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血管内皮细胞生长抑制因子单核苷酸多态与儿童神经母细胞瘤恶性程度发展的关系

中华实用儿科临床杂志 2014年第19期29卷 1506-1509页

作者：王棽李爱东初平鲁洁韩书婧韩炜邰隽王焕民郭永丽倪鑫首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所100029 中国医学院肿瘤医院中心实验室首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所儿科学国家重点学科教育部儿科重大疾病研究重点实验室首都医科大学附属北京儿童医院肿瘤外科首都医科大学附属北京儿童医院北京市儿科研究所儿科学国家重点学科教育部儿科重大疾病研究重点实验室首都医科大学附属北京儿童医院耳鼻咽喉头颈外科

目的探讨血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）基因启动子区的单核苷酸多态（SNP）与儿童神经母细胞瘤恶性程度发展的关系.方法采用病例对照研究方法,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测126例神经母细胞瘤患儿和... 详细信息

目的探讨血管内皮细胞生长抑制因子（VEGI）基因启动子区的单核苷酸多态（SNP）与儿童神经母细胞瘤恶性程度发展的关系.方法采用病例对照研究方法,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法检测126例神经母细胞瘤患儿和196例健康儿童VEGI基因启动子区域-358T＞C、-638A＞G多态,Logistic回归模型比较比值比（OR）及95％可信区间（CI）分析上述多态与儿童神经母细胞瘤发展、转移的风险关系.结果相较于神经母细胞瘤Ⅰ期-358TT野生型,携带VEGI-358CC基因型患儿容易发生肿瘤转移（Ⅱ期,OR=10.667,95％ CI1.387 ～ 82.033,P =0.023;Ⅲ期,OR=5.333,95％ CI0.968 ～ 29.393,P=0.055;Ⅳ期,OR =4.606,95％ CI1.007 ～ 21.072,P=0.049）,VEGI-358C等位基因在肿瘤转移过程可能发挥重要作用.携带VEGI-638 GG基因型的患儿相较于野生型AA基因型更易发生肿瘤转移,与VEGI-358位点结果一致,-638G碱基在肿瘤转移过程中发挥重要作用.结论 VEGI-358 T＞C和-638 A＞G多态与儿童神经母细胞瘤发展及转移相关.携带VEGI-358 CC基因型及-638 GG基因型患儿肿瘤侵袭力更强,更易发生转移.

关键词：神经母细胞瘤血管内皮细胞生长抑制因子单核苷酸多态肿瘤转移

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血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151重组腺病毒对角膜新生血管的抑制作用

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眼科研究 2005年第3期23卷 245-248页

作者：柳林刘银萍潘欣孙琰徐琪沈炜刘志勇 200433 上海第二军医大学附属长海医院眼科第二军医大学微生物学教研室

目的研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151对角膜新生血管的抑制作用.方法利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,Western Blot检测病变细胞内基因的蛋白质表达,体外检测Ad... 详细信息

目的研究以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞生长抑制因子VEGI151对角膜新生血管的抑制作用.方法利用腺病毒载体pCA13构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增,Western Blot检测病变细胞内基因的蛋白质表达,体外检测Ad-VEGI151对ECV304细胞的抑制作用,缝线诱导法建立炎症性兔角膜新生血管模型,给予体内基因治疗.结果VEGI151重组腺病毒在病变细胞内能成功表达相对分子质量为17300的蛋白,体外实验表明,可以强烈抑制静脉内皮细胞的生长,体内实验表明,重组腺病毒对炎症性角膜新生血管的生长具有抑制作用.结论以复制缺陷型重组腺病毒为载体的血管内皮细胞抑制因子VEGI151基因治疗角膜新生血管效果显著,为角膜新生血管的基因治疗提供了新的思路.

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子基因治疗腺病毒载体角膜新生血管

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血管内皮细胞生长抑制因子的研究进展

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广东医学 2013年第23期34卷 3664-3666页

作者：金卫篷周源尉辉杰张建宁天津医科大学第二医院神经外科天津300211 天津医科大学总医院神经外科天津市神经病学研究所300052

血管内皮细胞生长抑制因子（vascular endothelial growth inhibitor,VEGI）是由TAN等在1997年发现的,它属于肿瘤坏死因子超家族的一员,因为它具有明显抑制内皮细胞增殖的作用,所以被命名为VEGI.作为一个内皮细胞产生的血管生成负调控因... 详细信息

血管内皮细胞生长抑制因子（vascular endothelial growth inhibitor,VEGI）是由TAN等在1997年发现的,它属于肿瘤坏死因子超家族的一员,因为它具有明显抑制内皮细胞增殖的作用,所以被命名为VEGI.作为一个内皮细胞产生的血管生成负调控因子,VEGI具有重要的病理生理意义与潜在的应用前景.近年来,国内外研究证实了VEGI在肿瘤治疗、创伤愈合中的作用.本文对VEGI相关研究的进展作一综述.

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子肿瘤坏死因子超家族内皮细胞增殖 VEGI 负调控因子血管生成生理意义创伤愈合

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血管内皮细胞生长抑制因子151重组腺病毒联合地塞米松防治角膜移植排斥反应的实验研究

血管内皮细胞生长抑制因子151重组腺病毒联合地塞米松防治角膜移...

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作者：刘银平第二军医大学

学位级别：硕士

研究血管内皮细胞生长抑制因子151重组腺病毒(Ad-VEGI151)联合地塞米松防治异种板层角膜移植排斥反应的可行性。方法利用腺病毒载体构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增;缝线诱导法建立炎症性兔角膜新生血管模型,给予体内... 详细信息

研究血管内皮细胞生长抑制因子151重组腺病毒(Ad-VEGI151)联合地塞米松防治异种板层角膜移植排斥反应的可行性。方法利用腺病毒载体构建携带VEGI151基因的质粒,经293A细胞包装、扩增;缝线诱导法建立炎症性兔角膜新生血管模型,给予体内基因治疗;建立异种板层角膜移植动物模型,将Ad-VEGI151与地塞米松联合应用,观察Ad-VEGI151与地塞米松联合应用对角膜移植排斥反应的防治作用。结果 Ad-VEGI151在病变细胞内能成功表达有效蛋白,可以强烈抑制静脉内皮细胞的生长;对炎症性角膜新生血管的生长具有抑制作用;Ad-VEGI151和地塞米松联合应用与单独用药相比可明显抑制角膜移植术后新生血管的生长,减少排斥反应发生机率。结论 Ad-VEGI151对角膜新生血管的形成具有抑制作用;其与地塞米松局部联合应用可减少角膜移植术后新生血管形成,从而降低异种板层角膜移植排斥反应发生率。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子基因治疗重组腺病毒角膜新生血管地塞米松异种角膜板层移植

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内皮细胞抑制素血管内皮细胞生长抑制因子_(151)融合基因治疗胃癌的作用及其机制

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中华实验外科杂志 2005年第10期22卷 1186-1189页

作者：李喆方国恩华积德毕建威潘欣戚中田第二军医大学附属长海医院普通外科上海200433 第二军医大学附属长海医院基础部微生物学教研室上海200433

目的探讨新型内皮细胞抑制素血管内皮细胞生长抑制因子151融合基因(hENDOVEGI151)治疗胃癌的作用机制。方法应用重复感染系数(MOI=100)的重组腺病毒AdhENDOVEGI151转染胃癌SGC7901、MKN28细胞和血管内皮ECV304细胞4h后,继续培养6d,噻唑... 详细信息

目的探讨新型内皮细胞抑制素血管内皮细胞生长抑制因子151融合基因(hENDOVEGI151)治疗胃癌的作用机制。方法应用重复感染系数(MOI=100)的重组腺病毒AdhENDOVEGI151转染胃癌SGC7901、MKN28细胞和血管内皮ECV304细胞4h后,继续培养6d,噻唑蓝(MTT)比色法检测第1至6天3种细胞的存活率;流式细胞仪(FCM)丙化碘锭(PI)单染色法检测转染后48h胃癌和内皮细胞凋亡的情况;应用DNA片断化试验分析转染后12、24、36、48h时ECV304凋亡情况;应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和蛋白印迹法(Westernblot)检测融合基因转染对SGC7901表达促血管生成因子VEGF165的影响。结果AdhENDOVEGI151治疗强烈抑制ECV304增殖,72h抑制率为55.18%,144h抑制率89.86%;FCM检测出现明显凋亡峰,凋亡细胞约占(20.70±5.83)%,并且出现G1期阻滞(65.41±2.38)%和S期明显减少(21.81±1.52)%,与AdLacZ组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);转染组细胞DNA出现典型的梯形条带,尤以转染后24～36h最为明显,AdLacZ组及对照组DNA无裂解。AdhENDOVEGI151转染对胃癌细胞无直接毒性作用,但明显下调胃癌细胞VEGF165的表达水平。结论AdhENDOVEGI151治疗一方面强烈抑制内皮细胞增殖,诱导凋亡;另一方面抑制胃癌细胞表达VEGF165,多角度联合抑制肿瘤新生血管形成,使肿瘤细胞因缺血而发生大量凋亡。

关键词：胃癌基因治疗血管内皮细胞生长抑制因子151 血管内皮细胞生长抑制因子融合基因治疗内皮细胞抑制素胃癌细胞 ECV-304细胞 SGC-7901 肿瘤新生血管形成

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可溶性血管内皮细胞生长抑制因子基因的克隆与表达

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第二军医大学学报 2000年第5期21卷 416-419页

作者：肖扬娄永华王路朱玉平焦炳华第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433

目的 :对可溶性人血管内皮细胞生长抑制因子 (vascular endothelial growth inhibitor,VEGI)基因进行克隆和表达 ,检测表达产物对血管内皮细胞增殖的抑制活性。方法 :将可溶性人 VEGI基因克隆入载体 p U C19后测序 ;再将正确的 VEGI基... 详细信息

目的 :对可溶性人血管内皮细胞生长抑制因子 (vascular endothelial growth inhibitor,VEGI)基因进行克隆和表达 ,检测表达产物对血管内皮细胞增殖的抑制活性。方法 :将可溶性人 VEGI基因克隆入载体 p U C19后测序 ;再将正确的 VEGI基因亚克隆入表达载体 p PROEXHTb,IPTG诱导表达 ;初步纯化表达产物 ,检测对新生牛主动脉内皮细胞增殖抑制活性。结果 :可溶性人 VEGI可以直接抑制新生牛主动脉内皮细胞的增殖。结论 :VEGI是一种新的内皮细胞生长抑制因子 ,通过抑制新生血管形成可用于肿瘤治疗。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子基因克隆基因表达

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重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的抗肿瘤活性

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第二军医大学学报 2001年第7期22卷 639-641页

作者：肖扬焦炳华朱玉平娄永华王路第二军医大学基础医学部卫生毒理学教研室上海200433 基础医学部微生物学教研室

目的 :检测重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子 (VEGI)的抗肿瘤活性。方法 :检测重组人可溶性 VEGI对建株人脐静脉内皮细胞 (ECV 30 4)、新生牛主动脉内皮细胞 (BAEC)增殖抑制的活性以及对荷 S180肉瘤小鼠的疗效。结果 :重组人可溶... 详细信息

目的 :检测重组人可溶性血管内皮细胞生长抑制因子 (VEGI)的抗肿瘤活性。方法 :检测重组人可溶性 VEGI对建株人脐静脉内皮细胞 (ECV 30 4)、新生牛主动脉内皮细胞 (BAEC)增殖抑制的活性以及对荷 S180肉瘤小鼠的疗效。结果 :重组人可溶性 VEGI可以直接抑制 ECV30 4、BAEC的增殖 ,强烈抑制 S180肉瘤生长并延长 S180腹水瘤小鼠的寿命。结论 :重组人可溶性 VEGI可通过抑制新生血管形成用于肿瘤治疗。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子内皮新生血管生长抑制物抗肿瘤药 VEGI

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中国人内皮抑素-血管内皮细胞生长抑制因子融合基因治疗胃癌的实验研究

中国人内皮抑素-血管内皮细胞生长抑制因子融合基因治疗胃癌的实...

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作者：李喆第二军医大学

学位级别：博士

主要研究内容、方法和结果如下:1、携带内皮抑素-血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体的构建及重组腺病毒制备;设计引物用PCR方法从pBV220-hEndosatin中扩增hENDO基因,在其5'端引入HindⅢ酶切位点和IL信号肽序列,3'... 详细信息

主要研究内容、方法和结果如下:1、携带内皮抑素-血管内皮细胞生长抑制因子融合基因重组腺病毒载体的构建及重组腺病毒制备;设计引物用PCR方法从pBV220-hEndosatin中扩增hENDO基因,在其5'端引入HindⅢ酶切位点和IL<,3>信号肽序列,3'端引入编码缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸-缬氨酸-甘氨酸(Val-Pro-Gly-Val-Gly)五个氨基酸的弹性蛋白连接肽(linker)序列和EocR I酶切位点,得到647bp的IL<,3>/hENDO-linker片段;用PCR方法从pUC18-VEGI<,151>扩增VEGI<,151>片段在其5'端引入EocR I酶切位点,3'端引入BamH I酶切位点得到476bp的linker-VEGI<,151>片段.产物经纯化后,分别克隆到pMD18-T载体,经DNA自动测序证明序列正确.腺病毒载体pCA13用HindⅢ和BamH I双酶切线性化,用HindⅢ/EocR I将IL<,3>/hENDO-linker片段从携带目的基因的pMD18-T载体上游离下来,用EocR I/BamH I将linker-VEGI<,151>片段从携带目的基因的pMD18-T载体上游离下来,在T<,4>DNA连接酶作用下,将线性化的pCA13与HindⅢ-EocR I IL<,3>/hENDO-linker片段和EocR I-BamH I linker-VEGI<,151>片段进行连接,构建成pCA13 IL<,3>/hENDO-linker-VEGI<,151>,酶切鉴定连接和阅读框正确.将pCA13 IL<,3>/hENDO-linker-VEGI<,151>与含有5型腺病毒大片段的质粒pJM17,用LipofectAMINE介导共转染293细胞,约10天包装出重组腺病毒,经过筛选及PCR鉴定证实重组腺病毒携带融合基因,包装好的腺病毒命名为:Ad IL<,3>/hENDO-VEGI<,151>.同法制备携带报告基因LacZ重组腺病毒AdLac-Z.大量扩增病毒,经氯化铯梯度离心纯化获得1.1×10<'10>puf/ml滴度的重组腺病毒.2、融合基因在体外的表达与鉴定及携带融合基因重组腺病毒对胃癌细胞和血管内皮细胞增殖及生物学特性影响的体外研究.3、融合基因在活体内的表达与鉴定及携带融合基因重组腺病毒治疗胃癌的体内实验研究.该研究虽证实了重组腺病毒携带的融合基因可在体内外表达,并证实了其在体外抑制内皮细胞增殖,促进凋亡;体内抑制肿瘤生长的肯定结果.但动物实验结果表明种植瘤的生长仅仅被减慢,而与国外学者报告的使肿瘤消退到显微状态的结果还相差很远,虽然融合基因通过直接抑制内皮细胞增殖,诱导凋亡及抑制胃癌细胞表达分泌VEGF两种作用协同抑制血管生成,但融合蛋白并没有显示出所预期的对种瘤细胞及血管生成均有抑制作用的双重活性;说明应用重组腺病毒开展基因治疗,在给药途径、给药部位、给药剂量、剂型及提高基因表达效率等方面还存在很多值得进一步探索的问题,融合蛋白的结构、生物活性、毒副作用及作用机制也需进一步加以研究.

关键词：胃癌基因治疗内皮抑素血管内皮细胞生长抑制因子腺病毒载体抗血管生成

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可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的表达及抗肿瘤活性研究

可溶性血管内皮细胞生长抑制因子的表达及抗肿瘤活性研究

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作者：肖扬第二军医大学

学位级别：硕士

目的:本研究对可溶性人VEHI(第25~174位氨基酸)进行克隆、表达、高度纯化、并进行抗肿瘤等生物学活性研究.方法与内容:1.以质粒 pBluescrpt-VEGI为模板,PCR扩增可溶性VEGI基因经EcoRl、BamHl双酶切酶,酶切产物定向插同样双酶切的pUC1... 详细信息

目的:本研究对可溶性人VEHI(第25~174位氨基酸)进行克隆、表达、高度纯化、并进行抗肿瘤等生物学活性研究.方法与内容:1.以质粒 pBluescrpt-VEGI为模板,PCR扩增可溶性VEGI基因经EcoRl、BamHl双酶切酶,酶切产物定向插同样双酶切的pUC19质粒,转化后 ,阳性克隆送全自动荧光测序.2.将VEGL基因亚克隆入表达载体P<,R0>EXHTb,融合表达VEHL,获得含有6个His(组氨酸)的VEGL,经Ni-NTA spin 柱纯化并复性.3.重组VEGL对体外培养的建株人脐静脉内皮细胞ECV304、大鼠肺源毛细血管内皮细胞及新生牛主动脉内皮细胞增殖的影响.4.重组VEGL对体外培养的B16细胞,L929细胞的毒性作用.5.重组VEGL对体内新生血管形成和生长的影响.6.重组VEGL对小鼠体内S180肉瘤生长的影响.7重组VEGL可使荷S180小鼠的生存时间延长.8.重组VEGL对人脐静脉内皮细胞VCV304、大鼠肺源毛血管内皮细胞及新生牛主动脉内皮细胞凋亡的影响.结论:重组可溶性人VEGL是一种强烈的新生血管形成.可溶性人VEHL具有抗肿瘤效应,肿瘤血管密度大大减低因此,VEGL抗肿瘤作用机制,主要是通过VEGL诱导血管内皮细胞凋亡,使血管萎缩、减少、甚至消失,从而使肿瘤处于、"休眠"状态,达到治疗效果.

关键词：将VEHI基因亚克隆细胞凋亡血管内皮细胞生长抑制因子表达抗肿瘤

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人血管内皮细胞生长抑制因子在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

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生物技术通讯 2001年第2期12卷 85-87,105页

作者：刘麟陈宇光谈立松唐亮张颉上海大学生命科学学院上海201800 上海市肺科医院肺癌免疫研究室上海200433

血管内皮细胞生长抑制因子抑制肿瘤部位新生血管的形成 ,切断肿瘤细胞营养供应及废物排泄通道 ,抑制肿瘤细胞恶性增殖。将编码成熟的人血管内皮细胞生长抑制因子基因克隆到表达载体pPICZα中 ,电转化P .pasto risGS115菌株 ,抗生素Zeoci... 详细信息

血管内皮细胞生长抑制因子抑制肿瘤部位新生血管的形成 ,切断肿瘤细胞营养供应及废物排泄通道 ,抑制肿瘤细胞恶性增殖。将编码成熟的人血管内皮细胞生长抑制因子基因克隆到表达载体pPICZα中 ,电转化P .pasto risGS115菌株 ,抗生素ZeocinTM 浓度梯度筛选高抗性转化子 ,PCR筛选阳性重组菌株。经表型鉴定后 ,用甲醇进行诱导表达 ,SDS PAGE和Western印迹杂交结果证实了表达产物为重组人血管内皮细胞生长抑制因子 his6融合蛋白 ,表达量约为 5mg L。经细胞毒性试验测定 ,表达产物对人脐静脉内皮细胞HUVEC增殖具有较明显的抑制作用。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子毕赤酵母分泌表达重组蛋白

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