连蛋白和层粘连蛋白为作用对象,检测不同胃癌细胞与细胞外基质粘附作用;利用Transwell小室,以Matrigel和纤维粘连蛋白构建重组基底膜,检测胃癌细胞侵袭人工基底膜能力;针对VEGF-C基因编码区设计合成反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide, ASODN),通过脂质体介导对VEGF-C高表达胃癌细胞株进行转染;蛋白印迹检测反义寡核苷酸封阻后VEGF-C和基质金属蛋白酶2(matrix metal proteinas

关键词：右旋柠烯胃癌粘附侵袭血管内皮生长因子C 血管内皮生长因子受体3 基质金属蛋白酶-2 原位移植淋巴转移

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VEGF-D和VEGFR-3表达与食管鳞癌淋巴结转移相关性的探讨

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中华肿瘤防治杂志 2008年第23期15卷 1808-1811页

作者：张晖陈宏存王圣应蚌埠医学院第一附属医院肿瘤外科安徽蚌埠233004

目的:探讨VEGF-D/VEGFR-3信号通路与食管鳞癌淋巴结转移的关系。方法:采用逆转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测VEGF-D及其受体VEGFR-3在52例食管鳞癌组织和20例正常食管组织中的表达,并分析其与食管鳞癌临床病理指标的关系。结果:在正... 详细信息

目的:探讨VEGF-D/VEGFR-3信号通路与食管鳞癌淋巴结转移的关系。方法:采用逆转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测VEGF-D及其受体VEGFR-3在52例食管鳞癌组织和20例正常食管组织中的表达,并分析其与食管鳞癌临床病理指标的关系。结果:在正常食管组织中VEGF-D和VEGFR-3mRNA表达均呈阴性;在食管鳞癌组织中,VEGF-DmRNA阳性表达32例(61.5%),VEGFR-3mRNA阳性表达28例(53.8%)。VEGF-DmRNA和VEGFR-3mRNA表达与食管鳞癌淋巴结转移显著相关,χ2值分别为15.333和15.594,P均<0.01;与浸润深度亦显著相关,χ2值分别为25.646和10.511,P均<0.05;VEGF-D与VEGFR-3表达呈正相关,χ2=25.142,P=0.001。结论:VEGF-D及VEGFR-3信号通路与食管鳞癌淋巴结转移及进展程度关系密切。

关键词：食管鳞癌血管内皮生长因子D 血管内皮生长因子受体3 淋巴道转移逆转录聚合酶链反应

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非小细胞肺癌VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表达与淋巴管生成和淋巴转移关系的研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2009年第8期29卷 1077-1084页

作者：常超王平李琳杨慧张利斌昆明医学院附属昆华医院胸心外科云南昆明650032

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)-C、-D及其受体3(VEGFR-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达规律、与微淋巴管密度(MLVD)、淋巴转移之间的关系及其在NSCLC发生发展、预后中的意义。方法:以40例经病理确诊的NSCLC组织为实验组,以11例肺良... 详细信息

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)-C、-D及其受体3(VEGFR-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达规律、与微淋巴管密度(MLVD)、淋巴转移之间的关系及其在NSCLC发生发展、预后中的意义。方法:以40例经病理确诊的NSCLC组织为实验组,以11例肺良性病变组织为对照组,采用免疫组织化学染色法对上述组织中VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、淋巴管内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)、同源异型盒转录因子(Prox-1)蛋白的表达进行分析,并计数微淋巴管密度。结果:①NSCLC组织中VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3蛋白的阳性率分别为77.50%(31/40例)、67.50%(27/40例)、62.50%(25/40例),明显高于肿瘤周边组织(距肿瘤边缘100μm区域内)及肺良性病变组织(P<0.01)。②VEGF-C与VEGFR-3(r=0.409,P=0.005)、VEGF-D与VEGFR-3蛋白表达(r=0.492,P=0.000)均存在相关性;而VEGF-C与VEGF-D蛋白表达无相关性(r=0.256,P=0.093)。③VEGF-C、VEGF-D及VEGFR-3蛋白的表达与NSCLC患者的性别、年龄、肿瘤的大小、组织学类型、分化程度无关,但与肿瘤的淋巴结转移(P<0.05)、PTNM分期(P<0.05)显著相关。④NSCLC肿瘤中心组织中LYVE-1及Prox-1标记的MLVD分别为4.22±1.25、1.99±1.49,明显低于肺良性病变组织(P=0.000),而NSCLC肿瘤周边部位的MLVD显著高于肿瘤中心部位及肺良性病变组织(P=0.000)。VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3表达阳性的组织中,MLVD显著高于阴性组织(P<0.05)。MLVD与肿瘤的淋巴结转移(P=0.000)、PTNM分期(P=0.000)显著相关。结论:淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGFR-3蛋白在NSCLC中表达显著增高,并且通过VEGF-C、VEGF-D/VEGFR-3信号通路诱导淋巴管内皮细胞新生和淋巴管生成,从而促进淋巴结转移和肿瘤生长;VEGF-C、VEGF-D及其受体VEGFR-3可能成为检测NSCLC淋巴转移和评估预后的重要分子指标;淋巴管内皮细胞特异性标志物LYVE-1、Prox-1可以较严格地区分血管和淋巴管内皮,相对精确地评价肿瘤的脉管系统。

关键词：血管内皮生长因子C、D 血管内皮生长因子受体3 淋巴管内皮透明质酸受体-1 同源异型盒转录因子非小细胞肺癌淋巴转移

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大肠癌VEGFR-3、podoplanin和CD34阳性脉管的特点及其与转移的关系

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解放军医学杂志 2006年第1期31卷 64-66页

作者：牟江洪向德兵肖华亮李增鹏张沁宏王东第三军医大学大坪医院野战外科研究所病理科重庆400042

目的研究大肠癌VEGFR3、podoplanin和CD34阳性脉管的特点及其与转移的关系。方法采用双标及单标免疫组化方法分析96例大肠癌及其相应正常大肠组织VEGFR3、podoplanin和CD34阳性脉管的特点,并分别评估其预测大肠癌转移的价值。结果大肠... 详细信息

目的研究大肠癌VEGFR3、podoplanin和CD34阳性脉管的特点及其与转移的关系。方法采用双标及单标免疫组化方法分析96例大肠癌及其相应正常大肠组织VEGFR3、podoplanin和CD34阳性脉管的特点,并分别评估其预测大肠癌转移的价值。结果大肠癌边缘区VEGFR3、podoplanin和CD34阳性脉管密度显著高于其他区域(P<0.01、0.05),也显著高于正常大肠组织(P<0.01)。VEGFR3阳性脉管与podoplanin或CD34阳性脉管有交叉。大肠癌转移与肿瘤边缘podoplanin和CD34阳性脉管密度密切相关(P<0.01、0.05)。结论VEGFR3阳性脉管既有淋巴管也包含血管;血管密度,尤其肿瘤边缘淋巴管密度是预测大肠癌转移的有效参考指标。

关键词：结直肠肿瘤血管内皮生长因子受体3 podoplanin 抗原 CD34 肿瘤标记生物学肿瘤转移

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消痰散结方对裸鼠人胃癌模型淋巴管生长因子影响的实验研究

消痰散结方对裸鼠人胃癌模型淋巴管生长因子影响的实验研究

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作者：庞斌第二军医大学

学位级别：博士

背景淋巴转移是胃癌转移的主要途径之一,也是影响术后复发及患者生存率的重要因素,有研究发现,在发生淋巴结转移的肿瘤中,常有淋巴管的增生和扩张,表明淋巴管生成在肿瘤淋巴转移过程中起着不容忽视的作用。导师魏品康教授积数十年临床经... 详细信息

背景淋巴转移是胃癌转移的主要途径之一,也是影响术后复发及患者生存率的重要因素,有研究发现,在发生淋巴结转移的肿瘤中,常有淋巴管的增生和扩张,表明淋巴管生成在肿瘤淋巴转移过程中起着不容忽视的作用。导师魏品康教授积数十年临床经验,在总结前人理论基础上,构建胃癌“痰证学说”,认为“痰”是肿瘤发生、发展、转移的关键物质基础,因此提出“消痰散结”作为胃癌的核心治则,创立“消痰散结方”并应用于临床,取得了明显疗效。我科前期研究发现消痰散结方通过多靶点,多途径抑制肿瘤增殖,预防肿瘤复发、转移,但该方对于胃癌淋巴转移这一重要转移途径研究尚未深入,故本课题在前期研究的基础上,通过复制裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,观察消痰散结方对胃癌淋巴管生长因子表达的影响,进一步探讨消痰散结方在防治胃癌淋巴转移方面的作用机理。目的通过复制建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,观察肿瘤生长、转移情况,计算抑瘤率,并通过运用EnVision、RT-PCR等方法,检测消痰散结方对肿瘤组织中VEGF-C,VEGF-D和VEGFR-3蛋白和mRNA表达的调控作用,探讨消痰散结方在防治肿瘤淋巴转移方面的作用机制。方法 1.选取经传代后生长良好的人胃癌MKN-45细胞瘤株,将其移植到BALB／C裸小鼠胃大弯近胃窦旁,建立裸鼠人胃癌移植瘤模型。定期观察裸鼠全身情况和腹部瘤块生长特征,待动物出现衰竭征象时处死,解剖观察移植瘤局部生长情况。 2.40只BALB／C雄性裸小鼠,采用随机数字表法分为：生理盐水组、5-Fu组、榄香烯组和消痰散结方组,术后48h后给予不同的干预：分别给予生理盐水0.4ml灌胃,1／日；5-Fu稀释液0.2ml腹腔注射(***-1.w-1),1／周×3周：榄香烯稀释液0.4ml (2.5mg/ml)灌胃,1／日；消痰散结方0.4ml灌胃,1／日；给药时间为期6周,定期观察裸鼠全身情况、体重变化和腹部体征。 3.第6周实验结束时,麻醉后牺牲、解剖实验动物,观察移植瘤局部生长情况及周围组织转移情况,剥取瘤组织,称取瘤重,计算抑瘤率。行HE染色,对肿瘤进行病理诊断。 4.取瘤组织,行EnVision免疫组化方法,半定量分析和比较肿瘤组织VEGF-C,VEGF-D和VEGFR-3蛋白的表达,计数LMVD,分析肿瘤微淋巴管生成的情况。 5.取瘤组织抽提总mRNA,逆转录合成cDNA行RT-PCR检测,从mRNA水平检测和比较VEGF-C,VEGF-D和VEGFR-3 mRNA的表达变化。结果 1.成功建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型。移植术后10天左右左上腹部可扪及直径约为5mm左右质地较硬的结节,随后结节逐渐增大,6周时部分荷瘤鼠出现消瘦、行动迟缓等衰竭症状,原位移植瘤突起于腹壁,质硬,部分动物瘤体突出至皮下,瘤块透壁可见,解剖后可见胃壁上有灰白色鱼肉状的肿瘤组织,呈实质性,膨胀性生长,有包膜,表面多呈椭圆形结节状,高低不平,质地较硬,粘膜下有血管走行,胃被包绕在瘤块中。部分原位瘤与肝、脾及腹壁粘连。裸鼠移植瘤原位成瘤率100%,HE染色证实为低分化腺癌。 2.各组动物均可观察到腹腔淋巴结肿大,其中5-Fu组,榄香烯组,消痰散结方组出现淋巴结转移比率分别为60%,40%,40%,明显低于生理盐水组90%。 3.消痰散结方对MKN-45荷瘤小鼠肿瘤生长抑制情况表明：5-Fu组,榄香烯组,消痰散结方组的抑瘤率分别为66.5%、51.0%,57.1%。5-Fu组,榄香烯组,消痰散结方组的平均瘤重明显小于生理盐水组(P<0.01)；消痰散结方组平均瘤重与5-Fu组,榄香烯组相比差异无统计学意义(P>0.05),5-Fu组平均瘤重与榄香烯组相比差异有统计学意义(P<0.05)。 4.消痰散结方对移植瘤组织中VEGF-C蛋白及mRNA表达的影响： (1)消痰散结方对移植瘤组织中VEGF-C蛋白表达的影响：与生理盐水组相比,消痰散结方组、5-Fu组、榄香烯组均可明显降低VEGF-C的阳性表达(P<0.01),三组药物之间互相比较：消痰散结方组与榄香烯组相比,差异有统计学意义(P<0.05)；消痰散结方组、榄香烯组与5-Fu组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。 (2)消痰散结方对移植瘤组织中VEGF-C mRNA表达的影响：在VEGF-C mRNA的表达上消痰散结方组、5-Fu组、榄香烯组的cDNA扩增条带面积灰度值均较生理盐水组明显下调,(P<0.05),三组药物之间互相比较差异均无统计学意义(P>0.05)。 5.消痰散结方对移植瘤组织中VEG

关键词：消痰散结方胃肿瘤转移血管内皮生长因子C 血管内皮生长因子D 血管内皮生长因子受体3

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叶下珠及其复方对HBx介导肝癌VEGFR3表达的影响

叶下珠及其复方对HBx介导肝癌VEGFR3表达的影响

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作者：魏春山广州中医药大学

学位级别：博士

背景和目的：乙型肝炎病毒(HBV)感染形成乙型病毒性肝炎(hepatitis B,HB),是危及全球人类健康的一种世界性传染病。HB或HBV相关肝病进展成肝癌的机制至今尚未完全清楚。肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma, HCC)是世界发生率最高的恶性... 详细信息

背景和目的：乙型肝炎病毒(HBV)感染形成乙型病毒性肝炎(hepatitis B,HB),是危及全球人类健康的一种世界性传染病。HB或HBV相关肝病进展成肝癌的机制至今尚未完全清楚。肝细胞癌(hepatocelluar carcinoma, HCC)是世界发生率最高的恶性肿瘤之一,乙肝病毒x基因(hepatitis B virus X gene, HBx)及其编码产物(hepatitis B virus X antigene, HBxAg),被认为在肝癌的发生发展过程中扮演着重要角色。在调节肿瘤血管生成方而,不同血管生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)及受体(VEGFR)发挥核心作用,而VEGFR3的作用有其独特性,它在发育的不同阶段发挥不同的作用。在本课题前期研究中,导师童光东教授已通过基础研究初步证实了HBV可能通过HBxAg影响肝癌的生成和发展,此后通过对乙肝相关肝癌癌前病变的研究,获得一系列早期癌变标志物,并发现早期癌变标志物之一VEGFR3可能与HBx存在一定相关性,从而提出了HBx可能影响肝癌VEGFR3表达的假说。同时,前期研究通过采用复方叶下珠(compound phyllanthus urinaria L.,CP)对人肝癌细胞动物模型及肝癌患者进行干预,结果表明CP具有直接抗HBxAg表达而抑制肝癌进展的作用。在此基础上,本研究设计建立稳定转染HBx和VEGFR3基因的肝癌细胞株,通过制作相关动物模型,并用中药叶下珠水提物(the aqueous extract of phyllanthus urinaria L.,AEP)进行处理；同时采用CP干预肝癌癌前病变患者,旨在进一步探讨HBx和VEGFR3在HB相关肝癌中的相关性及对肿瘤调节的机制,了解AEP及其复方(CP)对HB相关肝癌和癌前病变的作用机理,从而为进一步开发中药抗癌药物,及扩大临床推广应用提供证据支持。方法： 1、首先构建转染HBx和VEGFR3的人肝癌HepG2稳定细胞株；PCR技术分别从HBV全基因组、人cDNA中扩增HBx和VEGFR3片段；将HBx和VEGFR3分别克隆至逆转录病毒载体质粒pBaBe-puro,构建重组质粒pBaBe-puro-HBx、 pBaBe-puro-VEGFR3,重组质粒与PIK包装质粒共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,包装产生重组逆转录病毒后,感染人肝癌细胞HepG2,获得转入HBx或VEGFR3的HepG2细胞。收集HepG2-HBx、HepG2-CAT、HepG2-VEGFR3细胞,用酶联免疫检测仪检测不同细胞增殖时间各细胞吸光度,通过流式细胞仪观察细胞周期；并收集各细胞RNA及蛋白质,进行RT-QPCR及western blot等检测,进一步验证HBx及VEGFR3在这些细胞中的表达情况。 2、制作叶下株水提取物(AEP)和复方叶下珠制剂(复方叶下珠(CP),组成：叶下珠30g、半枝莲30g、莪术15g、黄芪30g、山慈菇10g,由广东一方制药有限公司提供颗粒剂)。 3、制作裸鼠颈部皮下移植瘤模型；选用Balb/c nu小鼠。 4、动物管理：SPF饲养环境。 4、分组： (1)动物实验：按SPSS17.0的随机数字法按动物编号进行完全随机排序,完成分组,每组6只,分别为：G1,生理盐水对照组、G2,HepG2-HBx细胞空白对照组、G3,HepG2-HBx细胞CTX治疗组、G4,HepG2-HBx细胞AEP治疗组、G5,HepG2-CAT细胞空白对照组、G6,HepG2-CAT细胞CTX治疗组、G7,HepG2-CAT细胞AEP治疗组、G8,HepG2-VEGFR3细胞空白对照组、G9,HepG2-VEGFR3细胞CTX治疗组、G10,HepG2-VEGFR3细胞AEP治疗组。分别予NS、NS、CTX、AEP、NS、 CTX、AEP、NS、CTX、AEP。AEP灌胃6次/周、NS用法同AEP、CTX腹腔注射5次/周。按CTX使用疗程：共使用30次(1疗程),疗程结束时采集标本。 (2)临床试验：筛选有癌前病变指征的肝硬化病例113例,实验组59例,对照组54例。入组前签署知情同意书。实验组采用CP口服,对照组不治疗。两组患者仅在肝功能异常是采用常规护肝治疗。 5、取材： (1)动物：称量体重、常规摘眼球方法取血、颈椎脱臼法处死、取肿瘤、肝脏等。 (2)患者：在治疗前、治疗12月、24月时分别抽取患者血清送检。 6、观察指标及检测：动物：观察组织形态学：分别观察实验动物体重；瘤体大小、质量、形态等。生长曲线图绘

关键词：叶下珠乙肝病毒x基因肝癌血管内皮生长因子受体3

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大鼠角膜碱烧伤后角膜淋巴管生成及VEGF-C和VEG-FR-3的表达

引用

国际眼科杂志 2010年第12期10卷 2246-2249页

作者：郑彩慧朱学军张声周琳瑛徐国兴福建医科大学附属漳州市医院漳州眼科中心中国福建省漳州市363000 福建医科大学附属第一医院眼科中国福建省福州市350007 福建医科大学附属第一医院病理科中国福建省福州市350007 福建医科大学电镜教研室中国福建省福州市350004

目的:研究大鼠角膜碱烧伤后角膜淋巴管生成及VEGF-C和VEGFR-3的表达。方法:制作角膜碱烧伤模型,应用免疫组化方法检测正常角膜及烧伤后1,3,5,7,14,21,28d角膜组织中VEGF-C和VEGFR-3的表达,免疫组化LYVE-1(淋巴管内皮特异标记物)染色观... 详细信息

目的:研究大鼠角膜碱烧伤后角膜淋巴管生成及VEGF-C和VEGFR-3的表达。方法:制作角膜碱烧伤模型,应用免疫组化方法检测正常角膜及烧伤后1,3,5,7,14,21,28d角膜组织中VEGF-C和VEGFR-3的表达,免疫组化LYVE-1(淋巴管内皮特异标记物)染色观察角膜中淋巴管生成情况,电镜观察烧伤后14d角膜新生淋巴管状况。结果:角膜碱烧伤后,VEGF-C和VEGFR-3的表达明显升高,烧伤后3d,角膜中出现淋巴管。结论:角膜碱烧伤后新生淋巴管生成伴VEGF-C和VEGFR-3高表达。

关键词：淋巴管淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1 血管内皮生长因子受体3 血管内皮生长因子C 角膜碱烧伤大鼠

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