检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：杨军中山大学

学位级别：博士

本研究拟采用PEDF重组蛋白和PEDF基因靶向传输两种手段，探讨PEDF在抗肿瘤生长和血管增生中的作用及可能机制。研究围绕以下两方面进行：　　 (1)观察PEDF重组蛋白对宫颈癌的治疗作用，并探讨其可能机制。　　 (2)通过靶向肿瘤新生血管... 详细信息

本研究拟采用PEDF重组蛋白和PEDF基因靶向传输两种手段，探讨PEDF在抗肿瘤生长和血管增生中的作用及可能机制。研究围绕以下两方面进行：　　 (1)观察PEDF重组蛋白对宫颈癌的治疗作用，并探讨其可能机制。　　 (2)通过靶向肿瘤新生血管的纳米载体cRGD-PEG-PEI传输PEDF基因，观察在结直肠癌中的治疗效果，并初步探讨其可能机制。　　主要研究内容和结果如下：　　第一部分 PEDF重组蛋白通过抗血管增生抑制宫颈癌的生长　　 1. PEDF在人宫颈癌组织中的表达降低免疫组织化学分析显示，PEDF蛋白在人正常宫颈的鳞状上皮组织和宫颈癌的癌旁非增生的鳞状上皮组织内均有较强的表达，然而，在宫颈鳞状上皮细胞癌癌巢内PEDF的阳性染色则很少，PEDF表达水平降低至正常宫颈鳞状上皮组织和癌旁非增生的鳞状上皮组织的6％左右(P＜0.01)。　　 ***重组蛋白的表达和纯化将含PEDF-pET-30a(+)重组质粒的BL21(DE3)宿主菌，25℃用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后，提取细菌裂解产物的可溶部分，Ni2+-His Bind Resin亲和柱纯化获得含有6×His-tag的PEDF重组蛋白。用凝胶成像系统对电泳条带进行灰度扫描，结果显示纯化后重组蛋白纯度可达95％左右。用兔抗人PEDF抗体进行免疫印迹(Western blotting)分析得到分子量约为50 kDa的免疫杂交条带。　　 ***在人宫颈癌裸鼠异位移植瘤模型中抑制肿瘤的生长与PBS对照组相比，PEDF处理组肿瘤生长较慢，在种瘤后第30天处死裸鼠，剥离肿瘤，称瘤重。结果显示：总剂量为15 mg/kg的PEDF蛋白对BALB/c裸鼠宫颈癌实体瘤的生长具有明显的抑制作用，抑瘤率为68％(P＜0.01)。　　 ***在人宫颈癌裸鼠异位移植瘤模型中抑制肿瘤血管增生PEDF对肿瘤血管增生的作用通过对裸鼠肿瘤组织内免疫组织化学染色呈棕黄色的CD34(+)微血管的密度进行评价。结果显示PEDF处理组肿瘤组织中微血管密度明显低于PBS对照组(P＜0.01)。　　 ***选择性抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖噻唑蓝(MTT)比色法分析PEDF对HUVECs和宫颈癌细胞HeLa的增殖作用。结果显示，PEDF在10 mol/L即可抑制HUVECs的增殖，并随浓度增高呈明显的剂量依赖关系(P＜0.01)，IC50为200 nmol/L。而用PEDF处理常氧或低氧条件下培养的HeLa细胞，发现即使在640 nmol/L的高剂量组同对照组相比细胞存活率也没有明显差别。　　 ***特异性诱导HUVECs凋亡用膜联蛋白V(Annexin V)和碘化丙啶(PI)双染标记细胞，利用流式细胞仪分析PEDF对HUVECs和HeLa的凋亡作用。结果显示，200nmol/L的PEDF处理24 h的HUVECs细胞凋亡率为17.2±2.7％，明显高于PBS对照组6.5±0.5％(P＜0.01)。而常氧和低氧条件下，320 nmol/L的PEDF处理48 h的HeLa细胞调亡率与PBS对照组相比均无明显差异。　　 ***下调HeLa细胞中VEGF的表达免疫细胞化学和Westernblotting分析HeLa细胞中VEGF的表达。结果显示，低氧诱导HeLa细胞中VEGF的表达增高，80 nmol/L以上浓度的PEDF能够剂量依赖性地抑制低氧下HeLa细胞中VEGF的表达(P＜0.01)。　　 ***抑制HeLa细胞中HIF-1α的表达及核转位免疫细胞化学和Western blotting分析HeLa细胞中HIF-1α的表达。结果显示：常氧下培养的HeLa细胞HIF-1α表达很低，且主要位于胞浆;低氧处理的HeLa细胞HIF-1α表达明显增高，以细胞核尤为明显;用320 nmol/L的PEDF处理后，可见HeLa细胞中HIF-1α的表达明显降低，且主要位于胞浆(P＜0.01)。表明PEDF可以抑制低氧诱导的HeLa细胞中HIF-1α的表达及核转位。　　第二部分纳米载体靶向传输PEDF基因治疗结直肠癌的研究　　 1.纳米载体PEG-PEI和cRGD-PEG-PEI的合成本研究以聚乙烯亚胺(PEI)为纳米载体骨架，用聚乙二醇(PEG)修饰以避免自身聚集降低毒性，并结合特异靶向于整合素αvβ3的cRGD肽，构建了靶向肿瘤新生血管的纳米载体cRGD-PEG-PEI，经核磁共振氢谱(1H NMR)分析证实成功合成目标产物。　　 2.真核表达质粒PEDF-pcDNA3.1(+)和PEDF-EGFP-pcDNA3.1(+)的构建本研究中构建了PEDF-pcDNA3.1(+)以表达内源性PEDF蛋白，同时还构建了EGFP-pcDNA3.1(

关键词：色素上皮衍生因子血管内皮生长因子低氧诱导因子-1α 血管增生基因治疗抗肿瘤生长

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血小板反应蛋白-1在海人酸诱导急性大发作导致的血管增生和杏仁核电点燃癫痫诱导的突触生成中的作用

血小板反应蛋白-1在海人酸诱导急性大发作导致的血管增生和杏仁核...

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作者：张玉荣滨州医学院

学位级别：硕士

背景与目的:血管增生、突触形成是癫痫形成过程中常见的病理变化。有研究证实,星形胶质细胞分泌的血小板反应蛋白-1(Thrombospondin-1,TSP-1)在突触形成、血管增生中发挥重要作用,因此我们推测,TSP-1可能参与了癫痫形成和发作。鉴于TSP-... 详细信息

背景与目的:血管增生、突触形成是癫痫形成过程中常见的病理变化。有研究证实,星形胶质细胞分泌的血小板反应蛋白-1(Thrombospondin-1,TSP-1)在突触形成、血管增生中发挥重要作用,因此我们推测,TSP-1可能参与了癫痫形成和发作。鉴于TSP-1在癫痫发病中的作用不清楚,我们研究KA(Kainic acid,KA)诱导的大鼠急性大发作模型和杏仁核电刺激诱导大鼠癫痫形成模型中TSP-1的变化,并分析其变化在血管增生和突触形成中的作用及机制。方法:本论文分为两大部分。第一部分,采用侧脑室注射KA诱导制备急性大发作模型,通过western blotting和免疫组织化学、流式细胞检测等方法检测血管生成标记物VEGF/CD34的表达,检测脑内伊文氏蓝渗出含量评价血管屏障破坏情况,并通过基因干预(siRNA抑制TSP-1)或者药物干预(LSKL阻断TGF-β1的激活;PPADS/活性蓝-2阻断P2/P2Y4受体)的方法,观察TSP-1/TGF-β1/Smad2/3通路上相关蛋白表达变化;评估干预措施对血脑屏障和血管生成的影响;观察并分析动物行为学和脑电变化,评估干预措施对动物大发作的作用。第二部分,采用杏仁核电刺激癫痫模型,用western blotting和免疫组织化学、流式细胞检测等方法检测突触和兴奋性突触的标记物Synapsin-I/PSD95/GluT以及TSP-1/TGF-β1通路蛋白的表达变化;并通过基因干预(siRNA抑制TSP-1的合成)或者药物干预(LSKL阻断TGF-β1的激活;PPADS/活性蓝-2)分别干预P2Y4/TSP-1/TGF-β1通路的不同靶点,观察下游的分子表达变化以及对动物癫痫进程和突触生成。结果:1)KA诱导的大鼠急性大发作模型中,血管标记物VEGF/CD34和TSP-1的表达同步增加;PPADS/活性蓝-2/siRNA/LSKL干预后,减少了 Smad2/3磷酸化,减弱了血管增生和血脑屏障破坏、减轻了大发作的严重程度。2)杏仁核电刺激癫痫模型中,突触和兴奋性突触的标记物(Synapsin-I和PSD95/GluT)随癫痫进展在脑内部分区域(如海马)出现了规律的增强;并伴随着TSP-1/TGF-β1通路表达增强;药物或基因手段抑制TSP-1表达,或者抑制TGF-β1激活,突触表达增强得到部分逆转,癫痫发作严重程度明显减弱。结论:P2R/TSP-1/TGF-β1通路可能参与KA诱导的急性大发作动物的血管生成/血脑屏障破坏以及杏仁核电点燃诱导癫痫模型的突触生成,适当抑制该通路可以抑制血管生成和突触形成,抑制癫痫的发展和减轻大发作的严重程度。

关键词：癫痫血小板反应蛋白-1 血管增生突触生成

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Leptin功能之二:Leptin与激素调节、生殖、免疫及血管增生

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国外医学（卫生学分册） 1999年第6期26卷 335-338页

作者：刘志芳哈尔滨医科大学公共卫生学院哈尔滨150001

　Ｌｅｐｔｉｎ除可通过中枢神经受体发挥调节摄食、能量消耗和代谢功能外，新近研究表明，ｌｅｐｔｉｎ还可通过位于外周组织如胰岛、Ｔ淋巴细胞、血管内皮等处的受体对激素分泌、生殖功能、免疫功能及血管增生发挥重要的调节作... 详细信息

　Ｌｅｐｔｉｎ除可通过中枢神经受体发挥调节摄食、能量消耗和代谢功能外，新近研究表明，ｌｅｐｔｉｎ还可通过位于外周组织如胰岛、Ｔ淋巴细胞、血管内皮等处的受体对激素分泌、生殖功能、免疫功能及血管增生发挥重要的调节作用。本文将从以上四方面就ｌｅｐｔｉｎ的最新功能及其作用机制做一综述。

关键词： Leptin 激素调节生殖功能免疫功能血管增生

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类风湿性关节炎血管增生的机制研究进展

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安徽医科大学学报 2018年第4期53卷 649-652页

作者：章敏高梅陈镜宇宋礼华魏伟安徽医科大学临床药理研究所抗炎免疫药物教育部重点实验室安徽省抗炎免疫药物协同创新中心合肥230032 安徽医科大学附属省立医院麻醉科合肥230001

血管增生是指在原先已有的血管基础上形成新的微血管,广泛存在于一些肿瘤及自身免疫性疾病中。在类风湿关节炎中,滑膜组织新生血管致血管翳的形成是其重要表现,关节内巨噬细胞、滑膜成纤维细胞及内皮细胞分泌血管内皮生长因子、缺氧诱... 详细信息

血管增生是指在原先已有的血管基础上形成新的微血管,广泛存在于一些肿瘤及自身免疫性疾病中。在类风湿关节炎中,滑膜组织新生血管致血管翳的形成是其重要表现,关节内巨噬细胞、滑膜成纤维细胞及内皮细胞分泌血管内皮生长因子、缺氧诱导因子、趋化因子、促炎细胞因子等多种促血管生成因子,这些促血管生成因子主要通过促进新生血管形成维持滑膜及关节的炎症免疫反应,现就类风湿关节炎血管增生的相关机制研究进展作一综述。

关键词：类风湿关节炎血管增生促血管生长因子

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寻常型银屑病皮损中蛋白酶激活受体（PAR）1、蛋白酶激活受体（PAR）2的表达及其与血管增生的关系

寻常型银屑病皮损中蛋白酶激活受体（PAR）1、蛋白酶激活受体（PA...

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作者：谢艳飞河北医科大学

学位级别：硕士

目的:银屑病是一种常见的以一种以红斑、鳞屑、丘疹为特征的慢性易复发的皮肤病。真皮的乳头血管的异常在银屑病的组织病理变化中发生最早,然后炎症细胞的移行与表皮增生及分化异常出现。血管异常的发生不仅诱发了整个银屑病的病理过程... 详细信息

目的:银屑病是一种常见的以一种以红斑、鳞屑、丘疹为特征的慢性易复发的皮肤病。真皮的乳头血管的异常在银屑病的组织病理变化中发生最早,然后炎症细胞的移行与表皮增生及分化异常出现。血管异常的发生不仅诱发了整个银屑病的病理过程,并且因为血管的增生、迂曲和渗透性的增加,大量的调节因子和免疫细胞渗出到血管外面刺激了相关细胞因子的分泌和角质形成细胞的增殖,从而反馈性刺激和促进血管的变化。血管生成是一个复杂的过程,有多种因子参与。蛋白酶激活受体(protease-activated receptor,PAR)是G蛋白的耦联受体家族,是在二十世纪末被陆续发现,PAR1在家族成员中分布最为广泛,且作用最为重要。PAR1具有促进细胞增殖和血管增生的作用。血管内皮生长因子(VEGF)是一种促血管生成因子,作用非常重要,不仅可以使血管的通透性增加,而且可以促进血管内皮细胞的分裂和增殖,还可以使血管生成。对PAR2的研究深入,人们发现PAR-2与VEGF关系密切,可促进血管的生成。我们采用免疫组织化学的方法检测在寻常型银屑病患者进展期和稳定期的皮损中PAR1、PAR2的表达;采用CD34标记血管内皮细胞从而去计数寻常型银屑病皮损处微血管密度(microvessel density,MVD)值。目的是了解和探讨寻常型银屑病中PAR1、PAR2的表达及其与血管增生的关系,从而研究它们在寻常型银屑病的发病过程中所起的作用。方法:32例寻常型银屑病的皮损取自2013年11月-2014年4月在河北省泊头市第三人民医院皮肤科就诊的门诊患者。且所有患者具有典型的临床表现,并且再经过组织病理确认为银屑病。其中男19例,女13例,年龄在10到65岁,平均年龄33.9岁。其中有进展期的23例和静止期的9例。所有患者在取材前至少两个月未系统或者局部使用过糖皮质激素、维A酸类药物和免疫抑制剂,且都不伴有其他系统性疾病。检测患者皮损中PAR1、PAR2、CD34的表达水平采用免疫组织化学SP方法。正常对照组选取10例在我院整形美容科面部手术切下的正常人健康皮肤,均无任何皮肤疾患及系统性疾病。其中男7例,女3例,年龄在20到53岁,平均年龄35.6岁。两组之间年龄及性别的差异没有统计学意义。实验结果的统计分析采用SPSS16.0统计软件;采用完全随即设计的t检验比较计量资料组;?2检验比较计数资料;采用均数±标准差(?±s)表示计量资料;采用Spearman检验分析指标间的相关性。显著性界限为P<0.05。结果:1 PAR1在寻常型银屑病皮损的表达主要在表皮从基底层至棘层角质形成细胞胞膜。在32例寻常型银屑病中,阴性5例,阳性表达27例。而正常对照组10例,阴性5例,阳性5例,表达主要在基底层。实验结果表明,与正常对照组相比,寻常型银屑病皮损中PAR1阳性表达明显增高,差异具有显著性(P<0.05)。其中与静止期相比,寻常型银屑病进行期的表达增高,差异有统计学意义(P<0.05)。2 PAR2在寻常型银屑病皮损的表达主要在表皮的颗粒层和棘层的角质形成细胞胞质及胞膜。在32例寻常型银屑病中,阴性6例,阳性表达26例,。而正常对照组10例,阴性6例,阳性4例,表达主要在表皮的棘层。实验结果表明,与正常对照组相比,寻常型银屑病皮损中PAR2阳性表达明显增高,差异有显著性(P<0.05);其中与静止期相比,寻常型银屑病进行期的表达增高,差异有统计学意义(P<0.01)。3 CD34在寻常型银屑病组和正常对照组的表达都是在真皮浅层微血管的内皮细胞的胞浆。但寻常型银屑病皮损组MVD值比正常对照组的显著增大,差异有显著性(P<0.01);其中与静止期相比,寻常型银屑病进行期时MVD值要大,差异有统计学意义(P<0.01)。4在寻常型银屑病患者皮损中PAR1和PAR2的表达呈正相关,相关系数rs=0.626,且差异有显著性(P<0.01)。5在寻常型银屑病皮损中PAR1和PAR2的表达分别与MVD存在正相关,相关系数rs=0.694,rs=0.712(均P<0.01)。结论:1 PAR1表达主要位于寻常型银屑病表皮从基底层至棘层细胞胞膜,并明显高于对照组,且进行期皮损都明显高于静止期。PAR2表达主要位于寻常型银屑病表皮的颗粒层及棘层角质形成细胞胞质及胞膜,并明显高于对照组,且进行期皮损都明显高于静止期。提示PAR1、PAR2可能在寻常型银屑病的血管生成过程中起着重要的作用,且与寻常型银屑病病情进展有关。2与正常对照组相比,寻常型银屑病组MVD值明显要大;与静止期相比,寻常型银屑病进行期时MVD值明显要大。说明血管增生在银屑病发病过程中起一定作用,且在银屑病进行期作用更大。3在寻常型银屑病皮损中PAR1、PAR2的表达呈正相关,且二者与MVD值存在显著正相关,提示二者可能在寻常型银屑病皮损处血管增

关键词：寻常型银屑病血管增生蛋白酶激活受体1 蛋白酶激活受体2 微血管密度 CD34

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髓样分化蛋白-2在糖尿病视网膜血管增生中的作用机制研究

髓样分化蛋白-2在糖尿病视网膜血管增生中的作用机制研究

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作者：杨熙温州医科大学

学位级别：硕士

目的：　　探讨髓样分化蛋白-2（MD2）对糖尿病视网膜病变发生发展的过程中出现的病理性血管增生这一过程的作用机制，以及MD2小分子抑制剂L6H21（查尔酮类小分子化合物）[1]抑制高糖导致的视网膜炎症内环境中的MD2的介导作用，进而产... 详细信息

目的：　　探讨髓样分化蛋白-2（MD2）对糖尿病视网膜病变发生发展的过程中出现的病理性血管增生这一过程的作用机制，以及MD2小分子抑制剂L6H21（查尔酮类小分子化合物）[1]抑制高糖导致的视网膜炎症内环境中的MD2的介导作用，进而产生抗血管新生作用。项目实施将明确MD2介导的炎症反应在视网膜血管增生中的作用，证实MD2可以作为糖尿病视网膜病变血管增生治疗的新靶点，提供新的治疗策略。　　方法：　　1.利用1型糖尿病动物模型，探讨L6H21对糖尿病视网膜血管新生及炎症反应的治疗作用，明确MD2可以作为糖尿病视网膜病变血管增生的重要治疗靶点，本实验部分包括：（1）实验分组为野生型C57BL/6小鼠正常对照组，模型组，和治疗组（利用STZ注射造模）。其中，治疗组为STZ注射3个月（通过视网膜电图检测，证实确有DR及视网膜血管增生发生）后开始给药，每日一次，连续给药6个月，并详细记录动物实验时间，监测血糖、体重等指标;（2）被处死前一天分别记录上述眼底检查情况，处死后收集视网膜，视网膜铺片，检测视网膜病变相关病理指标、微血管形态学检测;（3）检测视网膜中炎症因子含量、WB实验考察TLR4/MD2表达量、血管增生相关信号通路等方面的情况。　　2.利用人微血管内皮细胞（HMEC-1）探讨L6H21通过抑制MD2对高糖诱导的血管生成信号通路、各种血管生成相关细胞因子表达的影响，并验证MD2在高糖诱导的血管增生中的是作为TLR4的必要配体存在，本部分实验包括：（1）利用RT-PCR技术考察L6H21对高糖刺激的HMEC-1细胞中TGF-β、Collagen-1、Ang-2等血管生成相关因子蛋白和mRNA水平的影响;（2）利用Western blot技术考察L6H21对高糖刺激的HMEC-1细胞中TLR4/MD2表达、NF-κB p65浆-核转移的影响;（3）利用免疫沉淀技术考察高糖刺激下TLR4与MD2的结合程度，TLR4与下游通路MyD88和TRIF的结合程度，以及L6H21对TLR/MD2复合物结合的影响。　　3.利用MD-2敲除小鼠验证MD-2在视网膜病理性血管新生过程中的靶点地位。本实验部分包括：（1）实验分组为野生型C57BL/6小鼠正常对照组和模型组，MD-2敲除的C57BL/6小鼠正常对照组和模型组（利用STZ注射造模）。STZ注射造模后3个月，四组小鼠均通过视网膜电图检测，证实造模组确有DR及视网膜血管增生发生而对照组功能及生理结构正常。SPF环境下继续饲养6个月，并监测血糖、体重等指标;（2）被处死前一天分别记录上述眼底检查情况，处死后收集视网膜，视网膜铺片，检测视网膜病变相关病理指标、微血管形态学检测;（3）检测视网膜中血管增生细胞因子含量、WB实验考察TLR4/MD2表达量、血管增生相关信号通路等方面的情况。　　结果：　　1.糖尿病视网膜病变小鼠视网膜处于炎症环境下，出现了视网膜血管新生的表现及相关蛋白、细胞因子的表达。　　2. HMEC-1细胞被高糖刺激后，迁移、成管能力明显被激活，高糖通过促进MD2和TLR4蛋白的结合激活下游MyD88和非MyD88途径（TRIF途径），进一步诱导损伤产生。　　3.敲除MD2后的糖尿病小鼠，即使长期处于高血糖状态，因MD2和TLR4的结合未能增加，导致下游通路激活同样发生减低。血管新生现象也被显著抑制。　　结论：　　1.通过抑制MD2可以降低高糖诱导的血管新生，即MD2介导糖尿病视网膜病变中的血管新生过程。　　2. MD2的介导作用，需通过和TLR4结合完成，即MD2有TLR4依赖性。　　3. MD2可作为防治视网膜血管新生的新靶点，MD2靶向抑制剂L6H21，可以作为防治视网膜血管新生的新药。

关键词：髓样分化蛋白-2 糖尿病视网膜病变血管增生治疗靶点

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人纤溶酶原Kringle 5突变体K5mut2和K5mut4的构建及抗血管增生活性的变化

人纤溶酶原Kringle 5突变体K5mut2和K5mut4的构建及抗血管增生活...

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作者：陈静中山大学

学位级别：硕士

血管增生(Angiogenesis)是恶性肿瘤、血管增生性眼病、类风湿关节炎等重大疾病的重要病理特征之一，运用内源性血管增生抑制剂抑制血管增生已经成为治疗血管增生性疾病的重要策略。人纤溶酶原(plasminogen)的水解片断kringle5是目前发... 详细信息

血管增生(Angiogenesis)是恶性肿瘤、血管增生性眼病、类风湿关节炎等重大疾病的重要病理特征之一，运用内源性血管增生抑制剂抑制血管增生已经成为治疗血管增生性疾病的重要策略。人纤溶酶原(plasminogen)的水解片断kringle5是目前发现的活性较强的血管增生抑制剂之一，因其有分子量较小，性质稳定成为抗血管增生的研究热点。\n 人纤溶酶原是分子量92KD的糖蛋白，含有5个环状结构域(Kringle)，每个环由80个氨基酸残基组成，含有3个二硫键，形成双环状结构。人纤溶酶原水解后可以产生一组具有抑制血管增生的小片段分子：血管抑素(Agiostatin,即Kringle1-4)，Kringle1-5，Kringele1-3，和Kringle5。国内外研究发现K5较血管抑素有更强的抑制血管内皮细胞增殖的活性，而且可以抑制血管内皮细胞的迁移，诱导内皮细胞的凋亡和细胞周期阻滞。\n 但相对于K5功能和潜在临床应用价值的研究，其抑制血管增生的活性和Kringle结构域中二硫键的位置、数量所决定的内外环结构的关系尚不明确。目前对于K5的抗血管增生活性与结构的关系国内外的研究结果并不一致。有研究发现还原或烷基化的处理的K5比K5本身具有更强的抗内皮细胞迁移能力。但是有人用高浓度的尿素(8Mol/L)作为变性条件处理纯化的K5，能使K5丧失抗内皮细胞增殖和迁移的能力，这又表明K5某些天然就构特征是维持其生物活性所必须的。天然构型的K5还是还原型K5更有活性需要进一步探索。因此本课题组K5结构与功能的关系进行了研究，对K5分子进行改造，获得K5的2种缺失突变体K5mut1(Cys462-Cys541)和K5mut3(Cys483-Cys536)，其中K5mut1删除了野生型K5N端的10个氨基酸和C端的1个氨基酸，保留了完整的Kringle环结构和3个二硫键(Cys462-Cys541Cys483-Cys524Cys512-Cys536)；K5mut3打开了Kringle环第一个二硫键，保留了部分的Kringle环结构和2个二硫键(Cys483-Cys524Cys512-Cys536)。对K5、K5mut1、K5mut3抗血管增生活性进行研究，结果表明K5mut1对视网膜微血管内皮细胞(humanretinalcapillaryendothelialcell,HRCEC)有明显的抑制增殖作用，其EC50(抑制50％细胞增殖的药物浓度)是K5的一半，提示K5分子中的Kringle环结构外的N端和C端氨基酸残基并不是其活性所必需。K5蛋白N端氨基酸臂含有的丰富的酸性氨基酸和某些支链氨基酸形成的空间结构可能与Kringle环相互作用反而会使K5抗血管增生受到抑制。K5mut3蛋白完全丧失对内皮细胞的抑制作用，提示Kringle环结构的完整性可能是维持K5抗血管活性的必需结构域。但是由于K5mut3不仅打开了第一个二硫键破坏了Kringle环的完整性，同时比K5mut1缺少了N端21个氨基酸残基和C端5个氨基酸残基，这些氨基酸残基可能是K5发挥活性的必需基团，因此尚不能说明K5二硫键的数量和位置所决定的Kringle环结构与K5的功能到底有着什么细微的关系。因此为了解决上述的问题，本课题将K5mut1和K5mut3进一步改造，分别去除N端第一个氨基酸(为半胱氨酸，分别构成K5的第一个和第二个二硫键)，构建了突变体K5mut2(Met463-Cys541)和K5mut4(Gln484-Cys536)，研究突变后抗血管增生活性的变化，揭示K5的抗血管增生活性是否依赖于完整的Kringle环结构及K5二硫键的数量和位置所决定的Kringle环结构与功能之间的细微关系。

关键词：纤溶酶原 Kringle5 血管增生脐静脉内皮细胞肿瘤病理生理学

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NRG1在间歇运动抑制心梗大鼠心肌细胞凋亡促进心肌血管增生中的作用及可能机制探讨

NRG1在间歇运动抑制心梗大鼠心肌细胞凋亡促进心肌血管增生中的作...

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作者：谭支内陕西师范大学

学位级别：硕士

目的：探讨神经调节蛋白1在间歇运动抑制心梗后心肌细胞凋亡促进心肌血管增生,改善心功能中的作用及可能机制。方法：雄性SD大鼠72只,随机分为正常对照组(C组)、正常运动组(CE组)、假手术组(S组)、心梗组(MI组)、心梗运动组(ME组)、心... 详细信息

目的：探讨神经调节蛋白1在间歇运动抑制心梗后心肌细胞凋亡促进心肌血管增生,改善心功能中的作用及可能机制。方法：雄性SD大鼠72只,随机分为正常对照组(C组)、正常运动组(CE组)、假手术组(S组)、心梗组(MI组)、心梗运动组(ME组)、心梗运动+拮抗剂AG1478组(MEA组),每组12只。采用左冠脉前降支结扎法(LAD)建立MI模型,S组仅穿线不结扎。CE组进行8wk跑台训练,ME和MEA组于术后静养1wk后行8wk跑台训练。MEA组通过尾静脉注射拮抗剂AG1478(10μg/kg),隔日一次。间歇运动方案：第1wk为适应性训练(10m/min×30min);之后先以10m/min热身运动10min,然后逐渐递增至25m/min X 7min和15m/min×3min依次交替进行,总时间60min,5d/lwk×8wk。运动结束后次日,腹腔麻醉大鼠,开胸并通过右颈总动脉逆行插管测定血流动力学指标LVSP、LVEDP、±dp/dt max,反映各组心功能变化。之后迅速摘取心脏并称重,测量胫骨长度,Masson染色测定胶原容积分数(CVF)。RT-qPCR检测心肌nrgl及其受体erbb2/4基因表达。Western Blot检测心脏NRG1、ErbB2/4、 PI3K/Akt、Bcl-2、Bax、eNOS、VEGF蛋白含量。免疫荧光观察a-SMA阳性表达。免疫组化观察CD31阳性表达。结果：(1)间歇运动可显著上调正常心脏NRG1及其受体ErbB2/4基因和蛋白表达。正常心脏存在NRG1及其受体ErbB2/4基因和蛋白表达,间歇运动可显著诱导心肌NRG1及其受体ErbB2/4基因和蛋白表达上调。(2)间歇运动可显著上调心梗心脏nrgl及erbb2/4基因表达。心梗心脏erbb4mRNA表达显著降低,nrg1和erbb2 mRNA表达有降低趋势,无显著差异。间歇运动干预显著升高心梗心脏nrgl和erbb2/4 mRNA表达,该作用被拮抗剂AG1478减弱。心梗引起nrgl及其受体erbb2 mRNA表达下降不显著,可能存在心肌NRG1蛋白来源于心脏之外的远隔器官。(3)间歇运动可显著上调心梗心脏NRG1及其受体ErbB2/4蛋白表达。心梗心脏NRG1及其受体ErbB2/4蛋白表达显著降低,间歇运动干预显著升高心梗心脏NRG1及其受体ErbB2/4蛋白表达,该作用被拮抗剂AG1478减弱。(4)间歇运动后,心梗大鼠心脏重量、心脏重量/胫骨长度显著增加,胶原容积分数CVF显著降低,心肌纤维化水平显著降低；LVSP和dp/dtmax显著升高,LVEDP显著降低,表明,间歇运动可显著改善心梗心脏的病理性重塑,改善心功能,发挥心脏保护效应。(5)相关性分析结果提示,NRG1表达与心功能水平显著相关。表明,NRG1表达与心功能改善关系密切。(6)间歇运动可显著抑制心梗心肌细胞凋亡。心梗心肌Caspase 3活力显著升高,TUNEL染色阳性细胞表达显著增加,Bcl-2/Bax比值显著降低；间歇运动可显著抑制Caspase3活性和TUNEL染色阳性细胞表达,显著升高Bcl-2/Bax比值,该作用可被拮抗剂AG1478所减弱。(7)间歇运动可显著促进心梗心肌血管增生。心梗心肌CD31和a-SMA表达显著增加,VEGF显著降低；间歇运动可进一步增强心梗心肌CD31和a-SMA的表达,显著改善VEGF表达,该作用被拮抗剂AG1478减弱。(8)间歇运动可激活心梗心脏PI3K-Akt-eNOS-VEGF信号通路。心梗心脏PI3K、Akt和eNOS磷酸化水平被抑制,VEGF表达显著降低；间歇运动可显著提高PI3K、Akt和eNOS磷酸化水平,显著恢复VEGF表达,该作用可被拮抗剂AG1478所减弱。表明,间歇运动可激活心肌PI3K-Akt-eNOS信号通路,诱导心肌血管增生。结论：(1)间歇运动可显著上调正常和心梗心脏NRG1及其受体ErbB2/4基因和蛋白表达。(2)间歇运动可显著改善心梗心脏的病理性重塑,改善心功能,发挥心脏保护效应,间歇运动促进NRG1表达与心功能改善关系密切；间歇运动可显著抑制心梗心肌细胞凋亡,显著促进心梗心肌血管增生,该作用可被NRG1受体拮抗剂AG1478所减弱。表明,间歇运动可能通过NRG1抑制心梗心肌细胞凋亡,促进心肌血管增生。(3)激活NRG1/ErbB2/4-PI3K-Akt-eNOS-VEGF信号通路,可能是间歇运动促进心梗心肌血管增生、抑制细胞凋亡、改善心梗心脏重塑,恢复心功能的机制之一。

关键词：神经调节蛋白1 间歇运动心肌梗死细胞凋亡血管增生

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基于视网膜图像的血管增生自动检测方法研究

基于视网膜图像的血管增生自动检测方法研究

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作者：黄河东北大学

学位级别：硕士

糖尿病是一种世界范围的疾病,可以导致许多并发症。其中糖尿病性视网膜病变(Diabetic Retinopathy, DR)是糖尿病最为严重的并发症之一,是高血糖导致血管受损引起的,可以表现出一系列的症状,如微血管瘤、出血和渗出等。糖尿病视网膜病变... 详细信息

糖尿病是一种世界范围的疾病,可以导致许多并发症。其中糖尿病性视网膜病变(Diabetic Retinopathy, DR)是糖尿病最为严重的并发症之一,是高血糖导致血管受损引起的,可以表现出一系列的症状,如微血管瘤、出血和渗出等。糖尿病视网膜病变已经成为发达国家工作人群致盲的最主要原因。糖尿病视网膜病变应尽早诊断,尽早治疗。视网膜病变筛查是一种有效、低成本的重要早期诊断手段。目前,视网膜病变筛查主要采用眼底相机拍照,根据拍摄得到的彩色图像进行糖尿病性视网膜病变的病灶的诊断。血管增生是糖尿病性视网膜病变的一个重要诊断标志,它将糖尿病性视网膜病变分为两个时期：非增殖性糖尿病视网膜病变(NPDR)和增殖性糖尿病视网膜病变(PDR),因此自动检测血管增生对于糖尿病性视网膜病变诊断意义非凡。本文所做的实验基于彩色视网膜图像。文章首先研究了一组用于提取血管增生纹理特征的滤波器。这组滤波器包括RGB通道、标准差滤波器、各向异性高斯滤波器、Gabor匹配滤波器和微分不变滤波器。这组滤波器具有平移不变性和旋转不变性,并可以在多尺度条件下提取特征。其次,本文研究了可以自动检测血管增生的框架,该框架包含预处理、特征提取、分类和特征选择等步骤。通过预处理去除视网膜图像的不均匀光照,通过滤波器组提取图像中的特征,通过极限学习机(Extreme Learning Machine, ELM)实现分类。为了减少计算的复杂性,本文使用特征选择算法来选择最重要的特征。结果表明,本文研究的滤波器组成功的提取了视网膜图像中的血管增生纹理特征,并且本文研究的血管增生检测框架可以自动检测并标记血管增生区域。

关键词：血管增生视网膜图像自动检测

来源：评论

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人纤溶酶原水解片段kringle5突变体表达纯化及抗血管增生功能研究

人纤溶酶原水解片段kringle5突变体表达纯化及抗血管增生功能研究

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作者：王小文中南大学

学位级别：硕士

目的：在细胞水平探讨GST标签的人纤溶酶原Kringle5基因工程蛋白(GST-K5m)抗血管增生的作用。方法：利用primer premier5.0引物设计软件,PCR法得到K5m基因,再利用基因工程技术,将目的基因克隆至pGEX-4T-3的BamHI和Xhol位点。再将该pGEX-... 详细信息

目的：在细胞水平探讨GST标签的人纤溶酶原Kringle5基因工程蛋白(GST-K5m)抗血管增生的作用。方法：利用primer premier5.0引物设计软件,PCR法得到K5m基因,再利用基因工程技术,将目的基因克隆至pGEX-4T-3的BamHI和Xhol位点。再将该pGEX-4T-3/K5m重组质粒转染到BL21(DE3)宿主菌中,表达出可溶性重组蛋白。采用GST树脂亲和纯化融合蛋白,对纯化的融合蛋白进行SDS-PAGE电泳和Vestern-blot分析鉴定,结果显示得到分子量约为37kDa的融合蛋白。为了验证GST-K5m融合蛋白是否具有生物学活性,用不同浓度的(25-1280nmol/L) GST-K5m融合蛋白分别处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)、肝癌细胞(Bel7402)(?)口正常肝细胞(NLC), MTT法检测各组的细胞抑制率,PI单染法和hoechst33258染色法标记各组凋亡细胞。用不同浓度的GST-K5m融合蛋白及His6-K5重组蛋白处理HUVECs,接着用transwell实验检测GST-K5m融合蛋白对人脐静脉内皮细胞迁移功能的影响。结果：GST-K5m融合蛋白可抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的增殖,呈浓度依赖关系,但是对肝癌细胞和正常肝细胞存活率无明显影响;GST-K5m融合蛋白对正常肝细胞(NLC)和肝癌细胞(Bel7402)无明显凋亡诱导作用,但具有诱导内皮细胞凋亡的作用；GST-K5m融合蛋白及His6-K5重组蛋白均抑制HUVEC的迁移。结论：1、构建了pGEX-4T-3/K5m重组质粒,并获得带GST标签的GST-K5m融合蛋白。2、体外实验证实,GST-K5m重组蛋白可特异性的抑制血管内皮细胞增殖和迁移,并诱导内皮细胞的凋亡,且对肝癌细胞和正常肝细胞无明显的效应。

关键词：人纤溶酶原K5 血管增生凋亡

来源：评论

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