检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：吴露湖南中医药大学湖南省中医药研究院

学位级别：硕士

目的：在成功复制大鼠主动脉内膜增生模型的基础上，通过研究补阳还五汤及其有效部位生物碱和苷对大鼠主动脉内膜损伤后的血管形态学变化、VSMC增殖标记物PCNA表达和增殖相关的周期蛋白cyclinD1、cyclinE表达的影响，探讨该方抗VSMC增... 详细信息

目的：在成功复制大鼠主动脉内膜增生模型的基础上，通过研究补阳还五汤及其有效部位生物碱和苷对大鼠主动脉内膜损伤后的血管形态学变化、VSMC增殖标记物PCNA表达和增殖相关的周期蛋白cyclinD1、cyclinE表达的影响，探讨该方抗VSMC增殖的物质基础，揭示其抗VSMC增殖的细胞周期调控机制。 　　方法： 　　 1.采用国产2.0F球囊导管建立大鼠主动脉内膜剥脱模型，分别用组织形态学和免疫组织化学方法，测定大鼠血管内皮剥脱后内膜增生情况及SMα-actin、PCNA及collagen I的表达活性，探讨该模型的特性。 　　 2.将大鼠随机分为七组，即：假手术组、模型组、生物碱组、苷组、补阳还五汤原方组、三七总皂苷组、阿托伐他汀组，以球囊导管损伤血管内膜造模，造模后第二天开始灌胃给药，连续给药14 天。术后第16 天取胸主动脉血管损伤段，分别测定血管形态计量指标及PCNA、cyclinD1和cyclinE的表达。 　　结果： 　　 1. 采用国产球囊导管反复3 次剥脱大鼠胸腹主动脉，术后14d 内膜增生明显，SMα-actin 及PCNA 表达均明显增强(均P＜0.01)；术后21d 内膜呈进行性弥漫性增生，SMα-actin 表达仍明显增高(P＜0.01)，但PCNA 表达不明显。模型7d、14d、21d 组collagen I 表达与假手术组比较，差异均无显著性意义(P＞0.05)。 　　 2. 采用国产球囊导管反复6 次剥脱大鼠胸腹主动脉，术后第16 天内膜即出现显著增生。各组血管形态学变化：假手术组大鼠主动脉壁各层结构完整，管腔面积无缩小，内膜光滑无增生，中膜VSMC 排列整齐；模型组大鼠胸主动脉内膜呈弥漫性增厚，管腔面积明显缩小，增厚的内膜中以VSMC 为主，中膜细胞排列紊乱；补阳还五汤原方组、生物碱组、苷组、阿托伐他汀组、三七总皂苷组内膜均有增生，管腔口径有不同程度缩小，但增生程度明显轻于模型组。 　　血管形态计量指标分析表明，各组中膜面积和中膜厚度均无显著变化(P＞0.05)。模型组的内膜面积、内膜厚度、内膜面积增生比率、内膜厚度增生比率、内膜/中膜面积比、内膜/中膜厚度比均显著大于假手术组(P＜0.01)；生物碱组、苷组、补阳还五汤原方组、三七总皂苷组、阿托伐他汀组的内膜面积、内膜厚度、内膜面积增生比率、内膜厚度增生比率、内膜/中膜面积比、内膜/中膜厚度比均显著低于模型组(P＜0.01~ P＜0.05)。 　　各组增生内膜PCNA 表达的比较：模型组PCNA 表达较假手术组显著增强(P＜0.01)。生物碱组、苷组、三七总皂苷组、阿托伐他汀组PCNA 表达较假手术组也均显著增强(P＜0.01~ P＜0.05)，但均显著低于模型组(P＜0.01)。 　　而补阳还五汤原方组PCNA 表达显著高于假手术组(P＜0.01)，其表达强度虽略低于模型组，但差异无显著性意义(P＞0.05)。 　　各组增生内膜cyclinD1和cyclinE表达的比较：模型组cyclinD1表达较假手术组均显著增强(P＜0.01)；生物碱组、苷组、补阳还五汤原方组、三七总皂苷组、阿托伐他汀组cyclinD1表达均显著低于模型组(P＜0.05～P＜0.01)。模型组cyclinE表达较假手术组显著增强(P＜0.01)。生物碱组、苷组、三七总皂苷组cyclinE表达均显著低于模型组(P＜0.05～P＜0.01)。而补阳还五汤原方组、阿托伐他汀组cyclinE表达强度虽略低于模型组，但差异无显著性意义(P＞0.05)。 　　结论：国产2.0F球囊导管致大鼠主动脉内皮剥脱术后14～21d可出现明显的血管内膜增生引起的血管再狭窄。增生内膜中PCNA、cyclinD1、cyclinE表达均增强，其内膜增生主要是由于VSMC增殖所致。在造模术后第十六天, 补阳还五汤及其两类有效部位生物碱和苷能显著抑制血管内膜增生，抑制PCNA、cyclinD1和cyclinE的表达，通过阻抑细胞周期的启动而抗VSMC的增殖，从而起到抑制血管内膜增生的作用。且由补阳还五汤提取的两类有效部位的抗血管内膜增生作用强于原方，提示其可能为该方具有抑制VSMC过度增殖作用的重要药效物质基础，其作用机制与抑制细胞周期的激活，阻抑VSMC增殖有关。

关键词：主动脉内膜损伤血管内膜增生补阳还五汤有效部位 VSMC增殖细胞周期调控机制

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穿心莲有效成分防治血管内膜增生的药效学及机制研究

穿心莲有效成分防治血管内膜增生的药效学及机制研究

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作者：谭春梅湖北中医药大学

学位级别：硕士

1目的血管内膜增生是导致冠心病、动脉粥样硬化等心系疾病的重要病理基础。心系疾病的中医病机是热毒内蕴,毒瘀能郁而化火,灼伤血脉,发为心痛。根据心系疾病内生热毒病机,清热解毒之法可作为治疗原则,清热解毒方药可有效干预冠心病、动... 详细信息

1目的血管内膜增生是导致冠心病、动脉粥样硬化等心系疾病的重要病理基础。心系疾病的中医病机是热毒内蕴,毒瘀能郁而化火,灼伤血脉,发为心痛。根据心系疾病内生热毒病机,清热解毒之法可作为治疗原则,清热解毒方药可有效干预冠心病、动脉粥样硬化等心系疾病的发展。基于此,本论文研究清热解毒中药穿心莲的有效成分穿心莲内酯对颈动脉结扎所致小鼠血管内膜增生的干预作用,探索穿心莲内酯对血管平滑肌细胞增殖、凋亡、迁移及相关检测指标的影响,并阐明其发挥作用的分子机制,为清热解毒法应用于相关疾病的防治提供理论依据。 2方法 2.1穿心莲抗血管内膜增生的网络药理学研究筛选穿心莲的活性成分、活性成分的作用靶点及血管内膜增生的疾病相关靶点。分析穿心莲治疗血管内膜增生的活性成分和基因靶点,得到交集靶点。交集靶点进行蛋白互作(PPI)分析,将PPI网络图进行可视化,筛选得到核心靶点,并将核心靶点和有效成分进行分子对接模拟验证和结合能力预测。 2.2穿心莲内酯抗血管内膜增生的药效学研究体内实验采用小鼠左颈总动脉结扎构建血管内膜增生模型。连续治疗14天后取颈动脉进行苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色。免疫荧光检测颈动脉中BCL2和Ki67的表达水平。体外实验以血管平滑肌细胞为研究对象,检测不同浓度穿心莲内酯处理后血管平滑肌细胞活力。采用流式细胞术和细胞划痕试验检测血管平滑肌细胞的增殖和迁移情况。蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)法测定增殖和凋亡相关蛋白的表达水平。 2.3穿心莲内酯抗血管内膜增生的机制研究以血管平滑肌细胞为研究对象,进行RNA测序。进一步分析测序结果,确定表达谱中的差异表达基因(DEGs)。然后使用R语言进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。采用分子对接、免疫荧光分析和蛋白质免疫印迹对转录组学分析发现的机制进行验证。采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术进行非靶向代谢组学研究,筛选差异代谢物,进行通路富集分析。然后采用分子对接对通路富集分析出来的代谢途径的潜在靶点进行验证。 3结果 3.1穿心莲抗血管内膜增生的网络药理学研究从穿心莲中共筛选得到23个有效成分和对应的383个作用靶点。获得1971个血管内膜增生相关疾病靶点。穿心莲与血管内膜增生有197个交集靶点。将交集靶点数据进行拓扑分析后得到度值最大的成分是穿心莲内酯。筛选得到穿心莲治疗血管内膜增生的核心靶点,分别是TP53、STAT3和AKT1。且穿心莲内酯与核心靶点之间具有良好的结合能力。 3.2穿心莲内酯抗血管内膜增生的药效学研究颈动脉的HE染色可以观察到,与假手术组相比,模型组小鼠颈动脉明显增生,经穿心莲内酯治疗后血管内膜增生明显减轻。免疫荧光分析显示,模型组显著提高了BCL2和Ki67的表达水平,而穿心莲内酯治疗后BCL2和Ki67的表达水平被明显抑制。穿心莲内酯对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用具有剂量依赖性。流式细胞术和细胞划痕试验表明,与对照组相比,穿心莲内酯处理后血管平滑肌细胞的迁移和增殖能力明显下降。WB实验结果表明,与对照组相比,穿心莲内酯组内CDK1、CCND1和BCL2蛋白表达水平显著下降,BAX蛋白表达水平升高。 3.3穿心莲内酯抗血管内膜增生的机制研究穿心莲内酯处理后血管平滑肌细胞共有3298个DEGs。KEGG富集分析显示,DEGs主要富集在PI3K/AKT信号通路。穿心莲内酯与PI3K和AKT1有良好的结合活性。穿心莲内酯对小鼠颈动脉结扎模型中p-PI3K和p-AKT的表达有抑制作用。穿心莲内酯剂量依赖性地降低血管平滑肌细胞中p-PI3K和p-AKT的表达水平。这些结果表明穿心莲内酯抑制PI3K/AKT信号通路的激活。GO生物学功能分析显示,DEGs主要集中在细胞和代谢过程中。代谢组学分析结果显示,穿心莲内酯降低L-精氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸等差异代谢物的表达,差异代谢物的通路富集分析主要集中在氨基酸代谢途径。穿心莲内酯与氨基酸代谢途径相关的关键酶靶点PRDM16、EZH2等具有较好的结合性。这些结果表明穿心莲内酯通过调节氨基酸代谢途径影响血管平滑肌细胞的增殖和迁移。 4结论本研究首先采用网络药理学预测了穿心莲可通过穿心莲内酯影响血管内膜增生的多个靶点,从而起到防治血管内膜增生的作用。接下来对穿心莲内酯对血管内膜增生的治疗作用进行研究,体内实验采用小鼠左颈动脉结扎模型,体外实验选用血管平滑肌细胞为研究对象,给予穿心莲内酯进行治疗,以全面的药效指标进行考察,明确了穿心莲内酯对血管内膜增生有较好的改善作用。最后通过转录组学、代谢组学、分子生物学等分析方法探索穿心莲缓解血管内膜增生的潜在作用机制。揭示了穿心莲内酯通过抑制PI3K/AKT信号通

关键词：穿心莲内酯血管内膜增生 PI3K/AKT 氨基酸代谢

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大黄提取液对犬搭桥术后纤溶系统改变和血管内膜增生的相关性研究

大黄提取液对犬搭桥术后纤溶系统改变和血管内膜增生的相关性研究

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作者：罗鹏贵州大学

学位级别：硕士

目的:测定大黄注射液对纤维蛋白溶解(纤溶)系统的影响以及对血管内膜增生的抑制作用,探讨其机制,为大黄注射液治疗血管搭桥术后内膜增生提供依据。方法:选用20只雄性健康犬,随机分为大黄高剂量组(0.8g/kg)、中剂量组(0.4g/kg)、低剂量组... 详细信息

目的:测定大黄注射液对纤维蛋白溶解(纤溶)系统的影响以及对血管内膜增生的抑制作用,探讨其机制,为大黄注射液治疗血管搭桥术后内膜增生提供依据。方法:选用20只雄性健康犬,随机分为大黄高剂量组(0.8g/kg)、中剂量组(0.4g/kg)、低剂量组(0.08g/kg)和对照组,每组5只。左侧颈外静脉重建颈总动脉,术后2天口服阿司匹林预防急性血栓形成。术后第3天头静脉静滴大黄注射液,连用12天。分别于术前,术后1d、2d、3d、5d、7d、14d和21d颈静脉采血测定D-二聚体、血清纤维蛋白(原)降解产物(FDP)、血浆血小板α颗粒膜蛋白(GMP-140)、纤溶酶原激活剂的抑制物-1(PAI-1)和组织纤溶酶原激活剂(t-PA)等纤溶系统指标。2个月后,牺牲动物,取搭桥血管主体动脉远心端吻合口常规病理切片,苏木素-伊红(HE)染色和弹性纤维与胶原纤维双重组合染色法(VG)染色,测定血管内膜增生厚度。结果:实验结果如下。 1.纤溶系统指标用药后,D-二聚体、FDP、GMP-140、PAI-1和t-PA的变化如下。 (1)对照组D-二聚体含量极显著升高(P＜0.01),低剂量组显著升高(P＜0.05)。中剂量组和高剂量组差异不显著(P＞0.05)。 (2)对照组FDP含量有所升高,但差异不显著。低剂量组和中剂量组略有下降,差异不显著。高剂量组血清FDP含量显著降低。 (3)对照组GMP-140在术后5d、7d、14d呈显著升高,分别为110.1±2.6ng/mL、112.8±1.9ng/mL和111.2±1.9ng/mL。低剂量组GMP-140在术后7d、14d、21d呈显著降低,分别为106.5±3.4ng/mL、105.9±1.6ng/mL和105.1±1.4ng/mL。中剂量组GMP-140在术后14d、21d呈显著降低,分别为104.4±1.1ng/mL和103.8±1.4ng/mL。高剂量组GMP-140在术后7d、14d呈显著降低,分别为105.7±2.5ng/mL和103.7±1.2ng/mL;术后21d极显著降低,为102.8±2.4ng/mL。 (4)对照组PAI-1含量有所升高,但差异不显著。低剂量组PAI-1在术后7d、14d、21d呈显著降低,分别为0.07±0.02ng/mL、0.06±0.04ng/mL和0.05±0.01ng/mL。中剂量组PAI-1在术后5d、7d、14d、21d显著降低,分别为0.08±0.05ng/mL、0.06±0.03ng/mL、0.06±0.01ng/mL和0.03±0.01ng/mL。高剂量PAI-1在术后5d、7d、14d显著降低,分别为0.08±0.01ng/mL、0.06±0.02ng/mL和0.04±0.01ng/mL;在术后21d极显著降低至0.02±0.01ng/mL。 (5)对照组t-PA在术后21d显著降低,为46.5±2.7ng/mL。低剂量组和中剂量组t-PA有所升高,但差异不显著,在术后14d分别达到最高值,为49.8±2.1ng/mL和50.1±2.5ng/mL。高剂量组t-PA在术后21d呈显著升高,为51.1±1.4ng/mL。 2.增生内膜厚度的测定对照组血管增生内膜厚度为112.89±6.08μm,大黄高、中、低剂量组血管增生内膜厚度分别为32.07±2.25μm、43.32±2.69μm和70.48±2.41μm,与对照组相比,差异极显著。结论:大黄注射液可改善搭桥术后纤溶系统,纠正血液高凝状态,恢复抗凝系统活性,预防血栓形成,并可有效的防治血管内膜增生。

关键词：大黄注射液纤溶系统旁路搭桥血管内膜增生犬

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基于Wnt/β-catenin和CaN/NFAT信号通路研究银丹心脑通软胶囊抑制大鼠颈动脉血管内膜增生的作用机制

基于Wnt/β-catenin和CaN/NFAT信号通路研究银丹心脑通软胶囊抑制...

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作者：丁瑞雪遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:研究银丹心脑通软胶囊(YDXNT)对球囊损伤所致大鼠颈动脉血管内膜增生的干预作用,并基于VSMC的增殖-凋亡失衡、表型转换、迁移、炎症反应等方面,探究其作用机制是否与Wnt/β-catenin和Ca N/NFAT信号通路有关。方法:将SD大鼠随机分... 详细信息

目的:研究银丹心脑通软胶囊(YDXNT)对球囊损伤所致大鼠颈动脉血管内膜增生的干预作用,并基于VSMC的增殖-凋亡失衡、表型转换、迁移、炎症反应等方面,探究其作用机制是否与Wnt/β-catenin和Ca N/NFAT信号通路有关。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(Sham,n=10)和球囊损伤组(采用球囊损伤建立大鼠颈动脉血管内膜增生模型),再将球囊损伤组大鼠随机分为模型组(Model,n=10)和YDXNT组(1.0 g/kg,n=10)。YDXNT组给予YDXNT(1.0 g/kg)混悬液。Sham和Model组以相同给药方式给予等量双蒸水。给药14天后,采用Vevo 2100高分辨小动物超声影像系统检测大鼠颈动脉血管内膜增生情况,计算血管内膜厚度;H&E染色和TUNEL染色观察大鼠颈动脉血管病理学变化;Western Blot检测大鼠颈动脉血管组织中Wnt3a、β-catenin、PCNA蛋白表达情况;免疫组织化学法检测大鼠颈动脉血管新生内膜中PCNA、α-SMA、OPN、MMP-9、TIMP-1、Bcl-2、Bax、Cyt C、Caspase 9、Caspase 3、Wnt3a、β-catenin、GSK-3β蛋白表达情况;免疫荧光法检测大鼠颈动脉血管新生内膜中IL-1β、TNF-α、MCP-1、Ca N、NFAT4蛋白表达情况。结果:与Sham组相比,Model组大鼠颈动脉血管内膜厚度增加68.48%(P<0.05);NIA、NIA/MA、NIA/IELA明显升高(P<0.05);颈动脉血管新生内膜中细胞凋亡率较高(P<0.05);Western Blot结果提示颈动脉血管组织中Wnt3a、β-catenin、PCNA蛋白水平明显上调(P<0.05);免疫组织化学结果提示颈动脉血管新生内膜中PCNA、OPN、MMP-9、Bcl-2、Wnt3a、β-catenin蛋白表达升高(P<0.05),α-SMA、TIMP-1、Bax、Cyt C、Caspase 9、Caspase 3、GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05);免疫荧光结果提示颈动脉血管新生内膜中IL-1β、TNF-α、MCP-1、Ca N、NFAT4蛋白表达升高(P<0.05);与Model组相比,YDXNT组大鼠颈动脉血管内膜厚度减少18.95%(P<0.05);NIA降低77.37%(P<0.05),NIA/MA降低42.14%(P<0.05),NIA/IELA降低36.64%(P<0.05);颈动脉血管新生内膜中细胞凋亡率明显升高(P<0.05);Western Blot结果提示颈动脉血管组织中Wnt3a、β-catenin、PCNA蛋白水平明显下调(P<0.05);免疫组织化学结果提示颈动脉血管新生内膜中PCNA、OPN、MMP-9、Bcl-2、Wnt3a、β-catenin蛋白表达降低(P<0.05),α-SMA、TIMP-1、Bax、Cyt C、Caspase 9、Caspase 3、GSK-3β蛋白表达明显升高(P<0.05);免疫荧光结果提示颈动脉血管新生内膜中IL-1β、TNF-α、MCP-1、Ca N、NFAT4蛋白表达降低(P<0.05)。结论:(1)YDXNT改善球囊损伤所致大鼠颈动脉血管内膜增生;(2)YDXNT抑制血管平滑肌细胞的增殖、表型转换、迁移,促进血管平滑肌细胞的凋亡,减轻炎症反应,改善球囊损伤所致大鼠颈动脉血管内膜增生;(3)YDXNT可能通过抑制Wnt3a/β-catenin信号通路,改善球囊损伤所致大鼠颈动脉血管内膜增生;(4)YDXNT可能通过抑制Ca N/NFAT信号通路,改善球囊损伤所致大鼠颈动脉血管内膜增生。

关键词：银丹心脑通软胶囊血管内膜增生 Wnt β-catenin 活化T细胞核因子

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LINC01615介导miR-185-5p/PIK3R2信号通路抑制血管内膜增生作用和机制研究

LINC01615介导miR-185-5p/PIK3R2信号通路抑制血管内膜增生作用和...

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作者：吴倩南昌大学

学位级别：硕士

目的:越来越多研究表明长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)作为基因表达调节剂,在心血管疾病中发挥着重要的分子调控作用,但涉及血液透析患者动静脉内瘘血管通路狭窄研究寥寥无几,目前两者关系尚不明确。在我们之前的研究中,发... 详细信息

目的: 越来越多研究表明长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lnc RNA)作为基因表达调节剂,在心血管疾病中发挥着重要的分子调控作用,但涉及血液透析患者动静脉内瘘血管通路狭窄研究寥寥无几,目前两者关系尚不明确。在我们之前的研究中,发现LINC01615在尿毒症患者自体动静脉内瘘吻合口周围静脉内膜增生组织中显著差异表达。本研究旨在进一步确定LINC01615在血管内膜增生中的功能作用及其潜在机制。方法: 利用氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)刺激正常血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖、迁移和分泌炎性因子,通过构建LINC01615过表达载体及mi R-185-5p模拟剂的添加,观察前后h VSMC的表型转化及炎症反应水平;另外利用CCK-8、流式细胞术、transwell实验方法分别检测LINC01615和mi R-185-5p对VSMC增殖、凋亡、迁移影响,同时采用Western blotting(WB)技术检测PIK3R2、PI3K、AKT和p-AKT蛋白表达量。最后,在双荧光素酶实验中进一步证实LINC01615与mi R-185-5p、mi R-185-5p与PIK3R2之间的互作关系。结果: ox-LDL诱导血管内膜增生,LINC01615阻断了该表型并减轻IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子的表达,使VSMC增殖、迁移能力减弱,同时PIK3R2蛋白水平显著上升;mi R-185-5p模拟物显著抑制VSMC中LINC01615及PIK3R2的荧光素酶活性;同时观察到LINC01615通过对mi R-185-5p海绵作用介导PIK3R2信号通路可以抑制ox-LDL诱导的VSMC增殖、迁移,促进VSMC凋亡,逆转VSMC向未分化表型变化,并且减轻周围炎症反应。结论: LINC01615介导mi R-185-5p/PIK3R2信号通路,在VSMC的表型转化中起着关键作用,为预防内膜增生、血管重塑等相关疾病治疗提供了新的靶点。

关键词：血管内膜增生 VSMC LINC01615 miR-185-5p PIK3R2

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丹参麦味颗粒质量标准建立及对血管内膜增生的作用机制研究

丹参麦味颗粒质量标准建立及对血管内膜增生的作用机制研究

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作者：王婷山西医科大学

学位级别：硕士

目的:丹参麦味颗粒由丹参、麦冬、酒女贞子、制何首乌等20余种药味组成,是应用传统工艺配制的中药复方制剂,临床多年用于治疗“心悸怔忡”效果显著,表现出一定的抑制血管内膜增生（intima hyperplasia,IH）作用,具有良好的开发与应用前... 详细信息

目的:丹参麦味颗粒由丹参、麦冬、酒女贞子、制何首乌等20余种药味组成,是应用传统工艺配制的中药复方制剂,临床多年用于治疗“心悸怔忡”效果显著,表现出一定的抑制血管内膜增生（intima hyperplasia,IH）作用,具有良好的开发与应用前景。但目前该制剂尚无有效的质量控制标准,其物质基础及作用机制也不明确。本研究旨在建立丹参麦味颗粒质量控制标准,初步明确药效物质基础,并探究其抑制IH的作用机制,为拓展其临床应用奠定基础。方法:1.采用薄层色谱技术（thin layer chromatography,TLC）建立丹参麦味颗粒方中丹参、赤芍、佛手、芦根等药味的定性鉴别方法;采用高效液相色谱技术（high performance liquid chromatography,HPLC）建立有效成分丹酚酸B的定量测定方法。2.采用超高效液相色谱串联质谱（UPLC-MS/MS）技术定性鉴别丹参麦味颗粒处方药味水提物（SME）中的主要化学成分;借助TCMSP和BATMAN-TCM数据库筛选方中药味所含成分;二者共有成分作为核心成分用于后续实验;借助Pub Chem和Swiss Target Prediction数据库预测核心成分相关靶点,利用Gene Cards、Dis Ge NET、OMIM数据库收集IH相关靶点。将核心成分相关靶点和IH相关靶点取交集,得到SME治疗IH的靶点;利用STRING数据库获取治疗靶点互作信息,导入Cytoscape3.7.2软件筛选核心靶点;利用Metascape数据库对核心靶点进行GO和KEGG富集分析。3.以SME、丹参、丹酚酸B、木犀草素为研究对象,分别从丹参麦味方总提物、丹参麦味方君药丹参、丹参麦味方主要活性成分三个层面,设置低、中、高浓度,采用MTT法考察各组分对血管平滑肌细胞（VSMC）A7r5活力的影响及其抑制10%FBS诱导的VSMC增殖作用;采用Western blot法考察SME对VSMC中PI3K/Akt信号通路的调控作用。结果:1.建立了方中丹参、赤芍、佛手、芦根、麦冬等9味药味的TLC鉴别方法,供试品色谱图中与对照药材对应的主斑点或与对照品对应的斑点清晰,阴性无干扰。建立了丹酚酸B的HPLC含量测定方法,丹酚酸B在0.1728～0.6048μg范围内线性关系良好（r2=0.9993）,低、中、高三个浓度的平均加样回收率为95.58%、96.60%、98.19%,RSD为1.50%。***-MS/MS技术检出SME化学成分257个,网络药理学结合文献报道筛选获得SME化学成分296个。两组数据共有成分共计64个,包括丹酚酸B、奎宁酸、木犀草素、绿原酸、红景天苷等。预测得到SME治疗IH相关靶点149个,核心靶点12个。GO分析发现,核心靶点涉及的生物过程主要富集在细胞对激素、氮化合物、脂质的反应等过程;KEGG通路分析显示,诸多靶点主要涉及PI3K/Akt、NF-κB、c GMP-PKG等信号通路。3.细胞活力实验结果显示,SME(0～500μg·m L-1)、丹参(0～200μg·m L-1)、丹酚酸B（0～40μM）和木犀草素（0～40μM）对A7r5细胞无显著细胞毒性。细胞增殖实验结果表明,SME(100,300,500μg·m L-1)、丹参(50,100,200μg·m L-1)、丹酚酸B（2.5,10,40μM）、木犀草素（10,20,40μM）可呈浓度依赖性抑制10%FBS诱导的A7r5细胞增殖。Western blot实验结果显示,SME(300,500μg?m L-1)可显著下调蛋白PI3K、p-AKT、m-TOR的表达。结论:本研究建立的丹参麦味颗粒TLC定性鉴别和HPLC定量测定方法简单、易行,可用于该制剂的质量控制;丹参麦味颗粒中丹酚酸B、奎宁酸、木犀草素、绿原酸、红景天苷等64个核心活性成分可经调控PI3K/Akt、NF-κB等信号通路防治IH的发生发展,部分结果已通过体外实验得以验证。

关键词：丹参麦味颗粒质量标准 UPLC-MS/MS 网络药理学血管内膜增生作用机制

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黄芪-当归配伍对家兔血管内膜增生模型细胞外基质和血管内皮细胞损伤的影响

黄芪-当归配伍对家兔血管内膜增生模型细胞外基质和血管内皮细胞...

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作者：曹旺湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:建立家兔颈总动脉血管内膜增生模型,用黄芪和当归不同比例配伍进行干预,观察其对血管内膜增生的影响,确立黄芪和当归抗血管内膜增生的有效配伍,并在黄芪和当归抗血管内膜增生的有效配伍基础上以细胞外基质（extracellular matrix,... 详细信息

目的:建立家兔颈总动脉血管内膜增生模型,用黄芪和当归不同比例配伍进行干预,观察其对血管内膜增生的影响,确立黄芪和当归抗血管内膜增生的有效配伍,并在黄芪和当归抗血管内膜增生的有效配伍基础上以细胞外基质（extracellular matrix,ECM）和血管内皮细胞（vascular endothelial cell,VEC）为靶点,探讨黄芪当归配伍对血管内膜增生模型ECM沉积和VEC损伤的影响。方法:1、30只新西兰大白兔,雌雄各半,随机分为假手术组、高脂+单侧套管组（按造模时间分为2周、3周亚组）、高脂+双侧套管组（按造模时间分为2周、3周亚组）。单侧套管组在左侧颈总动脉外侧置一硅橡胶管（长度20 mm,内径1.0 mm）包裹血管并固定,双侧套管组在双侧颈总动脉外侧分别置一硅橡胶管包裹血管并固定。两组均于术后次日给予2%胆固醇饲料连续喂养2-3周。假手术组只行手术分离颈总动脉,不进行血管套管术,并饲喂普通饲料。分别于手术后第2周、第3周取损伤段颈总动脉观察病理形态学改变,采用形态计量学方法测定血管内膜增生指标,免疫组化法测定增生内膜中α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）、炎性细胞因子白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的表达。2、96只新西兰大白兔雌雄各半,在上述确定建立血管内膜增生的条件的基础上随机分为假手术组（A组）,模型组（B组）,单用黄芪组（C组,1g/kg）,单用当归组（D组,1g/kg）,芪归1∶1组（E组,黄芪1g/kg+当归1g/kg）,芪归1∶5组（F组,黄芪1g/kg+当归5g/kg）,芪归5∶1组（G组,黄芪5g/kg+当归1g/kg）和阿托伐他汀组（H组,5mg/kg）。建立家兔双侧颈总动脉血管内膜增生模型,造模术后第1天起连续喂养高脂饲料。假手术组从术后第1天起连续喂养普通饲料。造模术后第一天开始分别灌胃给药,每天一次,连续给药28 d后腹主动脉采血并处死动物取损伤段颈总动脉。采用免疫组化法检测家兔损伤颈总动脉内膜的Ⅰ型胶原蛋白（Collagen 1,Col-Ⅰ）、纤维连接蛋白（Fibronectin,FN）、基质金属蛋白酶2（Matrix Metallopeptidase 2,MMP-2）、组织金属蛋白酶抑制剂1（Tissue inhibitor of metalloproteinases 1,TIMP-1）蛋白的表达,以ELISA法测定血浆内皮素-1（Endothelin-1,ET-1）、前列环素（Prostacyclin,PGI）含量,硝酸还原酶比色法检测血浆一氧化氮（Nitric oxide,NO）含量,以Western blot法测定损伤段颈总动脉内皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase,e NOS）蛋白表达。结果:1、高脂+颈总动脉硅橡胶管套管干预2周、3周后,颈总动脉出现明显的血管内膜增生,内膜面积（IA）、内膜厚度（IT）、内膜面积增生率（HRIA）、内膜厚度增生率（HRIT）均显著增加,其中双侧套管的内膜增生较单侧明显,干预3周内膜增生较2周严重。在高脂+颈总动脉硅橡胶管套管干预3周后,血管内膜α-SMA表达显著降低、OPN、Col-Ⅰ、IL-1β、TNF-α表达显著增高。2、与模型组比较,单用黄芪组、单用当归组、芪归1∶1配伍组、芪归1∶5配伍组、芪归5∶1配伍组均抑制了增生内膜中Col-Ⅰ、FN及MMP-2的表达,增强TIMP-1的表达。在黄芪-当归配伍中,黄芪-当归5∶1配伍与1∶1配伍的作用相当。与模型组比较,单用黄芪组、单用当归组、芪归1∶1配伍组、芪归1∶5配伍组、芪归5∶1配伍组血浆NO的含量显著增加（P<0.05）,损伤段血管e NOS蛋白表达显著降低（P<0.05）,血浆ET-1的含量显著降低（P<0.05）,单用当归组、芪归1∶1配伍组、芪归1∶5配伍组及芪归5∶1配伍组血浆PGI含量显著增加（P<0.05）。在黄芪-当归配伍中,黄芪-当归5∶1配伍与1∶1配伍的作用相当。结论:成功复制了家兔颈总动脉血管内膜增生的模型,以双侧颈总动脉套管干预3周以上为宜。黄芪当归配伍对VEC受损后内膜增生具有明显的抑制作用。其作用可能与抑制增生内膜中细胞外基质ECM沉积和对VEC功能障碍具有改善作用有关。

关键词：黄芪当归兔血管内膜增生 VEC

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血管内膜增生分子生物学研究(文献综述)

引用

国际外科学杂志 1998年第2期29卷 69-71页

作者：代望德上海医科大学中山医院血管外科研究室

随着分子生物学理论和技术的发展，DNA重组和基因转移技术已成为研究血管内膜增生发生机理与防治方法的重要手段，本文对血管内膜增生研究涉及的基因转移载体、转移方法以及目的基因的选择等方面作一简要综述。

关键词：血管内膜增生分子生物学

来源：评论

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紫苏叶提取物抑制犬血管搭桥术后血管内膜增生的血液流变学机理研究

紫苏叶提取物抑制犬血管搭桥术后血管内膜增生的血液流变学机理研...

引用

作者：高俊波贵州大学

学位级别：硕士

目的:观察紫苏叶提取物对犬血管搭桥术后血液流变学的影响,探讨紫苏叶抑制血管搭桥术后血管内膜增生的作用机理,为临床合理用药和开发新的抑制血管内膜增生的药物提供理论依据。方法:以紫苏叶粗粉（40μm）为原料,热水浸提、酸化处理、... 详细信息

目的:观察紫苏叶提取物对犬血管搭桥术后血液流变学的影响,探讨紫苏叶抑制血管搭桥术后血管内膜增生的作用机理,为临床合理用药和开发新的抑制血管内膜增生的药物提供理论依据。方法:以紫苏叶粗粉（40μm）为原料,热水浸提、酸化处理、乙酸乙酯萃取迷迭香酸、调节pH值、分离纯化后制备成紫苏叶注射液。采用高效液相色谱法（HPLC）检测注射液中迷迭香酸的含量,根据《中华人民共和国药典》（2005年版）规定检测注射液的鞣质、树脂、草酸盐含量是否超标,测定该注射液的稳定性、刺激性、溶血性、凝集性、LD50和热源性等。将20只试验犬随机分为高、中、低剂量（1434mg/kg,478mg/kg,159mg/kg）及对照组,每组5只,同侧自体颈外静脉重建颈总动脉,术后头静脉滴注紫苏叶注射液,每日1次,持续给药3周,分别于给药前、给药后第1周、第2周和第3周测定红细胞变形指数、红细胞聚集指数、红细胞电泳指数、红细胞刚性指数、红细胞压积、血浆蛋白、高切(150s-1)、中切(60s-1)、低切(10s-1)时全血黏度和全血还原黏度等血液流变学指标。术后3个月牺牲动物,制作病理切片,测定搭桥血管远心端吻合口内膜厚度,探讨紫苏叶注射液抑制血管搭桥术后血管内膜增生的作用机理。结果:实验结果如下。 ①注射液中鞣质、树脂、草酸盐含量均未超标;常温和光照下保存3个月后,注射液的颜色、澄明度、pH值、颗粒检查及有效成分均未发生明显变化;刺激性检查显示4块股四头肌反应级总和为6级;热源性检查3只供试家兔给药后体温升高度数总和低于1.4℃;注射液未出现溶血和凝集现象,表明制备的紫苏叶注射液符合《中华人民共和国药典》（2005年版）要求。迷迭香酸含量为2.81mg/mL,LD50为406.82mg/kg。 ②病理组织切片观察。与未行血管搭桥术的血管相比,颈外静脉重建颈总动脉后血管吻合口出现不同程度的内膜增生,说明颈外静脉重建颈总动脉的血管旁路搭桥手术能够成功建立血管内膜增生的动物模型。 ③不同剂量的紫苏液注射液能改善血管搭桥术后犬的血液流变学指标。与用药前比较,低、中、高剂量紫苏叶注射液均能显著或极显著降低低切时全血粘度、全血还原粘度、红细胞聚集指数和红细胞电泳指数（P＜0.05,P＜0.01）;高剂量紫苏叶注射液能显著降低时中切时全血黏度、全血还原黏度（P＜0.05）,但低剂量和中剂量紫苏叶注射液对中切时全血黏度、全血还原黏度无显著影响（P＞0.05）;低、中、高剂量紫苏叶注射液对高切全血黏度、全血还原黏度、红细胞变形指数、红胞刚性指数、血浆黏度和红细胞压积无显著影响。 ④不同剂量的紫苏液注射液对血管搭桥术后血管内膜增生的抑制程度不同。实验结果显示:对照组血管内膜厚度为103.40±18.91μm,低、中、高剂量紫苏叶注射液组血管内膜厚度分别为66.05±10.27μm、49.31±5.61μm、27.80±4.47μm,与对照组相比,低、中、高剂量紫苏叶注射液组能极显著降低血管内膜增生（p＜0.01）,内膜增生的程度随给药剂量的增加而减轻,呈现一定的量效关系。 ⑤紫苏叶注射液抑制血管内膜增生的血液流变学机理,可能与紫苏叶注射液降低全血黏度、红细胞聚集指数和红细胞电泳指数等血液流变学指标有关。结论:紫苏叶提取物能通过改善血液流变学指标来抑制血管搭桥术后的血管内膜增生。

关键词：紫苏叶注射液迷迭香酸质量控制血液流变学血管搭桥血管内膜增生犬

来源：评论

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PARP16对血管内膜增生的调控作用和机制研究

PARP16对血管内膜增生的调控作用和机制研究

引用

作者：朱梦琳桂林医学院

学位级别：硕士

目的：血管损伤后内膜增生是再狭窄的典型并发症，内质网应激诱导的未折叠蛋白反应（UPR）参与了血管内膜增生的发病机制，PARP16是ADP核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase），参与内质网应激反应。本文旨在揭示PARP16在促进UPR和... 详细信息

目的：血管损伤后内膜增生是再狭窄的典型并发症，内质网应激诱导的未折叠蛋白反应（UPR）参与了血管内膜增生的发病机制，PARP16是ADP核糖聚合酶（poly ADP-ribose polymerase），参与内质网应激反应。本文旨在揭示PARP16在促进UPR和内膜形成中的作用，探讨PARP16介导内质网功能在治疗新生内膜增生相关疾病中的作用。　　方法：1.采用PDGF-BB诱导人血管平滑肌细胞（Humen vascular smooth muscle cell,hVSMCs）或原代大鼠血管平滑肌细胞（Rat vascular smooth muscle cell,rVSMCs）增殖迁移，加入抑制剂ECGG和小干扰RNA（siRNA）抑制或敲除PARP16，Western blot法检测PARP16功能缺失对VSMCs增殖迁移以及内质网应激相关蛋白——Cyclin D1、PCNA、MMP9、p-IRE1α、p-PERK、Spliced XBP-1、Calnexin、Bip表达水平的影响;划痕实验和Transwell法检测PARP16功能缺失对PDGF-BB诱导的细胞迁移水平的影响。2.过表达载体构建PARP16过表达质粒，检测过表达PARP16对血管内膜增生的影响;CO-IP实验验证PARP16影响UPR的机制。3.建立大鼠球囊损伤的血管重构模型，颈动脉孵育方法给予PARP16siRNA及溶媒对照，于术后14天取材。HE染色观察血管内膜增生变化情况;Western blot检测对血管组织Cyclin D1、PCNA、MMP9、p-IRE1α、p-PERK、Spliced XBP-1、Calnexin、Bip蛋白表达情况;免疫荧光检测血管组织Cyclin D1表达情况。4.血管结扎建立小鼠颈动脉内膜增生模型，术后分别以5mg/kg/day和10mg/kg/day灌胃EGCG（PARP16抑制剂），28天后取材分析。HE染色观察内膜增生情况，免疫组化法检测血管中EVG和Collage III的表达情况，免疫荧光法检测EGCG血管组织中PARP16和Cyclin E蛋白表达水平的影响。　　结果：***和PARP16siRNA显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCs中Cyclin D1、PCNA、MMP9、p-IRE1α、p-PERK、Spliced XBP-1、Calnexin、Bip蛋白表达，抑制细胞增殖迁移以及内质网应激水平。***16的缺失阻碍了内质网应激和VSMCs的增殖迁移。3.敲除PARP16可降低球囊损伤后14天的血管内膜厚度，抑制组织中p-IRE1α、p-PERK、Spliced XBP-1、Calnexin、Bip以及增殖迁移蛋白Cyclin D1、Cyclin E、PCNA、MMP9的表达。***可改善小鼠结扎损伤后血管内膜增生，并且显著抑制增生内膜中PARP16和Cyclin E的蛋白表达，缓解血管内膜纤维化。　　结论：***16的敲除或抑制可显著降低PDGF-BB诱导的VSMCs增殖迁移以及内质网应激水平。***16可调节UPR和内膜增生。3.敲除或抑制PARP16可改善内膜增生，靶向PARP16对预防内膜增生相关疾病有一定意义。

关键词：血管内膜增生 PARP16蛋白未折叠蛋白反应发病机制

来源：评论

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