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血管内皮细胞生长因子vegf与唾液酸化Lewis-X抗原在骨肉瘤中的表达及意义的研究

中国骨肿瘤骨病 2011年第4期10卷 407-411页

作者：张峻张志诚杨军中国医科大学附属盛京医院脊柱创伤骨科沈阳110004 内蒙古巴彦淖尔市临河区北环社区卫生服务中心巴彦淖尔015000

骨肉瘤是一种好发于青少年的高度恶性肿瘤,研究表明骨肉瘤的术后复发和转移是影响患者预后的主要因素.肿瘤血管的生长无疑是肿瘤发生侵袭和转移的重要因素.血管对于肿瘤的生长起巨大的作用,新生的血管的形成增殖可以使骨肉瘤迅速生长及... 详细信息

骨肉瘤是一种好发于青少年的高度恶性肿瘤,研究表明骨肉瘤的术后复发和转移是影响患者预后的主要因素.肿瘤血管的生长无疑是肿瘤发生侵袭和转移的重要因素.血管对于肿瘤的生长起巨大的作用,新生的血管的形成增殖可以使骨肉瘤迅速生长及向远处转移.许多血管生长因子在肿瘤中均有表达,介导血管新生.肿瘤的生长、侵袭和转移是血管生成依赖性的,人类的许多恶性肿瘤包括骨肉瘤都发现有高水平的血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,vegf）.

关键词：血管内皮细胞生长因子vegf 唾液酸化Lewis-X抗原骨肉瘤侵袭和转移恶性肿瘤血管生长因子血管新生肿瘤发生

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孤核受体TR3介导血管新生对肿瘤生长的影响及机制研究

孤核受体TR3介导血管新生对肿瘤生长的影响及机制研究

引用

作者：陈晨华中科技大学

学位级别：博士

研究背景病理性血管新生是肿瘤及其他多种疾病发生发展过程中的标志性环节,血管内皮细胞生长因子vegf是目前已知的最强促血管新生的分子,自上世纪80年代vegf被发现,多种以vegf及其受体vegfR为靶点的抗肿瘤药物得以研发问世,但面临广泛... 详细信息

研究背景病理性血管新生是肿瘤及其他多种疾病发生发展过程中的标志性环节,血管内皮细胞生长因子vegf是目前已知的最强促血管新生的分子,自上世纪80年代vegf被发现,多种以vegf及其受体vegfR为靶点的抗肿瘤药物得以研发问世,但面临广泛的耐药、副作用等问题,因此探寻新的靶点以达到治疗肿瘤的目的具有十分重大的意义。孤核受体TR3/Nur77(人TR3;小鼠Nur77;大鼠NGFI-B)是转录因子孤核受体IV亚家族中的一员,被证实在vegf介导的血管新生中发挥关键作用,课题组前期研究发现降低TR3/Nur77的表达可以显著抑制肿瘤血管新生及肿瘤生长,提示TR3/Nur77可用为新的抗肿瘤治疗的潜在靶点。TR3/Nur77有三个主要功能域:配体结合域(ligand binding domain,LBD)、DNA结合域(DNA binding domain,DBD)、转录激活域(transactivation domain,TAD)。课题组前期研究发现TR3/Nur77对vegf介导的血管新生的促进作用与其转录活性有关,但其影响vegf介导的血管新生的具体作用机制尚未得到阐明,以TR3/Nur77及其相关分子为靶点的潜在治疗手段也未得以充分探究,是以本研究通过构建了TR3/Nur77的4个衍生分子以进一步探究TR3/Nur77作用于vegf介导的血管新生的作用位点及机制,为今后以TR3/Nur77为靶点研发新的抗肿瘤治疗手段提供理论依据。研究目的验证TR3/Nur77在vegf介导的血管新生中的作用,探究其影响vegf介导的血管新生的作用位点及机制,通过研究TR3/Nur77相关的衍生分子在vegf介导的血管新生中的作用进一步明确TR3/Nur77作为抗肿瘤治疗靶点的潜在价值。研究方法1.选取人黑色素瘤及结直肠癌肿瘤及癌旁组织切片进行免疫组化及免疫荧光染色,观察比较肿瘤及癌旁组织中TR3/Nur77的表达情况;2.向TR3/Nur77基因敲除小鼠及对照组野生型小鼠接种小鼠肺癌LLC细胞系,观察对比肿瘤生长情况;3.向TR3/Nur77基因敲除小鼠及对照组野生型小鼠接种小鼠结肠癌CMT93细胞系,观察对比肿瘤肺部转移情况;4.向内皮细胞高表达TR3/Nur77的EC-Nur77-S转基因小鼠、内皮细胞低表达TR3/Nur77的EC-Nur77-DN转基因小鼠、同品系的野生型wild type小鼠接种小鼠肺癌LAP0297细胞系,观察对比肿瘤生长情况;5.分别构建只表达TR3/Nur77的转录激活域TAD和DNA结合域DBD的重组腺病毒载体F-TR3-M1、F-TR3-M3p(穿梭质粒p ENTR1A,骨架质粒p Ad/CMV/V5-DEST);以及构建针对人TR3基因的sh RNA腺病毒载体sh TR3-176和小鼠Nur77基因的sh RNA腺病毒载体sh TR3-297(穿梭质粒p LKO.1-puro,骨架质粒p Ad/PL-DEST);6.重组腺病毒制备:将构建完成的腺病毒载体感染HEK293细胞,扩增、收集、纯化后得到重组腺病毒悬液,分装冻存;7.重组腺病毒感染内皮及肿瘤细胞,western-blot验证目的蛋白的表达;8.单层细胞划痕试验检测细胞感染重组腺病毒后的迁移能力变化;***-8细胞增殖试验检测细胞感染重组腺病毒后的增殖能力变化;***促血管新生实验:小鼠耳部皮下注射重组腺病毒观察其对血管新生的影响;11.裸鼠接种人黑色素瘤细胞建立移植瘤模型,给不同组荷瘤小鼠分别尾静脉注射不同重组腺病毒观察其对肿瘤生长的影响;12.观察周期结束后处死小鼠取肿瘤、肿瘤周围皮肤、肝脏等组织进行免疫组化检测并提取RNA进行q PCR检测分析组织中TR3/Nur77及其他血管新生相关分子的表达情况;实验结果***3/Nur77在人黑色素瘤及结直肠癌中检测到高表达,但在癌旁组织中不表达;2.接种LLC肺癌细胞后,TR3/Nur77基因敲除小鼠相比于对照组野生型小鼠,肿瘤生长速度及肿瘤大小明显降低;3.接种CMT93结肠癌细胞系后,TR3/Nur77基因敲除小鼠均未出现肺部转移,而对照组小鼠均出现肿瘤肺部转移;4.接种LAP0297肺癌细胞后,相对于野生型小鼠,EC-Nur77-S组小鼠肿瘤大小及重量明显升高;而EC-Nur77-DN组小鼠肿瘤大小及重量明显降低;5.在细胞实验中F-TR3-M1、F-TR3-M3p、sh TR3-176、sh TR3-297可抑制HUVEC内皮细胞及A375肿瘤细胞的增殖与迁移;6.F-TR3-M1、F-TR3-M3p、sh TR3-176、sh TR3-297可抑制vegf促进的小鼠耳部血管新生;7.F-TR3-M1、F-TR3-M3p、sh TR3-176、sh TR3-297抑制肿瘤生长

关键词：血管新生血管内皮细胞生长因子vegf 孤核受体TR3/Nur77

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卵巢癌患者血清vegf、CA125的表达及其与疾病进展的关系

引用

海南医学 2013年第7期24卷 1002-1004页

作者：黄芳桂林市人民医院检验科广西桂林541002

目的探讨血管内皮细胞生长因子(vegf)和糖类抗原(CA125)在卵巢癌患者血清中的表达及其与疾病进展的关系。方法检测50例卵巢癌患者、50例卵巢良性疾病患者和60例健康女性血清中vegf、CA125的水平,将卵巢癌患者以有无淋巴结转移分为两组,... 详细信息

目的探讨血管内皮细胞生长因子(vegf)和糖类抗原(CA125)在卵巢癌患者血清中的表达及其与疾病进展的关系。方法检测50例卵巢癌患者、50例卵巢良性疾病患者和60例健康女性血清中vegf、CA125的水平,将卵巢癌患者以有无淋巴结转移分为两组,同时按FIGO(1987年)进行临床分期:Ⅰ期10例、Ⅱ期18例、Ⅲ期12例,Ⅳ期10例;用酶联法检测vegf,用电化学发光法检测CA125。结果卵巢癌组各项检测指标与良性疾病组和正常对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01),而良性组与健康对照组比较vegf差异无统计学意义(P>0.05),CA125差异有统计学意义(P<0.01);卵巢癌患者有无淋巴结转移血清vegf、CA125水平比较差异均有统计学意义(P<0.01);不同临床分期卵巢癌患者血清vegf、CA125水平比较,Ⅳ期与Ⅲ期,Ⅲ期与Ⅰ、Ⅱ期比较vegf、CA125水平差异均有统计学意义(P<0.01)。结论联合检测血清vegf、CA125对卵巢癌的诊断、病情评估以及预后判断具有重要价值。

关键词：血管内皮细胞生长因子vegf 糖类抗原CA125 卵巢癌

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vegf与DLK1在骨肉瘤中的表达及相关性的实验研究

VEGF与DLK1在骨肉瘤中的表达及相关性的实验研究

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作者：张峻中国医科大学

学位级别：硕士

目的　　研究血管内皮细胞生长因子vegf与穿膜蛋白DLK1的表达与骨肉瘤患者的性别、年龄、病理分级、Enneking分期、病理分型、肿瘤的转移之间的关系,其中以“vegf/DLK1两因子与骨肉瘤的转移以及两因子的相关性”为研究重点。为骨肉瘤... 详细信息

目的　　研究血管内皮细胞生长因子vegf与穿膜蛋白DLK1的表达与骨肉瘤患者的性别、年龄、病理分级、Enneking分期、病理分型、肿瘤的转移之间的关系,其中以“vegf/DLK1两因子与骨肉瘤的转移以及两因子的相关性”为研究重点。为骨肉瘤病因的探讨、临床病情的判断及对骨肉瘤的防治提供理论依据。　　方法　　选取我院自1997年1月至2007年3月间手术切除、并经病理诊断确诊的骨肉瘤的标本,其中男性24例,女性18例。选取同期我院手术切除、并经病理诊断确诊的良性的骨软骨瘤10例。所有染色标本均有两位经验丰富的病理医师在双盲下分别计数。每张切片随机选取10个高倍镜视野(10x40),每个高倍视野下计数100个细胞。以染色强度评分:不着色为0分,着色浅为1分,着色适中为2分,着色深为3分。再以阳性细胞所占百分比评分:阳性细胞数≤15%为0分,阳性细胞占16%-30%为1分,阳性细胞占31%-50%为2分,阳性细胞占51%-75%为3分,阳性细胞＞75%为4分。两项得分相乘为最后得分:0分为“-”,1-2分为“+”,6-8分为“++”,9-12分为“+++”。0分为染色阴性,1-12分为染色阳性。　　应用微波SP-免疫组化法,检测42例骨肉瘤和30例骨软骨瘤vegf和DLK1的表达,运用统计学SPSS14.0软件分析两因子表达间的相关性,并对vegf和DLK1在不同临床、病理指标间的骨肉瘤表达差异性进行显著性分析。　　结果　　一.vegf在42例骨肉瘤组织中vegf阳性表达率为76.2%,统计学分析显示两组表达存在显著性差异,P＜0.05。DLK1在42例骨肉瘤组织中DLK1阳性表达率为66.7%,统计学分析显示两组表达存在显著性差异,P＜0.05。　　二.vegf在各病理分级(高、中、低分化)及Ermeking分期(Ⅰ-ⅡA期、ⅡB-111期)骨肉瘤组织中阳性表达差异有显著性(P＜0.05),且随着病理分级和Enneking外科分期的升高,vegf的阳性表达率也呈增强趋势。DLK1与病理分级(高、中、低分化)有关,在各病理分级的骨肉瘤组织中的阳性表达具有显著性差异(P＜0.05),且随着病理分级的升高,DLK1阳性表达强度也随之增强。　　三.vegf表达与转移呈显著正相关性(r=0.6782p＜0.05)。DLK1表达与转移呈显著正相关性(r=0.7643p＜0.05)。　　四.vegf与DLK1有相关性,二者呈正相关(r=0.8957p＜0.05)。　　结论　　一、vegf、DLK1在骨肉瘤组织中的表达均高于骨软骨瘤组织中的表达,存在显著差异性;二、vegf、DLK1在发生转移的骨肉瘤组织中表达高于未发生转移的骨肉瘤组织,存在显著差异性,提示两者可以作为判断骨肉瘤是否发生转移的指标;三、vegf、DLK1在骨肉瘤组织中的表达存在正相关性,提示两者在骨肉瘤的发生发展中存在相互影响的机制,但其机制尚需进一步的研究。

关键词：血管内皮细胞生长因子vegf 穿膜蛋白DLK1 免疫组织化学病理诊断骨肉瘤相关性

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肿瘤血管生成及其供血模式研究进展

引用

中国药理通讯 2009年第2期26卷 23-23页

作者：季宇彬周婷婷邹翔哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心哈尔滨商业大学药物所博士后科研工作站哈尔滨150076

在肿瘤的生长、侵袭和转移过程中，肿瘤血管生成研究尤为重要。本文对目前研究较多的肿瘤血管生成过程、相关影响因子及不同供血模式等方面做…综述。研究表明肿瘤生长分为无血管的缓慢生长阶段和血管快速增长阶段。在无血管的缓慢生长... 详细信息

在肿瘤的生长、侵袭和转移过程中，肿瘤血管生成研究尤为重要。本文对目前研究较多的肿瘤血管生成过程、相关影响因子及不同供血模式等方面做…综述。研究表明肿瘤生长分为无血管的缓慢生长阶段和血管快速增长阶段。在无血管的缓慢生长阶段，促血管生成因子（如血管内皮细胞生长因子vegf、成纤维细胞生长因子FGF、整合素INT等）和血管生成抑制因子（如内皮抑素Es、血管抑素AS、血小板反应蛋白-1TSP-1等）处于平衡状态，当实体肿瘤达到或超过1-2mm2时，单纯依靠弥散作用已不能满足自身营养需求，肿瘤自身缺血缺氧诱导促血管生成因子产生，平衡状态被打破，血管生成表型启动。在肿瘤的生长过程中，各种因子相互作用，肿瘤组织内部会出现不同的供血模式，主要有血管生成拟态VM、马赛克血管MV和内皮依赖性血管三种。VM完全以肿瘤细胞变形构建：MV由不连续内皮细胞和肿瘤细胞相间构建；内皮依赖性血管完全由内皮细胞衬覆。有文献将此三种模式称为“三阶段现象”即肿瘤供血模式由Ⅷ到MV再到内皮依赖性血管。目前，抗血管生成在肿瘤治疗研究中占据重要的地位，但还有许多问题尚未清晰。我们更需进一步研究，为抗血管生成在临床上的应用及与传统抗肿瘤治疗方法的结合提供充实的理论依据。

关键词：肿瘤血管生成肿瘤供血血管内皮细胞生长因子vegf 促血管生成因子成纤维细胞生长因子血管生成抑制因子肿瘤治疗方法依赖性血管

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骨乐宁胶囊促进骨折愈合作用的临床研究

骨乐宁胶囊促进骨折愈合作用的临床研究

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作者：任守平兰州大学

学位级别：硕士

目的:活血化瘀是外伤骨折早期治疗最为常用的方法.然而,跌扑外伤之瘀血肿痛是标,由其所致的气血受损、脏腑失和是本.治疗当标本兼顾,以益气养血为主、辅以活血通络.该研究的目的,是通过对骨乐宁胶囊治疗病人血情中vegf、 ALP等的检测分... 详细信息

目的:活血化瘀是外伤骨折早期治疗最为常用的方法.然而,跌扑外伤之瘀血肿痛是标,由其所致的气血受损、脏腑失和是本.治疗当标本兼顾,以益气养血为主、辅以活血通络.该研究的目的,是通过对骨乐宁胶囊治疗病人血情中vegf、 ALP等的检测分析,观察早期以益气养血活血法治疗对骨析愈合过程的影响,探讨其促进骨折愈合的机理.结论:骨乐宁胶囊可促进骨祈愈合过程中vegf的合成与释放,提高成骨细胞活性和骨痂中的钙盐沉积,所以能有效促进骨折愈合;且疗效优于单纯活血化瘀中药.

关键词：骨乐宁胶囊骨折愈合血管内皮细胞生长因子vegf 碱性磷酸酶ALP

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