检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：肖霞中山大学

学位级别：博士

鼻咽癌是中国华南地区及东南亚地区常见的头颈部恶性肿瘤，好发于40～60岁，男性患者为女性的3.5倍。放射治疗是目前鼻咽癌唯一的根治性治疗手段。然而，鼻咽癌确诊时75﹪的患者属于中晚期，中晚期鼻咽癌治疗失败的主要原因是局部复发... 详细信息

鼻咽癌是中国华南地区及东南亚地区常见的头颈部恶性肿瘤，好发于40～60岁，男性患者为女性的3.5倍。放射治疗是目前鼻咽癌唯一的根治性治疗手段。然而，鼻咽癌确诊时75﹪的患者属于中晚期，中晚期鼻咽癌治疗失败的主要原因是局部复发和远处转移。据统计，中晚期鼻咽癌患者首次放疗后的局部复发率为10.2﹪～15.75﹪，再放疗后5年的生存率为23.0﹪。为进一步改善局部晚期鼻咽癌的预后，近年来化学治疗、外科挽救性手术治疗已越来越多地介入到鼻咽癌的治疗中。但即使放疗联合顺铂化疗患者的5年生存率也不容乐观。因此，迄需研发新的治疗方法。 ZD6474(Zactima<'TM>、Vandetanib)是一种苯胺基喹唑啉化合物，为口服的小分子酪氨酸激酶抑制剂，由AstraZeneca制药公司研发，目前处于Ⅲ期临床试验阶段。该药物可高选择性抑制血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2/KDR)酪氨酸激酶活性(IC<,50>=0.04μM)，阻断血管内皮细胞生长因子(VEGF)介导的内皮细胞信号转导从而抑制血管生成。研究表明ZD6474通过这种广谱的抗血管生成作用可以抑制多种不同组织来源的恶性肿瘤裸鼠移植瘤模型生长。此外，ZD6474还可以抑制表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶活性(IC<,50>=0.5μM)。已经发现多种恶性肿瘤中有EGFR或其配体的过度表达，异常高活性的EGFR酪氨酸激酶与肿瘤细胞的增殖、存活、转移及分泌促血管生成因子密切相关。因此，ZD6474有望通过选择性抑制VEGFR2和EGFR酪氨酸激酶双靶点遏制肿瘤生长。本课题主要对ZD6474对鼻咽癌的抗肿瘤作用及其机制进行了研究。我们首先采用RT-PCR和Western blot的方法分析了三株鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2和C666-1中VEGFRl、VEGFR2和EGFR的表达情况。结果表明，三株鼻咽癌细胞中均未检测到VEGFR1和VEGFR2的表达，而EGFR蛋白在三株细胞中的相对表达量分别为1.1、1.23和0.66。接下来，我们以3gM ZD6474处理CNE-1、CNE-2和C666-1细胞，采用IP-WB及Western blot方法检测到ZD6474可明显抑制这三株鼻咽癌细胞中的EGFR酪氨酸激酶磷酸化并抑制其下游信号通路中ERK<,1/2>和Akt磷酸化。MTT法检测ZD6474对鼻咽癌细胞活力的影响，结果显示ZD6474作用于CNE-1、CNE-2和C666-1细胞72小时，其抑制细胞生长增殖的IC<,50>值分别为2.3μM，3.6μM和4.86μM。流式细胞分析术显示，ZD6474抗鼻咽癌细胞增殖作用与诱导细胞G0/G1期阻滞有关，6μMZD6474处理CNE-1、CNE-2细胞24小时或9μM ZD6474处理C666-1细胞24小时，处于G0/G1期的细胞分别由52.3±6﹪，45.24±10.2﹪和54.9±1.3﹪提高至79.4±6.9﹪，59.9±7.6﹪，和58.7±1.5﹪(P<0.05)，同时伴随处于S期和G2-M期细胞的减少。进一步以无血清RPMI 1640培养C666-1细胞24小时，使其形成生长同步化。随后使用含10﹪胎牛血清的RPMI 1640配制浓度9gM的ZD6474处理C666-1细胞，流式细胞仪分析细胞周期的进展。结果显示，ZD6474可显著延迟C666-1 G0/G1期进展(P<0.05)，ZD6474作用于细胞16小时后仍有70.7﹪细胞停留在G0/G1期，与之相比，未受到Z6474处理的细胞仅有60.3﹪停留在G0/G1期；ZD6474作用于细胞24小时，有69﹪处理组细胞处于G0/G1期，而未处理组仅有53.5﹪细胞处于G0/G1期。分子机制研究表明，ZD6474通过上调细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制剂p21、p27及下调细胞周期素依赖性蛋白激酶CDK2、CDK4或CDK6诱导鼻咽癌细胞停滞在细胞周期的G0/G1期。在明确了ZD6474诱导鼻咽癌细胞G0/G1期阻滞后，我们希望进一步探明ZD6474是否诱导鼻咽癌细胞凋亡。 ZD6474处理鼻咽癌细胞72小时，流式细胞仪检测到在CNE-1和CNE-2细胞有subG1峰的出现，提示ZD6474可能诱导鼻咽癌细胞凋亡。为了进一步证实此结果，我们采用Annexin-V/7-AAD双染方法进行检测。结果显示ZD6474可以剂量依赖方式诱导CNE-1和CNE-2细胞凋亡。以CNE-2细胞为例，ZD6474处理CNE-2细胞48小时，对照组及1.5-6μM ZD6474处理组早期凋亡细胞比例分别为2.5±1.2﹪

关键词：酪氨酸激酶抑制剂 ZD6474 鼻咽癌抗肿瘤血管内皮细胞生长因子受体表皮细胞生长因子受体

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KDR启动子驱动双自杀基因联合靶向STAT3的短发夹RNA干扰治疗大肠癌的实验研究

KDR启动子驱动双自杀基因联合靶向STAT3的短发夹RNA干扰治疗大肠...

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作者：王朝阳南方医科大学

学位级别：博士

研究背景\n 大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率正以4％的年增长率迅速上升,虽然随着诊断技术发展,大肠癌的诊断及外科治疗已取得了长足的进步,但仍然有许多患者在日后会进展并发生全身转移尤其是肝转移,并将最终导致患者的死亡,... 详细信息

研究背景\n 大肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率正以4％的年增长率迅速上升,虽然随着诊断技术发展,大肠癌的诊断及外科治疗已取得了长足的进步,但仍然有许多患者在日后会进展并发生全身转移尤其是肝转移,并将最终导致患者的死亡,因此寻找新的疗法迫在眉睫。近十余年来,随着分子生物学技术的不断发展,引起细胞恶变的机制被进一步揭示,可利用的载体越来越多,以及由于缺乏针对肿瘤治疗的安全有效方法,使得基因实验治疗成为最常用于恶性肿瘤研究的手段。\n 由于肿瘤是一个多因素、多阶段、多基因参与的复杂过程,不同类型的肿瘤对不同的基因治疗的敏感性有差异,单一的基因治疗往往不能取得良好的疗效,联合基因治疗有望提高疗效,它是指同时采用两种或两种以上的基因治疗策略来治疗肿瘤,利用各个基因治疗的优点,提高治疗效果,降低对机体正常组织的副作用。\n 信号传导及转录活化因子3(signal transducers and activators oftranscription 3,STAT3)是转录信号传导子与激活子家族(STAT)的重要成员。近年来研究发现,STAT3是EGF,IL-6／JAK,Src等多个酪氨酸激酶信号通道汇聚的焦点,它具有强烈的抑制细胞凋亡、促进细胞增殖的作用,参与了人类恶性肿瘤的发生、发展过程,存多种肿瘤中都有过度激活。短发夹RNA也是RNA干扰的一种,其原理是首先根据siRNA序列设计并合成一对互补的双链DNA(dsDNA),并将其连接到质粒中,然后将含dsDNA的质粒转染到细胞中。在细胞内,外源性dsRNA作为模板,转录出单链siRNA,后者折叠成发卡状结构(loop环)。shRNA上的loop环可被酶切,使原发卡状结构成为一双链siRNA,从而对DNA发挥特异性干扰效应。应用RNA干扰技术研究针对STAT3基因的shRNA,抑制RNA的表达可以诱导肿瘤细胞的捌亡。\n 为发挥联合基因靶向治疗的优势,本课题拟应用携有KDR启动子驱动的CDglyTK双自杀基因腺病毒(Ad),脂质体介导的STAT3 shRNA转染复合物,两者单独及联合染转大肠癌细胞株SW480和低恶性程度的大肠癌细胞株LS174T细胞,观察体外靶向杀伤作用及对大肠癌动物模型的体内抑瘤效应,为开展联合靶向治疗大肠癌的研究提供实验依据。研究内容与结果\n 第一部分:KDR启动子驱动双自杀基因的扩增鉴定及对SW480与LS174T细胞的体外实验\n 1.1目的\n 制备含CDglyTK目的基因的重组腺病毒,观察KDR启动子驱动的双自杀基因对SW480及LS174T细胞的转染及给予不同浓度前药作用后的体外杀伤作用。\n 1.2方法\n 1.2.1重组腺病毒的包装、扩增和鉴定\n 重组腺病毒质粒pAdEsay-KDR-CDglyTK在293细胞中包装成病毒,并在293细胞内扩增,当293细胞70～90％融合时,加入病毒,当细胞90％以上形成细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)时收集细胞,应用氯化铯梯度离心法纯化病毒。通过荧光显微镜下293细胞中绿色荧光蛋白(GFP)的表达观察重组病毒的包装与复制,并以PCR方法鉴定重组腺病毒。\n 1.2.2 KDR启动子驱动双自杀基因对SW480及LS174T细胞的体外杀伤实验\n 用重组腺病毒Ad-KDR-CDglyTK(MOI=100)感染SW480细胞及LS174T细胞(不表达KDR作为对照),荧光显微镜下观察腺病毒的感染效率,倒置显微镜下观察转染后的细胞形态,RT-PCR方法检测目的基因的表达。在前药5-FC和GCV作用下,MTT法测定三种细胞的存活率,并观察旁观者效应。\n 1.3结果\n 1.3.1重组腺病毒的扩增和鉴定\n 线性化的腺病毒质粒pAdEsay-KDR-CDglyTK用脂质体LipolifectmainTM2000介导转染293细胞,24h后通过荧光显微镜即可见GFP荧光表达,48h后,约10％的293细胞见到GFP表达,说明包装病毒的产生与扩增,3～5d表达达到高峰,7～10d形成典型的细胞葡萄样变后,收集上清液再次感染293细胞以大量扩增病毒。当出现明显的病细胞病变效应(CPE)时,反复冰融4次,所得病毒经氯化铯纯化后滴度达2.51×1010pfu／m。PCR鉴定结果显示,用扩增KDR及CDglyTK基因引物进行的PCR反应,分别出现580bp与2400bp的电泳带,与预计大小的DNA条带相当。\n 1.3.2重组腺病毒的感染效率\n 重组腺病毒AdKDR-CDglyTK感染SW480和LS174T细胞,细胞的感染率随腺病毒滴度的增加而递增,当MOI=100时,95％以上的GFP表达；重组腺病毒

关键词：大肠癌自杀基因血管内皮细胞生长因子受体 STAT3基因短发夹RNA 基因联合治疗

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血管内皮生长因子受体在胶原性关节炎动物模型中的表达及内皮抑素和血管抑素对其表达的干预

血管内皮生长因子受体在胶原性关节炎动物模型中的表达及内皮抑素...

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作者：姚中强中国协和医科大学

学位级别：博士

目的：建立Wistar大鼠Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)模型，探讨血管内皮生长因子受体(VEGFR)在CIA中的表达，以及内皮抑素和血管抑素治疗CIA的可能机制，为类风湿关节炎的发病机制及治疗前景提供线索。材料和方法： 1将天然Ⅱ型胶原... 详细信息

目的：建立Wistar大鼠Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)模型，探讨血管内皮生长因子受体(VEGFR)在CIA中的表达，以及内皮抑素和血管抑素治疗CIA的可能机制，为类风湿关节炎的发病机制及治疗前景提供线索。材料和方法： 1将天然Ⅱ型胶原与福氏佐剂乳化混匀作为免疫混合物，尾跟部皮内注射免疫wistar大鼠，通过观察动物关节局部红、肿程度、足垫厚度，评价动物关节病理、关节血管密度、关节软骨积分等，建立胶原性关节炎模型；分析胶原性关节炎动物抗Ⅱ型胶原抗体滴度和足垫厚度、关节炎症积分、关节病理积分、关节滑膜血管密度、关节软骨Safranin O含量、关节软骨Safranin O染色积分的相关性；分析CIA动物模型关节软骨Safranin O含量与关节软骨Saffanin O染色积分之间的相关性；分析血管密度和关节软骨含量的相关性；分析血管密度和足垫厚度、关节炎症积分、关节病理积分的相关性。 2采用免疫组化方法检测VEGFR-2蛋白在CIA关节的表达，分析VEGFR-2蛋白表达与关节滑膜血管密度、关节软骨含量的相关性；采用原位杂交方法检测VEGFR-2 mRNA在CIA关节的表达，分析VEGFR-2 mRNA表达丰度与关节滑膜血管密度、关节软骨含量的相关性；采用RT-PCR方法检测VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3 mRNA在CIA关节的表达，并分析VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3 mRNA表达丰度与关节炎症积分、关节病理积分、关节滑膜血管密度、关节软骨含量的相关性。 3使用分子克隆方法，扩增内皮抑素(endostatin，ES)cDNA,并插入真核表达载体pSecTag／HygroB，构建ES真核表达载体pSecTag／ES，转化感受态大肠杆菌，提取质粒pSecTag／ES，并加入PVP40与质粒DNA形成偶联物，以ES100μg的剂量，在CIA动物胫骨前部肌肉注射，每周1次，共3次，来治疗CIA：比较ES治疗和空白质粒对照CIA足垫厚度、关节炎症积分、关节病理积分、关节滑膜血管密度、关节软骨含量；并比较ES治疗和对照组CIA关节VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3 mRNA表达，比较ES治疗和对照组CIA VEGFR-2蛋白表达，初步探讨内皮抑素治疗机理。 4采用赖氨酸亲和层析法，从血浆中纯化纤维蛋白溶酶原，并使用胰弹性蛋白酶水解纤维蛋白溶酶原，制备血管抑素，并使用赖氨酸亲和层析法纯化血管抑素，使用SDS-PAGE蛋白电泳分析血管抑素纯度；并以40μg／kg的剂量，腹腔注射，每周1次，共3次治疗CIA，比较血管抑素治疗和空白对照组CIA足垫厚度、关节炎症积分、关节病理积分、关节滑膜血管密度、关节软骨含量：并比较血管抑素治疗组和空白对照组CIA关节VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3 mRNA表达，比较血管抑素治疗组和空白对照组CIA VEGFR-2蛋白表达，比较治疗前后整合素αvβ3mRNA表达，初步探讨血管抑素治疗CIA的可能机制。

关键词：关节炎胶原性血管内皮细胞生长因子受体整合素αvβ3 血管增生关节软骨内皮抑素血管抑素

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α-乳香酸抗急性髓细胞白血病血管新生的实验研究

α-乳香酸抗急性髓细胞白血病血管新生的实验研究

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作者：张勇中南大学

学位级别：博士

民间应用乳香树脂提取物治疗多种不同慢性炎症性疾病已经很长时间了。来自动物模型及人体的实验数据已经确认乳香树脂提取物不仅具有治疗炎症性疾病的能力,同时具有抗肿瘤效能。对树脂提取物成分的分析揭示五环三萜类化合物乳香酸具有... 详细信息

民间应用乳香树脂提取物治疗多种不同慢性炎症性疾病已经很长时间了。来自动物模型及人体的实验数据已经确认乳香树脂提取物不仅具有治疗炎症性疾病的能力,同时具有抗肿瘤效能。对树脂提取物成分的分析揭示五环三萜类化合物乳香酸具有多种生物学活性及药理学作用。在阐明乳香酸类化合物(boswellic acids, BAs)生物效应分子机制的研究中发现5-LO、人白细胞弹性蛋白酶、端粒酶Ⅰ和端粒酶Ⅱ以及激肽酶是BAs作用的靶标,而且根据细胞类型及结构不同,BAs在不同细胞分别影响炎症反应及肿瘤生长信号传导途径,包括Ca2+, MAPK信号肽。基于在中医及印度民间医药中观察到的一些效果,科学家们开展了许多动物试验及在受试人进行了临床试验。在动物模型上,BAs单体或包含了很多种成分的B. spec提取物,都显示具有潜在的治疗炎症疾病(风湿性关节炎、骨关节炎、自身免疫脑脊髓炎、回肠炎、结肠炎、肝炎等)、疼痛、高脂血症、高胆固醇血症、过敏反应等药理学效果。实际上,在人体的研究亦显露出其能干预风湿性关节炎、骨关节炎、脑及其他肿瘤、溃疡性结肠炎、Crohn’s病及支气管哮喘的潜能。国内外学者研究乳香酸类化合物抗白血病作用,主要集中在促进白血病细胞分化及诱导凋亡、抑制肿瘤细胞的增殖,而有关调节微血管新生方面的研究尚未见报道。本次研究对于进一步深刻了解乳香提取物及其单体乳香酸类化合物的药理作用机制具有比较深远的意义,对于中药的开发及临床广泛推广应用亦会产生积极的影响。目的①阐明临床急性髓细胞白血病患者体内血管新生与分型、预后、浸润的关系以及与血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的相关性。②研究乳香单体α-乳香酸对白血病细胞株HL-60细胞增殖的影响,对HL-60细胞VEGF及其受体(FLt-1和KDR/FLK-1)表达的影响。③通过体内试验,研究α-乳香酸对体内白血病细胞分泌VEGF的影响,以及对骨髓微血管新生的作用。方法①收集骨髓液,分离单个核细胞(monocyte, MNC),免疫组化检测急性白血病患者骨髓单个核细胞内VEGF蛋白的表达;②取骨髓活检组织,石蜡包埋、切片后免疫组化染色检测骨髓微血管密度;③MTT试验检测α-乳香酸对白血病细胞体外增殖的影响;④Real-time PCR检测α-乳香酸对VEGF及受体(FLT-1及KDR/FLK-1) mRNA表达的影响;⑤Western Blot法检测α-乳香酸对细胞VEGF及其受体蛋白表达的影响;⑥3Gyb0Co射线照射BALB/C裸鼠,通过注射HL-60细胞构建急性白血病动物模型;⑦组织病理学检查及染色体G显带法鉴定白血病动物模型;⑧ELISA法检测不同剂量α-乳香酸处理组模型裸鼠血浆VEGF浓度的变化;⑨免疫组化染色检测各组裸鼠骨髓微血管密度(microvessel density, MVD)。结果①初治急性髓性白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者和对照组骨髓组织中的微血管密度分别为：30.03±4.37/hot spot和9.85±3.44/hot spot, AML患者显著高于正常人(对照组)(P＜0.05)。经治疗达到完全缓解病例MVD降至12.27±2.40/hotspot,与初治AML患者MVD水平有显著性差异,而与正常人对照组无明显差异。②急性白血病按照FAB方法分组,不同组间的平均MVD进行比较,组间分析采用方差分析F检验比较其差异,不同组间平均MVD无明显差异(P>0.05);③无髓外浸润组MVD为19.93±8.02/hot spot,髓外浸润组MVD为30.00±5.40/hot spot,两组MVD比较有显著差异(P<0.05);④VEGF在急性白血病外周血MNC表达阳性率70%,完全缓解病例其阳性率下降至6.7%;⑤α-乳香酸能抑制HL-60细胞增殖,2.5mg/L-30. Omg/L浓度范围内对HL-60细胞抑制率为(5.98±2.06)%-(81.99±0.76)%;⑥15.0mg/L以上浓度α-乳香酸降低HL-60细胞VEGF及VEGF受体mRNA的表达;⑦15.0mg/L以上浓度α-乳香酸能减少HL-60细胞后VEGF及其受体(flt-1和FLK-1/KDR)蛋白的表达;⑧成功建立急性白血病动物模型;⑨***-1.d-1α－乳香酸作用于动物,能明显降低血清VEGF浓度及微血管密度。结论①急性髓细胞白血病中存在血管新生,骨髓MVD与白血病的分型无关,但与浸润有密切关系。白血病患者体内MVD的高低与肿瘤细胞VEGF的表达亦有明显关系。②急性髓细胞白血病细胞株HL-60细胞表达VEGF及受体,15.0mg/L以上浓度α-乳香酸能抑制HL-60细胞增殖,作用时间越

关键词：急性髓细胞白血病微血管密度血管内皮细胞生长因子血管内皮细胞生长因子受体 flt-1 flk-1/kdr α-乳香酸动物模型

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缺血骨骼肌VEGF及其受体表达与血管新生实验研究

缺血骨骼肌VEGF及其受体表达与血管新生实验研究

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作者：梁卫上海第二医科大学上海交通大学

学位级别：博士

血管内皮细胞生长因子(VEGF)具有促血管生成作用,其生物学作用是通过与特异性受体VEGFR-1(Flt-1)和VEGFR-2(Flk-1)结合而产生的.已证明VEGF有可能成为治疗下肢动脉闭塞性疾病的新方法.为了解肢体缺血状态下,体内代偿反应的动态变化过程... 详细信息

血管内皮细胞生长因子(VEGF)具有促血管生成作用,其生物学作用是通过与特异性受体VEGFR-1(Flt-1)和VEGFR-2(Flk-1)结合而产生的.已证明VEGF有可能成为治疗下肢动脉闭塞性疾病的新方法.为了解肢体缺血状态下,体内代偿反应的动态变化过程,该课题建立实验鼠后肢缺血模型,依缺血时间分为9组,观察骨骼肌侧枝血管的形成,分板自身VEGF及其受体表达的动态变化,为VEGF治疗下肢缺血性疾病提供理论依据.通过上述研究,表明:1.切除大鼠右侧后肢全长股动脉,可成功建立动物肢体缺血模型.2.肢体缺血后,生物体自身可以形成侧枝循环,以改善远端肢体的血液供应.3.缺血缺氧状况下,骨骼肌侧枝血管的形成与自身VEGF及其受体的表达密切相关.4.缺血缺氧状况下,骨骼肌VEGF及其受体的表达发生动态变化.

关键词：血管内皮细胞生长因子血管内皮细胞生长因子受体血管新生动脉闭塞性疾病骨骼肌

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KDR启动子驱动的双自杀基因靶向治疗乳腺癌的实验研究

KDR启动子驱动的双自杀基因靶向治疗乳腺癌的实验研究

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作者：苏国强第一军医大学

学位级别：博士

研究背景乳腺癌是威胁女性健康的主要疾病之一,且其发病率在世界范围内有上升趋势。传统的治疗方法有其自身的局限性,因此寻找新的疗法迫在眉睫。随着肿瘤生物学及分子生物学等新兴学科的发展,肿瘤的基因治疗成为一种新的治疗模式,... 详细信息

研究背景乳腺癌是威胁女性健康的主要疾病之一,且其发病率在世界范围内有上升趋势。传统的治疗方法有其自身的局限性,因此寻找新的疗法迫在眉睫。随着肿瘤生物学及分子生物学等新兴学科的发展,肿瘤的基因治疗成为一种新的治疗模式,其中自杀基因疗法是较为有效和颇具临床应用潜力的治疗策略。自杀基因疗法是利用基因工程技术将一些病毒或细菌等原核生物含有、哺乳动物细胞中不含有或表达水平极低的前药转换酶基因导入肿瘤细胞进行表达,其产物可使无毒性的前药变成细胞毒物质,从而达到杀伤肿瘤细胞的作用。该疗法通过直接杀伤效应和旁观者效应杀伤肿瘤细胞,而对正常机体细胞损伤轻微,因此能够在获得良好抗肿瘤疗效的同时明显降低全身毒副反应,目前已成为肿瘤基因治疗研究的前沿领域。国内外迄今研究最为深入的自杀基因疗法是HSV-TK/GCV和CD/5-FC两大系统,美国FDA已经批准多项有关HSV-TK/GCV和CD/5—FC的临床治疗实验方案。鉴于不同类型肿瘤细胞对自杀基因系统的敏感性不同、单一自杀基因系统治疗时部分肿瘤细胞易产生耐药以及CD/5-FC和HSV-TK/GCV系统的作用机理具有很强的互补性,联合应用此两系统不仅可以提高肿瘤细胞杀伤作用,改善治疗效果,而且可以扩大肿瘤治疗谱,减少耐药现象发生。基因治疗要求目的基因能在肿瘤细胞特异性表达而不在正常细胞中表达,

关键词：肿瘤腺病毒载体自杀基因治疗血管内皮细胞生长因子受体

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稳定型心绞痛伴慢性冠状动脉阻塞患者和急性下肢缺血动物模型侧支循环研究

稳定型心绞痛伴慢性冠状动脉阻塞患者和急性下肢缺血动物模型侧支...

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作者：孙振上海交通大学

学位级别：博士

冠状动脉严重狭窄或完全阻塞时，及时建立良好的侧支循环能够减轻心肌缺血损伤的程度和范围，保存部分甚至全部左心室功能，且能避免急性ST段抬高型心肌梗死(acute myocardialinfarction)的发生，有助于提高这些患者的远期生存率。因此... 详细信息

冠状动脉严重狭窄或完全阻塞时，及时建立良好的侧支循环能够减轻心肌缺血损伤的程度和范围，保存部分甚至全部左心室功能，且能避免急性ST段抬高型心肌梗死(acute myocardialinfarction)的发生，有助于提高这些患者的远期生存率。因此，冠状动脉侧支循环的建立是心脏的内在保护机制。目前，对影响慢性稳定型心绞痛患者冠状动脉侧支循环的临床、生化因素和细胞因子还不完全清楚。因此，本课题开展系列临床研究和动物实验，探讨冠状动脉侧支循环的发生机制和潜在的影响因素，以期为冠心病的进步优化治疗提供理论基础第一部分影响合并稳定型心绞痛的冠状动脉慢性完全阻塞患者侧支循环建立的临床特征和冠状动脉造影特征目的：在本研究中，我们试图探究冠状动脉慢性完全闭塞合并稳定型心绞痛患者的临床基线特征及冠状动脉造影结果显示的冠状动脉病变表现，对冠状动脉侧支循环建立程度的影响。方法：收集478例稳定型心绞痛伴冠状动脉慢性完全闭塞患者的人口统计学变量、生化检测结果和冠状动脉造影发现。按照Rentrop评分系统（依据冠状动脉慢性完全闭塞病变远端血管充盈的程度）将冠状动脉侧支血管的显影情况分为0至3个等级。结果：478例中，冠状动脉侧支循环较差（Rentrop0/1级）186例，冠状动脉侧支循环良好（Rentrop2/3级）292例。尽管两组的年龄、吸烟和心血管用药比例并无显著差异，但冠状动脉侧支循环较差的患者，其女性比例显著增加，高血脂、糖尿病发生率显著增高，而高血压所占的比例则降低。此外，冠状动脉造影结果显示，侧支循环较差患者合并单支冠状动脉病变以及肾功能不全的比例增高，而合并右冠状动脉阻塞病变的比例降低。多元Logistic回归分析表明，年龄≥65岁、女性、糖尿病、高血脂、中重度肾功能不全、血清高敏C反应蛋白（hsCRP）水平升高是冠状动脉慢性完全闭塞患者侧支循环建立不良的独立危险因素。结论：本研究中，近40%合并稳定型心绞痛伴冠状动脉慢性完全阻塞患者其冠状动脉侧支循环形成不良，后者与其临床基线特征和冠状动脉病变表现有关。第二部分血清可溶性血管内皮细胞生长因子受体1水平增高与稳定型冠心病患者冠状动脉侧支循环形成不良的相关性研究目的：可溶性血管内皮细胞生长因子受体-1（sVEGFR-1）蛋白是VEGFR-1前体mRNA的选择性剪切体的产物，对于血管内皮细胞生长因子（VEGF）有着较强的亲和力及中和作用，是血管新生的内源性负性调控因子。本研究探究血清sVEGFR-1水平增高与冠状动脉侧支循环建立不良是否成正相关。方法：通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测403例慢性冠状动脉完全和次全闭塞患者血清sVEGFR-1、sVEGFR-2、sVEGFR-3、胎盘生长因子（PLGF）、VEGF水平。采用Rentrop分级标准评估冠状动脉侧支循环建立的程度。结果：403例中，冠状动脉侧支循环未充分建立的患者和冠状动脉侧支循环充分建立的患者分别为161例和242例。与冠状动脉侧支循环充分建立的患者相比，冠状动脉侧支循环未充分建立的患者血清sVEGFR-1、sVEGFR-2、Hs-CRP水平显著增高，而血清PLGF和VEGF水平显著降低(所有比较，P＜0.05)。无论在糖尿病亚组还是在非糖尿病亚组，冠脉侧支循环未充分建立的患者的血清sVEGFR-1、PLGF和VEGF水平均与冠脉侧支循环充分建立患者的血清sVEGFR-1、PLGF和VEGF水平存在显著性差异。多元Logistic回归分析显示，糖尿病、高血脂、血清sVEGFR-1水平的升高以及血清PLGF和VEGF水平的降低是冠状动脉侧支循环建立程度差的独立危险因素。结论：血清sVEGFR-1水平增高与稳定型冠心病患者的冠状动脉侧支循环形成不良呈正相关。2型糖尿病是稳定型冠心病患者冠状动脉侧支循环形成不良的主要影响因素。第三部分基于血清胱抑素C和肌酐水平的肾小球滤过率在评估稳定型心绞痛伴慢性完全阻塞患者冠状动脉侧支循环中的作用比较目的:以往大量的研究结果表明，肾功能减低患者心血管死亡率增高，后者可能部分与冠状动脉侧支循环形成不佳有关。本研究目的旨在比较基于胱抑素或肌酐水平估测的肾小球滤过率（eGFR）在评价稳定型心绞痛伴慢性完全阻塞患者冠状动脉侧支循环中的作用。方法学:对427例稳定型心绞痛伴慢性冠状动脉完全阻塞患者应用血清胱抑素或肌酐水平，并以MDRD公式计算eGFRcr：eGFRcr(mL/min/1.73m2)=[186.3x肌酐-1.354(mg/dl) x年龄-0.203x0.742(如女性)]。以下列方程计算eGFRcys：当血清胱抑素C≤0.8mg/L时，eGFR2cys(mL/min/1.73m)=[133x

关键词：冠心病稳定型心绞痛冠状动脉造影侧支循环慢性完全阻塞肾功能糖尿病血管内皮细胞生长因子受体

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视网膜周细胞对微血管内皮细胞生长和紧密连接形成影响的研究

视网膜周细胞对微血管内皮细胞生长和紧密连接形成影响的研究

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作者：王应利第四军医大学

学位级别：博士

研究背景新生血管性视网膜病变常见于增生性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变等，是一类危害严重的致盲性眼病，也是当前研究的热点。其共同的特征是形成病理性视网膜新生血管(retinal neovascularization，R... 详细信息

研究背景新生血管性视网膜病变常见于增生性糖尿病性视网膜病变、视网膜静脉阻塞、早产儿视网膜病变等，是一类危害严重的致盲性眼病，也是当前研究的热点。其共同的特征是形成病理性视网膜新生血管(retinal neovascularization，RNV)，这些血管失去正常的生长抑制，缺乏重建和成熟，渗漏性强，是导致视网膜水肿、出血和增殖等病变的根本原因。视网膜微血管壁由两种细胞组成：视网膜周细胞(retinal pericytes，RPCs)和视网膜微血管内皮细胞(retinal microvascular endothelial cells，RMECs)。RNV的生成是一个由内皮细胞和周细胞相互作用，众多细胞因子和信号途径时序性参与和制约的多步骤、复杂过程。两种细胞相互作用的平衡对正常的血管生成和维持至关重要，一种细胞的损害会影响另一种细胞。在血管生成中，内皮细胞处于主导地位，既往的研究绝大多数集中于内皮细胞，对其作用已有了较多的认识。周细胞作为血管生成和血管功能的重要调节细胞，尤其在糖尿病视网膜病变中周细胞作为首发的受损细胞，使其成为目前研究的焦点。从一定意义上讲，RNV的形成是视网膜对缺血缺氧的一种紧急代偿，但这种代偿失去了正常血管生成的调控和抑制机制，从而产生了管壁结构不健全、易渗漏的新生血管。目前消除新生血管的治疗，如抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)表达、激光光凝视网膜无灌注区等，虽然在一定程度上能缓解视网膜水肿、出血等病变带来的视力损害，但同

关键词：视网膜新生血管周细胞内皮细胞缺氧增生移行血管生成血管内皮细胞生长因子受体血管生成素1 闭锁蛋白(occludin) 闭合小环蛋白1(zona occludens-1)

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VASH1和VEGFR-2在宫颈鳞癌组织的表达及意义

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山东医药 2015年第21期55卷 40-42页

作者：王玉霞孔红霞韩贝贝陈雁南刘燕郑州大学第三附属医院郑州450052

目的探讨血管生成抑制蛋白1(VASH1)和血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)在宫颈鳞癌组织中的表达及意义。方法选取20例正常宫颈组织、25例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、45例宫颈鳞癌组织,采用免疫组化SP法和荧光定量PCR法分别检测VASH1和... 详细信息

目的探讨血管生成抑制蛋白1(VASH1)和血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)在宫颈鳞癌组织中的表达及意义。方法选取20例正常宫颈组织、25例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织、45例宫颈鳞癌组织,采用免疫组化SP法和荧光定量PCR法分别检测VASH1和VEGFR-2的表达。结果宫颈鳞癌组织中VASH1、VEGFR-2蛋白阳性表达率均高于CIN组织、正常宫颈组织(P均<0.05)。VASH1 mRNA、VEGFR-2 mRNA在宫颈鳞癌组织中的相对表达量均高于CIN组织及正常宫颈组织(P均<0.05)。VASH1的表达与宫颈鳞癌淋巴结转移、临床分期有关(P均<0.05),VEGFR-2的表达与宫颈鳞癌淋巴结转移、临床分期及组织病理学分级有关(P均<0.05)。宫颈鳞癌组织中VASH1与VEGFR-2的表达呈正相关(r=0.617,P<0.01)。结论宫颈鳞癌组织中VASH1、VEGFR-2高表达,二者的表达变化可能与宫颈鳞癌的发生发展有关。

关键词：宫颈肿瘤肿瘤,鳞状细胞血管生成抑制蛋白血管内皮细胞生长因子受体

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VEGF及其受体在人胃癌细胞MGC803的共表达及VEGF对MGC803细胞的促增殖效应

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中国科学C辑 1999年第5期29卷 537-542页

作者：田学军孟麟寿成超董志伟北京医科大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所北京100034 中国医学科学院肿瘤研究所北京100021

血管内皮细胞生长因子(VEGF)在许多肿瘤细胞有异常高表达. 应用RT-PCR从人胃癌细胞MGC803中扩增获得了VEGF及其受体KDR的特异片段;细胞免疫化学结果显示在MGC803细胞上有KDR的强阳性着染,说明在胃癌细胞MGC803中存在VEGF及其受体KDR的... 详细信息

血管内皮细胞生长因子(VEGF)在许多肿瘤细胞有异常高表达. 应用RT-PCR从人胃癌细胞MGC803中扩增获得了VEGF及其受体KDR的特异片段;细胞免疫化学结果显示在MGC803细胞上有KDR的强阳性着染,说明在胃癌细胞MGC803中存在VEGF及其受体KDR的共表达. 3H-TdR掺入实验表明:外源性VEGF165对胃癌细胞MGC803有明显的促增殖作用, 抗VEGF165单抗及抗KDR单抗均可阻断VEGF的这种刺激作用. 从而提示VEGF可能作为肿瘤细胞的自分泌促生长因子发挥作用,为进一步认识VEGF在肿瘤发生中的作用提供了新的依据.

关键词：肿瘤细胞血管内皮细胞生长因子血管内皮细胞生长因子受体共表达增殖

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